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2010～2011年乌鲁木齐地区住院呼吸道感染患儿人博卡病毒检测与分析
目的 了解新疆乌鲁木齐地区住院呼吸道感染患儿中人博卡病毒(human bocavirus,HBoV)的检出情况.方法 收集新疆维吾尔自治区人民医院2010年1月至2011年12月住院呼吸道感染患儿鼻咽抽吸物标本525例,用巢氏PCR扩增人HBoV NS1片段检测HBoV 1 ～4型.结果 在525份标本中,HBoV总阳性检出率为8.38％ (44/525),其中HBoV 1型6例,HBoV 2型38例,未检出HBoV 3、4型.各民族患儿之间HBoV阳性检出率统计分析发现,维族、回族患几分别高于汉族患儿,差异有统计学意义(P＜0.05).HBoV 1型与参考株核苷酸序列相似度为97.7％ ～ 99.4％,HBoV2型与参考株核苷酸序列相似度为93.6～ 100％.HBoV的检出时间主要以冬春季为主,HBoV感染在年龄及性别方面差异均无统计学意义.结论 2010～ 2011年乌鲁木齐地区呼吸道感染的住院患儿存在HBoV 1、2型的流行,以HBoV 2型为主,维族、回族患儿HBoV的检出率分别高于汉族患儿.
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人博卡病毒研究进展
2005年,瑞典的Allander等人[1]采用宿主DNA消除、随机PCR扩增、高通量测序和生物信息学知识相结合的方法,在呼吸道感染患儿的鼻咽抽吸物中发现了一种新的细小病毒——人博卡病毒( human bocavirus,HBoV).随后,世界上许多国家陆续报道了在呼吸道感染患儿中检测出HBoV,但大多数研究只是描述这一病毒的流行情况,并没有阐明这一病毒是否是引起疾病的病原.虽然HBoV能在分化的呼吸道上皮细胞进行体外培养[2],但由于HBoV同其它病毒合并感染的情况较多,也没有建立动物感染的模型,因此HBoV在人类疾病中的作用还不明确.
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北京地区6岁以下儿童急性呼吸道感染病例人博卡病毒流行状况分析
目的 了解北京地区6岁以下儿童急性呼吸道感染病例中人博卡病毒的流行状况,探讨其流行特征.方法 2013年1月至2014年12月,从北京市28家哨点医院采集6岁以下急性呼吸道感染病例标本5623份,采用Real-timePCR及巢式RT-PCR方法,检测人博卡病毒核酸和基因分型.结果 共检出人博卡病毒38例,阳性检出率为0.68％(38/5623),不同年龄组的阳性检出率:0～1岁组为0.88％,1～3岁组为1.00％,3～6岁组为0.34％.3岁以下儿童组比3岁以上儿童组人博卡病毒检测阳性率高(x2=10.058,P=0.001).不同时间人博卡病毒阳性检出率:2013年3月为0.48％ (1/208),8月为0.90％(2/221),9月为1.52％(4/263),10月为2.00％ (9/449),11月为1.52％ (8/524),12月为0.35％ (2/567),其余月未检出;流行季节为8-11月,高峰期为10月;2014年3月为0.19％(1/519),5月为0.57％(2/348),8月为5.56％ (4/72),9月为1.14％ (1/88),10月为3.41％(3/88),其余月未检出;流行季节为8-10月,高峰期为8月.7例病例为人博卡病毒与其他病毒(冠状病毒、鼻病毒、呼吸道合胞病毒、副流感3型病毒)混合感染,混合感染率为18.42％(7/38).38例病例检出的人博卡病毒基因型别均为HBoV1亚型,与参考株HBoV1 ST1和ST2株核苷酸同源性为98.4％～99.6％,氨基酸同源性为98.2％～100.0％.结论 北京地区部分儿童急性呼吸道感染与HBoV相关;北京地区的HBoV以HBoV1亚型为主,流行季节性为8-11月.
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杭州地区急性呼吸道感染患儿人博卡病毒的检测及分析
目的 了解杭州地区人博卡病毒(HBoV)的流行情况和基因变异情况.方法 对杭州地区160例儿童急性呼吸道感染患者咽拭子样本进行HBoV检测,并对阳性样本进行常见呼吸道病毒的检测,终选取HBoV单一阳性的HZ1株和HZ2株进行VP1基因扩增,将获得的序列上传Genbank并与其他国家和地区的8株HBoV的VP1基因进行序列比对和分析.结果 杭州地区HBoV的检出率为6.9%(11/160),与其他常见呼吸道病毒的合并感染率达到45.5%(5/11),HZ1株和HZ2株与其他国家和地区的8株HBoV的VP1基因相似性达到99%以上.结论 研究证明杭州地区急性呼吸道感染患儿中存在HBoV的感染,与其他呼吸道病毒有较高的合并感染,从分离到的HZ1株和HZ2株来看,杭州地区流行的是ST2基因型,其外壳蛋白VP1基因变异很小.
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广州地区儿童呼吸道感染人博卡病毒的分子流行病学研究
人博卡病毒(HBoV)属细小病毒,为瑞典学者Allander 等[1]2005年从小儿下呼吸道感染样本中分离到的一种新呼吸道病原.目前世界各地均有HBoV研究相关报告[2],说明该病毒是世界范围内存在的人类致病原.为了解广州地区HBoV的分子流行病学特点和临床特征,对638例患儿临床标本进行检测.结果报告如下.
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人博卡病毒基因克隆及衣壳编码基因序列变异分析
为了解人博卡病毒(Human Bocavirus,HBoV)VP1基因进化关系;阐明HBoV目前具体的变化规律,用PCR的方法扩增了1株HBoV的全基因和9株HBoV的VP1基因,克隆并测序,在此基础上,将HBoV的全基因序列和衣壳序列分别与细小病毒亚科其他14个有代表性的病毒进行遗传分析,构建进化树,对目前所有可得到的HBoV的17个衣壳蛋白进行二级结构分析和抗原性分析.结果显示:HBoV全基因序列与B19关系较远,但衣壳序列遗传关系较近.以有典型性的猫瘟细小病毒(Feline parvovirus,FPV)衣壳蛋白为参照,分析多个HBoV衣壳序列之间的变异情况,显示HBoV衣壳的二级结构基础表现出较高的保守性,序列之间的变化主要发生在高抗原区域和感染活性区域.衣壳病毒变异情况显示HBoV在稳定自身的情况下表现出一定的活跃性以逃避免疫反应,也表现出一定的感染适应力.
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兰州地区腹泻患儿中人博卡病毒1～4型流行病学研究
了解兰州地区病毒性腹泻患儿中人博卡病毒1～4型(HBoV1～4型)的流行情况及临床特点,并探讨HBoV与急性胃肠炎的疾病相关性.收集兰州大学第一医院2012年7月至2013年6月5岁以下腹泻患儿的粪便标本331份,采用PCR方法检测人博卡病毒,同时检测常见的肠道病毒.331份标本中共检出博卡阳性标本49例(14.80％),其中HBoV1～4型分别检测出26例、15例、7例和1例.分析其流行规律发现HBoV相关的腹泻全年散发,无明显季节分布.HBoV感染的患儿年龄为11.04±6.92月龄,高发年龄是7～12月龄.2岁以下患儿占HBoV阳性患儿总数的93.88％.HBoV与其他病毒混合感染率为71.3％,以混合轮状病毒为主.HBoV感染对腹泻患儿的发热和呕吐发生率无明显影响.检测出一例罕见的HBoV4病毒LZFB086,与泰国(序列号JQ267789)参考株的同源性为99.0％.未检测出HBoV2B型.从研究结果得出我国兰州地区人博卡病毒以HBoVl为主,在我国首次发现HBoV4病毒.HBoV1～4与其他病毒的混合感染率高,主要是混合轮状病毒.HBoV可能不是导致急性胃肠炎的致病病原.
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人博卡病毒感染的研究进展
细小病毒科属于DNA病毒,其中的细小病毒亚科可进一步分成五个种属,大多数细小病毒属主要感染家畜并致病.
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人博卡病毒及其在中国的流行现状
人博卡病毒(Human bocavirus,HBoV)属于细小病毒科,博卡病毒属.HBoV是除细小病毒B19和人细小病毒4(Human parvovirus,PARV4)外,目前所发现的与人类疾病有关的细小病毒之一.至今已有4种不同的HBoV相继报道,分别为HBoV1、HBoV2、HBoV3和HBoV4.HBoVs感染的发生率差异较大,且患者的临床表现各不相同,常与其它病原体共检出.本文就有关HBoVs的报道,从HBoVs的生物学性状、流行特征、致病机制、系统进化分析及其在我国的流行现状进行了阐述和讨论.
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WLL-1株博卡病毒(Bocavirus)全基因组序列分析
儿童下呼吸道感染已成为当前儿科发病率高的一种疾病,而病毒是小儿下呼吸道感染的重要原因.临床上有相当比例的小儿下呼吸道感染病因未能作出明确的实验室诊断,给临床诊断与治疗带来了较大的困难.
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2016年北京地区急性腹泻患儿感染人博卡病毒流行特征及分子进化研究
目的 了解2016年北京地区急性腹泻患儿感染人博卡病毒(HBoV)流行及遗传进化特征. 方法 采集北京地区哨点医院2016年＜60月龄急性腹泻患儿粪便标本,用巢式PCR检测HBoV,通过测序和Blast比对确定病毒型别,并进行遗传进化分析;采用实时荧光PCR对A组轮状病毒、诺如病毒、肠道腺病毒、星状病毒进行检测,分析混合感染情况. 结果 354份粪便标本中,HBoV阳性26份,阳性率为7.34％,其感染无明显季节分布,＜2岁患儿占84.62％.HBoV与其他腹泻病毒混合感染率为38.46％,以混合轮状病毒感染为主.进化分析表明,HBoV1、2、3型感染分别为15、10、1例,未检出HBoV4型.HBoV2序列均独立于HBoV2A和HBoV2B亚型分支,位于一个新的HBoV2亚型分支上. 结论 2016年北京地区腹泻患儿感染HBoV包括3种型别(1-3型),2岁以内患儿是高发人群.HBoV2在进化树上位于一个新的亚型分支.
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人博卡病毒VP2蛋白的原核表达及血清学检测方法的建立
目的 获得高表达量的人博卡病毒( HBoV1、HBoV2) VP2蛋白,建立血清学检测方法.方法 按照大肠埃希菌密码子使用偏性,对HBoV1、HBoV2 VP2衣壳蛋白基因编码区序列进行优化合成.将合成的目的基因克隆至表达载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-VP2,转化大肠埃希菌BL21 (DE3),使用IPTG诱导表达并摸索佳表达条件;粗提取蛋白进行Ni亲和层析纯化后建立间接酶联免疫吸附试验( ELISA),进行临床血清标本筛查,分析人群HBoV1、HBoV2感染情况.结果 优化合成的HBoV1、HBoV2 VP2基因正确连接至pET30a载体,开放阅读框正确,用1 mmol/L IPTG过夜诱导表达(25℃)得到高表达量的VP2蛋白,目的蛋白主要以包涵体的形式存在.粗提取蛋白经NiNTA亲和层析,在pH4.5时获得较理想的纯化蛋白,以其为抗原建立ELISA检查方法,筛查临床血清标本IgG抗体水平,结果显示健康儿童HBoV1阳性率为62.2％,HBoV2阳性率为55.5％,混合感染率为37％.结论 本研究成功将HBoV1、HBoV2 VP2衣壳蛋白基因编码区序列进行优化,得到了较高的蛋白表达量,所建立的ELISA法可以应用于HBoV1、HBoV2人群血清流行病学调查.
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上海地区人博卡病毒在儿童急性呼吸道感染的研究
目的 了解上海地区人博卡病毒(HBoV)在儿童急性呼吸道感染中的流行情况和临床特点.方法 上海地区在2012年1月至2012年12月共收集271例急性呼吸道感染患儿的鼻咽抽吸物,采用巢式聚合酶链反应(Nested PCR)方法检测人博卡病毒NS1基因、并经测序确认,对所获得的基因序列进行同源性和进化分析,博卡病毒阳性样本同时检测鼻病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等8种呼吸道相关病毒.结果 271例标本中共检出HBoV阳性31例,检出率11.4％;21例存在混合感染,全年均有检出,阳性患儿中位年龄17个月(4个月-4岁),诊断包括上呼吸道及下呼吸道感染,临床表现包括发热、阵发性咳嗽、咳痰、腹泻、呕吐、咽充血、湿罗音等,无死亡病例,门诊患者检出率明显高于住院患者;序列分析表明其中29例为HBoV1、2例为HBoV2、与参考株的核苷酸同源性为99％-100％,氨基酸同源性96％-100％.结论 HBoV1是上海地区急性呼吸道感染患儿中的重要病原,HBoV2在该地区首次检出,临床症状及诊断无特异性.
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婴幼儿毛细支气管炎中人博卡病毒感染及其临床特征分析
目的 了解婴幼儿毛细支气管炎中人博卡病毒(HBoV)的感染状况,比较HBoV与呼吸道合胞病毒(RSV)单一检出的毛细支气管炎的临床特征.方法 选择2015年01月至2016年12月甘肃省妇幼保健院儿童哮喘中心收治的396例毛细支气管炎患儿,采集纳入患儿住院当日鼻咽抽吸物标本2份,1份提取病毒核酸,采用巢式聚合酶链反应(Nested-PCR)和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HBoV、RSV及其他常见6种呼吸道病毒,另1份行细菌及真菌培养,且采集相应患儿血液标本进行肺炎支原体及肺炎衣原体抗体检测,分析比较HBoV和RSV感染情况及临床特征.结果 396例标本中病毒检测阳性者212例,阳性检出率53.54％;HBoV及RSV检出阳性率分别为9.84％、24.49％;单纯HBoV感染29例,单纯RSV感染86例,5例为HBoV与RSV合并感染.39例HBoV感染患儿中男性27例,男性较女性检出率高(P＜0.05).HBoV阳性检出率在各年龄段患儿的差异有统计学意义(P＜0.05),6～12月阳性检出率高.HBoV感染检出高峰在2015年11月.与RSV感染相比,单一检出HBoV的毛支组更易出现呕吐、腹泻(P＜0.05),但气促、发绀、呼吸困难、低氧血症的临床症状发生率以及喘息时间、住院时间均低于RSV组(P＜0.05).HBoV较RSV感染患儿胸片肺气肿影相对多见(P＜0.05);实质病变少见(P＜0.05).结论 HBoV可能是引起婴幼儿毛细支气管炎的病毒病原之一;单一检出HBoV的毛细支气管炎组和RSV组具有相似的临床特征,但HBoV感染患儿病情可能较RSV轻.
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人博卡病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备
目的 表达纯化人博卡病毒( human Bocavirus,HBoV) VP2蛋白,采用杂交瘤方法制备抗HBoV VP2蛋白的单克隆抗体.方法 应用原核表达载体pET-30a和大肠埃希菌表达VP2蛋白,并用固定化金属亲和层析,纯化后的蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术和间接ELASA方法筛选阳性的杂交瘤细胞,并对单克隆抗体进行分型检测和滴度测定.结果 表达并纯化获得了重组HBoV VP2蛋白,利用杂交瘤技术得到单克隆IgG抗体,抗体效价达到1∶4×105.结论 利用HBoV VP2蛋白免疫制备了单克隆抗体,并具有较高的效价.本研究为快速诊断和研究HBoV打下基础.
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新近发现的细小病毒与多瘤病毒感染
2005年以来,研究人员又相继发现了新的与人类疾病相关的DNA病毒,包括属于细小病毒科的人博卡病毒(human bocavirus,HBoV,2005年[1])、人细小病毒4(human parvovirus 4,PARV4,2005年[2])与人细小病毒5(human parvovirus 5,PARV5,2006年[3]);属于多瘤病毒科的KI多瘤病毒(KI polyomavirus,KIPyV,2007年[4])、WU多瘤病毒(WU polyomavirus,WUPyV,2007年[5 ])及MC多瘤病毒(MCPolyomavirus,MCPyV,2008年[6])等.目前对于新近发现的这些DNA病毒的研究包括基因结构特征、流行病学、感染后临床特征、检测方法等各个方面.尽管分子生物学技术方法的发展与应用,实现了对病毒更敏感、特异、快速与深入的研究,但大部分新近发现的病毒与人类疾病的相关性仍不十分清楚[7].本综述就新近发现的DNA病毒:人博卡病毒、人细小病毒4、人细小病毒5、KI多瘤病毒、WU多瘤病毒、及MC多瘤病毒的发现、分子检测方法及其各自的病原学意义作一简要综述.
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乌鲁木齐地区腹泻患儿中人博卡病毒感染分子流行病学调查
目的 了解新疆乌鲁木齐地区腹泻患儿中人博卡病毒1～4型(HBoV1 ～4)感染的分子流行情况.方法 收集新疆维吾尔自治区人民医院2011年1月至12月住院及门诊腹泻患儿粪便标本315例,用巢氏PCR扩增入博卡病毒(HBoV) NS1片段(518 bp),检测HBoV1～4型.结果 315份标本中,HBoV总阳性检出率为8.57％ (27/315),其中HBoV1、2、3、4型分别为2例、22例、3例、0例.除XJ1378外,其他26例HBoV均与参考株的核苷酸同源性达到98％ ～ 100％,但其中3例HBoV3型与大猩猩GBoV1型(HM145750.1)核苷酸同源性为92％,且系统进化显示HBoV3型NS1片段更接近于HBoV1型.HBoV感染呈全年散发,并无明显季节性.在性别、年龄及民族间均无差异.结论 本地区腹泻患儿中HBoV1 ～3型均有流行,且以HBoV2型为主要流行株.
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杭州地区2009-2014年间人博卡病毒1型的全基因组序列测定及遗传进化分析
目的：调查杭州地区2009—2014年间人博卡病毒1型（ human bocavirus 1， HBoV1）全基因组序列的遗传变异和分子进化特征。方法采集2009—2014年间浙江大学医学院附属儿童医院急性呼吸道感染患儿咽拭子标本，采用实时荧光PCR检测HBoV1，终挑选15株病毒载量高的阳性样本进行全基因组扩增和测序。测序结果上传至GenBank，利用生物信息学软件分析序列。结果15株HBoV1病毒全基因组序列共检测到48个核苷酸突变，终导致11个氨基酸变化，其中5个位点处于磷脂酶（ PLA2）活性区。基于全基因组编码序列的进化分析表明HBoV1可以分为3个分支，本研究的15株病毒全部属于分支1，与瑞典代表株ST2属于同一簇。另外，进化树构建结果表明VP1／VP2基因可以替代全基因编码序列来构建HBoV1的进化树。 HBoV1全基因组序列的进化速率为每年3．03×10－4（95％HPD，2．14×10－4～3．92×10－4）突变点／位点，对于单个基因，NS1的进化速率慢，而NP1的进化速率快。 HBoV1四个基因的选择压力ω值都小于1，表明所有基因都处于纯化选择下，其中VP2的纯化选择压力强，而NP1的纯化选择压力弱。结论杭州地区2009—2014年间流行的HBoV1均属于ST2基因型，PLA2活性区变异率相对较高。全基因组序列虽然保守，但进化速率很快，其中NP1基因进化速率快。4个基因均处于纯化选择压力下，其中VP2基因的纯化选择压力强。
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北京市腹泻儿童人博卡病毒VP1区基因特征分析
目的了解北京市5岁以下腹泻儿童人博卡病毒(human bocavirus,HBoV)感染状况及分子流行病学特征.方法收集2015年11月—2016年12月北京市哨点医院5岁以下急性腹泻儿童粪便标本,用巢式PCR对HBoV部分VP1区序列进行扩增,并对阳性序列进行基因特征分析.结果共采集粪便标本396例,检出HBoV 30例(7.58％),包括3种基因型别,分别为HBoV1型(17例)、HBoV2型(11例)、HBoV3型(2例),未检出HBoV4型.进化分析表明,HBoV1序列在进化树上包括两簇,其中,BJ16-325变异程度较大,自成一簇;其他HBoV1序列共同形成一簇.北京地区所有HBoV2序列均位于一个新的HBoV2亚型分支上.结论2015—2016年北京市5岁以下腹泻儿童检出的HBoV包括3种基因型(1～3型);北京市至少存在2组不同来源HBoV1的流行;本地区流行的HBoV2为一种新的亚型.
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人博卡病毒感染的流行病学和诊断研究
人博卡病毒属于细小病毒科(Parvoviridae)博卡病毒属(Bocavirus).2005年,瑞典学者Allande首次从患急性呼吸道感染的婴幼儿中分离得到该病毒.全球已有人博卡病毒感染的报道,但对该病毒仍然知之甚少.本文对人博卡病毒感染的流行病学特点和诊断作一综述.
