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  • 清开灵注射液对登革病毒Ⅱ型的抗病毒作用研究

    作者:洪文艳;唐博恒;刘金华;刘建伟

    目的 检测清开灵注射液在细胞模型上抗登革病毒Ⅱ型(DENV-Ⅱ型)作用.方法 本实验以白纹伊蚊C6/36细胞为宿主细胞,阿昔洛韦(ACV)为阳性对照药物,通过观察细胞病变效应(CPE)和改良MTT法检测细胞存活率来测定药物的细胞毒性、药物对DENV-Ⅱ的直接灭活作用、以及药物抗DENV-Ⅱ对细胞的吸附和对DENV-Ⅱ在细胞内复制的抑制作用.结果 该药在体外对DENV-Ⅱ无直接灭活作用,也不能阻止其对细胞的吸附,但对病毒在细胞内的增殖有明显的抑制作用,且呈一定的剂量效应依赖性.结论 该药在体外有一定的抗DENV-Ⅱ感染作用.

  • 登革病毒悬液芯片分型检测方法的建立

    作者:史玲莉;闫冀焕;李云;罗明;沈军;韩伟

    目的 建立一种基于悬液芯片的登革病毒(dengue virus,DV)检测方法,可对四种血清型登革病毒进行快速检测和鉴定.方法 依据GenBank上4种病毒的基因序列信息,设计并合成相关引物及探针序列.抽提病毒RNA,经反转录后对目的基因进行PCR扩增,产物与核酸探针微球组杂交后于Bio-PlexTM 200系统检测荧光信号值.结果 DV1的悬液芯片检测敏感性约9 DNA拷贝,DV2、DV3、DV4的悬液芯片检测敏感性约90 DNA拷贝.进而将本方法用于检测15份临床标本,其检测结果与分型荧光RT-PCR一致.结论 建立了可同时检测四种血清型登革病毒的悬液芯片检测方法,为快速筛查和鉴定登革病毒提供了新的手段.

  • 登革病毒衣壳蛋白研究进展

    作者:秦成峰;秦鄂德

    登革病毒衣壳蛋白是病毒的结构蛋白之一,可与病毒基因组RNA结合构成病毒的核衣壳.同时,衣壳蛋白可进入细胞核,与多种蛋白质结合,并有可能参与对宿主细胞的调控,在病毒的感染过程中具有重要的作用.本文综述了近年来登革病毒衣壳蛋白的结构与功能等方面的研究进展情况.

  • 蚊传黄病毒的蚊虫细胞受体研究现状

    作者:任君萍;马文煜

    研究日本脑炎病毒、登革病毒和西尼罗病毒这三种蚊传黄病毒在蚊虫细胞上的受体特性及功能,对于终揭示这三种蚊传黄病毒的致病机理,切断蚊传黄病毒传播途径具有重要的意义.本文介绍了这三种蚊传黄病毒相似的受体结合蛋白的结构与膜融合机制,综合论述了在C6/36细胞上受体研究的进展,推测这三种蚊传黄病毒可能在蚊虫细胞上有相同的受体分子.

  • 登革病毒NS1蛋白在病毒致病与免疫中的作用

    作者:尹悦;周俊梅

    登革病毒可引起人类登革热、登革出血热以及登革休克综合征,其在世界范围内均有流行.至今登革出血热的发病机制仍未明确,也没有可用的疫苗和特效药物.近年来对登革病毒非结构蛋白NS1的研究逐渐增多,认为它与登革出血热的发病机制有一定关系,它在登革病毒感染的诊断以及亚单位疫苗的研制等方面也有一定的价值.本文就登革病毒NS1蛋白与病毒复制和致病的关系以及其在临床诊断和疫苗研制中的意义作一综述.

  • 墨西哥登革病毒感染者HLA-DR抗原频率研究:DR4可能是DHF的遗传抵抗因素

    作者:陈宗涛;李杰;安静

  • 2015年杭州市首例本地感染登革热病例病原溯源调查

    作者:孙昼;邱晓枫;任晓宾;王富良;谢立

    目的 对杭州市首例本地感染登革热病例开展调查及病原分子学溯源.方法 对首例本地感染登革热病例开展流行病学调查,采集患者血清进行登革病毒核酸和抗体检测.提取病毒核酸后扩增E基因并测序,利用生物信息学软件进行多序列比对排列及构建进化树.结果 该病例的登革病毒核酸及IgM抗体均为阳性,基因序列比对及进化分析,病毒株为登革病毒1型GⅣ亚型,与韩国2007年1例从菲律宾旅游输入病例分离的病毒株亲缘关系近,核苷酸和氨基酸同源性为98.9%和99.6%,与菲律宾2010年的2株病毒核苷酸和氨基酸同源性为98.6%和99.6%,病毒株来源于菲律宾的可能性较大.结论 杭州市首例本地感染登革热病例可能是由菲律宾旅游归国的输入性病例引发的二代病例.

  • 2015年云南省临沧市登革热暴发的流行病学调查

    作者:李华昌;潘虹;冯云;邓伟;杨贵荣;杨平;施靖;张海林

    目的 阐明云南省中缅边境地区临沧市2015年登革热(dengue fever,DF)流行病学特征及登革病毒血清型.方法 收集DF病例资料,采集患者急性期血清标本,用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测登革病毒核酸,并进行登革病毒C/PreM区核苷酸序列测定和分析.结果 2015年临沧市共报告登革热病例211例,其中本地感染病例100例(47.39%),输入性病例111例(52.61%;缅甸输入110例,泰国输入1例).本地流行地区为耿马县孟定镇,该流行区中埃及伊蚊为优势种,流行月份为7-11月.年龄分布以20 ~ 59岁组为主,小2岁,大81岁.男女性别比为1.37∶1.职业分布以农民(45.02%)和商业服务(19.43%)居多.211例DF病例从发病到诊断的时间间隔中位数为2.75 d.经登革病毒核酸检测和序列测定,从患者血清中获得7株病毒的C/PreM区基因核苷酸序列.进化分析表明,这7株病毒均为登革1型病毒(本地感染5例,缅甸输入2例),均与2014年云南省瑞丽市登革1型病毒以及缅甸、泰国和柬埔寨的登革1型病毒具有较近的亲缘关系.结论 2015年临沧市发生了输入性和本地感染并存的DF流行,临沧市和缅甸均存在登革1型病毒的流行,来自缅甸北部的DF输入性病例是引起DF本地流行的主要原因.加强输入性病例的监测和管理以及蚊虫控制是防止本病再次流行的关键措施.

  • 中国新疆部分地区蚊传黄病毒感染调查

    作者:吕志;付士红;李铭华;张松;高春代;高晓艳;邓掌;陈维欣;梁国栋

    目的 了解新疆部分地区不明原因发热患者蚊传黄病毒的感染状况.方法 采用ELISA方法对新疆维吾尔自治区南部喀什地区伽师县和麦盖提县、北部伊犁地区察布查尔县不明原因发热人群血清标本进行流行性乙型脑炎(乙脑)病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)、登革病毒(Dengue virus,DENV)、西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)IgM抗体检测.对检测结果阳性的血清标本平行进行以上3种病毒的交叉中和试验.结果 新疆南北部地区641例不明原因发热患者急性期血清中,乙脑病毒IgM抗体阳性率0.62%(4/641),登革病毒IgM抗体阳性率2.96%(19/641),西尼罗病毒IgM抗体阳性率1.72%(11/641).ELISA检测阳性患者血清中有6例存在乙脑病毒、登革病毒、西尼罗病毒中和抗体,滴度介于1∶10~1∶40之间.结论 新疆发热患者急性期血清标本可以检测到乙脑病毒、登革病毒、西尼罗病毒IgM抗体,部分病例血清中存在中和抗体.

  • 广东省肇庆市2014-2015年登革病毒分子分型及初步溯源研究

    作者:谭翰清;谭海芳;朱颖梅;程洁萍;苏乐斌;林凤;邓廷国;黄强;黎碧坚

    目的 了解广东省肇庆市2014-2015年登革病毒(DENV)的基因型别和可能的输入来源.方法 收集登革热临床诊断病例急性期血清,对实时荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测阳性标本进行病毒培养,分离株进行E基因扩增与序列测定,用Mega 5.1软件进行分子分型和系统进化树构建.结果 4 09份样品中147份实时荧光RT-PCR检测阳性(35.94%),其中2014年阳性144份(39.99%),以DENV 1(139/361)为主;2015年阳性3份(6.25%),以DENV 3 (2/48)为主.共获得22株DENV分离株,其中20株为2014年DENV 1型的genotype Ⅰ和Ⅲ,与2013-2014年广州、佛山市分离株核苷酸同源性分别为99.40% ~ 100.00%和99.20%~100.00%,与新加坡、泰国、马来西亚和印度尼西亚分离株亲缘关系次之;2株为2015年DENV 3的genotypeⅢ,与近年新加坡和印度尼西亚分离株的核苷酸同源性为98.20% ~99.70%.结论 广东省肇庆市2014年暴发流行的DENV 1为genotype Ⅰ和Ⅲ,可能由广州市和佛山市输入,2015年散发的DENV 3为genotypeⅢ,由佛山市输入,疫情毒株可能源于新加坡、印度尼西亚等东南亚流行株.

  • 2014年云南省瑞丽市登革1和2型病毒流行的分子流行病学研究

    作者:刘永华;冯云;尹小雄;杨召兰;李萍;张智萍;尹正留;张海林

    目的 阐明云南省中缅边境的瑞丽市2014年登革热流行的登革病毒血清型及分子流行病学特点.方法 收集登革热病例资料,采集患者急性期血清标本,用RT-PCR法检测登革病毒核酸,并进行登革病毒C/PreM区核苷酸序列测定和分析.结果 2014年6-12月,瑞丽市共确诊登革热病例292例,其中本地感染病例139例(47.77%),输入性病例153例(52.23%;缅甸输入152例,广州输入1例).2014年瑞丽市登革热本地感染病例发病率为72.77/10万.主要流行地区为瑞丽市城区、姐告开发区和勐卯镇.经登革病毒核酸检测和序列测定,从患者血清中获得65株病毒的C/PreM区基因核苷酸序列,其中本地感染40例,缅甸输入25例.进化分析表明,登革1型病毒53株(本地感染31例,缅甸输入22例),2型11株(本地9例,缅甸输入2例),4型1株(缅甸输入病例),它们均与东南亚登革病毒流行株具有较近的亲缘关系.结论 2014年瑞丽市发生了输入性和本地感染并存的登革热流行,缅甸木姐市和中国瑞丽市均存在登革1和2型病毒的共同流行,来自缅甸木姐市的登革热输入性病例是引起瑞丽市登革热本地流行的主要原因.

  • 登革病毒实时荧光PCR快速检测技术研究

    作者:刘建军;阳帆;何建凡;陈家敏;何雅青;杨洪

    目的 建立Taqman MGB实时荧光PCR技术快速检测登革病毒.方法 利用Taqman MGB技术,根据登革病毒3'端非编码区的一段高度保守序列,设计登革1~4型荧光PCR通用引物和TaqmanMGB探针,以登革热毒株作为标准,以乙脑毒株作对照,建立实时荧光PCR检测登革病毒的快速方法.并对8份ELISA法检测阳性的临床血清标本进行RT-PCR及荧光PCR扩增.结果 RT-PCR检测8份临床血清标本,2份阳性,阳性率为25%.实时荧光PCR检测登革病毒cDNA灵敏度为0.17pg/μl,病毒液灵敏度为10-5 TCID50,与乙脑病毒无交叉反应,检测8份临床血清标本,5份阳性,阳性率为62.5%.从RNA提取到检测结果仅需4 h.结论 Taqman MGB实时PCR检测方法快速、敏感性高、特异性强,可作为登革病毒的快速检测方法,应用于登革热的临床早期诊断.

  • 珠海登革病毒分离株的型别鉴定与序列分析研究

    作者:马洪波;朱汉荣;孙虹;杜坚;谭华;杨泽;林继灿;陈竞帆

    [目的]了解珠海市部分人群和入境船员中登革热的流行情况和珠海市流行的登革病毒株的型别和序列特征.[方法]分别采用胶体金快速法、酶联免疫吸附试验(ELISA)对登革热抗体进行检测;采用细胞培养和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术进行病毒鉴定,并对其结构蛋白基因序列进行克隆、测序及同源性分析.[结果]来自东南亚国家船舶的船员血清中登革病毒IgM抗体检出率为4.40%,IgG抗体为20.33%,其阳性样本经RT-PCR扩增,结果为阴性.而对本室保存的2001年珠海散发的登革热患者阳性血清,经用C6/36细胞培养分离出1株登革病毒,用登革病毒通用引物和Ⅱ型特异性引物,扩增出相应的片段,证实为登革Ⅱ型病毒;该分离株(DV2-1)的基因序列与其他9株登革Ⅱ型病毒进行系统发育关系的分析,结果显示分离株(DV2-1)与GD08/98株、FJ11/99株、16681株位于相近的分支,其中与1998年广东流行株GD08/98株系统进化关系近.[结论]2001年珠海地区登革热的散发流行为登革Ⅱ型病毒所致,推测其可能是输入性传染.

  • 应用DPO引物技术同时检测5种蚊媒病毒的多重RT-PCR方法

    作者:徐焕洲;平芮巾;季汝武;王琳;杨鹏飞;张丽萍;岳启安;胡孔新

    目的 应用双启动寡核苷酸引物(Dual Priming Oligonucleotide,DPO)技术建立同时检测日本脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)、黄热病毒(Yellow Fever Virus,YFV)、西尼罗病毒(West Nile Virus,WNV)、圣路易斯脑炎病毒(St.Louis encephalitis virus,SLEV)和登革病毒(Dengue virus,DV)5种蚊媒病毒的多重RT-PCR方法.方法 利用Primer Premier 5.0软件设计5种病毒的特异性DPO引物,对引物浓度、Mg2+浓度和退火温度进行优化,测定多重RT-PCR反应的特异性和敏感性.结果 应用DPO引物技术建立的多重RT-PCR方法可特异性扩增JEV、YFV、WNV、SLEV和DV的142bp、293bp、377bp、630bp和521 bp基因片段,灵敏度分别为5000PFU/ml、4 500 PFU/ml、2.3×105 copies/μl、2.6×104 copies/μl和1.37×104 copies/μl,蚊虫模拟添加实验未发生非特异反应.结论 应用DPO引物技术建立的针对5种蚊媒病毒的多重RT-PCR检测方法有良好的敏感性和特异性,可以同时对JEV、YFV、WNV、SLEV和DV进行检测.

  • 福建口岸输入登革Ⅰ型病毒E基因序列分析

    作者:张建明;黄野能;高博;杨坤宇;赵书艺;王宇平

    目的 研究分析福建口岸输入登革Ⅰ型病毒E基因序列,为登革热诊断的分子溯源提供参考.方法 收集2012-2013年福建口岸截获的7例入境Ⅰ型登革热病例资料及血清标本,用C6/36细胞培养分离病毒,提取病毒RNA,用RT-nested-PCR扩增包含E基因全长的核酸片段,扩增产物经纯化、测序,用生物学软件进行DNA序列比对分析.结果 用C6/36细胞从7例登革热病例血清中成功分离出7株登革病毒株,经RT-nested-PCR证实均为DENV-Ⅰ型,构建E基因全长进化树分析发现,分离株与新加坡、越南和菲律宾等地的病毒株同源性高,与病例入境时进行的流行病学调查资料完全吻合.结论 从分子水平证明登革热病例血清中分离到的毒株为DENV-Ⅰ型病毒,结合流行病学调查资料,证实均为输入性感染病例,有可能来源于东南亚一带.

  • 贵阳口岸人群登革病毒抗体血清流行病学研究

    作者:高睿;周筱;周年潮;韩勇;罗吉;秦洁

    [目的]掌握贵阳口岸人群登革病毒感染状况,为制定口岸预防控制措施提供科学依据.[方法]用酶联免疫吸附试验(ELISA)对2 281份血清样本进行登革病毒抗体检测.[结果]共检出登革病毒抗体阳性197例,总检出率为8%.不同人群阳性率分别为:机场口岸工作人员6.3%;出入境人员中劳务人员14.6%;公务人员4.9%;留学人员7.6%;定居人员3.6%;探亲人员11.7%;其他9.1%.不同人群、不同年龄组间登革病毒抗体阳性率差异具有极显著性(P<0.001).其中赴台湾地区探亲人员这一特殊人群阳性率为16.7%,应加以重视.[结论]贵阳口岸存在登革病毒的感染.出入境检验检疫机构应加强对贵阳口岸出入境人员尤其是赴台湾地区探亲人员的监测及预防控制力度.

  • 蚊虫携带登革病毒快速筛查方法的建立

    作者:宋锋林;王静;周蕾;吴刚;薛芳;张晓龙;姚李四;杜海方;张冠楠

    [目的]研究一种适合现场使用的快速检测方法,用于对蚊虫携带登革病毒的初步筛查.[方法]采用双抗体夹心技术,建立上转换发光(UCP)免疫层析方法,筛查蚊体携带的登革病毒.[结果]该方法能在15min内对蚊虫携带的登革病毒进行快速筛查.[结论]建立的免疫层析方法简便、快速、敏感、特异,适合卫生检疫工作现场使用.

  • 福州口岸入境船舶上首次发现埃及伊蚊及其携带的病原体

    作者:陈佳木;李亚伦;李平航;周天喜;吴青;蔡亨忠;张建庆;黄恩炯

    [目的]通过加强入境船舶医学媒介监测,防止新蚊种、蚊媒传染病传人和传播.[方法]对入境船舶的积水容器进行蚊幼虫监测,并采样送实验室进行形态学鉴定,登革热、黄热病、基孔肯雅热等病原检测,对船舶实施灭蚊等卫生处理,对船员施行流行病学调查、体温检测、医学检查等措施.[结果]全船发现9处积水,1处蚊幼虫阳性,积水4000ml,幼虫70条,羽化后经实验室鉴定该蚊幼虫均为埃及伊蚊,未检出登革热、基孔肯雅、西尼罗、乙脑等病毒.对该轮船员进行流行病学调查、医学检查,未发现登革、基孔肯雅热、乙型脑炎、西尼罗热、黄热病等病人.对船舶实施灭蚊等卫生处理措施后,未再发现成蚊和蚊幼虫.[结论]埃及伊蚊属福州地区外来蚊种,是传播黄热病、登革热等热带病的重要媒介.提示福州口岸应提高防范意识,特别应加强来自蚊媒传染病疫区船舶的蚊媒监测、卫生处理工作.

  • 输入性蚊类携带登革病毒的检测方法的研究

    作者:李家明;张锜;张军;裘炯良;王廷学

    [目的]研究适用于国境卫生检疫对输入性蚊类携带的登革病毒检测的方法.[方法]针对国境口岸输入性蚊类样本的特点和检疫检测的要求,筛选与试验对蚊样本检测登革病毒快速、敏感、特异的技术和方法.[结果]口岸输入性蚊类样本具有蚊虫数量少、不可重复获得等特点,需要有检测小样本蚊虫的方法,大样本检测需要一次完成并结果较准确.[结论]确定了适合对蚊虫小样本检测登革病毒的方法."单克隆抗体免疫荧光法"和"RT-PCR"技术被用于对蚊虫大样本进行病毒分离及鉴定,并制定了相应的行业标准规程.

  • 2017年河南口岸2例输入性登革热病例回顾分析

    作者:王永亮;李帅;高志华

    目的 对2017年河南口岸2名疑似为输入性登革热病例的入境人员进行实验室鉴定,为口岸实施精准检疫提供依据.方法 2名疑似病例分别从斯里兰卡和泰国旅游归国,入境时间分别为2017年1月和12月.根据流行病学调查,怀疑其在境外感染登革病毒,采集血清样本用实时荧光RT-PCR进行登革病毒检测.结果 2个病例样本均为登革病毒通用型核酸阳性,分型鉴定均为登革病毒Ⅱ型,Ct值为19.确定为输入性病例.结论 应根据国际疫情动态变动形势,加强输入性疫情的早期预警,实施口岸输入性传染病精准防控.

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