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花姜酮对鼻咽癌细胞株放疗敏感性的影响
目的：观察花姜酮处理对鼻咽癌CNE-2细胞放疗敏感性的影响。方法体外培养鼻咽癌细胞系CNE-2。并根据不同的实验目的分为对照组、γ-射线干预组以及γ-射线联合花姜酮处理组。其中对照组包括空白对照组和花姜酮处理组,分别给予等体积培养基或0~20μmol/L花姜酮处理48 h,γ-射线组采用剂量率为100cGy的γ-射线照射,联合治疗组细胞采用花姜酮预处理24 h后用γ-射线照射。处理结束后采用MTT法检测CNE-2细胞增殖情况,流式细胞术检测CNE-2细胞周期改变情况。结果0~20μmol/L花姜酮或100cGy γ-射线单独处理48 h后,对人鼻咽癌CNE-2细胞生长无明显影响；而同时联合不同浓度花姜酮与100cGy的γ-射线处理后,随着花姜酮浓度的增高,细胞增殖水平随之降低。流式细胞术也显示,0~20μmol/L花姜酮联合100cGyγ-射线照射后,可将细胞阻滞在G1期,同时可降低S期、G2/M期细胞的比例。结论花姜酮通过改变CNE-2细胞周期而发挥对细胞放疗增敏作用。
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花姜酮对MCF7细胞的增殖和迁移与侵袭的影响及其作用机制研究
目的 研究花姜酮对乳腺癌MCF7细胞增殖、迁移及侵袭的影响及潜在分子机制.方法 以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测花姜酮对MCF7细胞增殖的影响;根据MTr结果,将实验分为4组:空白对照组和低、中、高3个剂量实验组.实验组分别给予5,10,20 μmol·L-1的花姜酮,空白对照组给予等体积的二甲基亚砜(DMSO),处理48 h.用划痕、Transwell和平板克隆实验测定花姜酮对MCF7细胞迁移、侵袭和克隆形成能力;以免疫印迹法检测相关蛋白表达情况.结果 与空白对照组相比,低、中、高剂量花姜酮处理48 h后,MCF7细胞的增殖能力分别降至(89.7±5.4)％,(82.0±6.9)％,(62.7±4.6)％,迁移能力分别降至为(72.7±5.7)％,(55.0±3.9)％,(32.7±4.6)％,侵袭能力降至(77.6±7.8)％,(49.1±4.7)％,(40.8±6.2)％,差异均有统计学意义(均P＜0.01).空白对照组的克隆形成率为(41.4±6.3)％,低、中、高3个剂量实验组依次降至(27.4±4.8)％,(20.4±5.1)％,(5.4±0.8)％,实验组与空白对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).花姜酮处理MCF7细胞后,E-cadherin的表达量随低、中、高3个浓度而梯度上调,但N-cadherin的表达量随浓度而梯度下降,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 花姜酮能够抑制MCF7细胞的增殖、迁移和侵袭,机制可能与促进E-cadherin、抑制N-cadherin的表达有关.
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花姜酮对胃癌7901细胞株增殖凋亡的影响研究
目的:研究花姜酮对人胃癌7901细胞株增殖凋亡的影响及凋亡过程中B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和Bcl-2表达的变化.方法:胃癌7901细胞株培养接种,分为不给药的对照组和不同质量浓度花姜酮的给药组进行研究.通过四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验观察不同质量浓度花姜酮和时间对细胞增殖抑制的影响,不同花姜酮质量浓度下倒置显微镜观察7901细胞株细胞形态学变化,采用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚染色法检测细胞凋亡情况,采用逆转录聚合酶链式反应检测Fas mRNA和FasL mRNA的表达,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bax和Bcl-2的表达.结果:与对照组比较,不同质量浓度花姜酮均可抑制7901细胞的活性,且随着质量浓度和时间的增加,细胞增殖抑制率明显升高,具浓度依赖性;不同质量浓度花姜酮组中细胞形态均有明显改变,细胞逐渐皱缩、贴壁不牢,随着浓度增加其变化越明显,具浓度依赖性;不同质量浓度花姜酮组的细胞核染色质凝聚,逐渐出现凋亡,且随着浓度增加,细胞凋亡数目增多,具浓度依赖性;不同质量浓度花姜酮组中Fas、FasL mRNA的表达显著升高,且随着浓度增加,Fas mRNA、FasL mRNA的表达水平升高,具浓度依赖性;不同质量浓度花姜酮组中Bax的表达随花姜酮浓度增加显著升高,Bcl-2的表达随浓度增加显著下降,具浓度依赖性.结论:花姜酮可以抑制人胃癌7901细胞株增殖以及诱导7901细胞凋亡,其诱导细胞凋亡可能是通过上调Fas mRNA和FasL mRNA表达,并上调Bax的表达、下调Bcl-2的表达来实现的.
关键词： 花姜酮 人胃癌7901细胞株 增殖凋亡 Bax Bcl-2 -
花姜酮通过抗氧化应激抑制人气道平滑肌细胞的增殖
目的 探讨花姜酮对转化生长因子β (transforming growth factor-β,TGF-β)诱导人气道平滑肌细胞(human airway smooth muscle cells,HASMCs)增殖的抑制作用及其机制.方法 用CCK-8的方法检测细胞增殖;用荧光显微镜观察2,7-二氯荧光乙酰乙酸(DCFH-DA)染色后细胞内的活性氧(reactive oxygen species,ROS);用流式细胞术检测细胞内ROS水平.结果 TGF-β1(1μg/L)作用72 h后可以明显促进HASMCs的增殖(P＜0.05);花姜酮可以呈浓度依赖性的抑制HASMCs的增殖(P＜0 05),抑制细胞内ROS的水平,以花姜酮组(30 mmol/L)的抑制作用明显(P＜0.01).结论 花姜酮可以抑制HASMCs的增殖,其机制可能是通过抑制细胞内的ROS产生.
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花姜酮对胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响及机制的研究
目的:探讨花姜酮(zerumbone)对人胰腺癌绌胞株BxPC-3和Panc-1迁移和侵袭的影响及其相关基因的表达.方法:以BxPC-3和Panc-1为研究对象,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)实验选择毒性较小的花姜酮浓度,用细胞划痕实验、Transwell小室迁移和侵袭实验检测药物对细胞迁移和侵袭能力的影响,蛋白质印迹(Western blot)检测各细胞组CXC族趋化因子受体4(CXCR4)、促分裂原活化蛋白酶激酶1/2(MEK1/2)、磷酸化MEK 1/2(p-MEK1/2)、细胞外调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达变化.结果:花姜酮对BxPC-3和Panc-1细胞的生长均有抑制作用,且随着药物浓度的增高和作用时间的延长而增强(P＜0.05).低浓度药物作用后BxPC-3和Pane-1的划痕迁移率都低于对照组(P＜0.05).与对照组相比,Transwell迁移和侵袭实验中BxPC-3和Panc-1用药组的平均穿膜细胞数均减少(P＜0.05).蛋白质印迹检测结果表明:花姜酮抑制CXCR4、p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白的表达.结论:花姜酮具有抑制胰腺癌细胞株BxPC-3和Panc-1迁移和侵袭的作用,可能与下调CXCR4、p-MEK1/2、p-ERK1/2表达水平有关,为肿瘤的靶向治疗提供新的依据.
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花姜酮对激素不敏感哮喘小鼠的治疗作用及其机制
目的 探讨花姜酮对激素不敏感哮喘小鼠的治疗作用及其可能机制.方法 将30只BALB/c小鼠随机均分为五组:第0、1、2、7天,B、C、D、E组用75 μg鸡卵清蛋白+10μtg脂多糖滴鼻致敏,A组用PBS滴鼻致敏;第14、15、21、22天,五组小鼠均用50 μg鸡卵清蛋白滴鼻激发;每次激发30 min前,A、B、C、D、E组小鼠分别腹腔注射200μl PBS、200μl PBS、花姜酮10mg/kg、花姜酮50mg/kg、地塞米松1 mg/kg.采用瑞氏-吉姆萨复合染色进行支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类计数,HE染色观察气道炎症的改变,ELISA法检测BALF及血清中的IL-17水平,流式细胞术检测小鼠脾脏中Th17细胞的比例.结果 与A组相比,B组小鼠气道炎症加重,IL-17水平、Th17细胞的比例以及总细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞计数均增加(P＜0.05),而C组和D组能抑制上述各指标的增加过程(P＜0.05),其中D组的抑制作用更为明显(P＜0.05).结论 花姜酮能有效治疗激素不敏感哮喘小鼠;其机制可能是通过抑制Th17细胞及IL-17介导的中性粒细胞性气道炎症.
关键词： 花姜酮 激素不敏感哮喘 辅助性T淋巴细胞17 白细胞介素17 -
花姜酮对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭及CXCR4表达的影响
目的 研究花姜酮对人肝癌SMMC-7721细胞生长侵袭能力的影响及对CXCR4 mRNA和蛋白表达的影响,探讨花姜酮抗肝癌侵袭可能的作用机制.方法 分别应用花姜酮10 μmol/L、20 μmol/L处理人肝癌细胞,采用Transwell小室检测肝癌细胞的侵袭能力,RT-PCR、Western blotting实验检测CXCR4 mRNA及蛋白表达的变化.结果 花姜酮处理人肝癌细胞48 h后,对照组细胞透膜数为(56.8±7.8)个/视野,10 μmol/L组透膜数为(41.4±4.8)个/视野,20 μmol/L组透膜数为(23.2±5.6)个/视野,随花姜酮浓度增加,细胞侵袭人工基底膜的能力显著降低(P＜0.05),RT-PCR及Western blotting结果显示CXCR4 mRNA及蛋白表达随花姜酮浓度的增加而降低(P＜0.05).结论 花姜酮可能通过降低CXCR4的表达抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长和侵袭能力.
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花姜酮对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的保护作用
目的：探讨花姜酮对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肝损伤的保护作用。方法：70只Wistar大鼠随机分为4组：正常对照组(SO组,n=10)；重症急性胰腺炎组(SAP 组,n=40)；花姜酮(ZER)预处理组(ZER组,n=10),ZER 药物对照组(ZER-CON,n=10)。其中 SAP组又分为造模1h、3h、6h、12h四个时间亚组(n均=10)。SAP 组及 ZER组大鼠采用胆胰管逆行注射5%硫磺胆酸钠(STC)溶液(1ml/100Kg)造模；SO 组及 ZER-CON 组则向胆胰管注入等量生理盐水。ZER组及ZER-CON组于造模前30min由股静脉注射10mg/Kg的ZER溶液。比较各组大鼠于造模12h死亡情况、腹水量、血清淀粉酶(AMY)、磷脂酶(PLA2)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平以及胰腺、肝脏组织病理学评分(分级)。结果：ZER-CON组大鼠死亡率、腹水量、AMY、PLA2、ALT、AST水平以及胰腺和肝脏组织病理学评分(分级)与 SO组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。SAP 组上述指标明显高于 SO 组,差异有统计学意义(均P<0.05)。ZER 组上述指标与 SAP 组相比明显降低(均 P<0.05),但均高于 SO 组和 ZER-CON组(P<0.05)。结论：ZER对 SAP大鼠肝脏损伤具有一定的保护作用。
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花姜酮对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的保护作用及机制
目的 观察花姜酮对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的作用,并探讨其机制.方法 雄性56只Wistar大鼠,随机分为4组.正常对照组(SO组,n=8);重症急性胰腺炎组(SAP组)按时间分1、3、6、12h亚组(n =8);花姜酮预处理组(ZER组,n=8);花姜酮药物对照组(ZER-CON组,n=8).留取血清,固定及冻存胰腺及肝脏.血清检测血淀粉酶(AMY)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)以及磷脂酶A2(PLA2)水平,病理学检测胰腺与肝脏评分.提取各组大鼠新鲜肝脏组织核蛋白行凝胶电泳迁移实验(EMSA),免疫组织化学法检测各组大鼠肝脏核因子-κB p65(NF-κBp65)表达水平,提取各组大鼠肝脏组织浆蛋白检测白细胞介素-1β(IL-1β)水平.结果 SAP组大鼠血清AMY、ALT、AST、PLA2以及胰腺病理评分、肝脏病理分级较正常与药物对照组升高明显(P＜0.05);使用花姜酮后上述指标有明显下降(P＜0.05).SO、SAP 1、3、6、12 h、ZER、ZER-CON组、AMY[(U/L)1 485.6±130.5、2865.5±536.9、4 858.0±707.3、5702.3±885.2、7072.6±868.2、4 367.3±811.4、1 833.4±216.9],PLA2[(nmol/min· ml) 493.6±86.1、522.5±102.3、992.3±97.8、1 144.7±94.4、825.9±87.8、653.5±92.3、552.4±86.2],ALT[(U/L) 87.3±8.5、92.7±10.4、166.9±21.7、188.3±26.6、267.4±30.4、179.4±27.9、96.6±15.0],AST[(U/L) 103.5±11.7、230.8±48.4、381.0 ±76.0、510.7±84.3、484.1±74.5、317.1±66.2、120.3±35.1],胰腺病理评分[(分)0.40±0.39、3.45±0.93、6.70±1.40、9.35±1.68、10.85±1.89、6.96±1.21、0.52 ±0.15].SAP组大鼠肝脏NF-κB水平以及活性、IL-1β水平较正常组与药物对照组升高明显(P＜0.05),在使用花姜酮干预后,上述指标均有明显下降(P＜0.05).结论 花姜酮可以通过减少重症急性胰腺炎大鼠肝脏组织NF-κB蛋白表达,并进一步抑制下游炎性分子IL-1β,对胰腺炎肝损伤起到保护作用.
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花姜酮通过抑制氧化应激减轻MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤
目的:探讨花姜酮(zerumbone,ZER)对1-甲基-4-苯基-吡啶鎓离子(1-methyl-4-phenylpyridinium, MPP+)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的作用及其可能的分子机制.方法:采用CCK-8法检测MPP+对SH-SY5Y细胞的毒性作用以及ZER的保护作用,采用流式细胞术检测活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量和细胞凋亡情况,采用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术抑制人帕金森病蛋白7(Parkinson disease protein 7,PARK7)基因的表达,采用Western blot法检测PARK7、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related fac-tor 2,Nrf2)和血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)的蛋白表达水平.结果:MPP+可显著抑制SH-SY5Y细胞活力(P<0.05),并呈剂量和时间依赖性;ZER可使经600 μmol/L MPP+处理24 h的SH-SY5Y细胞活力升高,PARK7和Nrf2蛋白表达水平显著升高(P<0.05),ROS含量和细胞凋亡明显减少(P<0.05),抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)具有相似的作用;沉默PARK7 基因后,Nrf2 和HO-1 蛋白的表达水平明显下降(P<0.05),ROS含量和细胞凋亡显著增加(P<0.05).结论:ZER可在体外剂量依赖性地减轻MPP+对SH-SY5Y细胞的毒性作用,这可能与ZER激活PARK7/Nrf2/HO-1通路,继而抑制MPP+诱导的ROS生成和细胞凋亡有关.
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花姜酮通过NF-κB保护重症急性胰腺炎大鼠胰腺损伤
目的 探讨花姜酮对重症急性胰腺炎大鼠胰腺损伤可能的保护作用,为重症急性胰腺炎防治提供理论依据.方法 70只Wistar大鼠,雄性,按照随机数字表法随机分为4组,即正常对照组(NC组,n=10)、重症急性胰腺炎组(SAP组,n=40)、花姜酮预处理组(ZER组,n=10)及花姜酮药物对照组(ZER-CON组,n=10),SAP组又分为建模后1、3、6及12h 4个时间点组(n=10).SAP组及ZER组大鼠采用胆胰管逆行注射5％硫磺胆酸钠溶液(0.1 mL/100 g)制备SAP模型,NC组及ZER-CON组则向胆胰管注入等量生理盐水.ZER组及ZER-CON组于模型制备前30 min由股静脉穿刺给予10 mg/kg的花姜酮溶液.NC组、ZER组及ZER-CON组于建模后12 h处死大鼠,SAP组分别于建模后1、3、6及12 h处死大鼠.分别观察各组大鼠的死亡情况,测定其腹水量、血清淀粉酶(AMY)和磷脂酶A2水平;光镜下观察胰腺组织的病理学改变;采用免疫组化法检测各组大鼠胰腺组织中核因子-κB (Nuclear Factor-kappa B,NF-κB) p65的表达.结果 ZER-CON组大鼠的死亡情况、腹水量、AMY及磷脂酶A2水平和胰腺组织的病理学评分以及NF-κB p65蛋白表达与NC组相近,其差异均无统计学意义(P＞0.05);SAP组上述指标均明显高于NC组(P＜0.05).ZER组组大鼠的上述指标与SAP组相比明显降低(P＜0.05),但均高于NC组(P＜0.05).结论 应用花姜酮可以减少SAP大鼠的死亡,减少腹水量,减轻胰酶及胰腺病理学损伤,同时可降低胰腺NF-κB p65蛋白的表达.提示花姜酮可能通过核因子NF-κB途径对SAP大鼠胰腺起保护作用.
