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NLRP3炎症小体在疾病发生发展中的作用机制
固有免疫是机体在发育和进化过程中形成的天然免疫防御功能,即出生后就已经具备的非特异性防御功能,也称为非特异性免疫,是生物在长期的进化过程中形成的一系列重要防御机制;主要作用是维持机体内环境稳态.NLRP3是核苷酸结合和寡聚化结构域样受体家族中的一种蛋白复合体,在机体固有免疫中扮演重要角色,它参与人类众多疾病的发生发展.
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桂枝拮抗麻黄中枢氧化应激损伤及NLRP3炎症小体上调作用分析
目的:研究桂枝对麻黄中枢神经系统损伤的保护作用,并初步探讨其保护作用机制.方法:KM小鼠按体重随机分为生理盐水组,麻黄组(10 g·kg-1),麻黄-桂枝3∶2组(10 g·kg-1+6.67 g·kg-1),麻黄-桂枝3∶1组(10 g·kg-1 +3.33 g·kg-1),桂枝组(6.67 g·kg-1),灌胃给药14 d,酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),一氧化氮(NO),一氧化氮合酶(NOS)活性,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定小鼠脑组织NLRP3炎症小体表达水平.结果:与生理盐水组比较,麻黄组小鼠SOD活力下降(P＜0.01),MDA,NO,TNOS,iNOS含量增加(P＜0.01),Nod样受体蛋白3(NLRP3),凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白表达上调(P＜0.01),桂枝组无明显差异;与麻黄组比较,化学法结果显示麻黄-桂枝3∶2组和3∶1组均能够明显升高脑组织中SOD活力(P ＜0.05,P＜0.01),降低MDA,NO,TNOS,iNOS含量(P＜0.05,P＜0.01),Western blot结果显示3∶2组能够显著降低NLRP3,ASC和Caspase-1蛋白表达(P ＜0.05,P＜0.01),3∶1组能够降低Caspase-1蛋白表达(P＜0.05).结论:桂枝对麻黄中枢神经系统损伤具有保护作用,且具有一定的量效关系,随着桂枝比例的增加,桂枝拮抗麻黄中枢毒性更为显著,其作用机制可能与其增加抗氧化活性,减少氧化应激损伤,抑制NLRP3炎症小体上调有关.
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基于自噬途径探讨半枝莲总黄酮抑制肿瘤细胞NLRP3炎症小体表达的机制研究
通过研究半枝莲总黄酮(total flavonoids in Scutellaria barbata,TF-SB)对肿瘤细胞自噬以及炎症小体NLRP3的影响,探讨自噬与炎症小体NLRP3激活的关系,为进一步探讨TF-SB的抗肿瘤机制提供实验依据.该研究拟采用人工接种B16-F1细胞株致小鼠黑色素瘤模型,随机均分为模型对照组、阳性对照组(Rap,1.5 mg· kg-1)、TF-SB高、中、低(200,100,50 mg·kg-1)剂量组,另取健康C57BL/6J小黑鼠作为正常组以备血清检测对照,每组10只,每日给药1次,连续2周,末次药后30min处理动物.采用HE染色检测肿瘤组织病理形态学改变;采用Western blot法检测肿瘤组织内LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ以及炎症小体NLRP3,caspase-1,IL-1β,IL-18的蛋白表达水平;采用ELISA法检测血清炎症因子IL-1β,IL-18含量.结果显示:模型组肿瘤细胞呈明显异型性及恶性增殖的特点,阳性对照组及TF-SB各剂量组肿瘤组织向周围侵犯情况明显减轻、肿瘤组织坏死范围明显增大、炎性反应明显减轻.阳性对照组及TF-SB各剂量组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ明显增加,NLRP3,caspase-1,IL-1β,IL-18蛋白表达明显减少.模型组小鼠血清IL-1β,IL-18含量明显升高,与正常对照组比较有极显著性差异(P ＜0.001),阳性对照组及TF-SB各剂量组血清IL-1β,IL-18含量明显减少,上述指标各药物组与模型组比较均有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01或P＜0.001).实验结果表明半枝莲总黄酮可通过抑制NLRP3炎症小体的表达、改变肿瘤生长微环境,从而产生抗肿瘤作用,其机制可能与其诱导肿瘤细胞发生自噬有关.
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从NLRP3炎症小体途径探讨竹节参总皂苷改善自然衰老大鼠认知功能衰退的作用机制
探讨竹节参总皂苷(saponins from Panax japonicus,SPJ)对自然衰老大鼠认知功能衰退的改善作用及机制.18月龄SD雄性大鼠随机分为3组,即自然衰老组、竹节参总皂苷10 mg·kg-1和30 mg· kg-1剂量组,每组10只.竹节参总皂苷给药组大鼠从18月龄开始分别灌胃给予10,30 mg·kg-1竹节参总皂苷,自然衰老组大鼠灌胃等量的生理盐水.灌胃持续6个月,每周连续灌胃6d,停药1d,另取10只6月龄的大鼠作为青年对照组.采用旷场、新物体认知和Morris水迷宫方法检测各组大鼠认知功能的改变,场电位记录法检测各组大鼠海马CA1区突触传递长时程增强(LTP)的变化.Western blot法检测各组大鼠NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3,ASC,caspase-1的表达变化以及突触可塑性相关蛋白GluA1,GluA2和学习记忆相关蛋白CAMKⅡ,CREB及其磷酸化表达的变化.竹节参总皂苷可改善衰老大鼠的认知功能衰退,减轻衰老大鼠海马CA1区LTP的受损程度,减少衰老大鼠NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3,ASC,caspase-1的表达水平.同时,竹节参总皂苷可增强突触可塑性相关蛋白AMPA受体亚型GluA1和GluA2的膜表达,增强衰老大鼠学习记忆相关蛋白CAMKⅡ,CREB的磷酸化表达水平.竹节参总皂苷可改善衰老大鼠认知功能衰退,其机制可能与其调节NLRP3炎症小体,进而调节AMPA受体膜表达,增强学习记忆相关蛋白CAMKⅡ和CREB的磷酸化表达有关.
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银杏酮酯抑制LPS/ATP诱导原代小胶质细胞NLRP3炎症小体的激活机制研究
该研究利用原代小胶质细胞观察了银杏酮酯(Ginkgo biloba extract 50,GBE50)的抗炎机制及其对NLRP3炎症小体的作用机制.以LPS/ATP刺激小胶质细胞,筛选佳的刺激时间点及GBE50佳浓度;ELISA检测细胞培养液中IL-6,TNF-α含量;Western blot法检测GBE50对NLRP3,ASC,caspase-1,IL-1β炎症小体蛋白表达水平的影响;CO-IP检测GBE50对NLRP3炎症小体聚合的影响.GBE50(10 mg·L-1)预处理后可以明显抑制LPS(100μg·L-1,12h)、ATP(5 mmol·L-1,30 min)诱导原代小胶质细胞NLRP3炎症小体相关蛋白表达、NLRP3炎症小体聚集以及炎性因子IL-6和TNF-α的释放.以上实验结果表明,GBE50抑制小胶质细胞激活后炎性因子的分泌,与其下调NLRP3炎症小体的蛋白表达及活性有关.
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NLRP3炎症小体与溃疡性结肠炎的研究进展
溃疡性结肠炎是肠道慢性炎性反应性疾病,遗传易感性、肠道菌群和黏膜免疫功能失调在溃疡性结肠炎的发生发展过程中起重要作用.目前研究显示NLRP3基因与溃疡性结肠炎的易感性相关,NLRP3炎症小体可维持肠道内环境稳定,对实验性结肠炎具有保护作用,其功能缺陷可能导致对溃疡性结肠炎易感.NLRP3炎症小体有可能成为溃疡性结肠炎治疗的新靶点.
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灯盏细辛对视网膜缺氧及其所致炎症损伤保护的研究进展
视网膜缺氧损伤主要是视网膜神经节细胞遭到破坏,如氧化应激、兴奋毒性损伤、炎症损伤等所致.视网膜神经节细胞变性会导致视神经传导功能障碍,故缺氧损伤后短期内阻断视神经细胞损伤通路和增强其存活机制成为恢复视觉的关键.灯盏细辛能通过多种机制对视网膜缺氧损伤起到很好保护作用,其能降低炎症介质的表达,故可通过减轻炎症反应对视网膜缺氧所致的一系列炎症级联效应起到保护作用.
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NLRP3炎症小体与2型糖尿病的研究进展
NLRP3炎症小体作为固有免疫系统的重要组成部分，在2型糖尿病的发病过程中起着重要作用，而白细胞介素1β（ IL-1β）是介导其发挥作用的关键因子。核糖体蛋白质合成、嘌呤受体P2X7、活性氧敏感的硫氧还原蛋白相互作用蛋白（ TXNIP）与NLRP3炎症小体激活密切相关。肥胖时胰岛素作用的靶组织中NLRP3、IL-1β表达均增高，其介导的炎症反应在胰岛β细胞功能障碍、凋亡以及胰岛素抵抗发生过程中起关键作用。 NLRP3炎症小体被多种途径激活，从而上调胰岛和脂肪组织中IL-1β的表达，促进胰岛β细胞凋亡及胰岛素抵抗的发生发展，导致糖尿病的产生。
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NLRP3炎症小体信号通路相关分子在新疆哈萨克族高血压患者外周血T淋巴细胞中的表达
目的 研究新疆哈萨克族高血压患者外周血T淋巴细胞是否表达NLRP3炎症小体信号通路相关分子及其水平变化.方法 随机选取2013年6月至2014年2月期间新疆医科大学第一附属医院心脏中心门诊首次就诊且未经降压药物治疗的新疆哈萨克族高血压患者30例(高血压组),年龄(54.7±5.6)岁,选取同期同民族健康体检者30例(对照组),年龄(54.6±4.7)岁,每组男女比例1∶1.采集两组受试者外周血并分别提取血浆和T淋巴细胞,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血浆白细胞介素(IL)-1β含量;运用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测T淋巴细胞中NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspasm1)、IL-1β mRNA和蛋白的表达.结果 两组受试者基线资料差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组相比,高血压组血浆IL-1β水平明显升高[(61.0±4.1)比(43.0±3.1)ng/L,P=0.002].外周血T淋巴细胞表达NLRP3炎症信号通路关键分子NLRP3、Caspase-1和IL-1β;且高血压组的这3种基因mRNA相对表达量均高于对照组(0.0018±0.0005比0.0005±0.0001,P=0.010;0.0205±0.0062比0.0065±0.0021,P=0.024;0.0092±0.0019比0.0033±0.0011,P=0.008);三者蛋白表达量也较对照组增高.结论 外周血T淋巴细胞上表达NLRP3炎症小体信号通路相关分子,并且该通路的相关分子在新疆哈萨克族高血压患者外周血T淋巴细胞上表达增多.
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运动预适应通过下调NLRP3炎性小体影响心功能的研究进展
NLRP3炎性小体在慢性炎症的发生发展过程中很可能发挥着重要作用,它在心血管疾病中的作用也越来越受到关注.近年研究发现,运动对激活NLRP3炎性小体影响心功能有密切关联.本文介绍了关于运动预适应通过下调NLRP3炎症小体影响心功能的研究进展.
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NLRP3炎症小体在高脂诱导大鼠冠状动脉硬化性心脏病形成中的表达水平及意义
目的 探讨NLRP3炎症小体在冠状动脉硬化性心脏病(冠心病,CAD)大鼠心肌组织和冠状动脉(冠脉)组织中的表达水平,并初步探索NLRP3炎症小体致大鼠冠心病形成中的作用.方法 通过高脂饮食诱导制备大鼠冠心病动物模型,分析各组实验动物血液中总胆固醇(TC),三酰甘油(TG)水平;通过RT-qPCR及Western Blot等方法对NLRP3炎症小体及其作用蛋白白介素1β(IL-1β)心肌组织中的mRNA及蛋白表达水平进行测定;通过心脏超声检查、心肌及冠状动脉组织病理切片评价NLRP3炎症小体对CAD形成的影响.结果 血清学检测发现高脂饮食大鼠与正常饮食大鼠相比较TC与TG水平明显增高(P<0.05);通过RT-qPCR及Western Blot检测NLRP3炎症小体及作用蛋白IL-1β在高脂饮食组大鼠心肌组织中表达水平明显上调(P<0.05);通过大鼠冠状动脉、心肌组织病理切片及心脏超声发现,高脂饮食组大鼠冠状动脉出现明显粥样斑块并伴管腔内径缩小,心脏增大明显且心功能下降明显(P<0.05);心脏结构和功能改变与NLRP3炎症小体及作用蛋白IL-1β表达上调有关.结论 NLRP3炎症小体参与了CAD的发生发展过程.
关键词： NLRP3炎症小体 冠状动脉硬化型心脏病 高血脂 大鼠 -
NLRP3炎症小体在肾缺血再灌注损伤中的作用
缺血再灌注损伤是一个涉及多种因素相互作用的炎症级联反应过程,与肾移植术后早期的移植肾功能延迟恢复和急性排斥反应等密切相关,目前尚不明确其机制.近研究发现,NLRP3炎症小体作为炎症级联反应的关键分子在肾缺血再灌注损伤的发生发展中发挥重要作用,并有望成为肾缺血再灌注损伤新的治疗靶点.本文对NLRP3炎症小体在肾缺血再灌注损伤中的作用进行综述.
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NLRP3炎症小体调控机制研究进展
炎症小体活化是由多蛋白复合物组装信号介导的炎症相关的半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶(caspase)活化以及白细胞介素-1 (interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-18 (interleukin-18,IL-18)等炎症因子的成熟过程.其中NOD (nucleotide binding oligomerization domain)样受体家族3(NOD-like receptors,NLRP3)炎症小体是目前研究透彻的炎症小体类型,它参与了人类众多疾病的发生发展.因此靶向NLRP3炎症小体已经成为相关疾病治疗药物开发的热点.本综述总结了近5年来关于NLRP3炎症小体的研究进展,包括NLRP3 priming阶段的调控、蛋白复合物组装的调控、内源性代谢物质及亚细胞器对NLRP3的活化调节及小分子抑制剂的研究.对NLRP3调控机制的深入认识将有助于新药物靶标发现和治疗药物的开发.
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甘草查尔酮A对NLRP3炎症小体的调控作用及机制初探
利用小鼠原代骨髓巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)构建NOD (nucleotide binding oligomerization domain)样受体家族3(NOD-like receptors,NLRP3)炎症小体活化模型,探讨甘草查尔酮A (licochalcone A,LCA)对NLRP3炎症小体的调控作用及初步机制.脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)预处理BMDMs细胞后给予LCA,分别再给予三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)和尼日利亚菌素(nigericin)刺激构建NLRP3炎症小体活化模型,采用Caspase-Glo(R)1 Inflammasome Assay和ELISA检测细胞培养上清液中半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶1 (caspase-1)的活性、白细胞介素(interleukin,IL)-1β和肿瘤坏死因子-d(tumor necrosis factor-a,TNF-a)分泌;通过免疫印迹法(Western blot)检测细胞上清中的成熟IL-1β、caspase-1的产生及细胞裂解液中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)和pro-caspase-1、pro-IL-1β的表达.Caspase-Glo(R)1 Inflammasome Assay和ELISA结果表明,LCA能显著抑制ATP和nigericin诱导的NLRP3炎症小体组成蛋白pro-caspase-1和pro-IL-1β剪切活化,同时对细菌鞭毛蛋白(Lfn-Flic)诱导的NOD样受体家族半胱天冬酶激活募集结构域4(NOD-like receptor containing a caspase activating and recruitment domain 4,NLRC4)炎症小体活性也具轻微抑制作用,但是对poly(dA:dT)诱导的黑色素瘤缺乏因子2(the absent in melanoma 2,AIM2)炎症小体活化无影响.免疫印迹法检测显示LCA对NF-κB介导的NLRP3炎症小体组成蛋白NLRP3和pro-IL-1β表达无影响.综上,研究表明LCA可通过抑制pro-caspase-1剪切,阻断caspase p20介导的pro-IL-1β的剪切成熟,终抑制NLRP3炎症小体介导免疫炎症反应.本研究在中国人民解放军第302医院伦理委员会审批下进行,为甘草及LCA防治NLRP3炎症小体相关疾病提供了依据.
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NLRP3炎症小体在早期动脉粥样硬化ZDF大鼠中的表达及阿托伐他汀的干预
目的 观察NLRP3炎症小体及其介导的炎症因子在早期动脉粥样硬化(AS) Zucker糖尿病肥胖(ZDF)大鼠主动脉组织中的表达,以及阿托伐他汀(ATV)的干预作用.方法 高脂饲喂联合小剂量多次注射VD3建立ZDF大鼠早期AS模型,并给予ATV干预;检测血糖血脂、胰岛素、ox-LDL和hsCRP,并进行主动脉组织病理学检查和NLRP3、caspase 1、IL-1β和TNF-α基因表达的检测.结果 高脂饲喂后ZDF大鼠血糖、血脂、胰岛素和ox-LDL水平均显著上升(P＜0.05).注射VD3后,hsCRP水平均显著上升(P＜0.05),主动脉组织出现明显的早期AS病变,且NLRP3、caspase 1、IL-1β和TNF-α基因表达显著上调(P＜0.05),而ATV组ZDF大鼠血脂、ox-LDL和hsCRP水平均明显下降(P＜0.05),AS病变程度减轻,且主动脉组织中NLRP3、Caspase 1、IL-1β和TNF-α基因表达显著下调(P＜0.05).结论 NLPR3炎症小体及其介导的炎症因子参与了ZDF大鼠早期AS的炎症反应,而ATV可抑制NLRP3炎症小体的表达,抑制AS的炎症反应.
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NLRP3炎症小体在肝疾病中的作用
NLRP3炎症小体是一种多蛋白复合物,能识别来自损伤细胞和病原生物释放的信号分子,介导caspase-1活化,从而剪切活化细胞因子IL-1β和IL-18. IL-1β是一种正反馈式促炎因子,可放大炎症反应.与其他炎症反应不同,NLRP3炎症小体活化需要两种信号参与,因而具有较高的激活阈值. NLRP3炎症小体活化与肝疾病发病机制有密切关系,在不同病因诱导的肝疾病及实验动物模型研究中已证明,NLRP3炎症小体活化在肝细胞损伤、细胞活化以及促进肝纤维化中发挥重要作用.这些研究有助于转化应用到临床治疗实践中,为肝疾病的治疗提供理论依据和新的药物作用靶点.本文主要探讨了炎症小体的功能、活化机制及其不同肝损伤过程中的活化及生物学功能效应,并根据国内外新相关研究报道,对NLRP3炎症小体在酒精性肝病、非酒精性肝病、慢性HCV感染和肝纤维化中的作用进行综述.
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NLRP3炎症小体与糖尿病慢性并发症的关系及中药干预作用
NLRP3炎症小体是模式识别受体的一种,可通过活化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶调控白细胞介素-1β、-18等炎症因子的成熟和分泌,引发炎症反应.近年研究发现,在慢性高糖状态下葡萄糖、游离脂肪酸、尿酸等代谢应激均可激活NLRP3炎症小体,成为糖尿病及慢性并发症的新靶标.本文总结了NLRP3炎症小体与糖尿病慢性并发症的关系及中药干预作用的研究进展.
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NLRP3炎症小体参与光气致急性肺损伤的炎症反应
目的 探讨NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体介导的白细胞介素-1β(IL-1β)等炎性因子释放在大鼠光气致急性急性肺损伤(ALI)发病机制中的作用.方法 将20只大鼠随机分为2组,空气对照组(吸入与光气染毒组同等流量的空气)10只,光气染毒组(吸入8.33 mg/L纯度为100％的光气5min)10只.染毒6h后收集血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织.制作肺脏石蜡切片,HE染色观察形态学改变,免疫组化检测肺组织中NLRP3蛋白表达水平.蛋白质免疫印迹试验(Westere blot)技术和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)mRNA和蛋白的表达.采用双抗体夹心酶标免疫分析法(ELISA法)测定各组血清和BALF中IL-1β、IL-18和IL-33水平;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对肺组织IL-1β、IL-18和IL-33 mRNA水平进行半定量研究.结果 成功复制光气吸入性肺损伤模型.染毒6h后HE染色形态学观察可见,光气染毒组肺组织中有大量炎性细胞浸润,免疫组化染色结果显示,光气染毒组大鼠肺泡间隔增厚,肺组织中可见较多NLRP3阳性细胞.与空气对照组(mRNA:NLRP3为21.49±1.44,Caspase-1为23.38±1.37;蛋白含量的相对值:NLRP3为0.090 6±0.0257,Caspase-1为0.094 2±0.0346)比较,光气染毒组肺组织中NLRP3和caspase-1 mRNA和蛋白表达量(mRNA:NLRP3为28.19±1.11,caspase-1为28.67±0.89;蛋白含量的相对值:NLRP3为0.655 6±0.171 4,caspase-1为0.964 1±0.284 6)明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);ASC mRNA和蛋白表达量无明显变化,差异无统计学意义(P＞0.05).与空气对照组(肺组织mRNA:IL-1β为15.25±0.72、IL-18为23.16±0.60、IL-33为22.48±1.25;血清IL-1β为109.6±1.9、IL-18为36.12±1.49、IL-33为11.30±1.27;BALF:IL-1β为170.4±3.0、IL-18为48.15±3.08、IL-33为21.00±1.43)比较,光气染毒组肺组织IL-1β、IL-18和IL-33 mRNA (IL-1β为22.68±1.16、IL-18为30.35±1.23、IL-33为31.44±1.21)表达量明显升高,血清和BALF中IL-1β、IL-18和IL-33蛋白含量(血清:IL-1β为418.7±13.9、IL-18为140.4±5.0、IL-33为25.70±1.16;BALF:IL-1β为615.8±24.9、IL-18为151.60±6.38、IL-33为38.30±1.248)明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 NLRP3炎症小体介导炎性反应可能参与了光气致急性肺损伤的发病过程,可能是急性肺损伤的发病机制之一.
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NLRP3/IL-1β/TGF-β1信号轴在矽肺肺纤维化大鼠模型中的表达及意义
目的 探讨NLRP3/IL-1β/TGF-β1信号轴在矽肺肺纤维化大鼠模型中的表达情况及意义.方法 选择健康SPF级Wistar雄性大鼠80只,随机分为4组,分别为高(100mg/ml)、中(50mg/ml)、低(25 mg/ml)浓度SiO2染尘组和正常对照组,每组20只.各组分别在SiO2染尘后7d、14d、28 d、56 d处死5只大鼠,观察肺组织肺泡炎程度及肺纤维化程度,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织中IL-1β、IL-18、TGF-β1含量,Western Blot法检测大鼠肺组织中NLRP3、Caspase-1蛋白表达情况.结果 与正常对照组比较,各染尘组大鼠7d、14d、28 d、56 d的肺泡炎评分、纤维化程度明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01);与正常对照组比较,各染尘组大鼠7d、14 d、28 d、56 d的IL-1β、IL-18、TGF-β1浓度明显升高(P＜0.01);与正常对照组比较,各染尘组大鼠肺组织中NLRP3、Caspase-1蛋白表达在7d、14d、28 d、56 d均升高(P＜0.01);低、中、高浓度SiO2染尘组内NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18和TGF-β1表达量在7d、14d和28 d间两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),均呈随着染尘时间的增加而升高的时间-效应关系.结论 NLRP3及其下游因子Caspase-1、IL-1β、IL-18、TGF-β1在矽肺肺纤维化大鼠模型肺组织中高表达,提示NLRP3/IL-1β/TGF-β1信号轴可能与矽肺肺纤维化有密切的关系,在矽肺形成过程中发挥了作用.
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甲基强的松龙对光气吸入性肺损伤大鼠NLRP3炎症小体的影响
目的 探讨甲基强的松龙(MP)对光气吸入性急性肺损伤中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体及其下游炎症因子的影响.方法 将40只大鼠随机分为4组,空气对照组(吸入与光气染毒组同等流量的空气)、光气染毒组(吸入8.33 mg/L纯度为100％的光气5 min)、生理盐水对照组(吸入同等剂量的光气1h后尾静脉注入2 mg/kg生理盐水)、MP干预组(吸入同等剂量的光气1h后尾静脉注入2 mg/kg甲基强的松龙),每组10只.不同处理后6h收集血清,支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织.制作肺组织石蜡切片,HE染色观察形态学改变,免疫组化检测肺组织中NLRP3炎症小体相关蛋白表达水平.蛋白质免疫印迹试验(Western blot)技术和RT-PCR方法检测肺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)mRNA和蛋白的表达.采用双抗体夹心酶标免疫分析法(ELISA法)测定各组血清和BALF中白细胞介素(IL)-1β、IL-18和IL-33水平.结果 染毒6h后HE染色形态学观察可见,光气染毒组肺组织中有大量炎性细胞浸润.免疫组化染色结果显示,光气染毒组大鼠肺泡间隔增厚,肺组织中可见较多NLRP3、ASC和caspase-1阳性细胞;MP干预组肺组织中有炎性细胞浸润较光气染毒组明显减少,同时NLRP3和caspase-1阳性细胞较光气染毒组减少,而ASC阳性细胞无明显减少.与空气对照组比较,光气染毒组肺组织中NLRP3、ASC和caspase-1mRNA和蛋白表达量明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与光气染毒组比较,MP干预组NLRP3和caspase-1 mRNA和蛋白表达量明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05),而ASC mRNA和蛋白表达量无明显减少.与空气对照组比较,光气染毒组血清和BALF中IL-1β、IL-18和IL-33蛋白含量明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);与光气染毒组比较,MP干预组血清和BALF中IL-1β、IL-18和IL-33蛋白含量明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MP可通过抑制NLRP3炎症小体的表达进而减少其介导的IL-1β等炎症因子释放来有效地保护大鼠光气吸入性急性肺损伤.
