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SMO保存液对犬肾低温保存期间线粒体功能的保护作用
目的 研究SMO保存液对犬肾低温保存期间线粒体功能的保护作用.方法 建立犬离体肾脏单纯低温保存模型,分别采用0～4 ℃的SMO保存液、HTK保存液和UW保存液对犬肾进行灌注和保存,并根据所用保存液的不同分为SMO组、HTK组和UW组.分别于低温保存2、24、48和72 h后取各组的肾组织皮质标本,进行病理学观察并应用氧电极(Clark)法测定肾组织细胞线粒体的呼吸控制率(RCR)和磷/氧比(P/O).结果 犬肾在保存48 h和72 h后,SMO组肾组织病理学改变较HTK组轻;保存24 h内肾组织RCR与HTK组无明显差异,但其余时间点均高于HTK组(P＜0.05),保存72 h时差异为明显(P＜0.01).SMO组犬肾保存2 h后,肾组织的P/O比值与HTK组无明显差异(P＞0.05),但在保存24 h后则明显高于HTK组(P＜0.05).SMO组与UW组各项观察指标比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SMO保存液在减轻细胞形态学改变和保持线粒体整体功能方面显著优于HTK保存液,与UW保存液效果相当.
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冷冻保存大鼠肝脏离体再灌注时嘌呤核苷磷酸酶活性和透明质酸吸收率的变化
目的 探讨不同保存液保存大鼠肝脏后离体再灌注时嘌呤核苷磷酸酶(PNP)活性和透明质酸吸收率的变化及意义.方法 分别采用UW液、HTK液和Celsior液灌洗、冷保存Wistar大鼠肝脏16及24 h,然后用37℃的Kreb-Henseleit液在常温下连续灌注90 min,分别于灌注0、15、30、60和90 min时,从灌注液中取样,测定嘌呤核苷磷酸酶活性和外源性透明质酸吸收率的变化,据此评价肝窦内皮细胞的状况.结果 经过16 h的低温保存,在再灌注60 min以前,HTK液组灌注液中PNP的含量明显高于UW液组和Celsior液组(P＜0.01);再灌注60 min后,HTK液组和Celsior液组灌注液中PNP的含量明显高于UW液组(P＜0.01).经过24 h的低温保存,在再灌注15 min后,HTK液组灌注液中PNP含量明显高于Celsior液组(P＜0.O1),而Celsior液组又明显高于UW液组(P＜0.01).透明质酸的吸收率均为负值,说明内源性透明质酸的释放大于外源性透明质酸的吸收,且随着保存时间和再灌注时间的延长,这一趋势更加明显,其中HTK液组明显,Celsior液组次之.结论 随着低温保存和再灌注时间的延长,肝脏中PNP活性逐渐升高,外源性透明质酸的吸收率下降,二者可作为评价肝脏缺血-再灌注损伤的指标.
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HOE-642联合改良K/Mg冷血心麻液对犬供心的保护作用
目的 探讨HOE-642联合改良K/Mg冷血心麻液提高犬供心的保存效果的作用.方法 雄性成年杂种家犬32只,随机分为整合组和常规组(每组16只,供、受者各8只).(1)整合组:供心保护采用HOE-642联合改良K/Mg冷血心麻液的"整合策略";(2)常规组:供心保护采用临床上常规方法.所有动物的供心均冷浸浴保存4h,心脏移植用原位标准法.记录不同时段的心功能指标;实验结束后观察心肌超微结构并测定心肌含水量.结果 每组各1例主动脉开放后因主动脉吻合口漏血,失血性休克死亡,剔除出实验;其余动物均成功脱离体外循环.整合组的移植心脏左心室收缩功能和舒张功能恢复指标显著优于常规组(P＜0.05);整合组心肌组织含水量显著小于常规组(P＜0.05);整合组心肌细胞亚细胞结构的保存亦优于常规组.结论 临床常规方法和HOE-642联合改良K/Mg冷血心麻液的"整合策略",均可安全冷保存供心4 h,但后者能进一步减轻心肌水肿、维持心肌细胞结构完整、促进缺血/再灌注损伤后心功能的恢复,具有更佳的心肌保护效果.
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自制SDMC-2液对离体大鼠心脏低温保存的实验研究
目的开发一种应用简便、保存效果好的新心脏保存液.方法实验动物采用SD雄性大鼠.分为对照组(A组),Stanford液保存组(B组),SDMC-1液保存组(C组),SDMC-2液保存组(D组).实验组中,每组心脏均经某一种液体停搏、灌洗并保存8h,然后通过Langendorff灌流装置再灌注,分别测定保存末及再灌注后心肌的ATP、肌酸激酶(CK)、含水量及组织学检查,以及左心室功能的恢复、冠脉流量(CF).结果B、C、D三组各项检测指标与A组比较均有不同程度降低(P<0.05或0.01).左心室功能指标:D组优于B、C组;CF:D组高于B、C组;ATP、CK含量:保存末及再灌注后D组优于B、C组,再灌注前后比较,B、C组降低;B组水含量高且再灌注后加重;电镜:D组细胞结构损伤轻,B组损伤重.结论SDMC-2液配方更为合理,长时间低温保存离体心脏,效果优良.可直接用于心脏停搏、原位灌洗、保存及移植过程中的灌注,简化了心脏保存过程.
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三甲氧苄嗪对大鼠心脏保存作用的实验研究
目的探讨UW、HTK器官保存液以及加入三甲氧苄嗪(TMZ)对大鼠心脏离体低温保存的保护效果.方法以离体灌注鼠心为研究对象,观察鼠心在UW、HTK保存液中4℃保存8h后,以及在UW液、HTK液中加入10-6mol/L TMZ后的心功能、心肌ATP及乳酸盐的变化.结果 HTK液保存的心脏,心功能恢复明显优于UW液(P<0.05),心肌ATP储存量多于UW液(P<0.05),心肌乳酸盐含量少于UW液(P<0.05);在UW液、HTK液中加入10-6mol/L TMZ后,可显著提高UW、HTK液的心肌保护效果(P<0.05).结论 HTK液对离体低温保存鼠心的心肌保护效果优于UW液;TMZ能显著提高UW、HTK保存液的心肌保护效果.
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尼可地尔超极化心脏保存液保存兔心的效果
目的研究钾通道开放剂尼可地尔(nico randil)在心脏保存中的作用.方法 40个兔心随机分成4组,分别用含尼可地尔的KH液(超极化心脏保存液)、UW液、STH液和KH 液保存.采用Langendorff灌注模型和工作心模型,保存前、后测左室发展压、心室内压上升大速率、心室内压下降大速率、冠状动脉流量、肌酸激酶及乳酸脱氢酶,记录各组心跳停止和心电活动停止所需时间、心肌含水量、保存后心肌ATP含量. 结果尼可地尔组的各项指标(除心肌含水量外)均优于STH组和 KH组,达到了UW液的效果. 结论尼可地尔超极化心脏保存液保存兔心效果较好.
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不同器官保存液对大鼠肝脏透明质酸吸收率的影响
目的探讨不同器官保存液对大鼠肝脏透明质酸吸收率的影响,以评价它们对肝窦内皮细胞的保护作用. 方法大鼠肝脏原位灌洗后, 分别在UW液、Celsior液或Histidine -Tryptopan-Ketoglutarate液(HTK液)中低温保存16和24?h,然后用含透明质酸的Kreb -Henseleit液在37 ℃下连续循环灌注90?min,分别于灌注0、15、30、60和90?min时检测肝脏对外源性透明质酸的吸收率. 结果低温保存16 h,再灌注0、15、30、60和90?min时,3种保存液保存的肝脏对外源性透明质酸的吸收率均为负值,表明肝窦内皮细胞受到一定程度的损伤,但UW液和Celsior液对肝窦内皮细胞的保护作用较HTK液为优(P＜0.01);保存24?h者,UW液对肝窦内皮细胞的保护作用优于Celsior液和HTK液. 结论 UW液对肝窦内皮细胞具有较强的保护作用.
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冷浸泡法保存犬心3 h后原位心脏移植的实验研究
目的 探讨St Thomas仿细胞外液、Collins仿细胞内液及两种液体联合应用在冷浸泡法供心保存中的心肌保护效果.方法 12只供犬随机平均分为3组;第1组:以St Thomas液作为停跳液、灌注冲洗液和保存液;第2组:以Collins液作为停跳液、灌注冲洗液和保存液;第3组:以StThomas液作为停跳液、Collins液作为灌注冲洗和保存液.将离体供心放入4℃灌注冲洗液中保存3 h.观察指标:(1)供心灌注冲洗后及保存3 h末心肌温度;(2)心脏保存3 h末心脏重量增加值百分比;(3)血清肌酸激酶同功酶(CK-MB)变化;(4)保存3 h末心肌超微结构改变;(5)移植后心脏复跳情况,除颤次数、心功能.结果 第1组心脏重量增加值大,第2组心肌超微结构显示毛细血管内皮细胞有不同程度的破坏.第3组CK-MB、心脏重量增加值、心肌超微结构改变和移植后心脏复跳情况均明显优于第1、2组.结论 冷浸泡法低温保存供心在3 h以内是安全可行的,用St Thomas仿细胞外液先停跳,再用Collins仿细胞内液灌注冲洗和保存供心能取得更好的效果.
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新型器官保存液抗脐静脉内皮细胞凋亡作用的研究
由于供者器官在获取、保存和移植过程中难以避免的会遭遇冷缺血、热缺血及缺血再灌注损伤,这将影响供者血管内皮细胞的生存状态[1].缺血时间过长及器官保存液都会启动血管内皮细胞凋亡基因,引起血管内皮的损伤,从而导致移植物功能恢复延迟,甚至原发性移植物无功能[2],并且可缩短移植物的存活时间[3],引起慢性移植物功能丧失[4].2006年2-10月,我们分别采用新型器官保存液(TRS液)、UW液及HTK液对人脐静脉血管内皮细胞进行培养,观察不同器官保存液对人血管内皮细胞凋亡的影响.
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保存液中加入硝酸甘油提高离体犬肺的保存效果
在研究不同器官保存液的基础上,我们先后开发了SDMC-1、2液,可有效应用于离体心脏的保存[1,2].为了提高肺保存的效果,我们将保存液中加入硝酸甘油(NTG),用于供肺的灌洗及保存,取得了较好的效果,报道如下.
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超极化心脏保存液对离体大鼠心脏低温保存的保护作用
目的探讨含K+通道开放剂的心脏保存液(HCS液)对大鼠离体心脏的保存作用.方法将24只SD大鼠随机平均分为3组,分别用HCS液、UW液、K-H液对心脏进行保存.采用Langendorff心脏灌注和工作模型装置进行心脏功能测定,比较24h后心功能恢复率以及细胞酶学、心肌含水量、pH值变化和能量变化,观察心肌超微结构改变.结果心脏保存24 h后,K H组左心室功能损伤严重,UW组及HCS组左心室功能损伤较轻.HCS组冠状动脉流量(CF)恢复率较K-H组、UW组好;HCS组冠脉回流液中乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CPK)含量及心肌含水量与UW组比较,差异无统计学意义;HCS组pH值变化小,ATP含量高;HCS组心脏复跳时间与UW组基本相同;HCS组心肌保存良好.结论HCS保存液对大鼠心脏的保存在24 h内有明显的保护作用,心脏功能恢复率能达到UW液的水平,在能量保护、改善酸中毒方面则优于UW液.
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不同器官保存液对成人胰岛分离、纯化及功能的影响
目的探讨不同器官保存液保存胰腺对胰岛分离、纯化及功能的影响.方法以成人胰腺为研究对象,分别以高渗枸橼酸钾溶液(HC-A液)与威斯康新大学器官保存液(UW液)灌洗、保存胰腺,进行胰岛分离及纯化,比较两组分离、纯化后收获的胰岛数及胰岛当量数(IEQ),并在体外评价其功能.结果两组在胰腺重量、热缺血时间、冷缺血时间没有明显差异的情况下,胰腺分离、纯化后所获得的胰岛数及胰岛当量数的差异无显著性(P＞0.05),纯化后的胰岛细胞在体外低糖与高糖刺激下,其胰岛素的分泌量及G肽的释放量的差异也无显著性(P＞0.05);两个组胰岛细胞的活率均在85%以上.结论在胰岛移植中,可以使用HC-A液作为胰腺保存液.
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11,12-EET对未成熟离体兔心的长时间保存作用
目的观察11,12-EET(11,12-epoxyeicosatrienoic acid)液对未成熟兔离体心脏的保护作用.方法将48只未成熟离体兔心按随机分配原则分成对照组(24只)和EET组(24只),对照组保存心脏采用St.Thomas No.2液为停搏液及保存液,EET组采用St.Thomas No.2液+11,12-EET为停搏液及保存液,分别保存心脏8 h、16 h、24 h.利用非循环式Langendorff灌注装置测定各组心脏保存前及保存后再灌注30 min(37℃)的左心室变化压(LVDP)、舒张末期压(LVEDP)、大压力变化速率(+dp/ptmax)和冠状动脉流量(CBE),并测定心律失常评分、心肌肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)含量及观察心肌超微结构的改变等指标.结果(1)EET组各保存时间的心功能恢复率、心肌水肿程度、心律失常评分均好于相应对照组;CK、LDH及心肌超微结构的改变亦明显优于对照组.(2)心脏保存16 h后,EET组的心功能恢复率、心律失常评分基本接近心脏保存之前的测定值,而对照组则明显减低.(3)心脏保存24 h,EET组心脏全部复跳,对照组5只心脏不能复跳.结论St.Thomas No.2液中加入11,12-EET可延长对未成熟兔离体心脏的保存时间并增强其保存效果.
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氟碳化合物减轻移植器官缺血再灌注损伤的研究进展
近年来,器官移植技术得到了迅速发展,寻找佳器官保存液是目前移植工作者的重要研究课题之一.氟碳化合物(PFC)作为一种良好的人工氧载体已在医学领域得到广泛应用,近期则在移植器官保存方面崭露头角,现综述如下.
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HTK器官保存液及其研究近况
器官保存液的改进和发展,大大提高了器官移植的成功率.近年来,HTK液逐渐受到人们的重视,临床上该液已被用于心脏、肾脏、肝脏、胰腺等脏器的保存[1].本文将就HTK液的进展综述如下.
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改良SDMC-2液对离体犬肺保存-移植的研究
目的 在山东医科大学心脏液2号(SDMC-2)的基础上,开发有利于肺保存的器官保存液.方法 30条Beagle犬随机分为3组,每组供、受体各5条,供体左肺经3种保存液于4℃保存12 h;然后行受体左肺移植,测定并比较再灌注后的平均肺动脉压力(MPAP)及动脉血氧分压(PaO2);对保存末及再灌注后肺组织标本进行电镜观察.结果 (1)保存-移植再灌注后,3组与正常对照组比较:MPAP升高,PaO2降低(P＜0.01);超微结构均不同程度损伤.(2)改良SDMC-2液保存组再灌注后即刻、0.5、1 h的MPAP无明显变化,均低于相应时间的低钾保存液(LPD液)、SDMC-2液保存组(P＜0.05);PaO2则高于相应时间的LPD液、SDMC-2液保存组(P＜0.05).电镜显示:改良SDMC-2液保存组肺组织超微结构损伤轻.结论 改良SDMC-2液具有优良的保存效果及抗再灌注损伤能力.
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一种肺器官保存液的配制
随着器官保存液的不断改进和发展,器官移植的成功率得到了很大提高,近年来,LPD(low potassium dextran)液,逐渐引起人们的重视,在大量的动物实验中证实该器官保存液在心、肺等移植中效果良好[1～2].我们比较了EC液(euro-collins)、UW液(university of wisconsin)、HTK液(histidine tryptophane ketoglutarate)、KH液(krebs henseleit)、LPD液,决定在对一患者实施的心肺联合移植中采用LPD液,并对处方稍作了改变.其配制情况如下:
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肝移植3种器官保存液的比较研究
目的 比较UW液、Celsior液和HTK液时移植供肝灌注保存的效果.方法 回顾性分析2002年1月～2004年3月施行的成人首次肝脏移植且术前诊断为良性肝病者263例,根据所采用的灌注保存液分为lAW液组(161例)、Celsior组(45例)和HTK组(57例),3组患者年龄、性别及原发病分布,术前肝功能指标及分级,肝移植术式及供肝冷,热缺血时间差异均无显著性,比较3组患者术后早期移植肝功能指标、血管及胆道并发症发生率和移植物存活率.结果 3组患者肝移植术后早期血清丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶和γ-谷氨酰转肽酶差异均无显著性;UW液组术后第7天血清总胆红素(117.4±96.3)μmol/L高于Celsior组[(85.1±77.9)μmol/L,P=0.047]和HTK组[(86.5±82.6)μmol/L,P=0.033];HTK组术后即刻凝血酶原时间(21.9±5.8)s低于UW液组[(24.8±6.2)s,P=0.004]和Celsior组[(26.4±7.0)s,P=0.0011;HTK组凝血酶原时问峰值(24.0±5.2)s低于Celsior组[(27.5±6.1)s,P=0.002].UW液组发生移植肝原发无功能2例(1.2%),但组间差异无显著性(P=0.528).3组患者术后血管并发症、胆道并发症及排斥反应发生率和再次移植率差异均无显著性.移植物1年及3年存活率分别为:UW液组80.7%和73.9%,Celsior组91.1%和82.2%,HTK组94.7%和80.7%,存活时间差异无显著性(P=0.099).结论 UW液、Celsior液和HTK液对移植供肝灌注保存的效果差异无显著性.
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LHF器官保存液保存新生猪胰腺的实验研究
目的:探讨自行设计的LHF(乳果糖-组氨酸-聚蔗糖)器官液保存新生猪胰腺的效果.方法:在4±1℃条件下,分别采用LHF液、UW液、Euro-Collins液,保存新生猪胰腺12h、24h、36h后进行胰岛分离,观察保存前、后胰岛形态、功能、线粒体细胞色素氧化酶活力等变化.结果:LHF液保存新生猪胰腺36h后,组织结构基本完整,含水率低;胰岛分离后,超微结构正常,细胞存活率高,凋亡率低,分泌功能良好.细胞色素氧化酶活力正常,其指标与UW液类似,明显优于Euro-Collins保存液.结论:LHF器官保存液可用作胰岛移植供体保存,具有较为广阔的应用前景.
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自制GPC-Ⅱ-3液对兔肝低温延时保存的形态学观察
目的探索对供肝具有较长时间保护作用的器官保存液.方法20只新西兰大白兔(体重2.5～3.0 kg)随机分为实验组(15只)和实验对照组(5只).用自制的器官保存液(GPC-Ⅱ-3液),低温冷藏连续保存兔肝0～192 h,观察其组织结构的变化.结果保存0～120 h的兔肝,其组织结构基本正常;保存到144h兔肝,电镜下见肝细胞的线粒体出现轻度肿胀和嵴少;随着保存时间的延长肝细胞出现明显的细胞变性.结论用GPC-Ⅱ-3液以低温冷藏的方法能够在组织结构上保存兔肝120 h.
