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嵌合抗原受体修饰T细胞在肿瘤免疫治疗中的研究进展
近年来，作为新型肿瘤免疫治疗技术，嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor，CAR）T细胞在恶性肿瘤的治疗中取得了很好的成果，为部分晚期患者带来了康复的希望。CAR是利用基因工程技术将能够与肿瘤抗原结合的受体部分与胞内的信号转导部分相结合而形成的一种新型受体，经CAR修饰的T细胞可通过非MHC限制性的方式杀伤肿瘤细胞。本文就近年来CAR-T疗法的研究进展及其在恶性肿瘤临床治疗的应用进行综述。
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CAR-T细胞在肿瘤临床试验中的研究进展
以嵌合型抗原受体(CAR)为基础的细胞治疗近年成为肿瘤生物治疗领域亮丽的明星.尤其是靶向CD19分子的CAR-T细胞在B淋巴细胞恶性肿瘤的临床治疗中取得了良好的疗效.本文通过总结国内外CAR-T细胞的临床试验数据,对其临床疗效和潜在的不良反应进行统计分析,并就CAR-T细胞的发生、临床应用及存在的问题进行阐述.
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嵌合抗原受体修饰T细胞研究进展及肿瘤靶抗原的选择
嵌合抗原受体修饰T细胞(CAR-T)是目前恶性肿瘤免疫治疗的一种新方法.CAR-T细胞对肿瘤的杀伤不依赖主要组织相容性复合体(MHC),并可克服肿瘤局部免疫抑制微环境和突破宿主免疫耐受状态,因此,CAR-T细胞在治疗肿瘤方面具有独特的优势.CAR-T细胞的构建和选择合适的靶分子是CAR-T细胞免疫治疗的两个关键的问题,我们在文中将围绕这两个问题做一综述.
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CAR技术在多发性骨髓瘤治疗领域的研究进展
多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是在B淋巴细胞分化为浆细胞过程中因遗传基因发生突变所致的血液系统恶性肿瘤,化疗是目前主要治疗的手段;随着蛋白酶体抑制剂等药物的开发,患者的总体生存率得到了提高,但耐药等因素仍然会导致治疗的失败.嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的T淋巴细胞治疗是近5年来肿瘤过继免疫治疗的新方法,通过基因修饰的手段,使T细胞能够能特异性识别靶抗原,并以非组织相容性抗原(major histocompatibility complex,MHC)限制性的方式杀伤靶细胞,从而产生特异性的杀伤作用.目前,CAR-T治疗越来越被人们所关注,尤其在B系来源的白血病和淋巴瘤中取得了惊人的成绩.然而,就多发性骨髓瘤的CAR技术治疗而言,未见系统的文献复习.因此,本文就可查阅到的以不同靶点的CAR技术在多发性骨髓瘤体内及体外实验中所获得的研究成果作一综述.
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CAR-T免疫治疗在血液肿瘤治疗中的研究现状和挑战
嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)T细胞治疗技术经过近30年的发展,逐渐成为治疗血液肿瘤的新趋势.随着基因工程技术的不断发展,CAR-T技术已经经历了4代革新.CAR-T结构从单一信号分子发展到2个及2个以上共刺激分子,再到编码CAR基因或启动子,CAR-T技术发展不断成熟.CAR-T能特异识别肿瘤抗原,不受主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)限制性的影响,在治疗血液肿瘤领域取得了突破性的成果.本文就CAR-T的历史、结构和作用机理、以及在急性淋巴细胞白血病、急性髓系白血病、慢性髓系白血病、多发性骨髓瘤等血液肿瘤临床治疗中的研究现状和面临的挑战作一综述.
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应用CD19修饰的嵌合抗原受体T细胞治疗淋巴细胞白血病
应用嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptorT cell,CAR T)治疗急性和慢性淋巴细胞白血病,在近期已取得了新进展.CAR T细胞是通过将T细胞受体基因和抗CD19抗体基因嵌合,转柒至T细胞,在体外扩增以后输注给患者来治疗白血病的新型免疫治疗.经过基因改造后的CAR T细胞的表面具有特异性位点,可以识别淋巴细胞白血病中B细胞表面的CD19抗原.CD19抗原的持续刺激可使CAR T细胞不断增殖与活化,CAR T在患者体内可以增殖1000倍,有效杀伤急性和慢性淋巴细胞白血病细胞.本文就CAR T细胞及其对急性和慢性淋巴细胞白血病的疗效进行综述.
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嵌合抗原受体技术免疫治疗血液系统恶性肿瘤的研究进展
嵌合抗原受体(CAR)是单链抗体的可变区和T细胞信号分子的融合蛋白,它使T细胞可以通过非MHC限制性的方式识别特异性抗原,发挥杀伤作用.目前,CAR的信号域已从第一代的单一信号分子发展为包含CD28、4-1BB等共刺激分子的多信号结构域(第二、三代),在体内的存在时间及杀伤能力明显增强.利用靶向CD19和CD20的CAR修饰的T细胞进行过继输注,治疗血液系统恶性肿瘤是目前临床研究的热点.临床试验表明第二代CAR的抗肿瘤能力较第一代CAR明显增强,对于复发及难治性B系肿瘤有一定的疗效.同时,CAR技术也正研究用于骨髓移植后的过继免疫治疗等领域.在治疗安全性方面,目前临床试验中大部分患者对CAR治疗耐受性良好,但学者们对CAR可能引起插入突变、脱靶效应和炎症反应等不良反应也不无忧虑.本文就CAR技术在血液系统恶性肿瘤免疫治疗中的应用及安全性评价作一综述.
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嵌合抗原受体修饰的CAR-T/NK细胞在多发性骨髓瘤治疗中的应用
嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)是一种合成跨膜蛋白,通过抗肿瘤细胞上的特异性或相关性抗原来重新定向被修饰的细胞.CAR修饰的T/NK细胞,特别是CAR-T细胞是近年来迅速发展的肿瘤过继免疫治疗新手段,它赋予T/NK细胞靶向杀伤活性,并可克服肿瘤局部免疫抑制微环境和打破宿主免疫耐受状态.CAR将识别肿瘤相关抗原的单链抗体和T/NK细胞的活化基序相结合,通过基因转导赋予T/NK细胞肿瘤靶向性、更强的杀伤活性和持久的生命力.本文就CAR发展、CAR-T和CAR-NK细胞的比较、MM细胞的表面标记和CAR在MM中的应用及CAR-T/NK细胞的前景进行综述.
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嵌合抗原受体设计的NK细胞在多发性骨髓瘤中的应用研究
目的:通过建立CAR(CD138-CD28-CD3ζ)-NK细胞,探讨CAR(CD138-CD28-CD3ζ)-NK细胞对多发性骨髓瘤的抗肿瘤作用.方法:把抗CD138scFv-CD28-CD3连接到pcDNA3.1质粒,使用三质粒慢病毒包装系统转染293T细胞,收集病毒后感染NK92MI细胞系,应用嘌呤霉素筛选阳性细胞株;通过RT-PCR及West-ern blot检测CAR在NK92MI细胞系的表达,流式细胞术检测NK92MI细胞分泌细胞因子cd107a的能力.结果:经过基因工程技术,体外构建了CAR基因片段,基因测序验证基因序列正确.通过病毒包装技术,获得表达该片段的病毒株.经过病毒转染实验,获得表达CAR融合蛋白的稳转NK细胞株.PCR及Western blot证实,CAR融合蛋白在NK细胞表达.细胞杀伤实验证实CARNK细胞分泌细胞因子cd107a的能力明显优于对照组,具有明显的杀伤多发性骨髓瘤细胞的效应.结论:CAR能在体外构建并在NK92细胞表面表达,CARNK细胞能杀伤表达CD138抗原的多发性骨髓瘤细胞株,从而发挥抗骨髓瘤效应.
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抗CD19 CAR-T对K562CD19+肿瘤细胞特异性杀伤作用的研究
目的 构建表达抗 CD19 分子的嵌合抗原受体,制备抗CD19 CAR-T 细胞,研究其对 CD19 表型细胞的特异性识别和杀伤效果.方法 通过分子克隆方法,构建能够自剪切 EGFP 荧光报告的抗 CD19 CAR 分子,将其重组到慢病毒载体中并包装获得慢病毒.通过慢病毒递送的方式,将抗 CD19 CAR 过表达于 primary-T 细胞,流式细胞术分析确认表达后,通过ELISA 检测 CAR-T 细胞 IL-2 分泌情况,后用 LDH 释放法评价靶向杀伤作用.结果 成功获得抗 CD19 CAR 的慢病毒递送载体;流式细胞术表明 CAR 分子在 T 细胞表面高效稳定表达;ELISA结果显示 CAR-T 细胞在靶细胞刺激下 IL-2 分泌水平显著升高(P < 0.01);LDH 结果显示 CAR-T 细胞特异性杀伤 CD19 表型细胞,且杀伤效果在 E:T = 10:1 时达到50% 以上,显著高于对照组(P < 0.05).结论 成功获取了具有靶向 CD19 表型细胞的 CAR-T 细胞,能高效特异性杀伤肿瘤细胞.
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嵌合抗原受体修饰免疫细胞治疗肿瘤的新策略
以嵌合抗原受体（CAR）为基础的细胞免疫治疗目前成为治疗恶性肿瘤的一种新兴形式。CAR技术的应用在以下几方面受到密切关注：选择合适的目标抗原；甄选高效、安全的基因转导方法；优化信号分子；筛选具潜质的免疫细胞。随着研究的深入和技术的提高，相信CAR技术会给肿瘤患者带来福音。
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嵌合抗原受体疗法在血液肿瘤免疫治疗中的研究进展与应用前景
嵌合抗原受体（CAR）为基础的免疫治疗，发展经历了近25年，它已经从一个新兴的复杂的技术转变成为恶性肿瘤治疗的一种新策略。随着重组 DNA 技术的不断发展以及对信号传导通路的不断研究深入，CAR 技术也在不断革新并开始为临床服务。而CAR疗法以其在血液肿瘤的中独特优势在治疗中不断取得突破，见证了CAR技术成熟的过程。本文主要回顾在血液肿瘤研究中CAR技术的革新、应用现状和前景。
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胶质母细胞瘤免疫治疗的研究进展
胶质母细胞瘤（GBM）是常见的具侵袭性的脑部恶性肿瘤之一，尽管手术、放疗和化疗取得了进步，GBM患者预后仍然较差，寻求特异性强、靶向性高的治疗方法势在必行。免疫治疗通过特异性识别和杀伤肿瘤细胞，为 GBM 治疗开辟了新道路，其中以疫苗、抗体和细胞为基础的临床研究取得令人鼓舞的成果，免疫治疗有望突破传统治疗策略的藩篱，有效杀灭肿瘤细胞，赋予患者新的希望。本综述回顾了当前GBM的免疫治疗方法及相关研究。
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CAR-T细胞免疫疗法的研究进展
嵌合抗原受体(CAR)-T细胞免疫疗法是过继性细胞免疫疗法中具有研究前景的方法,它是利用基因技术,在T细胞内导入一个可以将CAR表达于其表面的基因,并使T细胞发挥作用,克服肿瘤局部免疫抑制微环境、打破宿主免疫耐受状态,靶向杀伤肿瘤细胞.本综述主要探讨CAR-T细胞免疫疗法及其原理、临床应用、存在的安全性问题和应对措施.
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CAR-NK的构建及其在抗肿瘤联合治疗中的研究进展
自然杀伤(NK)细胞是一类具有高抗肿瘤、抗病毒活性的固有免疫细胞,可以在无抗原预先致敏的情况下杀伤肿瘤细胞.目前,恶性肿瘤的治疗依然是世界性难题,亟待研发更加有效的肿瘤治疗方法.近年来,肿瘤的免疫治疗成为抗肿瘤研究的热点之一,其中,以嵌合抗原受体(CAR)修饰的NK细胞为基础的CAR-NK免疫治疗技术,成为一种新型抗肿瘤免疫方法,在临床前研究中对实体瘤的治疗效果显著,具有较好的肿瘤治疗前景;同时,将CAR-NK细胞与其他抗肿瘤疗法联合应用,也是未来肿瘤治疗的一个研究方向.
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嵌合抗原受体型T细胞在血液肿瘤中的研究进展
目的 嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T)是从患者的血液或肿瘤组织中提取出T淋巴细胞,通过基因工程技术,采用特异性CAR基因转染后,进行体外培养增殖,进而产生一种抗肿瘤细胞.本研究总结关于CAR-T技术与血液恶性肿瘤研究现状,探讨其对血液肿瘤治疗的效果.方法 以“嵌合抗原受体型T细胞、嵌合抗原受体型T细胞与肿瘤生物治疗、嵌合抗原受体型T细胞与血液肿瘤”为关键词,应用PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,检索2000-01-2016-03相关文献,共检索到文献520篇.以“CAR-T的生物合成、CAR-T的作用机制、CAR-T细胞在血液肿瘤中的治疗以及CAR-T细胞临床应用研究方向”为纳入标准,符合条件的文献共有42篇.结果 CAR-T细胞是通过基因修饰的方法获得的针对肿瘤细胞表面特定抗原的特异性T细胞,CAR-T细胞具有强大的抗肿瘤效果,可以在体内特异性识别并杀死肿瘤细胞.其对肿瘤细胞的识别作用是由CAR结构所决定.目前,CAR-T细胞技术常用于治疗血液肿瘤,尤其对于B细胞恶性肿瘤的治疗展现出良好的效果,并且对Ph+的高危患者和造血干细胞移植后复发的患者同样有效.结论 CAR-T细胞可能成为治疗血液恶性肿瘤的一种重要手段.
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嵌合抗原受体修饰的T细胞免疫治疗研究进展
嵌合抗原受体修饰的T细胞(CAR-T细胞)是将单链抗体技术和T细胞活化基序结合应用的一种新的免疫治疗技术,具有特异、持久的肿瘤杀伤效应,在B淋巴细胞白血病、B淋巴瘤及实体瘤的临床试验中取得了令人震惊的效果,但也存在着脱靶效应、细胞因子释放综合征、移植物抗宿主病等潜在的风险.文章就CAR-T细胞原理、优势、临床应用等方面进行简要综述.
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下咽鳞状细胞癌CAR-EGFR修饰T细胞构建的初步研究
目的 构建具有靶向功能下咽鳞状细胞癌Fadu细胞系,EGFR-CART细胞并进行验证,为CART细胞技术在下咽鳞状细胞癌治疗应用临床前基础进行探索.方法 通过慢病毒转染构建EGFR-CART细胞及CART-对照细胞,FACS荧光检测CART细胞上EGFR抗体的表达,验证 Fadu细胞系及HCT-116细胞系中EGFR的表达.结果 成功构建了EGFR-CART细胞及CART-对照细胞,感染效率约为67％,二者在细胞亚群的分布上没有明显区别.靶细胞功能验证发现HCT-116中EGFR低表达,Fadu中EGFR高表达,确定HCT-116作为EGFR-CART的非靶细胞,Fadu作为靶细胞.结论 本研究成功制备并验证了具有靶向功能的下咽鳞状细胞癌Fadu细胞系的EGFR-CART细胞,为CART技术在下咽癌治疗中的应用打下了前期基础.
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潜伏膜蛋白2A嵌合抗原受体-T细胞的制备及对鼻咽癌细胞杀伤作用的研究
目的 制备靶向潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)-T细胞,观察LMP2A CAR-T细胞体内外对鼻咽癌细胞的杀伤作用.方法 2016年9月至2017年12月,本研究以基因工程技术构建抗LMP2A慢病毒表达载体,测序鉴定并通过Western blot法验证抗LMP2A CAR在293T细胞中的表达;通过质粒包装体系制备LMP2A CAR慢病毒,并感染人T细胞,制备LMP2A CAR-T细胞;CCK-8法检测LMP2A CAR-T细胞对鼻咽癌细胞的杀伤作用.酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测LMP2A抗原激活后的LMP2A CAR-T细胞白细胞介素(IL)-2与干扰素(IFN)-γ的分泌水平.体内实验观察LMP2A CAR-T细胞对鼻咽癌移植瘤的抑瘤作用.SPSS 21.0统计学软件用于统计分析.结果 PCR结果显示抗LMP2 A CAR片段大小约为1500 bp,与理论值相一致,测序显示序列正确;Western blot结果显示抗LMP2A慢病毒表达载体能在293T细胞中表达;CCK-8法结果发现在效靶比为20:1、10:1与5:1时,LMP2A CAR-T细胞对LV-LMP2A-CNE1细胞的杀伤率分别为(72.11±9.75)％、(54.65±5.42)％与(36.68±3.80)％,与CD19 CAR-T细胞、T细胞相比差异有统计学意义(P<0.05),而对CNE1细胞的杀伤作用与CD19 CAR-T细胞和T细胞相比差异无统计学意义;ELISA法结果发现LMP2A CAR-T细胞与LV-LMP2A-CNE1细胞共培养上清中IL-2与IFN-γ的含量,显著高于与CNE1细胞共培养上清,差异具有统计学意义(P<0.05);体内实验中LMP2A CAR-T细胞组瘤体体积为(80.3±10.0)mm3,显著小于各对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 成功制备的LMP2A CAR-T细胞对LMP2A阳性的鼻咽癌细胞具有显著靶向杀伤效应.
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嵌合抗原受体T细胞肿瘤免疫治疗的风险与对策
近年来,嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)在肿瘤治疗领域表现出前所未有的疗效,对恶性B细胞肿瘤更是颠覆性突破.然而,临床研究发现,CAR-T输入体内后,经常因活性过度或活性失控而导致严重的毒副作用,如细胞因子风暴、靶点毒性和肿瘤溶解征等.构建CAR-T所采用的病毒载体也可能因基因组整合引起插入突变毒性.如何将CAR-T转化为安全有效的肿瘤治疗生物制品,且适用于更多类型的肿瘤,仍面临众多挑战.针对CAR-T治疗潜在的毒性,本文讨论了一系列可行的技术措施,包括使用自杀基因、组合靶向多抗原识别、正调控系统和非病毒载体等,希望为解决CAR-T制品的临床安全问题提供切实保障.
