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  • 利用慢病毒表达的RPS19-shRNA在HEL细胞中构建不依赖p53通路的DBA细胞模型

    作者:林艳;杨洋;王晓婷;段永娟;王文天;胡晓

    目的 约25%的先天性纯红细胞再生障碍性贫血(Diamond-Blackfan anemia,DBA)病人携带核糖体蛋白基因RPS19突变,RPS19对红系分化的分子调控机制尚不明晰.本研究采用RPS19-shRNA慢病毒构建RPS19表达敲降的HEL细胞株作为新的DBA细胞模型.实验结果表明:构建的HEL细胞株在细胞凋亡及红细胞分化基因表达方面的表型和已报道的DBA细胞和动物模型类似.结论:由于HEL细胞中TP53基因突变失活,因此构建的RPS19-shRNA HEL细胞株可作为新的的细胞模型,用于探索RPS19基因不依赖于p53通路的红细胞特异的分子调控机制.

  • 细胞衰老相关基因的研究进展

    作者:曲丹;蔡东联

    衰老是自然界一种复杂的、不同器官和系统呈现一系列特定变化的生命现象,是生命运动的自然过程,其机制很复杂.细胞衰老与个体衰老及细胞癌变等重要生理、病理现象密切相关.本文将对参与、影响和调控细胞衰老过程的重要基因,如MORF4、p21、p16和p53等近年来的研究进展作一综述.

    关键词: 衰老 基因 MORF4 P53 p21 p16
  • 饮水消毒副产物二氯乙腈对HepG2细胞周期的影响

    作者:罗皓;杜进林;唐焕文;翟璐;程小广;杨慧;陈佳佳

    目的 研究p53基因和chk1基因在饮水消毒副产物二氯乙腈(dichloroacetonitrile,DCAN)对HepG2细胞周期阻滞过程中的影响.方法 以二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理人肝癌细胞(HepG2细胞)为对照组,分别以低、高浓度(50、400 μmol/L)DCAN染毒HepG2细胞24 h.采用碘化丙啶(PI)标记的流式细胞技术检测细胞周期分布情况,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测p53基因和chkl基因mRNA表达的改变.结果 与对照组比较,400 μmol/L处理组G1期细胞比例明显减少,G2期细胞比例明显增加,差异均有统计学意义(P <0.05);400 μmol/L DCAN作用于HepG2细胞后下调了p53的表达,差异有统计学意义(P<0.05),而对chk1的表达没有影响.结论 高浓度的DCAN能明显延长HepG2细胞的G2期,并可抑制p53的mRNA表达水平,但对chk1的mRNA表达水平无影响.

  • 二氯乙腈对HepG2细胞凋亡的影响

    作者:翟璐;罗皓;叶美洁;李永崇;黄嘉华;丁梦珂;刘振龙;杨慧;唐焕文

    目的 探讨饮水消毒副产物二氯乙腈(dichloroacetonitrile,DCAN)对HepG2细胞凋亡的影响及相关调控机制.方法 二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理人肝癌细胞(HepG2细胞)为对照组,分别以50 μmol/L、100 μmol/L、200μmol/L、400μmol/L DCAN染毒HepG2细胞为处理组,培养24 h后通过AnnexinV/PI流式细胞分析法检测细胞凋亡情况,用荧光测定法观察Caspase 3酶活性,蛋白质印迹法(West-ern blotting)技术检测HepG2细胞pro-caspase 3和P53蛋白的表达情况.结果 与对照组相比,400 μmol/LDCAN处理组可诱导HepG2细胞凋亡(P<0.05),各处理组细胞内Caspase 3酶活性随着染毒剂量的增加而显著升高(P<0.05).DCAN作用于HepG2细胞后pro-Caspase 3和P53蛋白含量呈下降趋势,当染毒浓度达到200 μmol/L以上时,pro-Caspase 3和P53蛋白表达明显低于对照组(P<0.05).结论 高浓度的DCAN可通过激活Caspase 3诱导HepG2细胞凋亡.

  • 对曲古抑菌素A敏感的人肺腺癌细胞株的初步筛选

    作者:张东;刘长庭;于晓妉;刘岩

    目的 初步筛选不同p53表达型肺癌细胞株对曲古抑菌素A(TSA)敏感性不同的影响因素.方法 分别以体外药物敏感试验(MTT法)、流式细胞术观察TSA处理3种肺癌细胞株(H1299为p53缺失型,H322为p53变异型,A549为p53野生型)后, 其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化;用Western blot 法检测3种细胞的人类表皮生长因子受体2(HER2)表达水平.结果 TSA对3种细胞均有抑制作用,在96 h时对A549的IC50抑制作用明显低于对H1299和H322的IC50(P<0.05),A549细胞凋亡也明显多于H1299和H322的细胞凋亡(P<0.05).3种细胞株HER2蛋白表达水平由高到低依次为H322、A549和H1299,与TSA的IC50值之间无相关性.结论 TSA对p53不同表达型人肺腺癌细胞株均有生长抑制作用,肺腺癌细胞株p53的不同表达型可能对TSA的敏感性产生影响,而HER2的表达强度不影响TSA的敏感性.

  • ERCC1,p53和bcl-2表达与晚期非小细胞肺癌 铂类化疗疗效的关系

    作者:郑瑞锋;罗俊波;王彦威;文海英;申培红

    目的 研究核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1),抑癌基因p53(p53)和B细胞淋巴瘤因子2(bcl-2)基因的表达水平与晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者铂类化疗疗效的关系.方法 收集晚期NSCLC患者的肿瘤组织并制备组织芯片,进行ERCC1,p53和bcl-2基因的免疫组织化学染色,检测其在NSCLC组织中的表达情况;同时采集患者外周血检测其血清中ERCC1,p53和bcl-2蛋白的表达情况.根据RECIST肿瘤化疗疗效的评价标准评价患者的疗效,分析影响NSCLC患者铂类化疗疗效的因素及3种基因的表达情况和疗效的关系.结果 ERCC1阴性表达和阳性表达时的化疗有效率分别为55.81%和25.58%(P<0.01);bcl-2阴性表达和阳性表达时的化疗有效率分别为45.28%和25%(P<0.05);p53阴性表达和阳性表达时的化疗有效率分别为53.85%和29.79%(P<0.05).以ERCC1阴性,同时bcl-2阴性和p53阳性表达的患者人数为多,与其他各组相比差异有统计学意义(P<0.05),而其他各组人数差异无统计学意义(P>0.05);以ERCC1阴性表达同时bcl-2阳性表达和p53阴性表达的患者采用铂类化疗的有效率为高,与其他情况相比差异有统计学意义(P<0.05);而ERCC1,bcl-2和p53基因均为阳性表达时的化疗有效率差,与其他情况相比差异有统计学意义(P<0.01).结论 ERCC1,p53和bcl-2基因的表达水平可以作为预测NSCLC患者铂类化疗疗效和预后的指标.

  • HER-2、P53在乳腺癌中的表达及预后意义

    作者:黄建伟

    目的:分析乳腺癌疾病患者中HER-2、P53的表达及患者预后的关系。方法:抽取我院乳腺癌疾病患者36例作为研究对象,检测HER-2、P53在乳腺癌组织中的表达情况,对其临床病理特征进行分析。结果:P53蛋白数据显示为阳性概率约为41.67%(15/36),HER-2阳性概率约为30.56%(11/36),其阳性率与乳腺癌分级及预后有明显关系(P<0.05)结论:乳腺癌疾病出现因素和HER-2、P53存在直接联系,而HER-2和p53这两者是对该疾病患者进行判断的主要指标。

    关键词: 乳腺癌 HER-2 P53 预后
  • 多药耐药基因在胃癌组织表达的特点及其与P53基因表达相关性分析

    作者:卞国春;孙华新;董晓强;邓玉江;苏群学

    目的:分析多药耐药蛋白P-gp、MRP、GST-π、Topo-Ⅱ在胃癌组织表达的特点,探讨P53基因突变和MDR基因激活之间相互诱导、调控和协同作用关系及其可能机制.方法:应用免疫组化检测我院50例胃癌组织中多药耐药蛋白P-gP、MRP、GST-π、Topo-Ⅱ和突变型P53蛋白的表达,SPSS16.0统计软件分析胃癌中P-gp、MRP、GST-π、Topo-Ⅱ阳性表达情况及其与突变型P53蛋白阳性表达的关系.结果:胃癌组织中P-gp、MRP、GST-π、Topo-Ⅱ和P53蛋白的表达率分别为58%(29/50)、40%(20/50)、86%(43/50)、68%(34/50)、44%(22/50).P-gp与胃癌组织TNM分期(P<0.01)和淋巴结转移(P<0.02)相关,而与分化程度无相关性(P>0.05);MRP与胃癌分化程度、TNM分期和淋巴结转移均无相关性(P>0.05);GST-π与胃癌分化程度和淋巴结转移均相关(P<0.01),与TNM分期无关(P>0.05);Topo-Ⅱ与胃癌淋巴结转移有相关性(P<0.05),与分化程度和删分期无关(P>0.05);P53与胃癌分化程度、TNM分期和淋巴结转移均无相关性(P>0.05);P-gp、Topo-Ⅱ与P53表达存在显著相关性(P<0.01).结论:(1)P-gp、GST-π、Topo-Ⅱ均与胃癌淋巴结转移有相关性,淋巴结转移的胃癌中P-gp、GST-π表达率较高,而Topo-Ⅱ表达降低,提示伴有淋巴结转移的胃癌化疗容易耐药,预后较差;(2)P-gp与胃癌TNM分期和淋巴结转移有关,伴有淋巴结转移的晚期胃癌P-gp表达增高,提示淋巴结转移和较晚分期是影响胃癌化疗效果和预后的重要因素;(3)胃癌中P-gp、Topo-Ⅱ与P53蛋白表达具有正相关性,提示胃癌中P53基因突变与多个MDR基因激活有协同作用.

  • 根除幽门螺杆菌前后肠化生GST-π和p53表达的变化及意义

    作者:王旭光;张忠;吴璠

    目的:检测根除幽门螺杆菌前后肠化生(IM)GST-π和p53表达的变化,探讨二者在IM发生发展中的作用.材料和方法:本研究采用免疫组化染色检测30例正常胃黏膜、182例IM胃黏膜和32例胃癌组织GST-π和p53蛋白表达状况;采用HE染色和ELISA方法判断H.pylori感染.结果:GST-π表达阳性率在H.pylori阳性IM组(55.8%)显著高于正常胃黏膜(0.0%)和胃癌组(43.8%,各组间P<0.01),显著低于H.pylori阴性IM组(79.2%,P<0.01).p53蛋白表达阳性率在H.pylori阳性IM组(44.2%)显著高于正常胃黏膜(0.0%)和H.pylori阴性者(9.4%),显著低于胃癌(75.0%,各组间P<0.01).经H.pylori根除治疗后,H.pylori阳性IMGST-π表达阳性率升高(80.0%,P<0.05),p53蛋白表达阳性降低(17.8%,P<0.01).结论:H.pylori相关性IM阶段GST-π的低表达和突变型p53基因的高表达,在其发生发展中起着分别或协同作用,具体机制有待深入研究证实.GST-π的低表达和(或)p53基因高表达的H.pylori相关性IM患者与胃癌关系密切,如进行H.pylori根除治疗,对于降低胃癌发生率具有重要意义.

  • 乳腺癌中C-erbB-2、P53和nm23蛋白的表达及临床意义

    作者:袁慧敏

    目的 探讨C-erbB-2、P53和nm23蛋白在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌预后的关系.方法 收集女性乳腺癌手术标本70例,采用HE切片光镜观察和免疫组化标记分析C-erbB-2、P53和nm23蛋白在乳腺癌中的表达及其意义.结果 在70例乳腺癌中C-erbB-2及P53阳性率有随乳腺癌分级升高而上升的趋势,差异有显著性意义(P<0.05),而nm23蛋白则相反;且P53在淋巴结转移者阳性率高,在无淋巴结转移者阳性率低,两者有显著性差异(P<0.01),而nm23蛋白则与之相反.结论 C-erbB-2与P53为判断乳腺癌预后不良的重要参考指标,而nm23蛋白为乳腺癌预后好的一个重要参考指标.

  • 早期自然流产蜕膜组织细胞凋亡与热休克蛋白70、P53的表达

    作者:郭燕;王玉贤

    目的 观察早期自然流产蜕膜组织细胞凋亡情况及与热休克蛋白70(HSP70)、P53表达的关系.方法 采集20例正常早孕人工流产和20例早期自然流产的蜕膜组织,应用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测蜕膜组织细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测蜕膜组织中热休克蛋白70、P53的表达.结果 (1)早期自然流产组蜕膜与正常早孕蜕膜组织相比,凋亡显著增加(P<0.01);(2)蜕膜组织中HSP70、P53表达,自然流产组与正常早孕组相比显著增强(P<0.01).结论 蜕膜组织凋亡过度可能为自然流产发生机制之一,蜕膜细胞凋亡的增多与P53表达上调具有一致性;HSP70不能抑制蜕膜细胞凋亡,可能对蜕膜细胞有保护作用.

  • 前列腺癌组织中p53、bcl-2和E-cadherin蛋白的表达水平及临床意义

    作者:韩丽媛;王伟;王慧萍;陈东

    目的 探讨不同前列腺组织中p53、bcl-2和E-cadherin蛋白的表达水平及临床意义. 方法 收集活检或手术切除的人前列腺组织标本,按病理诊断分为前列腺癌组46例、前列腺增生组25例;其中前列腺癌组又分为高分化组(11例)、中分化组(13例)、低分化组(22例).应用免疫组织化学SP法检测上述标本中p53、bcl-2和E-cadherin蛋白的表达情况.结果 前列腺癌组织中p53和bcl-2的阳性表达率(50.0%和58.7%)显著高于前列腺增生组织的p53和bcl-2的阳性表达率(12.0%和8.0%),差异具有统计学意义(P<0.05).bcl-2在前列腺癌高分化组的阳性表达率(36.4%)显著低于低分化组(72.7%)(P<0.05).前列腺增生组织中E-cadherin蛋白表达阳性表达率为100.0%,前列腺癌组织中阳性表达率为43.5%,两组E-cadherin蛋白表达阳性率相比较,差异具有统计学意义(P<0.05).E-cadherin蛋白在前列腺癌高、中、低分化3组中的阳性表达率分别为90.9%、46.2%、18.2%,高分化组阳性表达率显著高于低分化组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 p53、bcl-2和E-cadherin蛋白的异常表达与前列腺癌的发生发展密切相关,检测p53、bcl-2和E-cadherin蛋白表达水平对前列腺癌鉴别诊断及临床预后具有重要价值.

  • P53、p21WAF1/CIP1蛋白在宫颈鳞癌中的表达

    作者:高坚欣;高坚蓉

    P53野生型蛋白质分子具有抑制肿瘤细胞的作用,但其突变型的等位基因却具有癌基因的作用特点,可使体外培养的细胞发生恶变[1].近年来P53与肿瘤的发生机制研究较多,认为P53通过两种途径:一是下调p21WAF1/CIP1,一是非p21依赖型.本研究探讨P53、p21WAF1/CIP1表达与宫颈鳞癌的组织学分级及相关性.

  • 亚硫酸钠对人胚肾293细胞的毒性作用与胞内蛋白水平变化的关系

    作者:白剑英;雷佩玉;邢锦;王静

    目的 研究食品添加剂亚硫酸钠(Na_2SO_3)对人胚肾293细胞(HEK293)的毒性作用与胞内重要蛋白质p53、增殖细胞核抗原(PCNA)和三磷酸腺苷(ATP)结合转运子G_2(ABCG_2)含量改变之间的关系.方法 采用细胞毒性试验(MTS)法观察Na_2SO_3对HEK293细胞的毒性作用,用蛋白印记法检测HEK293细胞中p53、PCNA和ABCG_2蛋白水平.结果 0.625~10 mmol/L NaSO_3处理组的细胞活性与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),说明NaSO_3对HEK293细胞有明显的毒性作用;蛋白印记分析发现高剂量组10 mmol/L Na_2SO_3可同时降低细胞内p53、PCNA和ABCG_2蛋白水平,而其余剂量组0.039~2.5 mmol/L Na_2SO_3对HEK293细胞内p53、PCNA和ABCG_2蛋白的水平无明显影响.结论 在本试验条件下,当Na_2SO_3的接触浓度达到一定水平时对人胚肾293细胞具有明显的毒性作用,这种毒性作用很可能与其降低肾细胞内的蛋白水平,干扰肾细胞的正常功能相关.

  • 细胞衰老过程中P53表观遗传学修饰

    作者:张文娟;纪卫东;杨淋清;杨建平;许玉玲;徐薇;庄志雄

    目的 检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中及过氧化氢诱导细胞早衰阶段P53的表观遗传学修饰.方法 荧光定量采用聚合酶链式反应法(PCR)检测P53的mRNA表达,甲基化特异PCR检测启动子区甲基化改变情况,染色质免疫沉淀结合定量PCR检测其组蛋白修饰,包括组蛋白H3,H4乙酰化和H3(Lys4)及H4(Lys20)甲基化修饰.结果 细胞复制性衰老过程中,P53的mRNA表达在中年细胞组显著升高,复制性衰老细胞组也升高,早衰组无明显改变;细胞复制性衰老过程中,其启动子区-820 bp~-656 bp甲基化水平随增龄而降低,早衰组降低明显;复制性衰老细胞组及早衰组的组蛋白修饰在启动子区-889 bp~-676 bp以组蛋白H3(Lys4)甲基化修饰为主;-199 bp~-30 bp的修饰,复制性衰老细胞组以组蛋白H3,H4乙酰化修饰为主,早衰组以H4乙酰化,H3K4甲基化修饰为主.结论 细胞衰老过程中,P53启动子区组蛋白修饰参与其mRNA表达调控,复制性衰老与早衰存在调控机制的差异.

  • 纳米二氧化硅对HaCaT细胞中p53基因表达及其启动子甲基化的影响

    作者:龚春梅;杨淋清;周继昌;朱玉梅;莫俊銮;徐远飞;刘小立;庄志雄

    目的 研究纳米二氧化硅(nm-SiO2)对人皮肤表皮细胞(HaCaT)中p53基因的表达及基因启动子区甲基化的影响.方法 分别以2.5、5、10 μg/ml的nm-SiO2溶液和10 μg/ml的微米级SiO2(micro-SiO2)处理HaCaT 24 h;以3μmol/L DNA甲基化转移酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷(DAC)处理48 h的10 tμg/ml nm-SiO2组为阳性对照,并设立溶剂对照组.应用荧光定量PCR检测p53基因mRNA水平的表达,Western-blot法检测其蛋白水平的变化,应用甲基化特异性PCR(MSP)检测p53基因启动子区CpG岛的甲基化状态.结果 nm-SiO2作用24 h后,HaCaT细胞中p53基因表达呈上调趋势并且p53启动子区未检测出甲基化状态.结论 nm-SiO2暴露可以上调HaCaT细胞中p53基因的表达,尚未发现这种上调与p53基因启动子区CpG岛的甲基化水平改变有关.

  • BCL-2与P53在腭发育及腭裂形成中的作用

    作者:王浩宇;安峰;吴靖芳;张耕;任君旭

    目的 探讨BCL-2和P53在地塞米松诱导胎鼠腭裂形成中的表达及意义.方法 以腹腔注射醋酸地塞米松诱导胎鼠腭裂畸形,应用免疫组织化学法和图像分析研究BCL-2和P53在不同时期实验组与对照组中腭突间充质(EPM)细胞的表达情况.结果 1.对照组中BCL-2表达随着腭部发育而逐渐降低;P53表达在妊娠(gestation day,GD)13.5~15.5 d中随时间变化降低,而在GD16.5增高;2.实验组中BCL-2表达GD13.5~15.5降低,GD16.5中增高;P53表达GD14.5中高,GD15.5中低;3.与对照组比较,实验组GD14.5~15.5中BCL-2表达明显降低(P<0.05),而P53表达明显增高(P<0.01);GD16.5中BCL-2表达明显高于对照组(P<0.01),而P53表达明显低于对照组(P<0.05).结论 地塞米松诱导的腭裂与EPM细胞凋亡水平升高有关.

  • 杂色曲霉素致人胚肺细胞p53及Ki-ras基因突变研究

    作者:曹文军;王会艳;张祥宏;孙旭明;谢同欣;严霞;王俊灵;王凤荣

    为探讨中国恶性肿瘤高发区粮食中优势污染霉菌毒素-杂色曲霉素(Sterigmatocystin,ST)的致癌作用,运用银染PCR-SSCP方法分析了不同浓度的ST(1μg/ml和3μg/ml)对体外培养的人胚肺细胞恶性转化过程中抑癌基因p53第5、6、7、8外显子及癌基因Ki-ras的突变情况.结果显示ST处理后第22周,人胚肺成纤维细胞p53基因的第8外显子和Ki-ras癌基因均出现异常泳动带型,表明ST诱发了抑癌基因p53及癌基因Ki-ras突变,进一步证实了ST对人肺组织的致癌作用.

  • 氟致人胎肝细胞DNA损伤及其对细胞凋亡和p53蛋白表达的影响

    作者:哈建利;褚启龙;王爱国;夏涛;杨克敌

    目的研究氟对L-02细胞DNA的损伤作用及其对细胞凋亡和p53表达的影响,并探讨p53表达与细胞凋亡之间的关系.方法体外培养的L-02细胞分别接触0、40、80、160μg/ml氟化钠(对照组、A、B、C组)24h后,检测L-02细胞DNA损伤率、细胞凋亡百分率和p53蛋白表达水平.结果染氟各组细胞DNA损伤率均明显高于对照组(P<0.05).与对照组相比,B组和C组细胞凋亡百分率明显升高(P<0.05).B组和C组细胞p53蛋白表达量均显著高于对照组(P<0.01).结论氟可导致L-02细胞DNA损伤率上升,诱导细胞凋亡和p53表达,并且随着氟浓度的升高,细胞凋亡率和p53蛋白的表达量均随之升高.

    关键词: DNA损伤 细胞凋亡 P53
  • 植酸对人胃癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用的研究

    作者:王路;程翠琳;赵海田;杨志平;魏红联;崔洪斌

    目的 了解植酸对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制和诱导凋亡作用.方法 MTT法检测植酸在体外对人胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用;AO/EB荧光染色和DNA Ladder实验检测细胞凋亡;免疫组化法检测凋亡调控基因P53蛋白的表达.结果 植酸在体外可以明显抑制人胃癌细胞的生长,并诱导细胞发生凋亡.免疫组化实验结果表明,植酸可以抑制SGC-7901细胞中凋亡相关P53蛋白的表达.结论 植酸在体外可以抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,且对于P53蛋白表达的下调作用可能是其诱导细胞凋亡的机制之一.

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