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干扰素调节因子3及其可变剪接体与肿瘤
干扰素调节因子3(IRF3)作为干扰素调节因子家族的重要成员,在调控(型干扰素及其下游基因中发挥关键作用,并参与多种生物学过程.研究发现其可抑制肿瘤细胞的生长和转移,并诱导细胞凋亡,发挥抑癌基因作用.该作用机制涉及肿瘤免疫与炎症反应、凋亡及上皮间质转化等过程.IRF3可变剪接体可负性调控IRF3功能,影响肿瘤发生发展.相关的信号通路、发病机制研究为肿瘤早期诊断、治疗提供了新的思路.
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干扰素调节因子3基因多态性检查在慢性淋巴细胞白血病患者中的预后价值
目的 研究干扰素调节因子3(IRF3)基因多态性在慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者中的表达,探讨其基因型在CLL预后中的意义.方法 采用变性高效液相色谱法(DHPLC)对患者样本进行基因分型,对IRF3基因的3个位点rs7251、rs1140375和rs2304206进行单体基因型分析,同期检测常规预后相关指标.结果 CLL患者经过治疗后,rs7251各基因型中无事件生存率(EFS)分别为:32.0％(杂合型CG和突变型GG)和72.7％(野生型CC),CC基因型患者EFS明显高于携带CG+ GG基因型患者.rs2304206各基因型中EFS分别为28.2％(杂合型CT和突变型TT)和62.5％(野生型CC),CC基因型患者EFS高于携带CT+ TT基因型患者;rs7251位点的杂合型CG和突变型GG基因型、rs2304206位点的杂合型CT和突变型TT基因型的ZAP-70、CD38表达率明显高于表达rs7251位点的野生型CC和表达rs2304206位点的野生型CC基因型,上述差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 IRF-3基因多态性与汉族人群CLL预后相关,IRF-3基因多态性可能与ZAP-70、CD38两项临床预后指标具有相关性,IRF-3基因多态性检测可作为一个新的相对独立的CLL患者生存预后指标.
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LXRα通过下调IRF3、GRIP1负性调控Kupffer细胞中LPS诱导的炎症反应机制
目的 通过观察肝X受体α(LXRα)激动剂对脂多糖(LPS)刺激后Kupffer细胞干扰素调节因子3(IRF3)、糖皮质激素受体反应蛋白1(GRIP1)、LXRα表达的影响,探讨LXR α负性调控炎症反应的相关机制.方法 采用胶原酶原位灌注法分离和培养雄性KM小鼠肝脏中的Kupffer细胞,所得细胞在含20%小牛血清和1%青霉素/链霉素的1640培养基中培养.将分离的Kupffer细胞随机分为4组:空白对照组、TLR4配体激活剂LPS(1 μg/ml)组、LXRα配体激活剂T0901317(5 μg/ml)组、LPS和T0901317共同处理组.收集培养细胞,采用Western boltting法检测Kupffer细胞的LXRα、GRIP1及IRF3蛋白表达水平.ELISA检测Kupffer细胞培养上清液中干扰素(IFN)β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β含量.结果 LXR α蛋白质表达水平在T0901317处理组高,LPS处理组低.联合处理组中,LXRα表达明显低于T0901317处理组(P<0.05),但又显著高于其他两组(P<0.05).IRF3及GRIP1蛋白表达量在LPS组高,联合处理组表达明显降低,两组间均有显著差异(P<0.05);在LPS组及联合处理组中,IRF3及GRIP1蛋白表达量均高于对照组及T0901317处理组(P<0.05).IFNβ在LPS处理组的含量较对照组和T0901317处理组明显增高(P<0.05);联合处理组IFNβ含量比LPS处理组明显降低(P<0.05);IFNβ表达T0901317处理组表达低.TNF-α在LPS处理组的含量较其他3组明显增高(P<0.05);对照组、T0901317处理组和联合处理组水平较低,且他们3组之间无明显差别(P>0.05).IL-1β的表达趋势与TNF-α相同.结论 在应用LPS处理之前预防性应用LXRα激动剂,能明显抑制Kupffer细胞的IRF3及GRIP1表达.通过抑制IRF3、GRIP1的表达而发挥抗炎效应,从而抑制LPS所诱导的Kupffer细胞活化.
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氯喹对脂多糖/内毒素诱导的RAW264.7细胞TLR4-MyD88非依赖信号转导途径的抑制作用
目的 探讨氯喹对脂多糖/内毒素(lipopolysaccharide/endotoxin,LPS)诱导TLR4-MyD88非依赖途径的抑制作用.方法 MTT法检测不同浓度氯喹(5、10、20、40、60 μg/ml)对RAW264.7细胞活性的影响,ELISA检测培养体系中TNF-α、IL-6在2、6、12、18、24 h的释放情况,RT-PCR检测TNF-α、IL-6、TLR4、TRAM mRNA的表达,EMSA检测NF-κB的活性,Western blot检测IκBα磷酸化水平和IRF3的降解情况.结果 氯喹浓度小于40 μg/ml时对RAW264.7细胞活性无影响(P>0.05);应用氯喹预处理后LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α、IL-6在蛋白水平和核酸水平均受到明显抑制(P<0.05),TLR4和TRAM在核酸水平均受到显著抑制(P<0.01);EMSA结果 显示NF-κB的活化受到抑制,而Western blot检测显示IκBα磷酸化及IRF3的降解也受到抑制.结论 氯喹对LPS诱导的RAW264.7细胞TLR4-MyD88非依赖信号转导途径具有抑制作用.
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IRF3shRNA腺病毒包装及其对RAW264.7细胞IRF3表达的抑制效应
目的 重组并包装干扰素调节因子3(interferon regulator factor 3,IRF3)短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)腺病毒,研究该病毒对RAW264.7细胞IRF3基因表达及对细胞增殖活性和吞噬功能的影响.方法 采用酶切和连接方法构建pAdeno-U6-CMV-EGFP-IRF3 shRNA质粒;借助AdMaxTM病毒包装系统完成IRF3基因干扰腺病毒的重组与包装;IRF3基因表达分别采用real-time PCR和Western blot分析方法检测;RAW264.7细胞的增殖活性和吞噬功能分别采用CCK8分析和吞墨试验检测.结果 IRF3基因的干扰片段及对照序列被正确插入pAdeno-U6-CMV-EGFP质粒Age Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点之间,经PCR扩增及DNA测序证实;RAW264.7细胞组成性表达IRF3基因,针对IRF3基因后部序列的干扰腺病毒Y2147明显抑制了IRF3 mRNA和蛋白质的表达,而针对IRF3基因前部及中部序列及对照序的干扰腺病毒对IRF3的表达无明显沉默或封闭效应;腺病毒Y2147对RAW264.7细胞的增殖活性及吞噬功能无明显不良影响.结论 成功构建并包装了IRF3shRNA腺病毒,该病毒能有效抑制RAW264.7细胞IRF3 mRNA和蛋白表达,且对细胞的增殖活性和吞噬能力无不良影响.
关键词： 干扰素调节因子3 短发夹RNA 腺病毒 病毒包装 RAW264.7细胞 -
固有免疫信号分子STING研究进展
干扰素基因刺激分子(stimulator of interferon genes,STING)是调控Ⅰ型干扰素基因表达的重要信号分子之一,在抗感染固有免疫应答中具有重要的作用.研究发现STING参与病毒或细菌dsDNA或RNA刺激引起的固有免疫信号转导途径,STING作为信号转导接头蛋白能募集TBK1并激活IRF-3 (interferon regulatory factor 3,干扰素调节因3)诱导1型IFN的产生,进而调控抗感染固有免疫应答反应.本文就目前STING的研究进展作一综述.
