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清道夫受体A在实验性小鼠糖尿病发病中的作用研究
目的:研究清道夫受体A(SR-A)在小鼠糖尿病发病中的作用.方法:取雄性野生型(SR-A(+/+1)小鼠和清道夫受体A敲除(SR-A(-/-))小鼠各60只,分别随机分成两组.采用链脲左菌素(STZ)50 mg/(kg·d)连续5 d腹腔注射诱导糖尿病模型,以血糖超过16.7 mmol/L为糖尿病模型,分别于造模后0 w,4 w,8 w测血糖、体重和24 h尿白蛋白排泄率;于注射STZ后0,10 d,4 w,8 w杀检.并留取胰腺和肾组织,测肾重、计算肾重/体重比值,并测定肾小球体积.结果:注射STZ的小鼠均有不同程度的多饮、多食、多尿和体重下降等糖尿病症状.SR-A(+/+)小鼠血糖水平、肾重、肾重/体重比值、肾小球体积、24 h尿白蛋白排泄率和死亡率较SR-A(-/-)小鼠明显增高.SR-A(+/+)小鼠的胰岛、血管周围、导管周围、小叶间隔及胰岛周围区域有大量单个核细胞和CD68阳性细胞的浸润,而SR-A(-/-)小鼠的胰腺组织几乎无炎性细胞浸润.结论:SR-A在STZ诱导的实验性小鼠糖尿病模型的发生发展中可能起重要作用,可能通过促进巨噬细胞和单个核细胞在胰岛的局部浸润而诱导胰岛B细胞的损伤.
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益气活血方调节SRA、CD36干预THP-1源性巨噬细胞泡沫化机制
目的:探讨益气活血方(宁心痛颗粒)调节巨噬细胞(MΦ)清道夫受体A (SRA)、CD36干预人类单核细胞株(THP-1)源性MΦ泡沫化的机制.方法:采用MTT法筛选出宁心痛颗粒含药血清作用于THP-1源性MΦ的适合剂量;建立THP-1源性MΦ泡沫化模型,用该适合剂量的宁心痛颗粒含药血清进行干预,Western blot法检测干预后细胞脂蛋白受体SRA、CD36蛋白表达水平,与空白组(THP-1细胞组)、THP-1源性MΦ组、模型组(泡沫细胞组)进行比较.结果:宁心痛颗粒10倍剂量含药血清作用下的THP-1源性MΦ存活率高;与空白组比较,THP-1源性MΦ组、模型组及宁心痛颗粒10倍剂量含药血清组SRA、CD36蛋白表达均升高(P＜0.01);宁心痛颗粒10倍剂量含药血清组SRA、CD36蛋白表达水平明显低于模型组(P＜0.01).结论:益气活血方能够下调THP-1源性MΦ的SRA、CD3蛋白表达,从而阻抑泡沫细胞的形成.这可能是该药干预动脉粥样硬化易损斑块的分子机制之一.
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FIZZ1对平滑肌细胞清道夫受体A表达的影响
背景 FIZZ1是一个与炎症相关的有丝分裂因子,具有刺激肺动脉平滑肌增殖、收缩血管、促进血管新生等作用.我们曾经报道FIZZ1在动脉粥样硬化中的作用,但对其作用机制尚未进一步探讨.目的 探讨FIZZ1对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的小鼠平滑肌细胞清道夫受体A(SR-A)表达的影响.方法 用ox-LDL以及终浓度分别为3×10-6、9×10-6、2.7×10-5 mmol/L的FIZZ1刺激培养的平滑肌细胞,激光共聚焦显微镜对SR-A表达进行定位,流式细胞术检测不同剂量的重组FIZZ1对ox-LDL诱导的平滑肌细胞SR-A表达的影响.结果 ox-LDL能诱导平滑肌细胞SR-A表达,SR-A表达主要位于细胞膜,重组FIZZ1能明显剂量相关地促进ox-LDL诱导的平滑肌细胞SR-A表达(与对照组比较,P＜0.01).结论 FIZZ1明显促进ox-LDL诱导的平滑肌细胞SR-A表达,提示FIZZ1可能通过促进平滑肌细胞SR-A表达促进动脉粥样硬化进展.
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肝组织清道夫受体A在急性重症胆管炎时的表达与内毒素性肝损伤的关系
目的: 研究急性重症型胆管炎(ACST)时大鼠内毒素性肝损伤与肝组织中清道夫受体A(SR-A)表达水平的关系.方法: Wistar大鼠随机分为2组, 第1组(急性胆道感染组, AOC组), 胆总管予以结扎并注入大肠杆菌O111B4建立ACST动物模型, 第2组(胆总管结扎组, BDL组), 结扎胆总管并注射等量生理盐水. 于术后0、4、8、16、24 h分别采用Western blot和RT-PCR检测肝组织中SR-A蛋白和基因表达水平; 以鲎试验和ELISA测定血浆内毒素和白介素-6(IL-6); 光镜观察肝组织病理变化并测定血浆ALT、TB含量.结果: 在ACST时随着病程的延长、血浆内毒素浓度逐渐升高(0-24 h: 0.058±0.009, 0.207±0.024, 0.433±0.049, 0.645±0.077, 0.784±0.097, P<0.01), 血浆IL-6、ALT和TB含量明显增加(均P<0.01), 肝功能减损, 同时肝细胞变性、坏死等病理改变逐渐加重, 而AOC组SR-A在术后4 h, 表达已开始下降( P<0.01), 随着病程延长其表达逐渐下降, 至24 h与BDL比较有明显显著性差异(蛋白: 0.156±0.014 vs0.809±0.107, P<0.01; mRNA: 0.138±0.019 vs0.578±0.068, P<0.01).结论: ACST时, 内毒素性肝损伤与肝组织SR-A表达水平的进行性下调有关. 随着枯否细胞清除内毒素的防御能力下降, 肝组织内毒素性损伤进行性加重.
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动脉粥样硬化斑块内FIZZ1表达促进平滑肌细胞清道夫受体-A上调
目的 探讨ApoE基因敲除鼠动脉粥样硬化斑块内FIZZ1表达情况及其对平滑肌细胞清道夫受体A(SR-A)表达的影响.方法 C57BL/6J ApoE基因敲除鼠及C57BL/6J野生型小鼠各9只,分别喂养高脂饲料及普通饲料,24周后处死小鼠,石蜡包埋血管后做连续切片,行HE染色及FIZZ1免疫组化.用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)以及终浓度分别为3×10+6 mmol/L、9×10-6 mmol/L、2.7×10-5 mmol/L的FIZZ1刺激培养的平滑肌细胞,激光共聚焦显微镜确认SR-A表达后,流式细胞术检测FIZZ1对ox-LDL诱导的平滑肌细胞SR-A表达的影响.结果 ApoE基因敲除鼠高脂饲养24周后,主动脉根部明显形成动脉粥样硬化,可见FIZZ1在动脉粥样硬化斑块内明显表达,同龄野生型C57BL/6J鼠正常血管壁内,未见FIZZ1表达,重组FIZZ1能明显促进ox-LDL诱导的平滑肌细胞SR-A表达(与对照组比较,P＜0.01).结论 C57BL/6J野生型小鼠正常血管不表达FIZZ1,C57BL/6J ApoE基因敲除鼠动脉粥样斑块表达FIZZ1,FIZZ1促进ox-LDL诱导的平滑肌细胞SR-A表达,提示FIZZ1可能在ApoE基因敲除鼠动脉粥样硬化进展中起一定的促进作用.
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香青兰总黄酮对小鼠腹腔巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响及其机制
目的 探讨香青兰Dracocephalum moldovica总黄酮对小鼠腹腔巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响及其可能机制.方法 以氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导小鼠腹腔巨噬细胞建立泡沫细胞的模型,并以不同质量浓度的香青兰总黄酮进行干预.分别采用油红O染色观察泡沫细胞,荧光分光光度法检测细胞内胆固醇酯的量,荧光定量PCR法检测细胞内酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶1(ACAT-1)mRNA的表达水平,流式细胞术检测细胞表面清道夫受体A(SR-A)的表达水平.结果 香青兰总黄酮能显著抑制Ox-LDL诱导的泡沫细胞的形成、细胞内胆固醇酯的积聚、细胞中ACAT-1 mRNA及细胞表面SR-A分子的表达水平,且呈一定的剂量依赖性.结论 香青兰总黄酮通过抑制巨噬细胞源性泡沫细胞的形成,可能是其治疗动脉粥样硬化的药效机制之一.
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内毒素肺损伤小鼠肺内清道夫受体A表达的变化
目的 观察内毒素肺损伤发病中小鼠肺组织及肺泡巨噬细胞(AM)清道夫受体A(SR-A)表达的变化.方法 腹腔注射内毒素脂多糖(LPS)复制小鼠急性肺损伤模型,实验分为LPS致伤后0.5、1、2、4和8 h组及对照组,用小鼠AM株J774A.1细胞作体外实验,分为LPS作用后0.5、1、2、4和8 h组及无血清培养液对照组.用免疫组化及流式细胞仪观察分析小鼠肺组织及AM、J774A.1细胞的SR-A表达及分布.结果 LPS各组小鼠动脉血氧分压(PaO2)均明显低于对照组,且肺湿/干重(W/D)比值明显高于对照组(P均＜0.01).对照组小鼠肺组织除支气管上皮细胞、淋巴细胞无SR-A表达外,AM、肺血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、肺泡上皮细胞、中性粒细胞胞膜及胞质均有SR-A表达.LPS致伤后0.5 h即可观察到肺组织SR-A免疫组化染色弱于对照组,并且随着致伤时间延长,染色逐渐变浅,表明内毒素肺损伤发病中肺内SR-A表达减少.用J774A.1细胞作体外实验也发现类似结果,以4 h和8 h组降低为显著.流式细胞仪检测AM及J774A.1细胞的SR-A表达与免疫组化染色结果相符,且细胞膜SR-A下降较细胞总SR-A显著.结论 内毒素肺损伤小鼠肺组织及AM的SR-A表达减少,其表达变化可能与内毒素作用有关.
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清道夫受体A在COPD发病及进展为肺癌中的研究
目的 探讨清道夫受体A基因多态性与COPD发病及进展为肺癌的关系.方法 选择2016年1月1日至6月20日上海交通大学医学院附属瑞金医院单纯COPD患者、COPD合并肺癌患者和健康吸烟对照者各100例,抽取外周血进行基因测序,检测SR-A 8个单核苷酸多态性[(single nucleotide polymorphism,SNP):ex3P36A_ C＞G、ex3S41Y～C＞A、ex4V113A～T＞C、ex4P174Y～G＞T、ex6P275A C＞G、ex6R293X C＞T、ex10G369S_ G＞A和ex11H441R_ A＞G].结果 上述8个SNP在3组人群中差异无统计学意义,但在基因测序过程中发现新的位于内含子剪接区的SNPrs13306550 (IVS4+ 3A＞G)与COPD发病相关,但对COPD进展为肺癌影响不大.结论 本研究表明,清道夫受体A SNP rs13306550是COPD的一个危险因素,但对COPD患者进展为肺癌的影响较小.
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冠心康对高脂饮食兔脂代谢和主动脉壁血管细胞清道夫受体AmRNA表达的影响
目的:观察中药复方制剂(冠心康)对高脂饮食兔脂质代谢和主动脉壁血管细胞清道夫受体A(SR-A)表达的影响,进一步探讨复方制剂(冠心康)抗动脉粥样硬化的机制.方法:将18只雄性日本大耳白兔随机分为正常对照组(C组)、高脂模型组(CH组)和复方制剂(冠心康)组(GXK组).喂养12周后处死动物,常规生化检测血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白(HDL-C);取胸主动脉连续切片,常规苏木精2伊红染色,脂质苏丹Ⅳ染色,对血管壁形态和脂质沉积定性观察;采用逆转录聚合酶链式反应对血管壁细胞SR-AmRNA表达定量分析.结果:CH和GXK组血脂水平显著高于C组(P＜0.01),而CH组与GXK组比较差异无显著性意义(P＞0.05);CH组血管壁脂质沉积明显高于C组和GXK组,C组和GXK组间无明显差别;各组均有SR-AmRNA表达,CH组显著高于C组和GXK组(P＜0.01),而C组与GXK组比较差异无显著性意义(P＞0.05).结论:复方制剂(冠心康)抗兔胸主动脉粥样硬化作用可能与其抑制SR-A表达,减少血管壁脂质沉积有关,而与降脂作用无关.
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阿霉素肾病大鼠肾脏清道夫受体A基因的表达
目的:探讨阿霉素肾病(AN)大鼠肾脏清道夫受体A(SR-A)基因表达水平与脂质代谢及肾脏病理之间的关系.方法:采用一次性尾静脉注射阿霉素法制备AN大鼠模型,RT-PCR法检测大鼠肾脏SR-A基因表达水平.结果:与正常组比较,AN大鼠尿中蛋白排泄量明显增加(P＜0.05),血清白蛋白和总蛋白水平降低(P＜0.05),血脂水平升高(P＜0.05),AN组大鼠肾脏SR-A基因表达水平(1.17±0.13)亦高于正常组(0.74±0.14)(P＜0.05).电镜下AN大鼠肾小球上皮细胞足突融合,内皮细胞增生,严重者肾小球基膜增厚,模糊不清,内皮细胞呈连拱状.结论:正常大鼠肾脏有低水平SR-A基因表达,AN大鼠肾脏SR-A过度表达与肾脏脂质代谢异常有关,也是造成肾脏病理改变的主要原因之一.
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清道夫受体A基因敲除对小鼠肝脏代谢及胆囊结石形成的影响
目的 探讨清道夫受体A(scavenger receptor class A, SRA)基因敲除对小鼠肝脏代谢及胆囊结石形成的影响.方法 SRAKO小鼠以及C57BL/6野生型小鼠分别给予成石饲料(lithogenic diet, LD)和普通饲料(Chow)喂养8周后,观察胆囊成石情况,并采集肝脏和胆囊组织.采用免疫荧光染色法测定小鼠肝脏巨噬细胞标记F4/80的表达,Western印迹法测定小鼠肝脏SRA表达,QT-PCR法检测肝脏脂质代谢相关基因及炎症因子的表达,胆固醇试剂盒测定胆囊和肝脏组织胆固醇含量.结果 LD喂养8周后,SRAKO小鼠和C57BL/6野生型小鼠成石率均为100%,而普通饲料喂养均不成石;LD喂养的小鼠肝脏脂质沉积增加,炎性细胞和巨噬细胞浸润增加;LD喂养的C57BL/6野生型小鼠肝脏SRA蛋白表达较普通饲料增高,胆固醇代谢相关基因ABCG5、ABCG8和炎症因子IL-1、TNF-α表达增加( P <0.05).LD喂养的SRAKO组小鼠胆固醇代谢基因ABCG8、胆汁酸磷脂基因ABCB4和炎症因子TNF-α表达均增加( P <0.05);LD喂养的小鼠胆囊组织中胆固醇酯和游离胆固醇含量均较普通饲料增加( P <0.05).结论 敲除SRA基因不改变小鼠胆囊结石形成率,高胆固醇可能更易导致胆囊结石的形成.
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RELMα对动脉粥样硬化清道夫受体表达的影响
目的 探讨抵抗素样分子α(RELM α)对与动脉粥样硬化密切相关的巨噬细胞清道夫受体CD36以及平滑肌细胞清道夫受体A(SR-A)表达的影响.方法 体外培养巨噬细胞以及平滑肌细胞,用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)以及终浓度分别为3×10-6mmol/L.9×10-6mmol/L,2.7×10-5mmol/L的RELM α刺激培养的细胞,24h后收集细胞,用流式细胞仪洲定巨噬细胞清道夫受体CD36以及平滑肌细胞SR-A表达.结果 ox-LDL明显促进巨噬细胞CD36表达,重组RELMα不影响OX-LDL诱导的体外培养的巨噬细胞清道夫受体CD36的表达.重组RELM α能明显促进ox-LDL诱导的平滑肌细胞SR-A表达(与对照组比较.P<0.01).结论 RELM α不影响OX-LDL诱导的巨噬细胞清道夫受体CD36的表达,但能促进oX-LDL诱导的平滑肌细胞SR-A表达,提示RELMα可能通过促进SR-A表达从而促进动脉粥样硬化进展.
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清道夫受体A基因的表达与肠癌侵袭转移密切相关
目的:研究清道夫受体A(SR-A)在结直肠癌组织中的表达及其与结直肠癌侵袭、转移之间的关系.方法:采用实时荧光定量PCR法,检测SR-A基因在33例结直肠癌组织和相应切缘正常组织中的表达.结果:SR-A基因在结直肠癌组织中的表达明显高于正常切缘组织.SR-A基因的表达与结直肠癌患者的性别、肿瘤大小、浸润深度以及TNM分期有关(均P＜0.05),而与患者的年龄、肠癌的部位、分化程度、淋巴结转移及病理组织学类型无关(均P＞ 0.05).结论:SR-A基因的高表达与结直肠癌的侵袭、转移明显相关.
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中药粉防己碱对高脂饮食兔脂代谢和主动脉壁血管细胞清道夫受体A mRNA表达的影响
目的观察中药粉防己碱对高脂饮食兔脂质代谢和主动脉壁血管细胞清道夫受体A(SR-A)表达的影响,进一步探讨粉防己碱抗动脉粥样硬化的机制.方法将18只雄性日本大耳白兔随机分为正常对照组(C组)、高脂模型组(CH组)和粉防己碱组(Tet组).喂养12周后处死动物,常规生化检测血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白(HDL-C);取胸主动脉连续切片,常规苏木精-伊红染色,脂质苏丹Ⅳ染色,对血管壁形态和脂质沉积定性观察;采用逆转录聚合酶链式反应对血管壁细胞SR-A mRNA表达定量分析.结果CH和Tet组血脂水平显著高于C组(P＜0.01),而CH组与Tet组比较差异无显著性意义(P＞0.05);CH组血管壁脂质沉积明显高于C组和Tet组,C组和Tet组间无明显差别;各组均有SR-A mRNA表达,CH组显著高于C组和Tet组(P＜0.01),而C组与Tet组比较差异无显著性意义(P＞0.05).结论粉防己碱抗兔胸主动脉粥样硬化作用可能与其抑制SR-A表达,减少血管壁脂质沉积有关,而与降脂作用无关.
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外源性硫化氢通过抑制SR-A表达减少THP-1源性巨噬细胞内脂质蓄积
目的 探索外源性硫化氢对THP-1源性巨噬细胞脂质蓄积的影响及机制.方法 以硫氢化钠(NaHS)做为外源性硫化氢的供体,采用油红O染色结合光密度法测细胞内脂质含量,RT-PCR和Westernblot法测SR-A mRNA和蛋白表达.结果氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)显著诱导巨噬细胞内脂质蓄积和SR-A表达,而NaHS呈浓度依赖性降低ox-LDL诱导的细胞内脂质蓄积,并显著下调SR-A mRNA和蛋白水平.结论 外源性硫化氢可能通过抑制SR-A表达减少ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞脂质蓄积.
关键词： 硫化氢 THP-1源性巨噬细胞 脂质蓄积 清道夫受体A -
人清道夫受体A胞外段的原核表达
目的 获得具有生物学活性的人清道夫受体A(SRA)胞外段蛋白.方法 从人外周血单个核细胞(PBMC)中提取RNA,逆转录为cDNA,采用PCR技术从PBMC-cDNA中扩增出目的基因片段,将其克隆至原核表达载体pET41a(+),经PCR、限制性酶切和测序确证后,以IPTG诱导其在大肠杆菌中的表达.包涵体经变性、复性后以Ni-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,以SDS-PAGE、Western blotting进行分析鉴定.FCM及ELISA方法检测SRA胞外段对Con A诱导PBMC细胞增殖及分泌细胞因子IL-2的影响.结果 PCR扩增得到长约1100bp的目的基因片段,插入pET41a(+)载体所获重组表达载体pET41a-SRAECD的酶切图谱和序列与预期的一致.重组子经诱导表达,表达产物主要以包涵体形式存在.以Ni-NTA亲和层析柱纯化获得约75 000 Mr的SRA胞外段融合蛋白.纯化的人SRAECD蛋白能与抗人SRA单克隆抗体特异性结合并具有活性,可抑制T细胞增殖及细胞因子IL-2的分泌.结论 获得了具有生物学活性的人SRA胞外段蛋白,为进一步探索SRA的效应功能提供了实验材料.
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清道夫受体A的研究进展
清道夫受体A(SR-A)是一种跨膜糖蛋白受体,有三种亚型,表达于巨噬细胞、血管平滑肌细胞和内皮细胞,与之结合的配体主要有修饰化的脂蛋白(ac-LDL,ox-LDL等)、多聚核苷酸(Poly Ⅰ和PolyG)、脂多糖、阴离子磷脂、磷壁酸、糖酐酯以及原核生物的细胞壁成分等.SR-A与配体结合后参与宿主的防御、吞噬凋亡细胞和促进细胞等多种生物学功能,并在动脉粥样硬化(As)的发生发展中发挥重要作用.本文综述了近年有关SR-A的结构、表达调控、主要生理功能以及与As关系的新研究进展,为人们进一步认识SR-A提供参考资料.
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清道夫受体A研究进展
清道天受体A广泛分布于巨噬细胞、血管平滑肌细胞和内皮细胞等细胞上,具有广泛的配体识别谱,在多种生理、病理过程中发挥作用,如参与宿主防御、凋亡细胞的吞噬、细胞粘附等,与动脉粥样硬化等疾病有关.本文对清道夫受体A的分子结构、基因表达调控和生物学功能等作一综述.
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丹参多酚酸盐对巨噬细胞抵抗素表达的影响
目的:探讨丹参多酚酸盐治疗动脉粥样硬化的可能分子靶标.方法:将单核巨噬细胞U937设为对照组、模型组、药物处理组.其中,模型组、药物处理组以ox-LDL刺激1h,再于药物处理组中加入丹参多酚酸盐.待药物作用细胞3h后,RT-PCR法检测巨噬细胞Resistin、SRA、CD36 mRNA表达水平.结果:与对照组相比,模型组Resistin、SRA mRNA表达水平均增高(P<0.01),药物处理组Resistin、SRA mRNA表达水平无差异(P>0.05);与模型组相比,药物处理组Resistin、SRA mRNA表达水平均降低(P<0.05).各组细胞CD36 mRNA表达未见显著变化.且丹参多酚酸盐对抵抗索表达的影响作用与对清道夫受体A表达的影响作用呈正相关.结论:丹参多酚酸盐可能以抵抗素作为其药理作用的分子靶标之一,且对抵抗素表达的影响可能与清道夫受体A的表达受抑制有关.
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清道夫受体A与动脉粥样硬化
清道夫受体A是一种细胞表面的糖蛋白,主要分布在巨噬细胞上,具有广泛的配体识别谱, 初是作为脂蛋白受体被发现的,可以内吞修饰的脂蛋白, 促进动脉粥样硬化斑块的形成.近年研究发现 ,清道夫受体A还在介导巨噬细胞对内毒素清除及凋亡细胞的识别、细胞黏附以宿主防御等起重要作用.与对清道夫受体A的分子结构,表达调空和生物学功能等做一综述.
