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  • 济南市手足口病患者肠道病毒71型的分离与鉴定

    作者:赵元昊;李志会;李鹏;宋楠楠;岳盈盈;纪璇;孟红

    目的 从13例2008年、2009年济南市HFMD患者的粪便标本中分离获得EV71病毒并对其基因型进行鉴定.方法 按照中国疾病控制预防中心<手足口病标本采集及检测技术方案>的规定对标本中的病毒进行分离和鉴定,对VP1编码基因的部分核苷酸序列进行测序分析.结果 分离到6株EV71病毒,均与EV1 C4亚型处于同一进化树分支上,与C4亚型的核酸同源率均大于96%.结论 济南地区流行的EV71主要为C4亚型,与2008年中国流行的C4亚型EV71相比并未出现明显突变,引起重症的毒株与未引起重症的毒株相比,在VP1蛋白部分片段上没有发现明显的氨基酸差异.

  • O157大肠杆菌生物学特性及分离鉴定技术研究

    作者:顾玲;郭喜玲;李玉青;曾晓燕;史智扬;汪华

    目的研究肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157:H7和其他O157大肠杆菌(以下简称O157:非H7)的生物学特性,制定高效、实用的O157:H7分离程序及鉴定指标.方法生化试验和玻片凝集试验分别检测菌株的生化特性和菌体抗原;穿刺法接种抗-H7抗血清琼脂检测H7鞭毛抗原,试管凝集试验检测其它鞭毛抗原.聚合酶链反应(PCR)分别检测特异性基因和毒力基因.结果194株O157:H7与101株O157:非H7在山梨醇、蔗糖、赖氨酸和鸟氨酸等生化反应中有差异.194株O157:H7中192株(98.97%)携带O157特异性基因,189株(97.42%)菌体抗原表型阳性;101株O157:非H7均携带O157特异性基因同时表型亦为阳性.194株O157:H7均携带H7特异性基因,186株(95.88%)鞭毛抗原表型阳性.194株O157:H7中除1株(0.52%)四种毒力基因检测均为阴性外,其余193株(99.48%)均携带2种及其以上毒力基因;101株O157:非H7四种毒力基因检测均为阴性.结论O157:H7特征性生化反应、O157和H7特异性基因检测及其携带毒力基因的特性,在区分不同类型的O157方面有重要意义,据此可以制定针对性强的O157:H7分离鉴定程序.

  • 2002年广州地区暴发的登革热流行特点分析

    作者:何丽娟;吴新伟;高阳;狄飚;杨卫路;陈芳;徐建敏;张玮

    目的了解2002年广州地区暴发登革热(DF)的流行特点,为其诊断、预防和治疗提供依据.方法采用间接酶联免疫(ELISA)法、免疫斑点法、免疫层析法,对3 716例发热待查、疑似患者的血清特异性抗体IgM、IgG进行检测.用C6/36细胞对DF病例176份标本进行病毒分离,以间接免疫荧光(McAb-IFA)、RT-PCR方法鉴定.结果本次广州地区暴发流行的登革热血清学确诊病人为886人.流行开始于5月份,8、9、10月份达高峰期,11月有明显下降.发病以青壮年为主.在3 716例发热待查、疑似患者中,血清IgG、IgM抗体阳性886例,阳性率27.84%.病毒分离阳性46份,阳性率26.1%.经单克隆抗体间接免疫荧光(McAb-IFA)、RT-PCR检测鉴定为Ⅰ型登革热病毒.结论在疾控工作中,应加强Ⅰ型登革热病毒的监测工作.

  • 云南部分鼠疫疫源地中小肠结肠炎耶尔森菌的分离及鉴定

    作者:陈邬锦;张海鹏;郭英;陈双艳;段然;肖玉春;王鹏

    目的 了解云南部分鼠疫疫源地中小肠结肠炎耶尔森菌的分布及病原学特征.方法 2012年5月至2014年4月采集剑川、梁河两县鼠类盲肠,对其进行培养,通过菌落聚合酶链反应初筛小肠结肠炎耶尔森菌,通过生化鉴定确定菌株并作毒力基因检测.结果 915份标本中分离到小肠结肠炎耶尔森菌35株,总检出率为3.83%,分离株包含1株致病株、34株非致病株.35株小肠结肠炎耶尔森菌全部为生物1A型,1株致病株为1A/O∶9生物血清型,毒力基因为(ail+、ystA-、ystB-、yadA-、virF-、rbfc-),非致病株血清为O∶5、O∶8及未分型,毒力基因为(ail-、ystA-、ystB+、yadA-、virF-、rbfc-).结论 小肠结肠炎耶尔森菌在剑川野鼠鼠疫疫源地鼠间流行,分离菌株血清型别较为多样,分离到的致病株缺乏典型毒力基因;小肠结肠炎耶尔森菌在梁河家鼠鼠疫疫源地尚未发现鼠间的流行.

  • 2013-2014年云南省剑川县野鼠鼠疫疫源地小肠结肠炎耶尔森菌的调查分析

    作者:陈双艳;郭英;张海鹏;谭红丽;王鹏

    目的 对剑川县野鼠鼠疫疫源地小肠结肠炎耶尔森菌分布情况调查分析.方法 从剑川采集鼠盲结肠标本进行小肠结肠炎耶尔森菌分离培养、表型鉴定和特异基因分析.结果 从采集的645份鼠类标本中,分离到34株小肠结肠炎耶尔森菌,分离率为5.27% (34/645);其中致病株1株、非致病株33株.鼠类标本分别是大绒鼠、贝氏树嗣、褐家鼠、齐氏姬鼠、小林姬鼠等,其中大绒鼠采集率和检出率高(2.79%),其次为齐氏姬鼠(1.55%).结论 剑川县野鼠鼠疫疫源地中,小肠结肠炎耶尔森菌的主要宿主与鼠疫菌主要宿主基本一致,推测小肠结肠炎耶尔森菌的存在与鼠疫的相对静息相关.

  • 2012-2014年内蒙古自治区脊髓灰质炎病毒病原学监测分析

    作者:闫真;徐冬冬;刘颖;赵燕

    目的 分析内蒙古自治区2012-2014年脊髓灰质炎(脊灰)病毒分离和鉴定情况,为维持中国无脊灰状态提供依据.方法 对来源于急性弛缓性麻痹病例、接触者和健康儿童的粪便标本进行病毒分离和型内鉴定,确定血清型别后进行VP1区核苷酸序列测定,并对结果进行分析.结果 从1176份粪便标本中分离到脊灰病毒21株,非脊灰肠道病毒83株.21株脊灰病毒中1株为疫苗衍生脊灰病毒,其余20株为疫苗株,未发现脊灰野病毒.结论 2012-2014年内蒙古自治区继续维持无脊灰状态.

  • 2010-2013年甘肃省白银市流感样病例监测哨点医院数据分析

    作者:曾同霞;何涛;王犇;卢旭升;张学太;张凤娇

    目的 分析甘肃省白银市2010-2013年国家哨点医院流感样病例(ILI)监测结果,掌握本地区流行性感冒的流行趋势及病毒株变化特点,为制定防控措施提供依据.方法 收集哨点医院ILI就诊数、门急诊病例总数,采集ILI咽拭子进行核酸检测,使用Excel 2003和SPSS 19.0统计软件分析ILI分年度、诊室、年龄段分布及ILI核酸检测情况.结果 4年ILI就诊百分比(ILI%)比较差异有统计学意义(x2=193.678,P=0.000),ILI%高的年份为2013年,为1.58%,高的月份是12月,低在8月,就诊比例高诊室是儿内科急诊,占5.21%,年龄分布主要集中在15岁以下儿童,占65.03%;4年核酸检测阳性率比较差异有统计学意义(x2=154.680,P=0.000),阳性率高的是2012年,为26.37%;甲型H1N1型流感病毒构成比逐年上升(x2趋势=58.773,P=0.000);分月核酸检测阳性率比较差异有统计学意义(x2=646.743,P=0.000),阳性率高的是11月,为50.39%;5个年龄组核酸检测阳性率比较差异有统计学意义(x2=143.568,P=0.000),阳性率高的是15 ~ 24岁组,为36.04%.结论 白银市流感发病呈冬春季高峰且冬季流感来临较早,儿童和青少年是防控重点人群,甲型H1N1型流感近4年病毒活性逐年上升.

  • 一株发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒的分离鉴定及其生长特性研究

    作者:郑雅匀;戴晓懿;金东;孙晖;熊衍文;罗雪莲

    目的 探索疑似发热伴血小板减少综合征病例中病原体的分离鉴定,了解病毒生长特性.方法 利用非洲绿猴肾细胞Vero E6从患者抗凝血标本中分离发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV),并通过血清学、形态学等方法对病毒进行鉴定;将分离的病毒接种不同细胞,利用荧光定量PCR检测不同时间细胞上清中病毒载量的变化.结果 从患者抗凝血标本中分离出SFTSV;免疫荧光显示感染病毒的细胞培养物能与患者血清发生阳性反应;在透射电镜下能观察到布尼亚病毒样颗粒.SFTSV可感染Vero E6、Hep G2、THP-l等多种细胞,但病毒在不同细胞中的复制水平差异明显.其中Vero E6细胞对SFTSV较易感,病毒可增殖至4.89×109 copy/ml.而Hep-2和HT29细胞不能被SFTSV感染.结论 从疑似发热伴血小板减少综合征病例血液标本中成功分离出SFTSV.该病毒具有较广泛的细胞嗜性,对肾来源的细胞更易感.这些研究将为后续研究SFTSV的相关基础研究提供重要的线索.

  • 模拟粪便标本中的单增李斯特菌的分离和检测

    作者:王艳;陈强;李爱华;叶长芸

    目的 建立针对粪便标本中单增李斯特菌的分离鉴定方法,评价方法的检测下限,以提高感染人群标本中单增李斯特菌的检出率,了解我国人群中该菌的携带及感染情况.方法 对模拟人粪便标本进行二次增菌,采用Real-time PCR检测,并同时分离培养获得该病原菌.结果 当每克模拟粪便标本中含有7 cfu的单增李斯特菌时,经过增菌后的标本用Real-time PCR方法可检测出阳性结果,并能够通过单增李斯特菌的选择培养基分离得到病原菌.结论 本研究为从粪便标本中分离单增李斯特菌和由单增李斯特菌引起的食物中毒事件的病原学调查提供了技术支持,有利于对我国人群中单增李斯特菌的携带或感染状况进行调查分析.

  • 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌不同来源株耐药性及流行特征分析

    作者:赵红庆;徐萍;周声安;胡守奎

    目的 探索耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)在动物食品、动物临床及人医临床中的分布和流行情况,对其耐药情况进行研究分析,为控制MRSA的感染和临床用药提供理论支持.方法 对采集安徽省不同地区动物食品、动物临床及人医临床的标本进行分离培养.采用法国生物梅里埃公司的Vitek全自动微生物分析系统,对分离菌株进行细菌鉴定和药敏试验;应用聚合酶链反应(PCR)方法检测mecA基因;应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对MRSA进行脉冲电泳,BioNumerics软件进行聚类分析.结果 从安徽省淮北、合肥和马鞍山地区共采集动物性食品450份、动物临床标本90份、人医临床标本150份.共分离MRSA 82株,其中动物性食品MRSA(Food-MRSA) 14株、动物临床MRSA(La-MRSA) 23株、人医临床MRSA (Hu-MRSA) 45株,分离培养率为3.1%、30.0%和25.6%;不同来源的MRSA菌株对万古霉素、达福普丁和利奈唑胺100%敏感;对青霉素和苯唑西林100%耐药;对头孢唑啉、红霉素、克林霉素、四环素、庆大霉素、左氧氟沙星、利福平、甲氧嘧啶和氨苄西林有不同程度的耐药,但不同来源MRSA间无差异.82株不同来源的MASA经PFGE分型可分为49个型别,同源性较低.结论 动物临床标本和人医临床标本的MRSA的分离培养率显著高于动物食品的分离率,不同来源的MRSA在药物敏感性方面差异无统计学意义.PFGE和聚类分析显示,安徽省不同地区不同来源的MRSA其亲缘关系较远,显示其菌株来源的多克隆特征.

  • 引起尿路感染的阴道加特纳菌的分离鉴定和药敏分析

    作者:赵建丽;刘宗春;赵新英

    目的 探析阴道加特纳菌导致的尿路感染的药敏及分离鉴定状况.方法 人血哥伦比亚琼脂上应用经灭菌后的一次性接种环接种10μL清洁中段尿,置于5%CO2、35°C环境下进行48h孵育,将可疑菌落纯化挑出,于ATB链球菌鉴定条进行细菌鉴定,确定为阴道加特纳菌后保存;菌株复苏后用琼脂稀释法测10种抗生素对54株阴道加特纳菌的90%低抑菌浓度(MIC90)和50%低抑菌浓度(MIC50).结果 人血哥伦比亚琼脂上54株阴道加特纳菌均良好生长、β-溶血、菌落典型显著;根据厌氧菌评估标准进行药敏试验,克林霉素、亚胺培南、头孢曲松、头孢噻肟、头孢西丁、氨苄西林-舒巴坦敏感率均为100%;其他依次为四环素(72.2%)、氨苄西林(68.5%)、左氧氟沙星(51.8%)、甲硝唑(35.2%).结论 阴道加特纳菌导致的尿路感染可用人血哥伦比亚琼脂培养分离、可应用克林霉素、亚胺培南、头孢曲松、头孢噻肟、头孢西丁、氨苄西林-舒巴坦等治疗尿路感染,阴道加特纳菌的相应药敏试验标准应尽快制定,以防经验用药,引起耐药性.

  • 食用油中黄曲霉毒素LC-MS/MS定量分析方法

    作者:AB SCIEX

    黄曲霉毒素是生长在食物及饲料中的黄曲霉和寄生曲霉代谢的一组化学结构类似的产物,目前已分离鉴定出的黄曲霉毒素有17种。黄曲霉毒素是一种毒性极强的物质。其危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时可导致肝癌甚至死亡。我国食品中黄曲霉毒素B1允许量标准(GB 2761-2011)规定,玉米、花生仁、花生油中不得超过20μg/kg,大米、其他食用油中不得超过10μg/kg,其他粮食、豆类、发酵食品中不得超过5μg/kg。

  • 四川泡菜发酵过程中酵母菌的动态变化规律及分离鉴定

    作者:柏旭;张倩茹

    从四川泡菜中分离5株不同酵母菌,各株酵母菌有着不同的菌落特点,分离鉴定采用26SrDNAD1/D2区序列分析法,鉴定出1株膜璞毕赤酵母、4株酿酒酵母。检测结果表明,两种酵母菌都存在于四川泡菜发酵前期,随着时间的推移,不同泡菜两种酵母菌的变化各不相同。

  • 肠出血性大肠杆菌O157的实验室分离与鉴定方法

    作者:丁红雷;毛旭虎;王豪举;邹全明

    大肠杆菌O157是一种重要的食源性病原菌.对该菌进行分离鉴定,继而进行进一步分子水平的深入研究具有重要意义.本文就该菌的目前常用的实验室分离鉴定方法,如平板分离、免疫磁珠分离、聚合酶链式反应等进行了综述,并对各种分离鉴定的方法进行了比较.

  • 分离鉴定结核分支杆菌索状结构基因

    作者:高谦

    目的:通过比较具有不同索状结构表型菌株的基因表达谱,分离鉴定可能的索状结构基因.

  • 一种海马肠道疾病病原体的鉴定及其对抗生素的敏感性研究

    作者:杨弘诣;杨为东;程刚;赵文;张国辉

    [目的]研究海马致病病原体,筛选不同用途海马的高效病害治疗物,促进我国海马养殖的发展.[方法]室外采集标本分离患病海马病原体,从患病海马体内分离到3株菌株,用分离菌株的纯培养物感染健康海马.[结果]48h内实验海马发病,其临床症状与原患病海马相似,经形态学、生化和室内感染试验鉴定为副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus).药敏试验表明,所分离菌株对链霉素、利副平、卡那霉素、环丙沙星、氟派酸、四环素、复达欣、菌必治、奈定酸等抗菌药表现为高敏感性;对红霉素、新霉素、先锋霉素Ⅵ、强力霉素、新生霉素、头孢呋肟、呋喃妥因等药物敏感性较高;对氨苄青霉素、羟苄青霉素、头孢氨苄、林可霉素等药物敏感性较差.[结论]弧菌对海马的致病性作用很明显,但不同的情况下表现不同.不同的药物对弧菌的作用不同,而不同用途的海马其所用药物也不尽相同.

  • 从牛蛙体中分离出01群霍乱弧菌的鉴定报告

    作者:刘光明;张人参;郭美华;苏水宽;郑李金;陈拱立;杨毓环

    由霍乱弧菌感染引起的霍乱是当今3种国际检疫传染病之一.厦门出入境检验检疫局在对进口牛蛙进行霍乱弧菌检测鉴定中,采用了以血清免疫学试验为主,结合生物化学与形态特点以及基因检测综合作出判断的方法.本次实验检出3株符合O1群埃尔托型霍乱弧菌生物学特性的菌株,血清分型为稻叶型;噬菌体-生物分型为30K.实验提示,加强和完善对人出境水产品(包括牛蛙)的霍乱弧菌检测,对于严防霍乱病原菌自国门传入或传出具有重要的意义.

  • 鲜活贝类中单核细胞增生李斯特菌的分离鉴定及毒力基因与耐药性分析

    作者:姚琳;江艳华;李风铃;张媛;张奇;朱文嘉;郭莹莹;王联珠;翟毓秀

    目的 研究采自产地的鲜活贝类中单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)的污染状况、毒力基因分布与耐药性.方法 对采自产地的200份鲜活贝类,按照GB/T 4789.30-2010《食品安全国家标准食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》进行单增李斯特菌的分离与鉴定;采用Kirby-Bauer纸片扩散法测定分离株的耐药性;通过PCR法分析分离株9个毒力基因(包括prfA、plcB、hly、actA、iap、inlA、plcA、mpl、inlB).结果 在200份鲜活贝类中,共检出阳性样品4份(2.0%);有1株缺失inlB基因,l株缺失mpl基因;分离株对氨苄青霉素、庆大霉素等一线临床治疗药物敏感,但有2株对四环素和复方新诺明同时耐药,1株对复方新诺明和氧氟沙星耐药.结论 采自产地的鲜活贝类存在单增李斯特菌的污染,分离株毒力基因有一定程度缺失,提示初级水产品中的单增李斯特菌污染需引起关注,并且需要继续加强食品中该菌的耐药性监测.

  • 海产品中溶藻弧菌的分离及多种方法鉴定效果的比较

    作者:赵晓娟;汪琦;王紫薇;刘莉;韩笑;曹佳悦;曾静

    目的 了解北京市市售海产品中溶藻弧菌的污染情况,并对使用不同方法鉴定溶藻弧菌的效果进行比较.方法 样品经碱性蛋白胨水增菌后,分别于硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖(TCBS)琼脂培养基和科玛嘉狐菌显色培养基上划线培养,实时荧光聚合酶链式反应(PCR)法鉴定可疑菌落.以rpoB基因测序方法为参考,比较了实时荧光PCR和VITEK两种方法的鉴定效果.结果 对北京市水产品市场随机采集的116份海产品进行了检测,实时荧光PCR法鉴定出溶藻弧菌阳性样品95份,检出率高达82%.使用科玛嘉弧菌显色培养基的检出率高于TCBS培养基,分别为82% (95/116)和72% (83/116).经rpoB基因核苷酸序列测定确定95株疑似菌株为溶藻弧菌.采用VITEK 2 COMPACT GN鉴定卡对这95株菌株进行鉴定,31株鉴定为溶藻弧菌,其余未能得到准确的鉴定结果.结论 北京市市售海产品中溶藻弧菌检出率高.科玛嘉弧菌显色培养基比TCBS琼脂培养基更适于溶藻弧菌的分离,实时荧光PCR法的鉴定效果优于VITEK法.

  • 1株不分解乳糖O111:K58型致病性大肠埃希氏菌的分离鉴定

    作者:罗燕;李广兵;雷卫蓉

    目的:探讨一起疫情中的致病性大肠埃希氏菌(EPEC)O111:K58的分离鉴定.方法:依据GB/T 4789.6-2003对致病性大肠埃希氏菌(EPEC)O111:K58进行培养,经染色镜检,生化反应,血清学试验,噬菌体裂解试验作出鉴定.结果:从患者粪便接种的庆大平板中检出1株不分解乳糖致病性大肠埃希氏菌(EPEC)O111:K58.结论:抗菌素合适量的庆大平板可用以分离到致病性大肠埃希氏菌.

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