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空斑试验在鼻病毒定量中的应用
目的 探讨空斑试验在鼻病毒定量过程中的应用.方法 Hela细胞单层在24孔板中融合达90％以上时,接种RV-1B,用琼脂作为半固体培养基孵育3-5 d后,甲醛固定、结晶紫染色,计算空斑.结果 利用Hela细胞进行空斑试验可以对RV-1B进行准确定量.结论 空斑试验为RV-1B定量提供一种相对有效方法,其中温度、PH、Mg2+等可能影响实验结果的因素不可忽视.
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紫杉醇脂质体联合卡铂对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响
目的 研究紫杉醇脂质体联合卡铂对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响.方法 用设定浓度的紫杉醇(0.5和1 μmol/L)单独或联合(0.5和25 mg/L)卡铂分别处理Hela细胞24 h.用MTT比色法检测细胞活力,荧光探针检测细胞内活性氧,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用Western blot检测凋亡蛋白p53、Bax和Bcl-2的表达量.结果 与空白对照组相比,紫杉醇、卡铂单独处理组可降低细胞活力,提高ROS含量,使p53和Bax蛋白表达升高,降低Bcl-2蛋白表达,使Hela细胞发生凋亡.且紫杉醇联合卡铂对Hela细胞的杀伤作用显著大于单独作用组.结论 本实验初步证明紫杉醇和卡铂均通过引起Hela细胞活性氧升高,诱导p53蛋白介导线粒体凋亡通路,导致Hela细胞凋亡的发生,还进一步证明紫杉醇联合卡铂对Hela细胞的杀伤作用显著大于二者单独作用.
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小鼠金属硫蛋白-I的表达对HeLa细胞耐药性的影响
HpSV2-neo质粒作为载体,在EcoRI酶切位点上插入小鼠金属硫蛋白(MT-I)基因,然后用DNA-磷酸钙介导的基因转移法将重组质粒转染HeLa细胞,经筛选得到表达MT-I的抗性细胞克隆.经检测,G418抗性细胞内有MT的特异性表达,表达量是未转染细胞的2.6倍.用不同浓度顺铂、阿霉素处理细胞,观察MT-I基因的表达与HeLa细胞耐药性的关系.结果表明:0.1μmol/ml顺铂作用细胞72h后,顺铂对转染和未转染MT细胞的生长抑制率分别为34%和82%(P<0.05);半数细胞生长抑制浓度(IC50)分别为0.144和0.061μmol/ml,二者相差2.36倍.用0.2μmol/ml阿霉素作用细胞72h后,对转染和未转染细胞的生长抑制率分别为18%和25%,差异无显著性(P>0.05).结果表明,MT与肿瘤细胞的耐药性有一定相关性.
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硒化合物在HepG2和Hela细胞中代谢生成硒蛋白的效应比较
目的 比较亚硒酸钠(Na2SeO3)、硒代蛋氨酸(SeMet)和甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)3种硒化合物在HepG2和Hela细胞中代谢生成硒蛋白P(SEPP)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的差异.方法 将培养好的细胞分为对照组、Na2SeO3组、SeMet组和MeSeCys组.加入0.01μmol/L和0.1μmol/L的硒化合物作用48 h和72 h,收集细胞培养上清液和裂解液.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法对上清中的SEPP和裂解液中的GPx进行定量检测.结果 与对照组比较,0.1 μmol/L SeMet和MeSeCys处理的Hela细胞生成的SEPP和GPx浓度显著升高(P＜0.05).与Hela细胞比较,0.1μmol/L 3种硒化合物处理的HepG2细胞生成的SEPP和GPx浓度均显著升高(P＜0.05).结论 硒化合物在肝癌细胞HepG2中代谢生成硒蛋白的效应比在宫颈癌细胞Hela中更明显.
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硒化合物对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移及粘附功能影响的研究
目的 探讨甲基硒酸(MeSeA)、硒代蛋氨酸(SeMet)和甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)对宫颈癌HeLa细胞的增殖、迁移及粘附功能的影响.方法 体外培养HeLa细胞,3μmol/L的MeSeA、SeMet和MeSeCys处理HeLa细胞12 ～ 72 h,分别采用MTT法、划痕实验和体外基质粘附实验检测HeLa细胞的增殖、迁移及粘附功能.结果 与对照细胞相比,MeSeA处理组HeLa细胞的增殖速度明显降低(P＜0.01).MeSeA处理组HeLa细胞在4h和8h的迁移抑制率分别为34％(P＜0.05)和26％(P＜0.05);SeMet处理组HeLa细胞在4h和8h的迁移抑制率分别为18％和13％;MeSeCys处理组HeLa细胞在4h和8h的迁移抑制率分别为28％ (P ＜0.05)和5％.MeSeA、SeMet和MeSeCys对HeLa细胞粘附功能的抑制率分别为36％(P＜0.01)、25％和49％ (P ＜0.01).结论 MeSeA可以更好地抑制HeLa细胞的增殖和迁移,而MeSeCys对HeLa细胞的粘附功能的抑制作用更强.
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甲基硒酸对HeLa细胞增殖和迁移功能影响的研究
目的 探讨甲基硒酸(MeSeA)对HeLa细胞增殖和迁移功能的影响.方法 体外培养HeLa细胞,采用不同浓度的MeSeA处理12 ～72 h,MTT和划痕实验检测HeLa细胞的增殖和迁移能力.结果 采用3μmol/L的MeSeA处理HeLa细胞,细胞的增殖和迁移速度明显降低(P＜ 0.01,P＜ 0.05).与对照组相比,MeSeA处理组的细胞增殖抑制率达40％,4h和8h的迁移抑制率分别为29％和26％.结论 MeSeA可以抑制宫颈癌细胞系HeLa细胞的增殖及迁移,表现出抗癌活性.
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天花粉蛋白诱导人宫颈癌HeLa细胞调亡的分子机制研究
目的:利用基因芯片技术研究天花粉蛋白对人宫颈癌Hela细胞基因表达谱的影响,以深入探讨其作用的分子机制.方法:提取药物处理前后HeLa细胞RNA并逆转录成cDNA,在获得的cDNA上分别标记CY3和CY5两种荧光物质,然后与BiostarH-I 表达谱芯片杂交,扫描后对获得的数据用GenePix Pro 3.0软件分析.结果:两组间存在差异性表达基因78条,其中与细胞黏附及细胞间相互作用相关的MGST3、LGALS3BP等16条基因表达下降,与细胞凋亡密切相关的NOP56、TNFSF10、CASP9、DFFB等62条基因表达上调.结论:基因芯片技术能高通量分析天花粉蛋白作用于HeLa细胞的相关靶基因,为进一步揭示天花粉蛋白的抗癌机制提供了新的思路.
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天花粉蛋白对宫颈癌HeLa细胞凋亡及Bax、Bcl-2基因表达的影响
目的:研究天花粉蛋白对人宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用并探讨其对凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响.方法:不同浓度天花粉蛋白分别处理Hela细胞24～72 h后,MTT法检测细胞的生长活性,显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞周期,Western Blot检测凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2的表达.结果:天花粉蛋白对HeLa细胞的生长具有抑制作用,显微镜下观察到细胞圆缩,染色体凝聚等凋亡细胞的形态学改变,流式细胞仪直方图上亦出现特征性的亚二倍体峰,随着天花粉蛋白浓度的增加,Bax基因的表达增加而Bcl-2的表达减少.结论:天花粉蛋白可诱导宫颈癌HeLa细胞发生凋亡,Bcl-2蛋白的减少与Bax蛋白表达增多可能是HeLa细胞凋亡的机制之一.
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反义寡聚核苷酸抗柯萨奇病毒感染的研究
目的 针对柯萨奇病毒-3型(CVB3)基因组重要功能区设计系列反义寡聚核苷酸序列,通过实验观察特异性反义核酸对病毒感染细胞的抑制作用.方法 通过病毒空斑形成试验及致细胞病变作用,了解反义核酸抑制及阻断CVB3病毒感染细胞的能力.结果 实验所设计的反义核酸中SCB1对感染HeLa细胞的CVB3病毒活性抑制作用较强,当病毒感染量为1 MOI时,病毒活性抑制率高达90%;SCB4和SCB2均为75%;SCB6有50%抑制作用;而SCB3和SCB5以及非特异性对照序列对CVB3病毒基因基本没有任何作用.结论 通过以上实验确定SCB1、SCB2、SCB4等较好的抗病毒反义核酸序列,为进一步研究反义核酸抗病毒作用提供了重要的实验基础.
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中药狼毒对人乳头瘤病毒-18感染的HeLa细胞增殖及凋亡的影响
目的：探讨中药狼毒对人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)-18感染的HeLa细胞增殖及凋亡的影响。方法配制狼毒乙醇浸出液。运用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖，并运用 Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡。结果以10、20μg/ml的狼毒乙醇浸出液处理HPV-18感染的HeLa细胞12 h后，细胞增殖抑制率增高[分别为(16.36±5.06)%、(18.59±5.99)%]，与对照组比较差异有统计学意义(P均＜0.01)。以0.625、1.25、2.5、5、10、20μg/ml的狼毒乙醇浸出液处理HPV-18感染的HeLa细胞72 h后，细胞增殖抑制率均增高[分别为(13.82±3.66)%、(30.24±6.58)%、(43.29±4.29)%、(53.32±1.41)%、(54.24±1.97)%、(50.68±1.74)%],与对照组比较差异有统计学意义(P均＜0.01)。Hoechst 33258染色显示，以10μg/ml的狼毒乙醇浸出液处理HPV-18感染的HeLa细胞24 h后，可见凋亡的细胞。结论中药狼毒可抑制HPV-18感染的HeLa细胞增殖，并诱导其凋亡。
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山茱萸多糖诱导宫颈癌细胞凋亡及Bax蛋白表达的变化
目的:探讨山茱萸多糖诱导人宫颈癌Hela细胞的凋亡作用及Bax蛋白表达的变化.方法:用12.5,25,50 g·L-1的山茱萸多糖作用Hela细胞24 h.倒置显微镜下观察细胞凋亡的形态,免疫组化SP法检测凋亡相关蛋白Bax表达的变化.结果:Hela细胞经3个不同浓度的山茱萸多糖作用后,出现典型的细胞凋亡的形态学变化,其程度与浓度相关；而且Bax蛋白的表达量随浓度升高而增加,免疫组化评分(IHS)分别为0.18,0.44,1.35.结论:山茱萸多糖能够促进Bax的表达,诱导Hela细胞凋亡.
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消癌舒及其含药血清对人宫颈癌Hela细胞体外增殖及迁移的影响
目的:观察消癌舒(XAS)及其含药血清对Hela细胞增殖和迁移的影响,并初步探讨其作用机制.方法:采用倒置显微镜观察Hela细胞形态;四唑盐(MTT)法检测Hela细胞的增殖能力;Transwell观察Hela细胞的迁移能力;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测Hela细胞糖类抗原125 (CA125)的水平;real time RT-PCR法检测Hela细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达.结果:经消癌舒处理后Hela细胞形态发生了改变,表现为细胞折光度下降,体积明显缩小,形状变圆,消癌舒及其含药血清均明显抑制Hela细胞的增殖,消癌舒减少Hela细胞穿过滤膜的个数,降低Hela细胞CA125水平及VEGFmRNA的表达,且与顺铂联用效果更佳.结论:消癌舒及其含药血清明显抑制Hela细胞的增殖及迁移能力,与顺铂联用作用更明显,其机制可能与降低CA125水平和VEGF mRNA的表达有关.
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雷公藤红素-薏苡仁油微乳的制备及其体外抗肿瘤活性评价
目的:制备雷公藤红素-薏苡仁油微乳(CC-MEs)并对其理化性质及体外抗肿瘤活性进行评价.方法:通过考察雷公藤红素在不同介质中的溶解度,筛选CC-MEs的佳油相、乳化剂及助乳化剂.采用水滴定法制备微乳,根据其粒径,多分散指数(PDI),Zeta电位,包封率和载药量筛选CC-MEs的佳处方,并对制备微乳的形态、稳定性和体外释放进行考察.通过四甲基偶氮唑盐法考察CC-MEs对宫颈癌HeLa细胞的毒性,评价其体外抗肿瘤活性.结果:CC-MEs佳处方为雷公藤红素10 mg,薏苡仁油既为药物又兼作油相(用量400 mg),聚氧乙烯氢化蓖麻油450 mg,聚乙二醇400 150 mg;制备的微乳外观形态圆整,平均粒径(31.63±0.63) nm,PDI 0.06±0.01,Zeta电位(-10.14±1.35)mV,48 h时雷公藤红素体外累积释放度(19.89±0.59)％,具有一定的缓释特性.CC-MEs对HeLa细胞具有较好的增殖抑制作用,其半数抑制浓度以薏苡仁油计为20.7 mg·L-1,以雷公藤红素计为0.82 μmol·L-1,联合用药指数0.93,表明两药联用具有协同作用.结论:CC-MEs粒径小且分布均匀、稳定性好、辅料用量少.雷公藤红素与薏苡仁油组分配伍制剂能够增强对HeLa细胞的增殖抑制作用,二者具有协同抗肿瘤功效.
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冬青素诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机制初步研究
目的:研究冬青素(IA)对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其相关机制.方法:建立人宫颈癌HeLa细胞体外培养体系,采用CCK-8法检测细胞活力,MTT法测定乳酸脱氢酶(LDH),免疫比色法检测细胞增殖情况,DAPI荧光染色观察细胞凋亡形态学变化,Western Blot检测Caspase-3/7和NF-κB蛋白表达水平.结果:用冬青素处理过的HeLa细胞,LDH释放增加,呈剂量和时间依赖性.在CCK-8和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)测定过程中,冬青素比标准药物抗HeLa活性更强,随浓度和作用时间的增加,细胞的活性不断下降,对HeLa增殖的抑制作用明显.DAPI染色观察用冬青素处理过的HeLa细胞浓缩明显,细胞核分散,染色质凝聚.Western Blot结果显示用冬青素处理过的HeLa细胞Caspase-3/7的活性显著增加(P＜0.01),NF-κB蛋白表达水平下降(P＜0.01).结论:冬青素具有诱导HeLa细胞凋亡的作用,其机制可能与激活Caspase-3/7和抑制NF-κB蛋白表达有关.
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用两种细胞评价中药白薇寒热药性
目的:通过本实验室前期建立的中药寒热药性细胞学评价方法评价中药白薇的寒热药性.方法:用噻唑蓝(MTT)比色法考察白薇对Hela细胞和SGC-7901细胞体外增殖的影响,倒置显微镜观察白薇对细胞形态特征的影响,台盼蓝染色法分析白薇的细胞毒作用.结果:白薇在所选浓度范围(5-800μg/mL)内对细胞增殖的影响皆表现为抑制.形态学观察表明白薇能使细胞密度减小,细胞固缩变圆,颗粒感增加.台盼蓝染色表明白薇对这两种细胞没有细胞毒作用.结论:研究结果表明白薇药性寒凉,且对所用细胞没有细胞毒作用.
关键词： 白薇 MTT法 Hela细胞 SGC-7901细胞 寒热药性 -
基于细胞学方法评价5种中药复方的寒热药性
目的:用细胞学方法评价左金丸、反左金丸、茱萸丸、甘露散、交泰丸等中药复方的寒热药性.方法:用噻唑蓝(MTT)比色法考察5种中药复方对HeLa细胞和SGC-7901细胞体外增殖的影响,倒置显微镜观察其对细胞形态特征的影响.结果:反左金丸、茱萸丸在所选质量浓度5-800μg/mL范围内对HeLa细胞和SGC-7901细胞的生长增殖表现出促进作用,表现为热性;左金丸、甘露散、交泰丸在所选质量浓度5-800μg/mL范围内对HeLa细胞和SGC-7901细胞的生长增殖表现出抑制作用,随着浓度的增大,抑制率逐渐增大,表现为寒性.形态学观察表明,左金丸、甘露散与交泰丸能使细胞密度减小,固缩变圆;反左金丸、茱萸丸可使细胞密度增加,结构致密,生长旺盛.台盼蓝染色表明,5种中药复方对这两种细胞没有细胞毒作用.结论:5种中药复方的寒热药性细胞学方法评价结果与文献记载一致,说明细胞学方法能够用于中药复方寒热药性的评价,为研究中药复方寒热药性提供了实验依据和方法学参考.
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云南琵琶甲提取物抑制HeLa细胞增殖和诱导凋亡的研究
目的:研究云南琵琶甲粗提物对人子宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用,并进一步探讨其提取物抑制肿瘤细胞增殖的机制.方法:用水提反复冻融法得到云南琵琶甲提取物,倒置显微镜观察、MTT法检测琵琶甲提取物对HeLa细胞的抑制作用,荧光染色观察、流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳法检测药物诱导细胞凋亡的作用.结果:云南琵琶甲粗提物对HeLa细胞有明显的增殖抑制作用,IC50为413μg/mL,荧光染色可见细胞皱缩,染色质凝集并边缘化,琼脂糖凝胶电泳可以看到梯状条带,流式细胞术发现S期细胞增多.结论:确定云南琵琶甲提取物可抑制HeLa细胞增殖,并初步推测云南琵琶甲粗提物能够诱导HeLa细胞凋亡.
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异亚丙基莽草酸抗炎作用机制研究
目的 观察异亚丙基莽草酸(ISA)对人宫颈癌Hela细胞转录因子STAT1、STAT3、NF-κB表达作用的影响,探讨其抗炎作用机制.方法 用MTT法体外检测ISA不同浓度对Hela细胞生长的抑制作用,采用双荧光素酶报告系统检测不同浓度药物对转录因子STAT1、STAT3、NF-κB表达活性的影响.结果 ISA对人宫颈癌Hela细胞的生长没有明显的抑制作用;ISA处理组NF-κ B-luc荧光素酶活性下降,而GAS-luc、STAT3-luc荧光素酶活性无明显改变.结论 ISA可能通过下调转录因子NF-κ B的活性,抑制炎症因子的表达,对炎症反应起到抑制作用.
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榄香烯乳对人宫颈癌Hela细胞转录因子ELK1及其靶基因的影响
目的 观察中药榄香烯乳对人宫颈癌Hela细胞转录因子ELKl及其靶基因的影响,以深入了解榄香烯乳的抗癌机制.方法 用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,双荧光素酶报告系统检测药物对转录因子ELKl的影响,Western Blot检测磷酸化ELK1及其靶基因c-fos表达.结果 榄香烯乳能明显抑制人宫颈癌Hela细胞的生长,其半数生长抑制剂量为80.6μg/mL;榄香烯乳处理组荧光素酶活性下降,磷酸化的ELK1及其靶基因c-fos的表达均下调.结论 榄香烯乳可能通过下调转录因子ELK1的磷酸化水平,抑制c-fos的表达,从而抑制人宫颈癌Hela细胞的生长.
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胡颓子有效部位化学成分研究
目的:研究胡颓子Elaeagnuspungens叶的具有抑制HeLa细胞增殖活性部位的化学成分.方法:采用硅胶柱色谱、凝胶色谱进行分离纯化,化学及波谱方法进行结构鉴定.结果:分离得到9个化合物,经理化及波谱数据分析鉴定为:对羟基苯甲酸(1),3,3'-二甲氧基槲皮素(2),咖啡酸甲酯(3),3,5-二羟基苯甲酸甲酯(4),spingicacid(5),对甲氧基苯甲酸(6),3-甲氧基山柰酚(7),山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(8),胡萝卜苷(9).结论:化合物1～8为首次从该植物中得到.
