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炎症在癫痫发病机制中的研究进展
炎症在癫痫发病机制中的作用越来越受到关注,成为近年来的研究热点.文章将对血脑屏障(Blood brain barrier,BBB)、高迁移率族蛋白1(High mobility group box-1 protein,HMGB1)、白介素-1(Interleukin,IL-1)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、趋化因子(Chemotactic factors)及补体因子(Complement factors)在癫痫发病机制中的作用进行总结,分析并概述干预这些炎症通路作为癫痫辅助治疗的前景,为癫痫致病机制和临床诊治研究提供一定帮助.
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中药补肺活血胶囊对PM2.5模型小鼠肺炎性损伤的影响
目的 观察补肺活血胶囊对PM2.5致小鼠肺组织炎性损伤的影响.方法 采用鼻腔滴注PM2.5悬液的方法建立PM2.5小鼠肺损伤修复模型,分为空白对照组,低、中、高剂量染毒组,低、中、高剂量染毒中药组,每组10只.运用免疫组化法、ELISA法检测各组小鼠肺组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的蛋白表达,及IL-1β、IL-10等炎性因子的含量.结果 鼻腔滴注PM2.5悬液可以成功建立肺损伤模型,肺组织炎性损伤程度随染毒剂量的增加而加重;中药补肺活血胶囊干预后,小鼠肺间质HMGB1蛋白表达降低(P＜0.05),肺组织IL-1β、IL-10等炎性因子的含量降低(P＜0.05).结论 补肺活血胶囊可以减少肺组织中炎性因子的分泌,改善肺炎性损伤程度.
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电针对慢性神经痛大鼠穴区高迁移率族蛋白1及其受体CD24表达的影响
目的:观察电针干预治疗慢性压迫性损伤(CCI)大鼠过程中,大鼠"足三里"穴区局部高迁移率族蛋白1(HMGB 1)及其受体CD 24表达及β-内啡肽(β-EP)含量的变化,探讨穴区电针刺激缓解慢性神经痛的机制.方法:Wistar大鼠随机分为正常对照组、CCI模型组、电针组,每组10只.正常对照组大鼠行假手术,其余两组结扎坐骨神经造成慢性神经痛模型.手术后1周开始测定大鼠双侧热刺激缩腿反应的潜伏期(PWL).电针组于CCI术后8 d电针双侧"足三里""阳陵泉"穴,连续5 d.电针结束后用免疫沉淀法检测"足三里"穴区乙酰化HMGB 1蛋白表达,用蛋白免疫印迹、荧光定量PCR分别检测HMGB 1和Toll样受体4(TLR 4)蛋白、CD 24 mRNA的表达,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测穴位局部组织β-EP的含量,并在穴位局部注射CD 24的中和抗体,观察阻断H M GB 1-CD 24通路对电针效应的影响.结果:与正常对照组比较,CCI后各组动物双侧PWL差值明显增加(P<0.05);与CCI模型组比较,电针组动物的痛觉过敏明显减轻(P<0.05).CCI后穴位局部的HMGB 1和TLR 4蛋白表达比正常对照组明显升高(P<0.05);电针后,和CCI模型组比较,HMGB 1乙酰化程度增高,CD 24 mRNA表达升高,同时穴位局部β-EP含量显著升高(P<0.05),但是HMGB 1及TLR 4蛋白表达未见明显变化(P>0.05).穴位局部注射CD 24的中和抗体后,电针升高局部β-EP含量、抑制动物痛觉过敏的作用明显减弱(P<0.05).结论:电针"足三里""阳陵泉"穴可缓解CCI大鼠的神经病理性疼痛,其效应与穴位局部H M GB 1活性及其受体CD 24表达升高导致的局部β-EP含量增加有关.
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电针对慢性神经痛大鼠海马区高迁移率族蛋白1表达的影响
目的:观察电针对慢性神经痛大鼠海马区高迁移率族蛋白1(HMGB 1)及其下游效应促炎细胞因子的影响,探讨电针镇痛的作用机制.方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组12只.结扎大鼠左侧坐骨神经建立坐骨神经慢性结扎性损伤模型.电针组电针双侧“足三里”“阳陵泉”,每次30 min,每日1次,共7d.检测各组大鼠左后足底机械痛阈(MWT),荧光定量PCR法和Western blot法分别检测海马HMGB 1基因和蛋白的表达水平,ELISA法检测海马区肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1 β)的表达水平.结果:与假手术组比较,模型组MWT显著降低(P＜0.001).与模型组比较,造模第10天和第14天,电针组MWT显著升高(P＜0.05,P＜0.01).与假手术组比较,模型组大鼠海马HMGB 1基因及蛋白表达水平显著增加(P＜0.001),TNF-α和IL-1 β蛋白表达水平也均显著升高(P＜0.001).电针7d后,与模型组比较,电针组海马区HMGB 1基因及蛋白表达水平显著降低(P＜0.001,P＜0.01),TNF-α和IL-1 β蛋白表达水平显著降低(P＜0.05).结论:电针可明显提高慢性神经痛大鼠痛阈值,其作用机制可能与抑制大鼠海马区HMGB 1及其下游促炎细胞因子释放有关.
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白芍总苷对NAFLD大鼠HMGB1,TLR4通路的干预作用
目的:探讨白芍总苷(TGP)对高脂-果糖诱导非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1),Toll样变体4(TLR4)信号通路的影响及其作用机制.方法:用高脂-高果糖餐诱导NAFLD大鼠模型,除设正常组外,将模型大鼠随机分为模型组,水飞蓟宾组,二甲双胍组(200 mg·kg-1 ·d-1),TGP高、低剂量组(200,100 mg·kg-1·d-1).用药6周后观察各组大鼠空腹血糖(FBG),餐后2h血糖(2 hBG),胰岛素(Fins),总胆固醇(TC),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),甘油三酯(TG),游离脂肪酸(FFA),丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和肝脏指数;并以免疫蛋白印迹法(Western blot)检测肝组织中HMGB1,TLR4蛋白的表达.结果:与正常组比较,模型组转氨酶,肝脏指数,血脂,2 hBG,Fins,HOMA-IR及TLR4,HMGB1蛋白均明显升高(P ＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,TGP高、低剂量组2 hBG,Fins,HOMA-IR,LDL-C,TG,TC,FFA,ALT,AST均明显降低(P＜0.05,P＜0.01),高、低剂量TGP在拮抗胰岛素抵抗、降糖降脂,改善肝功能有较显著的作用,TGP高、低剂量组均可下调HMGB1,TLR4蛋白的表达(P＜0.01).结论:在NAFLD病程进展中,HMGB1,TLR4是导致炎症的其中一条通路,TGP通过下调HMGB1,TLR4信号通路的表达而起到抑制大鼠NAFLD炎症发展的作用.
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熊果酸对THP-1细胞HMGB1表达和NF-kB活性的影响
目的 研究熊果酸(UA)对人单核细胞系THP-1细胞HMGB1表达和NF-kB活性的影响.方法 用不同浓度的UA(0、0.1、1、5和10 μmol/L)作用细胞后进行如下检测:1)MTr检测细胞增殖;2)RT-PCR法检测HMGB1和P65 mRNA表达;3)Western blot检测HMGB1和P65蛋白的表达;4)荧光素酶报告基因转染,质粒pNF-kB-luc瞬时转染THP-1细胞,转染40h后加1μmol/L UA作用,于转染48 h后进行荧光素酶活性测定.结果 1)随着UA浓度的增高,可明显抑制THP-1细胞的增殖;2)不同浓度的UA对THP-1细胞HMGBl mRNA和蛋白表达,呈现出一定的双向性,且以l μmol/L UA作用强(P ＜0.05);3)UA可增强P65 mRNA和蛋白表达以及NF-kB活性.结论 UA可影响单核细胞HMGB1表达和NF-kB活性.
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HMGB1-TLR4促进缺氧复氧介导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡
目的 研究缺氧复氧后大鼠肾小管上皮细胞中高迁移率族蛋白1(HMGB1)和Toll样受体4(TLR4)的表达及其在肾小管上皮细胞凋亡中的调控机制.方法 大鼠原代肾小管上皮细胞(PTECs)置于6孔L培养板培养,随机分为对照组(control)、缺氧复氧组(A/R)、HMGB1抗体处理组(A/R+ HMGB1)和TLR4抗体处理组(A/R+ TLR4)(每组n=3).用RT-PCR检测HMGB1和TLR4 mRNA的表达;Western blot法检测HMGB1、TLR4及凋亡相关分子Bcl-2、Bax、CHOP和caspase-8的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡.结果 A/R组HMGB1和TLR4的mRNA和蛋白的表达水平较对照组均显著上调(P＜0.01),细胞凋亡水平较对照组显著增加(P＜0.01),凋亡相关分子Bax、CHOP和caspase-8蛋白表达水平较对照组显著增加(P＜ 0.01),Bcl-2蛋白表达较正常对照组下调(P＜0.05).经抗体处理后,HMGB1抗体处理组和TLR4抗体处理组PTECs细胞凋亡水平较缺氧复氧组显著下降(P＜0.05),凋亡相关分子Bax、CHOP和caspase-8蛋白表达水平较缺氧复氧组下降(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达变化不明显.结论 HMGB1-TLR4轴可促进缺氧复氧介导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡.
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高迁移率族蛋白1促进原发性肝癌细胞增殖
目的 探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)及晚期糖基化终产物受体(RAGE)在原发性肝癌中的表达,研究HMGB1促进肝癌细胞增殖的作用以及相关的分子机制.方法 取肝癌组织及癌旁组织各25例,免疫组化法观察组织样本中HMGB1及RAGE的表达;体外培养肝癌细胞系HepG2和正常肝细胞系L02,用Western blot检测细胞系中HMGB1及RAGE的表达.向HepG2肝癌细胞系中加入外源性重组人HMGB1蛋白(rhHMGB1),用MTT法检测处于不同浓度rhHMGB1(0、10、50和100μg/L)以及不同处理时间(0、12、24和36 h)作用下HepG2细胞的增殖率;用Western blot检测细胞中RAGE和NF-κB的表达.结果 HMGB1和RAGE蛋白在肝癌组织的阳性表达率为64％和72％,分别高于癌旁组织的20％和28％(P<0.05).随着细胞培养时间的延长,HMGB1及RAGE的表达呈上升趋势;随着rhHMGB1浓度的升高或处理时间的延长,HepG2细胞的增殖率显著提高(P<0.05),细胞中RAGE和NF-κB的表达显著上调(P<0.05).结论 HMGB1和RAGE蛋白在肝癌组织及肝癌细胞中高表达.HMGB1可能通过与其受体RAGE结合,进一步激活NF-κB信号通路,从而促进肝癌细胞增殖.
关键词： 原发性肝癌 高迁移率族蛋白1 晚期糖基化终产物受体 HepG2细胞系 细胞增殖 -
下调人高迁移率族蛋白1对人前列腺癌细胞PC-3的影响
目的 研究小干扰RNA(siRNA)抑制高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因对PC-3侵袭和转移的影响.方法 构建真核表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA,转染PC-3细胞系,通过RT-PCR和Westem blot检测HMGB1的mRNA及蛋白;通过细胞划痕、transwell 和明胶酶谱分析检测PC-3体外侵袭能力.结果 成功构建siRNA表达载体Pgene-sil-1/HMGB1 siRNA,可使PC-3细胞HMGB1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),并能有效抑制PC-3体外侵袭和转移活性(P<0.05).结论 应用siRNA技术能有效的抑制基因的表达,同时也能有效抑制PC-3细胞的体外侵袭和转移,为肿瘤的生物学治疗提供了新思路.
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HMGB1及TLR2、TLR4在类风湿关节炎中的表达及意义
目的 探讨HMGB1及TLR2、TLR4在类风湿关节炎患者中的表达.方法 选取活动期类风湿关节炎患者29例,非活动期20例及对照者18例.用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清HMGB1表达,用多色免疫荧光流式细胞术(FCM)检测外周血单核细胞表面TLR2和TLR4的表达率和蛋白相对含量.结果 活动期RA患者血清HMGB1含量和外周血CD14+单核细胞表面TLR2、TLR4的表达率及蛋白相对含量明显高于非活动期和对照者(P＜0.05)；非活动期RA患者TLR4显著高于对照组(P＜0.05).活动期RA患者血清HMGB1与外周血CD14+单核细胞表面TLR2、TLR4相对蛋白含量表达呈显著正相关.结论 RA患者血清HMGB1及外周血单核细胞表面TLR2、TLR4的表达可能与RA病情发生发展有关,且具协同作用.
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HTLV-1 Tax 蛋白对T细胞中HMGB1调控的影响
目的探讨人T淋巴细胞白血病1型病毒（human T-cell leukemia virus 1，HTLV-1）Tax蛋白对人高迁移率族蛋白1（ high mobility group box 1，HMGB1）基因转录调控的影响。方法提取TaxN和TaxP细胞总RNA和蛋白质，通过real-time PCR和Western blot分析HMGB1 mRNA和蛋白质的表达情况；利用脂质体介导方法，将6个含有不同长度HMGB1调控序列的pGL3-HMGB1-luc瞬时转染至TaxN 和 TaxP 细胞，观察 HMGB1基因在不同 T 细胞中的转录活性；pCMV-Tax 与 pGL3-HMGB1-luc瞬时共转染至Jurkat细胞，观察Tax蛋白对HMGB1基因的转录调控影响；染色体免疫共沉淀（ ChIP）找寻Tax蛋白影响HMGB1基因转录调控的区段。结果 TaxP细胞中HMGB1 mRNA和蛋白质表达水平高于TaxN细胞。 TaxN和TaxP细胞中HMGB1调控趋势基本相似，均表现出3号质粒（pHLuc3，含有-504～＋83 HMGB1区段）的相对荧光素酶活性（HMGB1/neo）高，但是6号质粒（含有-1163～＋83 HMGB1区段）却表现出 TaxP 细胞 HMGB1的转录活性明显高于 TaxN 细胞。pCMV-Tax与pGL3-HMGB1-Luc报告基因共转染到Jurkat细胞也显示，6号质粒（pHLuc6）中Tax促进HMGB1基因的转录。 ChIP分析证实了Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163～-1043区段。结论-504～-383可能是HMGB1基因转录激活的关键启动子区，Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163～-1043区段促进HMGB1基因转录。
关键词： 成人T细胞白血病病毒1型 TAX蛋白 高迁移率族蛋白1 T淋巴细胞 基因调控 -
人HMGB1基因的原核表达、产物纯化及活性鉴定
目的构建人高迁移率族蛋白1(HMGB1)编码基因的表达载体,获得纯化的重组蛋白,研究其生物学功能. 方法通过RT-PCR方法扩增出人HMGB1的编码基因,克隆于载体pGEM-T easy,再亚克隆于表达载体pGEX4T-2,经IPTG诱导可表达相对分子质量(Mr)约56×103的融合蛋白GST-HMGB1.经用GSTrap FF蛋白纯化柱和凝血酶行柱上酶切,得到纯化的重组蛋白HMGB1,用培养的人单核细胞系THP1检测蛋白活性. 结果构建了融合蛋白GST-HMGB1的重组表达质粒,获得了Mr约为30×103的纯化蛋白产物.该蛋白能刺激THP1细胞产生TNF-α,并能明显诱导THP1细胞的凋亡. 结论获得了纯化的人HMGB1原核表达产物,对研究其在脓毒症中的生物学功能具有重要的意义.
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HMGB1在系统性红斑狼疮肾损害中的作用
目的 研究高迁移率族蛋白1(high mobility group protein box 1,HMGB1)在系统性红斑狼疮肾损害中的作用.方法 ELISA检测12例健康对照、16例系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)无肾脏损害和14例合并肾脏损害的系统性红斑狼疮患者(lupus nephritis,LN)血清中HMGB1的表达情况.将体外培养的人系膜细胞分为正常对照组和HMGB1刺激组,于培养6、12、24 h后收集细胞,免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达变化;免疫细胞化学和流式细胞术检测Toll样受体2(TLR2)、NF-κB 065蛋白的表达变化.结果 血清中HMGB1蛋白在LN组明显高于SLE组和健康对照组,且血清中HMGB1水平与LN患者的蛋白尿呈显著正相关;人重组HMGB1能够促进系膜细胞增殖;与正常对照组相比,HMGB1刺激组中TLR2、NF-κB p65蛋白表达增强;TLR2蛋白与NF-κB p65蛋白表达呈显著正相关(r=0.658,P=0.000);NF-κB p65蛋白表达与PCNA阳性表达率呈显著正相关(r=0.536,P=0.007).结论 HMGB1是狼疮性肾炎发病中的重要的细胞因子之一,可能部分通过与其受体蛋白TLR2结合激活NF-κB促进系膜细胞增生,从而引起肾脏损害.
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TLR4介导高迁移率族蛋白致系统性红斑狼疮肾损害的作用研究
目的 探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)致红斑性狼疮肾损害的作用机制与Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达的相关性.方法 ELISA检测12例健康对照组、16例系统性红斑狼疮(systemic lupus eqrthematosus,SLE)无肾脏损害和18例狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)患者血清中HMGB1、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)的表达情况;流式细胞术检测外周血CD3/TLR4和CD14/TLR4表达情况;分离外周血单个核细胞(PBMC),RT-PCR检测HMGB1 mRNA的表达变化.结果 HMGB1 mRNA相对表达量及血清中HMGB1蛋白在LN组明显高于SLE组和健康对照组;流式细胞术显示CD14+的单核细胞表面HMGB1受体TLR4在LN组表达高(P＜0.05),且与尿蛋白呈正相关(P＜0.01);LN患者血清中MMP-2和TIMP-2蛋白的浓度明显低于SLE和健康对照组,同时MMP-2/TIMP-2比值下降.HMGB1 mRNA及CD14+/TLR4+与MMP-2/TIMP-2比值均呈显著负相关;LN组患者血清中HMGB1蛋白水平与蛋白尿呈正相关,与MMP-2/TIMP-2比值呈显著负相关.结论 HMGB1是狼疮性肾炎发病中的重要细胞因子;HMGB1可能部分通过TLR4激活PBMC,降低MMP-2/TIMP-2的活性,从而引起蛋白尿.
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丹参酮ⅡA对脑缺血-再灌注损伤大鼠高迁移率族蛋白1表达的影响
目的 探讨丹参酮ⅡA(tanshinone,TSN)对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及对高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGBI)表达的影响.方法 雄性SD大鼠32只随机(随机数字法)分为4组(n=8),分别为假手术组(Sham组)、缺血-再灌注组(I/R组)、丹参酮ⅡA低剂量组(TaLD组)与丹参酮ⅡA高剂量组(TaHD组).采用右侧大脑中动脉栓塞(MCA0)法建立大鼠脑缺血-再灌注损伤模型.TTC染色法检测大鼠脑梗死体积,Tunnel法检测大脑皮质区细胞凋亡并计算凋亡指数,免疫印迹法检测大脑HMGB1的表达,ELISA法检测大鼠血清HMGB1水平,并测定大脑皮质钙调蛋白(calmodulin,CaM)活性及丙二醛(malondiadehyde,MDA)含量的变化.结果 与Sham组比较,I/R组、TaLD组与TaHD组大鼠脑梗死体积增大,凋亡细胞增多,CaM活性显著增强,MDA含量升高,脑组织及血清HMGBI水平明显升高(P＜0.01).与I/R组比较,TaLD、TaHD组脑梗死体积缩小、凋亡细胞减少,CaM活性显著减弱,MDA含量降低,脑组织及血清HMGB1水平明显降低(P＜0.01),且TaLD组与TaHD组之间上述各指标值差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 丹参酮ⅡA能够减轻大鼠脑缺血-再灌注损伤,其机制可能与减轻脑缺血-再灌注阶段HMGB1介导的晚期炎症反应有关.
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重度心衰患者高迁移率族蛋白B1水平变化研究
目的 探讨重度心力衰竭(CHF)患者高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的水平变化及其临床意义.方法 利用彩色超声诊断仪等测定按纽约心脏病协会分级为 Ⅲ～Ⅳ级的心功能不全患者,将心脏扩大、射血分数(EF)<35%的63例患者纳入研究组;另选25例正常体检者作为对照组.所有研究对象采用酶联免疫吸附法测定HMGB1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素1(IL-1)水平;用彩色多普勒超声测定左室射血分数(EF值)及二尖瓣血流峰值速度/左室舒张晚期峰值速度(E/A值).结果 CHF患者的HMGB1、TNF-α和IL-1均明显高于对照组(P<0.05);HMGB1与心衰的严重程度正相关.结论 CHF患者HMGB1水平明显升高,HMGB1可能参与了心力衰竭的过程,并可作为预测心衰严重性的参考指标.
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声辐射力脉冲弹性成像结合HMGB1在宫颈癌分期中的初步应用
目的 探讨声脉冲辐射力弹性成像(ARFI)技术结合高迁移率族蛋白1(HMGB1)在宫颈癌分期中的应用价值.方法 应用ARFI技术测量42例宫颈癌患者(宫颈癌组)、55例宫颈上皮内瘤样病变(CIN组)及40例健康体检者(对照组)宫颈声触诊组织量化值(VTQ).三组均采用酶联免疫分析法(ELISA)检测血清HMGB1浓度,采用电化学发光免疫法检测血清CA125、CEA水平.分析宫颈癌组VTQ值、血清HMGB1水平与CA125、CEA之间的相关性.结果 宫颈癌组VTQ值(2.43±0.87) m/s大于CIN组(1.61±0.73) m/s和对照组(1.55±0.45) m/s;差异有显著统计学意义(P＜0.01).宫颈癌组HMGB1 (9.42±3.51) ng/ml大于CIN组(3.25±2.89)ng/ml和对照组(3.13±1.53) ng/ml,差异有统计学意义(P＜0.01).宫颈癌组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ+Ⅳ期VTQ值、血清HMGB1水平随分期增加而增大,差异有统计学意义(P＜0.05);CIN组与对照组比较,VTQ值及血清HMGB1水平差异无统计学意义(P＞0.05).宫颈癌组VTQ、血清HMGB1水平与CA125、CEA呈正相关(P＜0.01).结论 声辐射力脉冲弹性成像技术结合血清HMGB1水平有助于宫颈癌范围及分期的评估.
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肠道缺血-再灌注致远隔组织损伤的信号传导机制
目的 应用不同的抗体蛋白研究小鼠肠道缺血-再灌注致远隔组织损伤时Toll样受体4(TLR4)-高迁移率族蛋白1(HMGB1)及其下游信号的传导途径.方法 SPF级雄性C57BL/6小鼠40只,采用随机数字表法分为5组:假手术组、对照组、抗HMGB1组、抗髓样细胞分化基因88 (MyD88)组和抗含诱导干扰素β的衔接蛋白(TRIF)组,每组8只.对照、抗-HMGB1、抗-MyD88和抗-TRIF组在行肠道缺血-再灌注手术前30 min分别经尾静脉注射对照IgG、HMGB1、MyD88和TRIF抗体(剂量为1 mg/kg,浓度为0.025％).所有小鼠麻醉、开腹后,除假手术组外的4组用无创血管夹夹闭肠系膜上动脉60 min后再灌注60 min,假手术组只开腹120 min,不进行缺血-再灌注.检测血浆核因子-κB(NF-κB) p65、白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度;肺和肠道组织形态学变化和HMGB1与NF-κB的mRNA和蛋白表达.结果 小鼠肠道缺血-再灌注损伤时,与对照组[(228.534-24.85)、(104.91±31.18)及(70.81±46.97) ng/L]比较,缺血前通过注射抗体抑制HMGB1[(145.00±33.63)、(62.28±6.73)及(52.76±5.71) ng/L]、MyD88[(191.12± 13.22)、(85.90± 17.37)及(63.19±5.47) ng/L]和TRIF[(183.73±10.81)、(78.14±7.38)及(59.70±4.63) ng/L]的表达能明显降低血浆炎症因子NF-κB(P=0.000、0.005、0.001)、IL-6 (P=0.000、0.004、0.000)及TNF-α(P=0.000、0.024、0.002)的水平,同时减轻了肺脏和小肠组织的损伤.抗-HMGB1组、抗-MyD88组和抗-TRIF组小鼠肺脏和回肠的HMGB1 mRNA(肺脏:1.89±0.18、2.35±0.31和2.29±0.28,回肠:4.93±0.55、5.96±0.73和5.76±0.51)、NF-κB mRNA(肺脏:1.42±0.23、1.77±0.18和1.70±0.13,回肠:2.23±0.55、3.11±0.38和2.99±0.24)和蛋白表达较假手术组[肺脏HMGB1mRNA (1.04±0.19) (P=0.000、0.000、0.000)、NF-κB mRNA (1.03±0.21) (P=0.004、0.000、0.000),回肠HMGB1 mRNA (1.14±0.54) (P=0.000、0.000、0.000)、NF-κB mRNA (1.03±0.23)(P=0.000、0.000、0.000)]升高,差异有统计学意义,但与对照组[肺脏HMGB1 mRNA(2.67±0.30) (P=0.000、0.035、0.016)、NF-κB mRNA (2.04±0.29) (P=0.000、0.039、0.012),回肠HMGB1 mRNA (6.70±0.66) (P=0.001、0.038、0.015)、NF-κB mRNA(3.71±0.53) (P=0.000、0.018、0.006)]相比其余3组的升高程度明显降低,其中抗-HMGB1组降低的程度为显著.抗-HMGB1抗体、抗-MyD88抗体和抗-TRIF抗体的应用能明显减轻缺血-再灌注引起的组织损伤,其中抗-HMGB1抗体的作用为显著.结论 HMGB1及其下游信号途径在小鼠肠道缺血-再灌注损伤中具有重要作用,在两条下游信号途径中,TRIF依赖途径发挥的作用比MyD88依赖途径更大些.
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高迁移率族蛋白B1与维持性血液透析患者微炎症及内皮损伤的相关性探讨
目的 本研究通过观察分析维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者血清高迁移率族蛋白B1(high mobil ity group box protein-1,HMGB1)水平的变化,初步探讨其与炎症因子、内皮损伤标志物的关系,了解HMGB1对MHD患者微炎症状态及血管内皮的影响.方法 采用横断面研究方式,选择MHD患者89例,并以31例健康者作对照,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测入选者血清肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和HMGB1水平.ELISA法检测MHD患者血清可溶性血管细胞黏附分子1(soluble vascular cell adhension molecule-1,sVCAM-1)和E选择素水平,同时收集其血常规和血生化等指标.结果 MHD患者血清HMGB1、TNF-α和IL-6水平均显著高于正常对照组(P＜0.01),HMGB1水平与TNF-α、IL-6呈正相关(相关系数分别为0.711和0.804,均P＜0.01).HMGB1水平与sVCAM-1、E选择素水平呈正相关(相关系数分别为0.454和0.601,均P＜0.01),与血红蛋白和白蛋白呈负相关(相关系数分别为-0.260和-0.372,均＜0.05),与总胆固醇、甘油三酯及血糖等不相关(P＞0.05).结论 MHD患者血清HMGB1水平升高,与血管内皮损伤密切相关,因此其作为一项评价MHD患者微炎症状态的新指标具有临床应用价值.
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高迁移率族蛋白1基因多态性与代谢综合征的相关性
目的 探讨福建地区高迁移率族蛋白1(H MGB1)基因多态性与代谢综合征(MS)的关系.方法 共纳入2015年2月-2016年2月期间连续住院治疗的受试者1005例,其中MS组450例,非MS组555例.采用病例对照关联分析研究方法,探讨HMGB1基因单核苷酸多态性rs2249825、rs1045411、rs1412125与MS及其各组分的关系.应用直接计算法计算等位基因及基因型频率,利用HaploView4.2软件分析其单倍体,非条件Logistic回归分析HMGB1各位点基因型与MS的关系.结果 ①HMGB1基因位点rs2249825、rs1045411、rs1412125在共显性、显性、隐性3种遗传模式下与MS相关性无统计学意义(均P＞0.05).HMGB1基因rs2249825-rs1045411单倍体CA在MS组与非MS组分布差异有统计学意义(P=0.027).②HMGB1位点rs2249825的共显性模式基因型GC及显性模式基因型GG+ GC是高三酰甘油发生的影响因素(分别OR=1.573,1.558,分别P=0.041、0.038).HMGB1基因rs2249825-rs1045411单倍体GA、CA在高三酰甘油组与非高三酰甘油组分布差异有统计学意义(分别P=0.007,0.030).③HMGB1位点rs2249825的显性模式基因型GG+GC(OR=0.711)、rs1045411的共显性模式基因型AA(OR=0.457)及隐性模式基因型AA(OR=0.438)和rs1412125的共显性模式基因型CC(OR=0.529)及显性模式基因型CC+CT(OR=0.714)是高血压发生的影响因素(均P＜0.05).结论 HMGB1基因多态性与MS危险因素成分中的高三酰甘油、高血压具有一定相关性.
