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H7N9禽流感病毒HA基因在杆状病毒中的表达及检测
目的 利用昆虫杆状病毒表达系统表达H7N9禽流感病毒血凝素(HA)基因,获得重组HA蛋白,并验证其活性.方法 全基因合成H7N9禽流感病毒全长HA基因,将HA基因进行扩增并克隆到pFastBacI载体中,构建重组杆状病毒表达载体,经PCR鉴定后将其转染昆虫sf9细胞,再采用SDS-PAGE实验和免疫印迹法检测重组HA蛋白的表达.HA蛋白经纯化后,采用血凝试验鉴定其红细胞凝集活性.结果 PCR结果显示重组杆状病毒表达载体的扩增产物大小约为4000 bp,SDS-PAGE电泳显示纯化的表达蛋白分子量为63 KD,免疫印迹检查结果显示表达蛋白可以与特异性HA抗体进行反应,产生条带与理论大小相当.血凝试验结果显示表达的蛋白能使红细胞凝集,滴度为1:64.结论 禽流感H7N9的HA蛋白在重组杆状病毒中获得表达,并具有血凝活性.
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乙型肝炎病毒转基因小鼠研究现状
由于HBV感染具有明显的种属特异性,只感染人及黑猩猩等灵长类动物,使乙型肝炎的研究一直缺乏理想的动物模型.转基因小鼠出生前就能在内源性HBV启动子的控制下,主要在肝脏内持续转基因表达,在肝细胞内没有HBsAg积累,也没有肝细胞病变,HBsAg以亚病毒颗粒的形式以9 000ng/ml的浓度分泌入血[1].这些小鼠对高水平的循环抗原耐受,不产生抗HBs,可被用作HBV慢性携带状态模型.本文对HBV转基因小鼠转基因表达、免疫耐受及打破免疫耐受的机理等作一简要综述.
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呼吸道病毒基因反义技术的研究进展
反义寡核苷酸是一段与mRNA特异性结合并阻断其基因表达的人工合成的DNA分子.本文通过对呼吸道病毒特异性反义寡核苷酸的作用位点、序列设计、生物利用度(化学修饰、载体运用等)的讨论为抗呼吸道病毒新型药物的研究提供一条新途径.
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EB病毒相关胃癌研究进展
世界范围内约10%的胃癌组织中可检测到EBV,研究显示:EBV感染能使原代培养的正常胃上皮细胞永生化,EBV相关胃癌是由一个EBV感染的细胞单克隆增殖形成,提示EBV感染在EBV相关胃癌的发展中起重要作用.本文就EBV相关胃癌的诊断、病毒存在形式和基因表达、影响其发生发展的协同因素以及EBV对上皮细胞的生长促进作用作一综述.
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RNAi的作用机制与抗病毒效应的研究进展
RNAi广泛存在于各种生物体,是参与细胞防御与分化调控的机制之一.RNAi的作用由dsRNA启动,通过在转录水平、转录后水平、翻译水平等多个水平上,对同源基因表达的特异阻断和抑制来实现的.RNAi技术具有高效、特异、易构等特点,为病毒感染性疾病的预防和治疗开辟了一条崭新的途经.本文就RNAi的作用机制及其抗病毒效应作一综述.
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影响人乳头瘤病毒相关细胞系增殖的因素
人乳头瘤病毒的基因表达与KC的增殖分化相互影响.近二十年来人们在如何体外重复两者之间的关系方面做了大量工作,但由于体外培养人乳头瘤病毒非常困难,因此有关实验多是采用体外培养的人乳头瘤病毒相关肿瘤细胞系作为研究对象.本文的内容包括(1)HPV相关细胞系体外培养的方法;(2)有关影响人乳头瘤病毒相关细胞系增殖的细胞因子和药物,及其作用机理.
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乙型肝炎病毒转基因小鼠
乙型肝炎病毒转基因小鼠对研究HBV基因结构和功能,基因表达的调控,HBV的复制和致肝细胞病变的关系,HBV感染和宿主免疫系统的应答以及HBV感染与肝细胞癌之间的相互关系等,都有极为重要的意义.本文对HBV转基因小鼠及其在研究HBV中的应用进用综述.
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镉致肾脏损伤的研究概况
镉普遍存在于自然界,损害人体的多个系统.肾脏是对镉毒性敏感也是容易受损的器官.镉的毒性与细胞脂质过氧化密切相关.本文从镉诱导氧化损伤、氧化损伤与细胞凋亡、镉肾毒性的预防等方面对镉致肾损伤作用作一.
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153胚胎干细胞实验方法及其在发育毒性研究中的意义
胚胎干细胞是一种存在于着床前早期胚胎中具有发育全能性的细胞,可在体外培养、传代并保持其全能性.在一定条件下,胚胎干细胞可发育成各种细胞,包括心肌细胞.胚胎干细胞试验就是利用胚胎干细胞在体外分化成心肌细胞的能力来检测受试物的胚胎毒性、致畸性,并对其进行评价.本文介绍了目前已建立的胚胎干细胞试验的主要实验方法及应用情况.
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038 n-3多不饱和脂肪酸与代谢综合征的研究进展
代谢综合征是一组严重影响人类健康的症候群,与2型糖尿病、冠心病和其他动脉粥样硬化性血管病密切相关.n-3多不饱和脂肪酸由于其独特的生理和生化作用,能够改善代谢综合征的多种代谢异常情况,从而改善和提高人们的生活质量.
关键词: 代谢综合征 n-3多不饱和脂肪酸 基因表达 -
宫内苯并(a)芘暴露对胎儿癌症相关基因表达的影响
目的 初步探讨宫内苯并(a)芘(BaP)暴露对胎儿癌症相关基因表达的影响.方法 用高效液相色谱法检测20份新生儿脐带血血清中BaP的浓度,并按照BaP浓度将样本分成不同暴露组,用实时荧光定量PCR检测脐带血RPL27A(ribosomal protein L27a)、NUDT2 (Nudix (nucleoside diphosphate linked moiety X)-type motif 2)和E2F1(E2F transcription factor 1)基因的表达,分析不同BaP暴露水平与癌症相关基因表达的关系.结果 20份脐带血血清BaP平均浓度为0.38±0.31 μg/L.按照血清BaP浓度,将20份样本分成5个不同水平的暴露组.随着BaP暴露水平的增高,RPL27A和NUDT2呈现表达上调的趋势,而E2F1呈现表达下调的趋势.结论 宫内BaP暴露可引起胎儿癌症相关基因表达的改变.
关键词: 苯并(a)芘 基因表达 宫内暴露 脐带血 Real-time PCR -
铬(Ⅵ)的基因毒性作用
三价铬[Cr(Ⅲ)]是人体必需微量元素,在糖代谢和脂代谢中发挥重要作用.六价铬[Cr(Ⅵ)]毒性较大,对人类有致畸、致癌作用.铬对人类的毒性主要表现在基因毒性方面.Cr(Ⅵ)的基因毒性研究主要包括铬及其代谢产物导致DNA的损伤、基因表达和生存信号的变化、肿瘤的形成及致畸作用.
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分子营养学(中)
(接上期)2.3几种营养素对基因表达的调控2.3.1碳水化合物对基因表达的调控碳水化合物对许多基因的表达有调控作用,主要表现在碳水化合物在胃肠道被消化成葡萄糖并吸收入血以后,葡萄糖能够刺激脂肪组织、肝脏和胰岛β细胞中脂肪合成酶系和糖酵解酶基因的转录.下面以葡萄糖对肝细胞中L-丙酮酸激酶(L-pyruvate kinase,L-PK)基因和S14基因的表达调控为例,介绍碳水化合物对基因表达的调控机制及意义.
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饱和氢气生理盐水对大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的影响
目的 研究饱和氢气生理盐水对大鼠心肌缺血再灌注模型梗死质量百分比、血流动力学变化及血清肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响.方法 90只大鼠随机分为3组:G1组,假手术组(n=30);G2组,缺血再灌注(I/R)组(n=30);G3组,缺血再灌注用饱和氢气生理盐水处理组(n=30).结扎大鼠冠状动脉前降支(LAD) 30 min,松扎再灌注24 h,制备心肌缺血再灌注损伤模型,再灌注24 h后测量心肌梗死质量百分比、血流动力学及TNF-α的基因表达情况.结果 与G1组相比,再灌注24h后G2、G3组左心室收缩压(LVSP)、等容收缩期左心室压力上升的大速率[+(dp/dt) max]、等容舒张期左心室压力下降的大速率[-(dp/dt) max]显著下降(P<0.01),左心室舒张末压(LVEDP)显著增加(P<0.01),TNF-α表达明显上调(P<0.01).与G2组相比,再灌注24 h后G3组心肌梗死质量百分比明显减小(P<0.01),LVSP、+(dp/dt) max、-(dp/dt) max显著增加(P<0.01),LVEDP显著下降(P<0.01),TNF-α表达明显下调(P<0.01).结论 饱和氢气生理盐水能有效减小梗死质量百分比,改善血流动力学参数,其机制可能与其降低炎性反应相关.
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肌氨肽苷注射液临床疗效综述
肌氨肽苷是由动物心脏和肌肉为原料提取的含有多种血管活性物质的药物,其主要成份为降钙素基因相关肽(CGRP)和心房肽(ANP)、腺苷等.CGRP是由降钙素基因表达和产生的一种37个氨基酸组成的生物活性多肽,具有强大的扩张血管作用.其扩张冠状动脉的能力是硝酸甘油的240倍.肌氨肽苷注射液能够改善冠心病心绞痛患者的左室舒张功能,此作用与CGRP强大的扩张冠状动脉、增加冠脉血流作用有关.
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天然药物多聚糖类抗肿瘤研究进展
天然药物中多聚糖作为具有多种生物活性的一类天然大分子化合物药理作用广泛,其抗肿瘤作用已得到各界肯定.本文通过植物多糖影响肿瘤细胞基因表达,直接抑制肿瘤细胞信号转导,诱导细胞凋亡、分化,破坏细胞结构、改变肿瘤细胞膜特性,抗氧化、清除自由基,增强免疫功能等方面对其作用机理进行综述.
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小剂量米非司酮对分泌中期人子宫内膜HOXA11基因表达的影响
通过口服米非司酮(RU486)改变子宫内膜的发育进程,观察内膜HOXA11基因表达量的变化,以及与孕酮受体(PR)和白血病抑制因子(LIF)表达的相互关系。13例月经周期正常志愿者观察两个周期。于对照周期的分泌中期取内膜。实验周期排卵前或后一次性口服RU486 10 mg,分泌中期取内膜,用原位杂交和免疫组织化学方法检测HOXA11、PR及LIF的表达。结果:对照周期内膜腺上皮HOXA11和PR呈阴性或弱阳性表达。服药后,腺上皮HOXA11和PR表达强度大多增加,而LIF的表达强度大多下降;基质细胞的表达量变化无明显规律。提示HOXA11基因的表达与孕激素及其受体密切相关;分泌中期腺上皮HOXA11和PR表达下降或消失是内膜分化成熟的重要标志;也是LIF分泌达高峰的前提。
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妊娠早期小鼠子宫内膜原癌基因H-ras的表达
目的:本实验检测原癌基因H-ras的转录和翻译水平在妊娠早期小鼠子宫内膜的表达规律.方法:采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫转移印迹(Western-blot)和免疫斑点印迹(Dot-blot)法.结果:原癌基因H-ras在妊娠早期小鼠子宫内膜的表达呈现两个峰值,分别为妊娠的第1和第6、7天.结论:提示原癌基因H-ras参与了胚泡着床过程及胚胎的早期增殖与分化过程.
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妊娠与未妊娠患者超排卵周期第10天子宫内膜基因表达差异分析
目的 对内膜修整后所取得的内膜组织按妊娠结果的不同分组进行分子水平的分析和检测,寻找合适的内膜发育分子标志物,早期预测辅助生殖技术(ART)患者的妊娠结果. 方法随机选择10例接受增殖期子宫内膜修整术患者,其B超及组织学检查结果表明内膜处于相同发育阶段,按妊娠结果分为妊娠组与未妊娠组,抽提每例的子宫内膜组织总RNA,4例妊娠患者和3例未妊娠患者的内膜组织RNA符合芯片检测要求,使用Affymetrix U133 plus 2.0基因芯片进行表达谱分析.结果 妊娠组与未妊娠组子宫内膜组织具有218个差异表达基因(≥2倍),其中177个基因在未妊娠组高表达,41个基因在妊娠组高表达.差异基因主要涉及代谢、细胞通讯和胞内过程调控等生物学过程,参与离子结合、信号传导和物质转运等重要功能.结论 妊娠组与未妊娠组的增殖期子宫内膜细胞表达在转录组水平上差异明显,某些重要差异表达基因(LAMA4、integrin α 6和MMP1)有可能成为便利的早期预测ART患者妊娠结果的分子标志物.
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完全性葡萄胎绒毛凋亡与基因表达的相关研究
目的:探讨完全性葡萄胎绒毛凋亡、增殖活性与Bcl-2、Bax、Fas、Fas-L及增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达的相关性.方法:收集正常早孕绒毛标本及近一年归档的完全性葡萄胎绒毛蜡块,原位末端标记法(TUNEL)进行细胞凋亡的组织学检测,免疫组织化学法测定Bcl-2、Bax、Fas、Fas-L、PCNA的分布与含量,原位杂交法测定Fas、Fas-L mRNA的分布与含量.结果:正常早孕绒毛有少量凋亡细胞,主要分布于合体滋养细胞,Bcl-2、PCNA蛋白仅在细胞滋养细胞表达且含量丰富,Bax、Fas、Fas-L蛋白在合体滋养细胞表达且含量低下.完全性葡萄胎绒毛合体滋养细胞凋亡较正常早孕明显增多,Fas、Fas-L蛋白及其mRNA不仅在合体滋养细胞而且在细胞滋养细胞表达均明显增强,Bcl-2、Bax蛋白在两种细胞中表达也增强;PCNA蛋白仅见于细胞滋养细胞,含量丰富.结论:完全性葡萄胎绒毛凋亡细胞增多,主要经Fas/Fas-L转录与翻译水平介导,表现为高凋亡与高增殖共存现象,可能与其无控生长的特性相关.