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恒河猴PDL1Ig文献资料
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PDL1Ig基因修饰的恒河猴肝细胞在混合淋巴细胞反应中的效应研究
目的 探讨恒河猴来源的PDL1Ig在体外混合淋巴细胞反应中的作用.方法 在GenBank中检索到恒河猴目的基因PDL1和IgG1Fc的序列,采用重叠延伸PCR法合成该目的基因,与pGEM-T连接转化感受态E.coli TOP10,经鉴定得到PDL1Ig基因,pShuttle-CMV线性化后连接目的基因转化感受态E.coli TOP10,克隆pShuttle-CMV/PDL1Ig重组穿梭质粒.将pAdEasy-1和线性pShuttle-CMV/PDL1Ig共电转至BJ5183细胞中同源重组,构建重组腺病毒载体pAdEasy-1/PDL1Ig骨架,以脂质体2000将pAdEasy-1/PDL1Ig转染至293细胞中包装成有活性的重组腺病毒.感染恒河猴肝细胞,RT-PCR和Western blotting检测目的基因的表达.混合淋巴细胞反应(MLR)测定其生物学活性.结果 成功构建了PDL1Ig重组腺病毒载体,能感染恒河猴肝细胞,RT-PCR和Western blotting检测有目的基因表达,在混合淋巴细胞反应中其能抑制T细胞增殖.结论 成功构建了pAdEasy-1/PDL1Ig重组腺病毒载体,其可在恒河猴肝细胞中高效表达,该重组蛋白可在体外通过PD-1/PDL1通路抑制T淋巴细胞增殖.
