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巨细胞病毒对细胞周期的影响及其机制
HCMV感染对细胞周期有很大的影响,处于不同细胞周期的细胞感染HCMV,皆可导致细胞周期的改变,在G0期及G1期感染HCMV可导致细胞周期进展到了G1/S限制点,在S期细胞感染HCMV可导致细胞周期受阻,细胞将不能进行有丝分裂.HCMV影响细胞周期主要是其极早期蛋白IE1-72及IE2-86的作用,以IE2-86为主,其机制包括:使CyclinE的转录活性增加;把Cdk2从细胞浆转移到细胞核;细胞核中CKIs水平的下降.
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人巨细胞病毒立即早期蛋白功能的研究进展
人巨细胞病毒基因表达分为立即早期、早期和晚期三个时相.立即早期基因的表达在病毒基因和宿主细胞基因的表达和调控方面有重要作用,并能够影响宿主细胞周期进程.本文对立即早期蛋白调节病毒复制以及影响细胞周期进程方面的功能作一综述.
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慢病毒载体与基因治疗
载体是供插入目的基因并将其导入宿主细胞内表达或复制的运载工具.常用的有SV40衍生载体、逆转录病毒载体、腺病霉载体、腺病毒相关病毒载体、细小病毒载体、疱疹病毒载体、痘苗病毒载体等.近几年来,慢病毒载体受到高度重视,慢病霉载体来源于人类免疫缺陷病霉HIV-1、HIV-2、SIV,具有转染分裂和非分裂的T细胞、树枝状细胞、造血干细胞及巨噬细胞[1],基因疗法是一种新方法.Hawley[2]等的文章中指出,由于慢病毒载体可作用于细胞周期的G0/G1期,成为遗传性疾病治疗的有效手段.基因治疗的初目的是传送特殊的基因至预定的靶细胞,并且直接表达该基因的性质,达到治疗效果.在治疗遗传性、代谢性、神经系统疾病、癌症及艾滋病方面有广泛的应用前景[3].
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病毒感染对细胞周期的调控
病毒靠宿主细胞的代谢系统来复制及合成自身的核酸、蛋白质等组分,终进行装配而得以繁殖.病毒感染会导致疾病的发生,其致病机制有很多方面,对宿主细胞周期的干扰是近年的研究热点,即通过作用于细胞生长的数条调节通路和多个调控点使宿主细胞周期进程发生障碍,合成的相关功能蛋白被病毒利用,导致感染.现就近年来有关病毒对宿主细胞周期影响的研究进展做一综述.
关键词： 病毒感染 细胞周期 细胞周期蛋白 细胞周期蛋白依赖性激酶 -
030 苯并(a)芘对细胞周期、细胞增殖的影响及相关信号传导途径的作用
以苯并(a)芘及其代谢物为模式化学物,围绕着DNA损伤修复、细胞信号传导途径、细胞周期检测点调控等方面,从化学致癌物对细胞周期的影响角度来阐明化学致癌物的致癌机制已成为当前环境毒理学的热点问题与研究前沿.本文就苯并(a)芘对细胞周期分布与细胞周期调节因子的影响、以及相关信号传导途径在苯并(a)芘对细胞周期与细胞增殖影响中的作用等方面,对苯并(a)芘对细胞周期的影响进行了综述.
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饮水消毒副产物二氯乙腈对HepG2细胞周期的影响
目的 研究p53基因和chk1基因在饮水消毒副产物二氯乙腈(dichloroacetonitrile,DCAN)对HepG2细胞周期阻滞过程中的影响.方法 以二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理人肝癌细胞(HepG2细胞)为对照组,分别以低、高浓度(50、400 μmol/L)DCAN染毒HepG2细胞24 h.采用碘化丙啶(PI)标记的流式细胞技术检测细胞周期分布情况,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测p53基因和chkl基因mRNA表达的改变.结果 与对照组比较,400 μmol/L处理组G1期细胞比例明显减少,G2期细胞比例明显增加,差异均有统计学意义(P ＜0.05);400 μmol/L DCAN作用于HepG2细胞后下调了p53的表达,差异有统计学意义(P＜0.05),而对chk1的表达没有影响.结论 高浓度的DCAN能明显延长HepG2细胞的G2期,并可抑制p53的mRNA表达水平,但对chk1的mRNA表达水平无影响.
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紫杉醇对p53基因不同表达型人肺腺癌细胞株的生长抑制作用
目的 评价紫杉醇对p53基因不同表达型肺癌细胞株的生长抑制作用.方法 分别以体外药物敏感试验(MTT法)、流式细胞术观察紫杉醇相同作用浓度处理肺癌细胞株(H1299为053缺失型,H322为p53变异型,A549为053野生型)后,其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化.结果 紫杉醇对H1299、H322及A549细胞毒性呈时间依赖性(P<0.05):紫杉醇对H322和A549的IC50(48.07±26.12 nmol/L,9.8±2.45 nmol/L)明显低于对H1299的IC50(110.6±38.7 nmol/L,P<0.05).紫杉醇相同作用时间及相同浓度(作用时间48 h、浓度10 nmol/L)下,H322和A549 G2/M期的阻滞明显多于H1299(P<0.05),H1299多阻滞于G0/G1期.H322的细胞凋亡也明显多于H1299(P<0.05).结论 紫杉醇对053基因不同表达型人肺腺癌细胞株均有生长抑制作用,但对变异型及野生型p53表达型细胞株的抑制作用明显高于p53缺失型的细胞株.
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对曲古抑菌素A敏感的人肺腺癌细胞株的初步筛选
目的 初步筛选不同p53表达型肺癌细胞株对曲古抑菌素A(TSA)敏感性不同的影响因素.方法 分别以体外药物敏感试验(MTT法)、流式细胞术观察TSA处理3种肺癌细胞株(H1299为p53缺失型,H322为p53变异型,A549为p53野生型)后, 其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化;用Western blot 法检测3种细胞的人类表皮生长因子受体2(HER2)表达水平.结果 TSA对3种细胞均有抑制作用,在96 h时对A549的IC50抑制作用明显低于对H1299和H322的IC50(P<0.05),A549细胞凋亡也明显多于H1299和H322的细胞凋亡(P<0.05).3种细胞株HER2蛋白表达水平由高到低依次为H322、A549和H1299,与TSA的IC50值之间无相关性.结论 TSA对p53不同表达型人肺腺癌细胞株均有生长抑制作用,肺腺癌细胞株p53的不同表达型可能对TSA的敏感性产生影响,而HER2的表达强度不影响TSA的敏感性.
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曲古抑菌素A对肺癌细胞株H322抑制效应及机制的研究
目的 评价曲古抑菌素A(TSA)对肺癌细胞株H322的生长抑制效应及机制.方法 以四氮甲基唑蓝、流式细胞术观察TSA作用后,肺癌细胞株H322的生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等变化,Western blot分析细胞周期相关蛋白p21、抗凋亡蛋白survivin及细胞外信号调节激酶(ERK)的表达.结果 TSA对H322具有时间依赖性和浓度依赖性的生长抑制作用；TSA作用48h及96h后,H322细胞凋亡及G2/M期细胞明显增加(P＜0.05).p21蛋白表达水平显著提高,survivin蛋白及磷酸化ERK蛋白表达显著下降.结论 TSA对肺癌细胞株H322生长具有抑制作用,其机制可能是上调p21蛋白的表达,引起细胞周期的阻滞；同时抑制survivin的表达,阻断ERK信号通路,导致细胞凋亡.
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非小细胞肺癌的临床治疗进展
肺癌是常见的恶性肿瘤之一,其发病率逐年上升,目前已成为恶性肿瘤中常见的死亡原因.肺癌患者中的80%左右为非小细胞肺癌.肺癌的治疗方法从作用范围分为局部治疗和全身治疗,前者以手术、放疗为主,后者包括化疗、生物治疗和中医药治疗.其中化疗应用早,经验多.近年来新药相继问世,用药方案不断改进,疗效明显提高.但不同的治疗方法的细胞周期作用点和机制不同,联合用药可以达到相辅相成,取长补短,提高疗效的作用.因此综合治疗已成为非小细胞肺癌的基本策略.
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肺癌不同组织类型灰度值的比较研究
近年来,我国肺癌的发病率和死亡率均呈明显上升的趋势.研究发现,细胞周期失控是细胞增殖失控而导致癌变的重要原因.而细胞周期蛋白D1 (cyclinD1)是近年来提出的重要的原癌基因,在细胞周期的调控中起关键作用.为了探讨细胞周期蛋白D1基因与肺癌的关系,本文进行了肺癌不同组织类型灰度值的比较研究.1材料与方法1.1研究对象收集肺癌住院病人并经手术后病理证实的肺癌石蜡包埋组织108例.本实验组男75例、女33例,其中包括鳞癌59例、腺癌33例、小细胞未分化癌16例.
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甲状腺肿瘤cyclin E蛋白与PCNA免疫组化的定量研究
近年来,随着人们对细胞周期的研究深入,人们逐渐认识到细胞周期的调控异常与细胞癌变密切相关,细胞周期蛋白(cyclin)及其依赖性激酶(CDKs)形成的复合物是细胞周期的核心调控装置[1],在cyclin家族中,cyclin E是其中较重要的一种[2],其含量异常不仅将导致细胞周期的调控失常,也与肿瘤细胞的增殖、发展相关.Wang以Western Blot法研究38例结直肠癌,发现35例癌组织的cyclin E水平显著高于癌旁粘膜,并同时平行应用增殖细胞核抗原(PCNA)测定增殖指数,发现41%的病例中增殖指数也同时增高,提示cyclin E可作为结直肠癌组织的又一细胞增殖指标.我们利用免疫组化和图像定量分析研究cyclin E在甲状腺"正常"与良恶性病变中的表达情况,并同时平行检测PCNA的表达,将两者对比分析,旨在探讨cyclin E与PCNA在甲状腺肿瘤中的相关性及cyclin E的异常表达.
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CD133阳性肝癌细胞周期分析
目的:免疫磁珠分选法分选肝癌细胞系SMMC7721中CD133+细胞,并检测CD133+和CD133-细胞周期.方法:采用免疫磁珠分选法分选肝癌细胞系SMMC7721中CD133+和CD133-细胞,乙醇固定,PI染色,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期.结果:CD133+细胞在SMMC7721中所占比例为0.9%,FCM检测显示SMMC7721细胞株中CD133.细胞周期处于G0/G1期的比例为85.3%,而CDl33.细胞G0/G1期的比例相对较低,为61.6%,未分选细胞居中,为68.9%.结论:人肝癌细胞系SMMC7721中CD133+亚群,比例约为0.9%,且CD133.细胞多处于静止期,具有一般干细胞的特性.
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葫芦素B纳米脂质载体对结肠癌和乳腺癌细胞抑制及凋亡作用的研究
目的：研究葫芦素B纳米脂质载体（CuB-NLC）对结肠癌Lovo细胞，乳腺癌MCF-7细胞的体外细胞毒性。方法：结肠癌Lovo细胞，乳腺癌MCF-7细胞常规复苏、培养及传代，取处于对数生长期的细胞用于实验。采用CCK-8法检测质量浓度为0、0.0625、0.25、1.00、4.00、16.0 mg/L的CuB-NLC对结肠癌Lovo细胞，乳腺癌MCF-7细胞的毒性，流式细胞仪检测结肠癌Lovo细胞，乳腺癌MCF-7细胞的细胞周期进程及Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡率。结果：与葫芦素B （CuB）相比CuB-NLC对结肠癌Lovo细胞，乳腺癌MCF-7细胞生长抑制作用明显增强(P＜0.05)，且这种抑制作用随药物浓度增加而增强。CuB组及CuB-NLC组作用于结肠癌Lovo细胞、乳腺癌MCF-7细胞48 h后，与NLC空白组及DMSO对照组相比较，CuB及CuB-NLC均能够引起结肠癌Lovo细胞、乳腺癌MCF-7细胞G2/M期阻滞，同时伴有G0/G1期细胞减少， CuB-NLC组的作用更加明显，有统计学差异(P＜0.05)。Annexin V/PI双染法检测结果表明，CuB-NLC能显著诱导结肠癌Lovo细胞，乳腺癌MCF-7细胞凋亡。结论：葫芦素B纳米脂质载体能够抑制结肠癌Lovo细胞，乳腺癌MCF-7细胞的增殖，诱导细胞凋亡。
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环磷酰胺与顺铂联合化疗对骨髓细胞P53蛋白表达昼夜节律的影响
目的：探索肿瘤联合化疗副作用小的时间，以确定佳给药模式。方法：小鼠按昼夜六个时间点给予环磷酰胺与顺铂联合化疗，用Western blot方法测定小鼠骨髓细胞凋亡相关蛋白p53蛋白表达的昼夜节律。结果：正常小鼠骨髓细胞 p53蛋白表达在18：00h强，22：00h弱。联合化疗后P53蛋白在22：00h表达强,18：00h表达弱。结论：环磷酰胺不同时间用药与顺铂联合化疗在18：00h对小鼠骨髓细胞的抑制作用小。
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CDK4和CyclinB1在乳腺癌中的表达和意义
目的 研究乳腺癌组织中CyclinB1和CDK4的蛋白表达水平、临床意义及预后.方法 应用免疫组织化学法检测乳腺癌组织中CyclinB1和CDK4蛋白表达情况,并比较其与临床病理特征之间的关系.结果 CDK4蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率56.3％,Ⅰ级表达率为36.4％,Ⅱ级为58.8％,Ⅲ级为100％,三者比较有显著差异(P＜0.05)；说明CDK4蛋白的表达随着乳腺癌分化程度降低而升高.CyclinB1蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为68.8％,Ⅰ级表达率为54.5％,Ⅱ级为70.6％,Ⅲ级为100％.CyclinB1蛋白在各级中的表达没有明显差异(P＞0.05).结论 乳腺癌的发生发展可能与CDK4和CyclinB1的过表达有关.
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异位子宫内膜细胞增殖及增殖动力学研究
目的探讨异位内膜细胞的增殖特性及增殖动力学. 方法对10例异位内膜组织(试验组)及10例正常内膜组织(对照组)进行原代培养,采用免疫细胞化学检测两组内膜ki-67表达,采用流式细胞术检测两组细胞的细胞周期. 结果 (1)异位内膜腺上皮细胞的ki-67积分(4.20±0.55)与正常内膜腺上皮细胞(3.90±0.70)相当(P>0.05).异位内膜间质细胞ki-67积分(2.92±0.58)与正常内膜间质细胞(2.60±0.37)相当(P>0.05).(2)异位内膜G0/G1、G2/M、S期的比例分别为(78.14±3.51)%、(11.53±2.18)%、(10.32±1.72)%与正常内膜(79.27±2.49)%、(11.53±1.43)%、(9.20±1.66)%相似(P>0.05). 结论 (1)异位内膜细胞并非高度增殖;(2)本实验提示异位内膜细胞的细胞周期可能受到了正常的调控.
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甲氧滴滴涕对雄性大鼠生精细胞的细胞周期影响
目的探讨甲氧滴滴涕(MXC)对雄性大鼠生精细胞的细胞周期影响.方法实验动物分为对照组,溶剂组,5 d、10 d和15 d MXC实验组.用流式细胞仪检测染毒雄性大鼠生精细胞周期变化. 结果随着MXC染毒时间延长与对照组比较,实验组G0/G1期与S期细胞数减少,G2/M期细胞数增多(P＜o.05),单倍体细胞减少,二倍体与四倍体细胞增多(P＜0.05);除5 d实验组二倍体与四倍体细胞荧光强度强外,其余各实验组的单倍体、二倍体和四倍体细胞荧光强度均减弱(P＜0.05);溶剂组与对照组间的变化无显著性差异(P＞0.05). 结论MXC可引起大鼠睾丸生精细胞S期抑制及G2期阻滞.
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植物类雌激素杨梅素对结肠癌细胞系RKO生长的影响
目的 检测一种植物类雌激素杨梅素对人结肠癌细胞系RKO生长的影响,并初步探讨其作用机制. 方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测杨梅素对RKO细胞系生长的影响;流式细胞仪技术检测杨梅素对细胞周期的影响;半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)确定杨梅素对抑癌基因p16INK4a表达的影响. 结果 MTT法显示杨梅素处理组对结肠癌细胞系生长有明显抑制作用;流式细胞仪分析结果显示,经杨梅素处理后RKO细胞周期明显阻滞在G0/G1期;RT-PCR结果显示杨梅素恢复了RKO细胞系p161NK4a的转录. 结论 杨梅素对RKO细胞系生长有明显的抑制作用,杨梅素可能通过上调抑癌基因p16INK4a的表达使RKO细胞周期阻滞于G0/G1期.
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维生素C对PM2.5致人肺癌A549细胞周期阻滞的影响
目的 研究维生素C对PM2.5致人肺癌A549细胞周期阻滞的影响.方法 用设定浓度的PM2.5 (50、100和200 μg/ml)单独或联合20μg／ml维生素C分别处理A549细胞24 h.用MTT比色法检测细胞活力,荧光探针检测细胞内活性氧,试剂盒检测MDA和SOD变化,用流式细胞仪检测细胞的周期时相,用Western blot检测细胞周期调控蛋白GADD45α的表达量.结果 与空白对照组相比,PM2.5(50、100和200 μg/ml)可降低细胞活力,提高ROS和MDA含量,降低SOD酶活,并在100和200μg／ml浓度组提高GADD45α蛋白表达量,使A549细胞阻滞在G2期.而20μg／ml维生素C可显著抑制上述损伤指标的升高,提高SOD酶活性,降低G2期细胞阻滞.结论 本实验初步证明PM2.5可引起A549细胞氧化损伤并导致细胞发生G2期阻滞,维生素C抗氧化剂可有效抑制这一过程的发生,对细胞起到保护作用.
