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免疫窗乙脑疫苗
可预防的疾病流行性乙型脑炎(简称乙脑)是由乙型脑炎病毒引起的以脑实质炎症为主要病变的急性传染病,蚊虫是该病的主要传播媒介,多在夏秋季节流行.临床表现以高热、意识障碍、抽搐、呼吸衰竭、病理反射及脑膜刺激征为主要特征.
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2008年甘肃省部分地区虫媒病毒调查
目的 调查甘肃省部分地区虫媒病毒分布状况,为虫媒病毒病防治提供依据.方法 2008年7～8月在甘肃省嘉峪关、张掖、酒泉、白银和平凉市采集蚊虫标本,用细胞培养法分离病毒,用血清学和分子生物学方法对病毒分离物进行鉴定;利用生物信息学技术对新分离病毒的序列进行同源性和系统发生分析.结果 采集到3属280批共13 839只蚊虫标本,从中分离到6株病毒,血清学和分子生物学鉴定结果显示6株病毒(GSBY0801、GSBY0804、GSBY0810、GSBY0816、GsBY0827、GSBY0861)均为基因I型乙脑病毒.新分离株与减毒活疫苗株SA14-14-2相比,E基因核苷酸同源性为87.5%～87.9%,氨基酸同源性为96.8%～97.2%.结论 甘肃省东部地区存在基因I型乙脑病毒的流行,流行病毒株与中国四川省乙脑病毒分离株进化关系较近.
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2009年江西省新分离流行性乙型脑炎病毒株全基因组分子生物学特性研究
目的 对2009年分离自江西省蚊虫标本的流行性乙型脑炎(乙脑)病毒JX0939株进行全基因组序列测定,分析其基因组特征.方法 使用针对乙脑病毒全基因组测序引物进行PCR扩增基因组片段,PCR产物直接测序,拼接后获得全基因组序列.利用生物信息学软件进行核苷酸序列及氨基酸序列分析和病毒的系统进化分析.结果 新分离乙脑病毒IX0939株基因组全长10965个核苷酸,从97位到10 392位,共10296个核苷酸编码-个开放阅读框,编码3432个氨基酸.与GenBank中登录的所有59株乙脑病毒全基因组序列比较发现,其核苷酸总体差异率为1%～17%,氨基酸总体差异率为0.1～5%.与目前使用的减毒活疫苗株SA-14-14-2株相比较,只有88%的核苷酸同源性,全基因组共存在1237个核苷酸差异,83个氨基酸差异.提取GenBank登录的及本实验室测定的不同省份的乙脐病毒全基因组序列,进行全基因组序列系统进化分析显示JXCY939株属于基因1型乙脑病毒.结论 新分离的乙脑病毒JX0939株属于基因1型,与2007年中国分离株SHl7M-07进化关系接近,与疫苗株SA-14-14-2相比关键位点氨基酸未见变异.
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广西北流市分离到基因I型流行性乙型脑炎病毒
目的 从广西流行性乙型脑炎(乙脑)监测点之一的北流市分离乙脑病毒并研究其基因分型.方法 2006年在广西北流市采集蚊虫标本,在C6/36和BHK-21细胞上进行病毒分离,对病毒分离物进行多种虫媒病毒抗体的酶联免疫吸附试验,获得的乙脑病毒进行E基因扩增、测序和基因分型.结果 在北流市采集骚扰阿蚊2588只和三带喙库蚊230只,分61批进行处理,获得3个病毒分离物,酶联免疫吸附试验与乙脑抗体反应,E基因测序后基因分型显示为基因I型乙脑病毒.结论 从广西蚊虫标本分离到基因I型乙脑病毒.
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三峡库区仔猪血清流行性乙型脑炎病毒抗体调查
目的 掌握三峡库区监测哨点仔猪中流行性乙型脑炎(乙脑)病毒IgG抗体达到50%的时间段,为当地乙脑的防控提供理论依据.方法 在三峡库区的湖北省秭归县、重庆市万州区、涪陵区和渝北区共4个监测点采集仔猪血清,采用酶联免疫吸附试验检测仔猪血清乙脑病毒IgG抗体,采用间接免疫荧光法检测仔猪血清乙脑病毒IgM抗体.应用SPSS 12.0统计软件进行统计学分析.结果 4个监测点中,重庆市万州区和渝北区仔猪在5月初感染乙脑病毒,5月中旬乙脑病毒IgG抗体阳性率达到50%以上;重庆市涪陵区、湖北省秭归县仔猪在5月下旬感染乙脑病毒,6月中旬达到50%以上.其中猪场中的仔猪乙脑病毒抗体阳性率高于散养猪(X2=43.797,P<0.05).结论 三峡库区监测点仔猪乙脑病毒IgG抗体50%阳转时间出现在5月中旬到6月中旬之间.
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保妇康栓的临床作用
宫颈炎和阴道炎为妇科常见病，由于炎症引起白带增多，刺激阴道及外阴，使粘膜充血，灼痛，干扰患者工作及生活。保妇康栓系纯中药制剂，主要成分为莪术油，临床上用于治疗霉菌性阴道炎，宫颈糜烂，老年性阴道炎等。 1 莪术油的作用 1．1 广谱抗病原微生物，抗炎作用 1．1．1 抗霉菌作用：莪术油对白色念珠菌的生长繁殖有极强的抑制作用，对白色念珠菌感染的豚鼠阴道炎有抗菌及促进炎症恢复的作用。 1．1．2 抗病毒作用：经北京友谊医院和陆军202医院病毒室研究证明，本品对合肥病毒，流感病毒A1和A3型及副流感病毒Ⅰ型，有直接灭活作用对乙型脑炎病毒Ⅱ型腺病毒有……
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急诊护士要正确分诊流脑与乙脑
流脑为流行性脑脊髓膜炎的简称,是由脑膜炎双球菌引起的一种呼吸道传染病;乙脑为流行性乙型脑炎的简称,是由乙型脑炎病毒引起的一种蚊虫媒介传染病.两病除症状相似外,还有很多不同之处.
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浙江省部分地区2009-2010年蚊媒中乙型脑炎病毒分子流行病学特征研究
目的 了解浙江省部分地区蚊媒携带流行性乙型脑炎(乙脑)病毒(JEV)情况及其分子流行病学特征.方法 2009-2010年7-8月从浙江省慈溪市和仙居县乙脑监测点采集蚊13620只,利用荧光定量PCR方法检测蚊中JEV核酸,用BHK-21细胞分离病毒,扩增JEV分离株E基因,然后选择6株进行测序并进行同源性分析.结果 慈溪和仙居监测点蚊中JEV带病毒率分别为17.0％(27/159)和3.4％( 1/29);从2010年143批蚊中分离到22株JEV,分离率为15.4％.6株测序株E基因全长均为1500个核苷酸(nt),推导编码500个氨基酸(aa),未发现nt插入和丢失,nt和aa同源性分别为99.2％～ 99.8％和100.0％,与浙江省2007-2008年JEV分离株的nt和aa同源性分别为99.1％～99.3％和99.2％～ 99.8％,与乙脑疫苗株SA14-14-2同源性分别为87.6％～88.0％和97.8％.E基因进化树显示,6株测序株位于基因Ⅰ型分支上.结论 浙江省慈溪市和仙居县监测点蚊媒携带JEV,其中慈溪监测点蚊媒中乙脑带病毒率明显高于仙居监测点,JEV分离株均为基因Ⅰ型.
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山西省运城市2012年蚊媒病毒的分离鉴定
目的 了解山西省运城市蚊虫及蚊媒病毒的种类和分布.方法 2012年8月在山西省运城市临猗县和永济市采集蚊虫标本,经鉴定分类和分批研磨后,利用细胞(C6/36和BHK21)培养方法分离病毒,对阳性分离物使用蚊媒病毒种属特异引物进行RT-PCR扩增鉴定.结果 采集4属7种10455只蚊虫,临猗县和永济市优势蚊种分别为淡色库蚊(91.96％)和三带喙库蚊(72.85％).经鉴定分析,从标本中分离到15株基因I型乙型脑炎病毒(JEV)、4株库蚊黄病毒(CxFV)、3株淡色库蚊浓核病毒(CppDNV)和1株盖塔病毒(GETV).结论 首次从山西省分离GETV和CxFV;三带喙库蚊仍是运城市优势蚊种,目前当地自然循环的JEV仍以基因I型为主.
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浙江省蚊虫中乙型脑炎病毒的分离及鉴定
目的 对2007年浙江省采集的蚊虫标本进行病毒分离与鉴定.方法 2007年在浙江省采集蚊虫标本,用金黄地鼠肾细胞(BHK-21)分离病毒,对新分离的病毒进行血清学和分子生物学鉴定.结果 采集到4735只蚊虫,分离到2株致BHK-21细胞病变的病毒,经免疫荧光和RT-PCR试验鉴定为乙型脑炎病毒(JEV),利用病毒PrM区段进行基因分型分析,新分离的2株病毒属于基因Ⅰ型JEV.对这2株病毒的E基因区段进行分析,核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.0%和98.8%.与疫苗株SA14-14-2相比,核苷酸同源性在87.7%,氨基酸同源性在96.4%以上,共有14个共同的氨基酸位点差异.结论 在浙江省采集的蚊虫标本中分离到2株病毒,经鉴定为基因Ⅰ型JEV,是浙江省近年来首次分离.
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乙型脑炎病毒sA14-14-2株NS1基因片段的克隆、测序与表达
以流行性乙型脑炎病毒减弱毒株SA14-14-2的基因组RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增其NS 1基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T载体中,得到克隆质粒pMD18-T-NS1.pMD18-T-NS1经EcoRI和SalI酶切后,回收NS 1片段克隆到原核表达载体pET-28a(+)EcoRI/SalI位点,构建了重组原核表达质粒pET-28a(+)-NS1.转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导获得高效表达,产物经SDS-PAGE电泳结果显示,表达产物分子量约为45kD.Western blottmg分析表明表达产物具有抗原活性.
关键词： 乙型脑炎病毒 NS1基因 反转录一聚合酶链反应 克隆 表达 -
乙型脑炎病毒表达载体的研究
用RT-PCR方法分段扩增了乙型脑炎病毒SA14-14-2疫苗株5'、3'NCR,利用融合PCR技术在5'、3'NCR之间引入BamHⅠ酶切位点,将5'NCR置于T7启动子控制之下,构建乙脑病毒微复制子表达载体pMR.分别将绿色荧光蛋白(GFP)和汉滩病毒核蛋白编码区基因插入到pMR中,构建两种表达外源基因的乙脑病毒微复制子表达载体:pMR-GFP和pMR-84FliS.经荧光显微镜直接观察、Western blot、ELISA等方法检测,证实外源基因能够在辅助病毒SA14-14-2感染的BHK-21细胞中表达.
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我国2009年新分离乙脑病毒全基因组序列特征研究
本研究对我国2009年新分离的两株乙脑病毒进行全基因组序列测定和分析,以了解病毒全基因组分子特征.通过RT-PCR和核苷酸序列测定方法获得病毒全基因组序列,采用ClustalX、DNASTAR、MEGA等生物学软件完成核苷酸序列及氨基酸序列分析和系统进化分析等.研究结果显示,新分离两株乙脑病毒YN0911和YN0967株基因组全长均为10 965个核苷酸,编码3 432个氨基酸.这2株乙脑病毒之间核苷酸同源性为98.7％,氨基酸同源性为99.8％0.与国际乙脑病毒流行株相比,核苷酸同源性为83.5％～98.9％,氨基酸同源性为94.8％～99.7％.与乙脑病毒疫苗株SA14-14-2相比,在E蛋白有13个氨基酸差异位点,但都位于抗原关键位点之外.这2株病毒在3′UTR区域存在11nt缺失.基于C/PrM区段、E基因、全基因组系统进化分析结果均显示新分离2株乙脑病毒为GI乙脑病毒,并且和越南、四川、贵州、广西以往的分离株遗传进化关系较近.本研究提示我国新分离的2株乙脑病毒均为GI乙脑病毒,决定病毒毒力的关键氨基酸位点未见明显变化.
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稳定表达乙脑病毒结构蛋白的细胞系的建立
以乙型脑炎病毒SA14-14-2疫苗株全长基因组克隆质粒pBR-JTF为模板,通过PCR分别扩增prM-E及C-prM-E基因片段,构建表达乙型脑炎病毒结构蛋白的真核表达质粒pCJE-ME及pCJE-CME.将这2种重组质粒用脂质体法转染BHK一21细胞后,质粒pCJE-ME表现明显的细胞毒性,转染细胞不能存活;质粒pCJE-cME可导致筛选到表达JEV结构蛋白的稳定细胞系.这种稳定表达JEV结构蛋白的细胞系通过PCR扩增细胞系基因组、ELISA、Western Blot、间接免疫荧光等方法得到鉴定.研究结果表明在C蛋白存在下,乙型脑炎病毒C-prM-E蛋白可以在BHK细胞中稳定表达,为研制JEV新型复制子颗粒疫苗提供了便利工具.
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乙型脑炎减毒活疫苗株全长感染性克隆的构建及表达外源基因的初步研究
通过构建乙型脑炎病毒减毒株SA14-14-2的全长cDNA克隆,来初步探讨将其作为表达载体的可行性,为下一步利用乙型脑炎病毒作为载体构建嵌合病毒打下基础.利用长片段RT-PCR的方法分两段扩增出乙型脑炎病毒cDNA,通过片段两端的酶切位点,将cDNA依次连接到pACYC184载体.进一步利用分子克隆的手段,在乙型脑炎病毒基因组cDNA的3 '非编码区插入增强型绿色荧光蛋白(Ehanced green fluorescent portein,EGFP)基因作为报告基因,通过体外转录和转染,拯救乙型脑炎病毒和表达绿色荧光蛋白的乙型脑炎嵌合病毒.采用RT-PCR、蚀斑实验和荧光显微镜观察等方法对恢复病毒进行鉴定.对恢复病毒进行连续6次细胞传代,从病毒生长特性和结构基因稳定性的角度对恢复病毒传代稳定性进行研究.结果表明成功地扩增并构建得到乙型脑炎病毒的全长cDNA,在此基础上进一步构建得到了乙型脑炎嵌合病毒rJEV-EGFP全长cDNA,经过体外转录和转染获得了活的rJEV病毒及嵌合病毒rJEV-EGFP,并采用了多种方法对其进行了鉴定,拯救出的恢复病毒在已传代的代次内稳定性良好,嵌合病毒rJEV-EGFP可稳定地表达绿色荧光蛋白.本研究应用反向遗传学技术构建并在BHK-21细胞中成功地拯救出了rJEV和rJEV-EGFP活病毒,同时也表明乙型脑炎病毒SA14-14-2株可以作为载体来表达外源基因.
关键词： 乙型脑炎病毒 反向遗传学 全长cDNA感染性克隆 表达载体 增强型绿色荧光蛋白 -
乙型脑炎病毒样颗粒疫苗的制备及其免疫保护效率的初步评价
将乙型脑炎病毒prME及其信号肽基因片段克隆到穿梭载体AcBacmid中,构建重组穿梭载体AcBac-prME.Lipofectine介导其转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒Ac-prME.Western-blotting、间接免疫荧光试验及电镜观察,证实Ac-prME介导prME在Sf9细胞中高效表达,且形成了病毒样颗粒.小鼠免疫和攻毒试验表明,该病毒样颗粒免疫可以使小鼠获得有效抵抗乙型脑炎病毒强毒株攻击的能力,保护率高达100％,从而为研制基于乙型脑炎病毒样颗粒的亚单位疫苗奠定了基础.
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我国新分离乙型脑炎病毒株毒力特征研究
将分离自不同年代的17株乙脑毒株在小鼠脑内传代,然后将病毒在BHK21细胞单层上观察不同毒株的空斑形成大小形态,小鼠脑内和皮下途径接种观察病毒的毒力,结果显示不同毒株在BHK21细胞上形成的噬斑大小不尽相同,减毒株形成的噬斑小.所有毒株对小鼠的脑内毒力都很强,病毒滴度高达lg8.0/mL,以上,毒株间无明显差异.毒株对9～11g小日龄小鼠的皮下毒力有一定差异但不明显,但对14～16g较大日龄小鼠则差别明显.PFU/LD50的对数值差异除一株(M47株)为8.44外,其余各株差别在3.94～0.45间.本研究结果证明自然界乙脑毒株存在明显的神经外毒力差异,毒力差异与分离年代和病毒基因型无关,但从人体分离到的毒株毒力表现较强.
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N-糖基化对乙型脑炎病毒prME和NS1基因免疫效果影响的研究
prME和NS1为乙型脑炎病毒两个主要的免疫保护蛋白,且均为N-糖蛋白.为研究N-糖基化对乙型脑炎病毒免疫保护的作用,本研究用PCR介导的定点突变方法,分别消除乙型脑炎病毒prME和NS1基因的不同N-糖基化位点,并构建了prME和NS1突变基因的真核表达质粒.将质粒免疫四周龄雌性小白鼠,经两次免疫后,采集血清检测体液免疫反应,后对小鼠用强毒进行攻击,观察并记录免疫保护力.研究结果显示,与野生型prME基因免疫组相比,消除单个糖基化位点后prME基因诱导的ELISA抗体、中和抗体和免疫保护力均略有升高,而同时消除两个糖基化位点的则会降低.NS1基因消除单个糖基化位点后保护率高达到100％,但消除两个糖基化位点后则免疫保护率略有降低(75％).通过本研究证明,N-糖基化在维系乙型脑炎病毒prME和NS1蛋白的免疫保护中具有重要的作用,单个糖基化的缺失可增强蛋白的免疫原性,而两个糖基都缺失后,则造成了免疫效率的降低.
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乙型脑炎病毒毒力基因定位的研究进展
乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)属于黄病毒科(Flaviviridae),简称乙脑病毒.该病毒能引起人类的急性脑炎,致死率在20%左右,另有50%的患者会遗留神经系统方面的后遗症.乙脑病毒流行于亚洲及太平洋地区,有季节性的特点,一般蚊虫滋生的7、8、9月是其发病高峰期.每年在亚洲的乙脑病例有50 000例左右,其中致死的有上万人之多,是亚洲公共卫生的一个大问题[1],因而对乙型脑炎病毒功能与结构的研究,尤其是对影响其毒力的功能域的定位,多年以来都是研究的热点.
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乙型脑炎病毒侵染细胞机制的研究进展
乙型脑炎病毒是一种蚊媒致病病毒,能引发严重的病毒性脑炎.乙脑病毒入侵细胞是导致乙型脑炎发生的先决条件,入侵机制的阐明将为乙型脑炎的治疗提供更多途径.近年来,乙脑病毒侵染细胞机制的研究不断深入,其他黄病毒的研究成果也拓展了乙脑病毒入侵机制的研究方向.E蛋白抗体的研制以及侵染过程抑制物的发现为乙脑病毒入侵的有效阻断提供了更多的可能.本文就近年来乙脑病毒入侵及膜融合的相关研究进展做一综述.
