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丙型肝炎病毒检测的方法学评价及临床应用价值
目的:检测丙肝病毒的HCV-Ab、CAg、RNA,对检测方法进行评价,并探讨其临床应用价值.方法:123例已知HCV-RNA结果的临床标本同时检测HCV-CAg、HCV-Ab.结果:HCV-RNA阳性的93例样本中,有92例HCV-CAg阳性,1例阴性;30例HCV-RNA阴性的样本中,HCV-CAg阴性29例,1例阳性;93例HCV-RRNA阳性样本中HCV-CAb阳性87例,6例阴性;30例HCV-RNA阴性的标本中,10例HCV-Ab阳性,20例阴性.结论:HCV-Cag对HCV检测的特异性高于HCV-Ab.HCV-RNA、HCV-Ab、HCV-CAg联合检测能提高HCV的阳性捡出率,HCV-RNA、HCV-Ab、HCV-CAg联合检测能提高HCV的阳性检出率.
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Logistic 回归和 ROC 曲线评价抗－HCV、AST、ALT对 HCV 现症感染的诊断价值
目的：应用 Logistic 回归和受试者工作特征（ROC）曲线探讨抗－HCV S／CO 比值、AST、ALT 单项检测及联合检测诊断丙型肝炎现症感染的价值。方法留取588例酶联免疫吸附剂测定（ELISA）法检测血清抗－HCV 阳性标本，RT－PCR 法检测 HCV－RNA，酶速率法检测 AST、ALT，将标本分成 HCV－RNA 阴性组和阳性组，通过 Logistic 回归和 ROC 曲线对各指标进行分析。结果HCV－RNA 阳性组抗－HCV S／CO 比值、AST 水平、ALT 水平均高于 HCV－RNA 阴性组，差异均有统计学意义（ P＜0．05）。抗－HCV S／CO、AST、ALT 三者均与 HCV－RNA 呈正相关（ P ＜0．05），且相关程度为抗－HCV S ／CO ＞AST ＞ALT。抗－HCV S ／CO 比值、AST、ALT 单项的 ROC 曲线下面积（AUC）分别为0．894[95％ CI （0．862～0．926）]、0．823[95％ CI （0．789～0．856）]、0．788[95％ CI （0．750～0．826）]，三项联合检测的 AUC 为0．949[95％ CI （0．932～0．966）]，高于各指标单项检测的 AUC。结论诊断丙肝现症感染的指标中，抗－HCV 价值大，其次分别为 AST、ALT，3项指标联合检测优于各指标单项检测。
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抗-HCV和HCV-RNA检测及其与ALT的相关性分析
目的 探讨化学免疫发光法(CLIA)定量检测抗-HCV和FQ-PCR法检测HCV-RNA含量与丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平的相关性.方法 用CLIA定量筛选抗-HCV阳性的100例病人标本,以荧光定量PCR法检测HCV-RNA含量和酶速率法检测ALT浓度水平,并对所得数据进行统计分析.结果 在100份抗-HCV阳性标本中,检出HCV-RNA阳性者76例,阳性率为76％.随着抗-HCV的S/CO值增高,HCV-RNA检出率增高较明显；ALT水平与HCV-RNA含量无显著相关性(P＞0.05),但ALT异常率与HCV-RNA含量呈正相关.结论 在HCV诊断与疗效观察中,血清抗HCV、HCV-RNA和ALT指标各有利弊,3者有机结合能正确诊断和预测肝脏损伤及评价疗效.
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自配HCV-RNA室内质控品稳定性探讨
目的 探讨自配HCV-RNA质控品稳定性及对其临床应用价值进行评估.方法 第1组实验:配备HCV-RNA阳性质控品,分装并随机分为4组,分别为A组:-20℃组,B组:-70℃组,C组:-20℃蛋白酶K组,D组:-70℃蛋白酶K组,定期用实时荧光PCR技术定量检测;第2组实验:将HCV-RNA阳性新鲜血清、HCV-RNA阴性新鲜血清和稳定剂按适当比例混合,分装并随机分成3组,分别为E组:-20℃静置保存,F组:干冰包装邮寄组,G组:模拟卫生部邮寄室间质控品的常温邮寄包装,F和G组经历共2d邮寄运送后-20℃保存,定期用实时荧光定量PCR技术定量,统计分析,绘制质控图.结果 A、B、C和D组28周前病毒载量对数分别为(5.39±0.11)、(5.44±0.11)、(5.40±0.10)、(5.46±0.12),变异系数为2.00％、2.00％、1.85％、2.20％,差异均无统计学意义(P＞0.05),SD和CV均小于临床允许误差,Z-score质控图显示28周前4组测定结果均在可控范围.E、F、G组24周前病毒载量对数分别为(5.22±0.09)、(5.19±0.07)、(5.08±0.15),变异系数为1.72％、1.35％、2.95％;3组均值两两比较,E和G组之间差异有统计学意义(P=0.02);L-J质控图显示E、F组病毒载量均匀分布在均值两侧和±2SD范围内,G组于第12周连续超出-2SD,于16周和20周超出-3SD控制线.结论 在自配HCV-RNA质控品中加入蛋白酶K不能有效延长质控品的有效期;自配HCV-RNA质控品在-20℃保存稳定期至少7个月(28周),满足临床室内质量控制的需要;常温邮寄过程可明显缩短HCV-RNA时效性,自配HCV-RNA无需经历运送过程,在稳定性上存在明显优势.
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应用聚合酶链反应检测肝病患者HBV-DNA和HCV-RNA结果分析
应用聚合酶链反应(PCR)进行HBV-DNA和HCV-RNA检测,了解HCV在各型肝病中感染情况.
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慢性丙型肝炎患者血清可溶性血管黏附蛋白-1的水平及意义
目的 检测慢性丙型肝炎患者血清可溶性血管黏附蛋白-1(sVAP-1)的水平,分析血清sVAP-1与肝功能各项参数及血清HCV-RNA载量的关系,探讨sVAP-1在慢性丙型肝炎发病中的作用.方法 纳入慢性丙型肝炎患者58例及体检健康者30例,ELISA检测观察对象血清sVAP-1的水平;全生化仪检测肝功能,实时荧光定量PCR检测血清HCV-RNA水平.结果 慢性丙型肝炎患者与健康对照者血清sVAP-1水平分别为(154.24±45.88)和(72.23 ±35.82) ng/mL(t =8.53,P＜0.05);丙氨酸氨基转移酶(ALT)升高的慢性丙型肝炎患者血清sVAP-1水平高于ALT正常的慢性丙型肝炎患者(t=4.53,P＜0.05),且血清sVAP-1与ALT、天冬氨酸氨基转移酶水平呈正相关(r=0.739,r=0.732,均P＜0.01),与白蛋白水平呈负相关(r=-0.491,P＜0.05),与血清HCV-RNA载量无关(P＞0.05).结论 慢性丙型肝炎患者血清sVAP-1水平较正常人高,可能参与了慢性丙型肝炎的发病,其水平与肝细胞炎性损伤程度密切相关.
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丙型肝炎病毒抗体与核心抗原联合检测在丙型肝炎临床诊断中的应用价值
目的 探讨丙型肝炎抗体(HCV-Ab)和丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)联合检测在丙型肝炎早期诊断中的应用价值.方法 选取本院检验科收集的280份血清标本,按照HCV-Ab检测结果分为阳性组175例、弱阳性组66例和阴性组39例.三组标本分别进行HCV-cAg和HCV-RNA检测,以HCV-RNA检测结果为诊断丙型肝炎的金标准,评估HCV-Ab联合HCV-cAg检测在丙型肝炎早期诊断中的应用价值.结果 单独HCV-Ab检测结果的阳性预测值为84.23％,而HCV-Ab和HCV-cAg联合检测结果的阳性预测值为95.29％,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 HCV-Ab和HCV-cAg联合检测在丙型肝炎的早期诊断中具有高灵敏度和高特异性的优势,在基层医院具有较高的推广价值.
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脂血标本对丙肝病毒RNA定量检测结果的影响
目的 探讨脂血标本对丙肝病毒RNA定量检测结果 的影响程度.方法 在逆转录酶的作用下将DNA逆转录为HCV-cDNA,以四种脱氧核甘酸为底物,用Taqman探针法对HCV-RNA进行实时定量检测用于评价不同浓度的甘油三酯对低水平和高水平的HCV-RNA结果 的影响.结果 当标本为含104 IU/ml丙肝病毒,其甘油三酯浓度上升为4mmol/L病毒载量从104IU/ml降为103 IU/ml,检测结果 的差异有统计学意义;当标本为含107、106、103 IU/ml丙肝病毒,HCV-RNA的水平与甘油三酯的浓度没有明显关系.结论 脂血标本对低水平HCV-RNA的检测存在干扰,而对较高水平的HCV-RNA不存在明显的干扰.
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联合检测丙型肝炎抗体和核心总抗原的临床价值探讨
目的 探讨联合检测丙型肝炎抗体和核心总抗原(HCV-cAg)在临床中的应用价值.方法 用酶联免疫吸附试验(ELISA)法联合检测HCV抗体和HCV-cAg,并与荧光定量PCR法检测丙型肝炎核酸(HCV-RNA)的结果进行对照.结果 157例患者中共检出HCV抗体阳性149例、HCV-cAg阳性99例、HCV-RNA阳性115例;5例HCV抗体阴性而HCV-cAg阳性的患者,经HCV-RNA证实为HCV感染;共检出HCV抗体或HCV-cAg阳性154例,另外3例经HCV-RNA排除HCV感染.结论 联合检测HCV抗体和HCV-cAg提高了HCV感染的检出效率,可有效避免漏检,适合在普通医疗机构推广使用.
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保存温度和保存时间对血清HCV-RNA定量检测结果的影响
目的:探索不同保存温度和保存时间对血清HCV-RNA荧光定量检测结果的影响.方法:收集HCV阳性血清标本16份并平均分成6份分别置于室温、4℃和-20℃保存1 d和1周后用荧光定量PCR法检测结果,利用SPSS13.0软件对数据进行处理.结果:HCV阳性患者血清在室温(25 ± 2)℃、4℃和-20℃保存1 d,各组荧光定量结果无统计学差异(F ＝ 0.012,0.447,0.230;P ＝ 0.913,0.507,0.796);保存1周,各组结果无统计学差异(F ＝ 0.059,0.308,0.184;P ＝ 0.808,0.582,0.833);根据温度分组后血清保存1 d和保存1周结果无统计学差异(F ＝ 0.055,0.000,0.103;P ＝ 0.816,0.990,0.751).结论:血清在室温、4℃和-20℃条件下保存1周对HCV-RNA的荧光定量检测结果无显著影响.
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HCV-RNA及ALT、AST联合检测在丙肝患者诊断治疗中的应用研究
目的 研究HCV-RNA及ALT、AST联合检测在丙肝患者诊断治疗中的应用价值.方法 选择我院2012年1月至2014年12月收治的104例丙肝患者作为研究对象,并选择70例同期健康体检者作为对照组,检测HCV-RNA病毒含量和AST、ALT活性.采用SPSS 11.0软件对结果进行统计学分析.结果 HCV-RNA病毒含量和抗-HCV的阳性率呈正相关(r=0.78,P＜0.05),丙肝患者AST水平、ALT水平和AST/ALT比值均高于正常人群,并且AST/ALT比值和病毒含量成正相关(r=0.528,P＜0.01).结论 HCV-RNA含量反映病毒复制情况,ALT、AST水平反映丙肝患者肝脏损伤情况,两组指标间存在一定相关性.HCV-RNA及ALT、AST联合检测有助于病情分析、疗效观察及预后评估,在丙肝患者的诊治中发挥作用.
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丙型肝炎病毒血清学检测的方法学评价
目的 比较酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光微粒子免疫检测法(CMIA)、PCR-荧光探针法三种方法对同一种样本检测结果的一致性.方法 120例疑似丙型肝炎患者的血清标本同时用ELISA与CMIA检测HCV-Ab,PCR -荧光探针法检测HCV-RNA.结果 在不考虑CMIA检测HCV-Ab结果为可疑的情况下,ELISA与CMIA检测HCV-Ab结果具有一致性.当CMIA检测HCV-Ab结果为可疑时,ELISA检测HCV -Ab的OD值与CMIA检测HCV -Ab的S/CO值没有相关性.当CMIA检测HCV-Ab结果为阳性时,ELISA检测HCV -Ab的OD值与PCR -荧光探针法检测HCV-RNA的含量没有相关性,CMIA检测HCV-Ab的S/CO值与PCR-荧光探针法检测HCV-RNA的含量也没有相关性.结论 在临床检测丙型肝炎病毒感染时建议采用化学发光微粒子免疫检测法(CMIA)检测HCV-Ab的同时也采用PCR -荧光探针法检测HCV-RNA含量,这样不仅可以降低漏诊,同时也为临床抗病毒提供有效的医学数据.由于ELISA检测HCV-Ab仍然具有可靠性,对于基层医院,ELISA检测HCV-Ab仍是首选的方法.
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有偿供血者HCV感染43例临床分析
目的 分析本地农村有偿献血后感染丙肝者的临床表现,进行生化检测、病毒基因分型、HCV-RNA定量分析,提出合理的治疗方案.方法 对43例有偿献血后感染HCV者,进行临床常规生化指标、基因分型、HCV-RNA定量、自身免疫肝炎及肝脏超声检测.结果 43例丙肝感染者中,乏力、食欲减退、厌油者9例,占20.9％；肝功异常,转氨酶升高者13例,占30.2％；基因Ⅰ型15例,占34.9％,基因Ⅱ型25例,占58.1％,未分型者3例,占7％；HCV-RNA定量＜1.0E +03copies/mL为7例,占16.3％,4例＜1.0E+ 04copies/mL,占9.3％,余均为＞1.0E+ 05copies/mL,占74.4％；彩超示:未见明显异常者3例,占7％；40例有不同程度肝损害,部分已有肝硬化的表现；自身免疫肝炎指标检测均阴性.结论 感染丙肝后大部分发展成慢性肝炎,逐渐出现肝纤维化、肝硬化等不同程度肝损害,需积极早期抗病毒治疗,才能防止病情进一步发展.
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应用二氧化硅微粒快速灵敏提取HCV-RNA
目的:探索一种快速、经济、灵敏的HCV-RNA提取方法.方法:在裂解缓冲液中加入二氧化硅微粒提取血清中的HCV-RNA,并按传统的酚-氯仿提取法从血清中提取HCV-RNA作为对照,然后结合逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HCV-RNA.结果:在34例抗-HCV(+)血清标本中,应用传统的酚-氯仿提取法有23例RT-PCR检测结果(+),而应用二氧化硅微粒提取法有25例RT-PCR检测结果(+).结论:应用二氧化硅微粒提取HCV-RNA,其灵敏度不低于传统的酚-氯仿提取法,而且操作简单,避免了传统提取法的繁杂操作步骤,是一种快速、经济、灵敏的HCV-RNA提取方法.
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保定市丙型肝炎病毒基因型分布特征及临床意义
目的 了解保定市丙型肝炎病毒(HCV)基因型分布特征及其与丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV-RNA)载量、肝病程度的相关性,为其防治提供依据.方法 对2010年1月-2017年9月758例HCV-RNA阳性者进行HCV的基因型检测,分析其基因型与HCV-RNA含量和肝病程度的相关性.结果 758例HCV感染患者中1b型和2a型分别为50.79％ (385/758)和36.68％ (278/758).HCV基因型的分布特征与性别、感染途径及种族差异均无统计学意义(P＞0.05).1b型患者ALT、AST、GGT及HCV-RNA水平均高于2a型和其他型患者,差异有统计学意义(P＜0.05).不同程度肝病患者的HCV基因型分布差异有统计学意义(P＜0.05),1b型丙肝肝硬化及肝癌比例高于其他基因型,差异有统计学意义(P＜0.05).1b型患者对长效干扰素加利巴韦林治疗的ETVR应答率(57.92％ vs 83.09％)和SVR应答率(24.68％vs 60.79％)均明显低于2a型患者(P＜0.05).相关分析显示,1b型患者ALT与HCV-RNA呈正相关(r=0.685,P＜0.01).结论 保定市丙型肝炎病毒基因型流行株为1b型和2a型,其中1b型与丙肝肝硬化、肝癌的产生有一定的相关性.
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维持性血液透析患者丙型肝炎病毒感染血清学诊断方法的比较
目的 比较丙型肝炎病毒(HCV)感染的血清学诊断方法,探索诊断维持性血液透析患者HCV感染的可靠方法.方法 分别使用国产和进口HCV抗体试剂盒检测抗-HCV,使用TMA法定性检测HCV-RNA,荧光定量PCR法定量检测HCV-RNA,比较各种诊断方法对HCV的检出率,评价ALT变化与HCV-RNA载量的关系,评价抗-HCV S/CO值与HCV-RNA载量的关系.结果 国产和进口试剂检测抗-HCV的检出率均为7.3％(P=1.000); TMA法检测HCV-RNA的检出率为9.5％,免疫荧光定量PCR法的检出率为5.6％,两者之间差异无统计学意义(P=0.330)；单独检测HCV-RNA比单独检测抗-HCV的检出率高,两者差异有统计学意义(p=0.000)；联合检测抗-HCV和HCV-RNA的检出率为10.6％,与单独检测抗-HCV相比较差异有统计学意义(P=0.000).HCV-RNA的载量和ALT的变化无相关性(r=0.189,P=0.536)；抗-HCV初筛的S/CO值与HCV-RNA载量无相关性(r=0.174,P=0.569).结论 检测HCV-RNA能缩短HCV感染后检出的窗口期,以便更早诊断维持性血液透析患者HCV感染,联合检测抗-HCV和HCV-RNA能避免漏诊处于血清转换期或慢性病毒携带的患者.ALT的变化和HCV载量无明显相关性,在血液透析患者中辅助早期诊断HCV感染的作用较小.
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多项生化指标动态监测慢性丙型肝炎感染者的临床分析
目的：观察慢性丙型肝炎感染患者多项生化指标动态监测变化特点，为临床治疗提供有价值的参考依据。方法选取该院资料齐全的定期行血清生化检查的51例慢性丙型肝炎患者资料进行回顾性分析，观察患者在48个月生化指标中血清丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）、HCV-RNA、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、胆碱脂酶（CHE）等多项动态生化指标变化。结果根据慢性丙型肝炎感染患者血清病毒载量高低分为低复制组33例和高复制组18例，高复制组 ALT、AST 水平无论是治疗前还是治疗后各时间段均高于低复制组，CHE 水平治疗前与治疗后各时间段低于低复制组，两组治疗后不同时间段 ALT、AST 水平均低于治疗前，差异有统计学意义（P ＜0．05）。治疗后各时间段血清 HCV-RNA 阳性率较治疗前明显降低，而抗-HCV 阳性率无明显变化，治疗后 HCV-RNA 及抗-HCV 阳性率比较差异具有统计学意义（P ＜0．05）。结论慢性丙型肝炎感染患者一旦感染，抗-HCV 指标在长期可较稳定显示阳性，而 HCV-RNA 则根据病情变化而变化，是灵敏度较高的提醒，同时血清 HCV-RNA 水平越高，患者肝功能损害程度越高，提示病毒复制对肝功能有明显影响。
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肝素抗凝血浆对HCV-RNA检测结果的影响分析
目的 探讨肝素抗凝血浆对HCV-RNA检测结果的影响及对策.方法 采用实时荧光定量法(qPCR)检测68例丙型肝炎患者的血清、肝素血浆及肝素血浆(稀释后)中HCV-RNA水平,并相互比较.结果 血清组HCV-RNA水平对数值为(4.24±0.31),血浆(原)组HCV-RNA水平对数值为(1.37±0.58),血浆(稀释后)组HCV-RNA水平对数值为(3.61±0.33).结论 肝素对HCV-RNA检测有明显的抑制作用,通过用阴性血清稀释能一定程度减少肝素的抑制作用,提高HCV的检出水平.
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3种方法检测丙型肝炎患者的早期诊断价值
目的：探讨采用丙型肝炎病毒抗体（HCV‐Ab）、丙型肝炎病毒核心抗原（HCV‐cAg）、HCV‐RNA 3种方法联合检测丙型肝炎患者的早期诊断价值。方法收集该院西宁地区203例 HCV‐Ab 阳性患者及5例 HCV‐Ab 阴性 HCV‐cAg 阳性的患者，使用荧光定量 PCR 法进行 HCV‐RNA 检测，化学发光法检测 HCV‐Ab ，ELISA 法检测 HCV‐cAg 。结果203例 HCV‐Ab 阳性患者中 HCV‐cAg 阳性例数为67例、HCV‐RNA ＞1×103 U ／L 143例；72例 HCV‐Ag 阳性患者中 HCV‐RNA 阳性例数69例，符合率达95．83％，其中5例 HCV‐Ab 阴性 HCV‐cAg 阳性患者中，HCV‐RNA 阳性3例，符合率达60．00％。结论 HCV‐cAg 、HCV‐Ab 和 HCV‐RNA 3种方法联合检测可用于丙型肝炎患者的早期诊断，同时可有效缩短 HCV 窗口期，降低 HCV 感染的漏检率。
关键词： 丙型肝炎病毒抗体 丙型肝炎病毒核心抗原 HCV-RNA -
实时荧光定量PCR法检测HCV-RNA测量不确定度评价
目的 探讨对实时荧光定量PCR法测HCV-RNA测量不确定度评定的合理方式.方法 依据Nordtest准则,利用实时荧光定量PCR法检测HCV-RNA室内质控及室间质评标本,收集2012年4～9月的HCV-RNA室内质控数据及2010～2012年室间质评结果.计算其批内及批间变异系数、系统偏倚变异系数,确定其相应的标准不确定度分量,进而计算出其扩展不确定度.结果 同一天内12次HCV-RNA室内质控的检测批内变异系数为2.55%,2012年4～9月共155个工作日的HCV-RNA检测批间变异系数为5.80%;2010～2012年卫生部临检中心室间质评共30个检测数据的系统偏倚变异系数为5.04%,剔除8个检测为零的数据后重新计算变异系数为5.97%.批内、批间及系统偏倚的因素合成后,扩展不确定度为 16.18%,剔除8个检测为零的数据后为 17.16%.结论 对实时荧光定量PCR法测HCV-RNA测量不确定度的评价,利用现有室内外质控数据,无须额外测试,简单易行,是医学检验实验室较为实用的一种测量不确定度评价方式,但数据的纳入应考虑方法的特殊性.
关键词： 实时荧光定量PCR法 HCV-RNA 测量不确定度 评定
