04 MDCK细胞悬浮培养制备流感疫苗

罗汉果悬浮培养细胞的生长和罗汉果甜苷积累的动力学研究

目的:研究罗汉果悬浮细胞生长、罗汉果甜苷积累的动力学特征,为培养过程的优化控制提供理论依据.方法考察1个培养周期内罗汉果悬浮细胞的鲜量重、干质量和罗汉果甜苷的含量,绘制生长曲线和生长速率曲线.结果:罗汉果悬浮细胞培养的生长周期约为21 d,O～6 d为细胞的延滞期,7～21 d为对数期,稳定期较短,第22天进入到衰亡期,在第21 天时细胞鲜、干质量达到大,分别为693.0,416.0 g·L-1,大生长速率为0.040 g·L-1 ·d-1.罗汉果总苷和甜苷V从第7 天开始快速积累,第21天达到大值,生长速率分别为0.032 8,0.054 7 g·L-1 ·d-1.结论:联合研究细胞生长和产物积累,可以明确产物积累的动态变化规律,为培养过程的优化、代谢产物的调控和大规模的工业化生产提供实验依据.

罗汉果细胞悬浮培养体系的建立与优化

目的:研究6-BA,萘乙酸(NAA),碳源,pH对罗汉果悬浮培养细胞生长的影响,探讨罗汉果细胞悬浮培养的适条件.方法:考察1个培养周期内罗汉果悬浮细胞的鲜重和干重,绘制生长曲线和生长速率曲线；采用正交试验设计对6-BA,NAA,碳源,pH 4因素3水平的组合进行优化.结果:罗汉果悬浮细胞培养的生长周期约为21 d,0～6 d为细胞的延滞期,7～21 d为对数期,稳定期较短,第22天进入到衰亡期,在第21天时细胞鲜、干质量达到大,分别为693.0,416.0 g、L-1,大生长速率为0.040 g·L-1·d-1.NAA是影响罗汉果悬浮细胞生长的关键因素,其影响效应依次为NAA＞6-BA＞pH＞碳源.悬浮细胞生长的适宜培养基为MS+1.0 mg·L-1 6-BA +0.02 mg·L-1 NAA,4.0％蔗糖为碳源,初始培养基pH5.5～6.0.结论:通过组织培养方式可以成功建立罗汉果细胞悬浮培养体系.

培养条件对西洋参悬浮细胞生物量和活性成分的影响

目的:研究主要理化因子对西洋参细胞悬浮培养的影响.方法:利用组织培养技术结合高效液相色谱法和紫外分光光度法,考察接种量、培养基种类、基质pH和光照条件对西洋参悬浮细胞生长,人参皂苷Re,Rb1以及西洋参多糖含量的影响.结果:当接种量为25 g·L~(-1)时,西洋参细胞的干重增殖倍数显著增加;通过考察Ms,SH,B_5 3种培养基对西洋参细胞的影响,结果表明MS培养基有利于西洋参细胞生长,B_5培养基有利于人参皂苷和西洋参多糖的合成.3种培养基中西洋参细胞多糖含量均高于栽培西洋参;pH变化对西洋参细胞生长影响不大,pH 6.0时,有利于人参皂苷Re和西洋参多糖的合成;光照培养显著促进西洋参细胞次生代谢物的合成,但对多糖合成没有太大影响.结论:接种量、培养基种类、基质pH和光照条件对西洋参悬浮细胞生长,人参皂苷Re,Rb_1以及西洋参多糖合成有显著影响.

新疆雪莲细胞悬浮系的建立和黄酮类活性成分的产生

目的:建立新疆雪莲的悬浮培养体系.方法:研究不同培养基、培养基初始pH、碳源、接种量、植物生长物质含量对雪莲细胞生长和黄酮合成的影响.结果:N6液体培养基在pH5.8、蔗糖含量50g·L-1、接种量60～80g·L-1FW时有利于细胞生长和黄酮合成,附加BA 0.2 mg·L-1+NAA2mg·L-1有利于黄酮合成,而附加BA 0.5mg·L-1+NAA 3mg·L-1则对生长有利.结论:培养条件的优化可有效提高雪莲悬浮细胞的生长和总黄酮的合成.

明党参愈伤组织诱导及其细胞悬浮培养的研究

目的:建立明党参愈伤组织的诱导及其细胞悬浮培养的技术体系.方法:采用正交试验法研究不同植物激素对明党参叶柄、根和叶片愈伤组织诱导的影响,以及明党参不同外植体细胞的悬浮培养.结果:叶柄易诱导出愈伤组织,其次是根和叶片,4种植物激素对明党参根和叶柄愈伤组织的诱导都具有极显著的效果,其中诱导叶柄愈伤组织形成的佳激素组合为0.5 mg·L~(-1) NAA+0.5 mg·L~(-1) 2,4-D+0.1 mg·L~(-1) KT+0.5 mg·L~(-1) 6-BA,培养14 d左右,诱导率达到100%.此外,明党参叶柄细胞培养至21 d时,细胞量和多糖均达到大值,分别1 090.28,36.85 mg·L~(-1).结论:明党参叶柄是愈伤组织诱导的佳外植体和细胞悬浮培养体系的佳细胞来源.

怀牛膝愈伤组织悬浮培养及其多糖含量的初步研究

目的:研究怀牛膝悬浮培养条件及其对愈伤组织中ABPS含量的影响.方法:采用正交试验和单因素试验,研究接种时间、接种量、碳源添加及pH对细胞生长量及多糖含量的影响.结果和结论:适宜ABPS生产的培养基是1/4MS+6-BA 0.5 mg·L-1+2,4-D 1.0 mg·L-1+蔗糖2%+葡萄糖2%+果糖1%,pH 6.0,培养时间50 d,接种量7 g·L-1.

波浪式WAVE生物反应器悬浮培养枇杷细胞生产熊果酸的研究

采用波浪式WAVE生物反应器放大培养枇杷悬浮细胞,研究细胞生长及熊果酸(UA)的累积情况.摇瓶和反应器中,以细胞的干重和UA的含量为指标进行对比试验;反应器中1L和5L工作体积下,以培养液中元素代谢、细胞的干重、UA的含量为指标进行对比试验;生物反应器中,1L的工作体积下,以接种量、转速、转动角度为因素开展正交试验筛选佳的组合.反应器中细胞的干重增长及UA含量比摇瓶中高出了105.5％,27.65％;生物反应器中不同的工作体积下,培养液中元素的代谢、细胞的干重及UA的累积情况相似;生物反应器中,接种量为80 g,转速为26 r·min-1,角度为6°是佳组合,接种后100 h收获,细胞的干重为19.01 g· L-1,UA质量分数为27.750 mg·g-1.结果表明WAVE生物反应器比摇瓶更适合枇杷细胞悬浮培养,并且可实现1L到5L的培养放大.

天山雪莲悬浮培养细胞中紫丁香苷、绿原酸和1,5-二咖啡酰奎尼酸的生物合成调控

紫丁香苷、绿原酸和1,5-二咖啡酰奎尼酸为野生天山雪莲中的3种活性化学成分,具多种药理活性,在药材中含量较低.研究在筛选得到天山雪莲上述3种化学成分高产细胞系的基础上,通过外源添加碳源和生物合成前体的方法调控紫丁香苷、绿原酸和1,5-二咖啡酰奎尼酸在天山雪莲培养细胞中的生物合成,极大地提高了其含量和产量.仅需培养16 d,紫丁香苷、绿原酸和1,5-二咖啡酰奎尼酸的质量浓度即可以分别达到339.0,225.3,512.7 mg·L-1;三者的含量分别为野生药材的67.9,1.9,10.6倍.研究为终实现通过天山雪莲细胞培养同时规模化生产以上3种活性成分打下了坚实基础,具有理论和实际应用意义.

天山雪莲悬浮细胞培养物中紫丁香苷的分离及含量测定

紫丁香苷为天山雪莲的主要活性成分之一,本研究运用溶剂提取方法,结合各种色谱手段对天山雪莲组织细胞培养物中的紫丁香苷进行分离纯化,并根据现代谱学方法对其结构进行鉴定.同时采用高效液相色谱法建立了天山雪莲组织细胞培养物中紫丁香苷的含量测定方法,该方法简便,精密度、重现性良好,结果准确可靠.这些研究为通过天山雪莲细胞悬浮培养大规模生产活性成分紫丁香苷奠定了基础.

真菌诱导子对胡桐悬浮培养细胞产生红厚壳素的影响

目的探讨真菌诱导子对胡桐悬浮培养细胞产生红厚壳素的影响.方法通过对胡桐叶斑病病菌的分离培养,制成真菌诱导子补加到胡桐细胞悬浮培养基中,考察不同浓度、不同加入时间对胡桐细胞生物量及红厚壳素产量的影响.结果 S-I菌株诱导胡桐CR2细胞合成红厚壳素的佳浓度为60 mg GE·L-1,诱导子在细胞生长静止期初期(即培养d 18)加入对红厚壳素产量影响大,可使产量提高27%,并促进了红厚壳素向胞外分泌.结论壳多孢菌的添加能有效提高胡桐细胞悬浮培养体系中红厚壳素的产量.

不同诱导子对甘草悬浮培养细胞中甘草酸积累的影响

目的 研究水杨酸、酵母提取物、水解酪蛋白、高糖、高盐、超声等诱导子对甘草悬浮培养细胞中甘草酸积累的影响.方法 向细胞悬浮液中加入各种诱导子或对细胞悬浮液进行超声处理结果加入10 mg·L-1水杨酸可使甘草酸的含量为对照组的1.86倍.低浓度的酵母提取物时甘草酸的积累有显著的促进作用,加入1 mg·L-1酵母提取物时,甘草酸的含量为对照组的3.71倍,达到14.20μg·g-1.添加100 mg·L-1水解酪蛋白时,甘草酸的含量为对照组的1.69倍.高盐胁迫对甘草酸的积累有较高的影响,其含量为对照组的1.96倍.结论 甘草细胞悬浮培养中,添加水杨酸、酵母提取物、水解酪蛋白、高糖、高盐、超声等诱导子是提高细胞中甘草酸含量的有效方法之一.

长鞭红景天细胞悬浮培养体系优化研究

目的 优化长鞭红景天Rhodiola fastigiata细胞悬浮培养体系及生长条件.方法 研究基本培养基、激素、碳源、氮源等因素对长鞭红景天细胞生长和红景天苷产量的影响,建立高产红景天苷的细胞悬浮培养体系.结果 MS培养基+BA5.0 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L为长鞭红景天细胞悬浮培养的适培养条件.结论 对培养条件进行优化,为利用长鞭红景天细胞大规模生产天然活性成分奠定基础,为缓解野生长鞭红景天资源的匮乏提供可行途径.

高产绿原酸杜仲细胞悬浮培养体系优化研究

目的 优化杜仲细胞悬浮培养及其产绿原酸的条件.方法 研究基本培养基种类、激素质量浓度、碳源种类及质量浓度、pH值、接种量和摇床转速等因素对杜仲细胞生长和绿原酸产量的影响,建立了高产绿原酸的悬浮细胞培养体系.结果 B5培养基+0.5 mg/L,NAA+0.6 mg/L 6-BA、蔗糖30 g/L、初始pH 5.0～5.5、接种量20g·FW/L以及摇床转速110 r/min为杜仲细胞悬浮培养的适合条件.结论 优化后的培养条件为杜仲细胞大规模悬浮培养生产天然活性成分奠定了基础.

冬凌草愈伤组织诱导及细胞培养的研究

用组织培养、细胞悬浮培养和单细胞平板培养技术,诱导出冬凌草愈伤组织,并探讨了细胞悬浮培养时间、培养方法和接种密度对冬凌草单细胞平板培养植板率的影响.结果表明:从冬凌草叶和嫩茎诱导愈伤组织,以MS+2,4-D1mg/L+NAA0.5mg/L培养基较好,愈伤组织诱导率高达96.80%.用普通单细胞平板培养法培养冬凌草单细胞的植板率很低,而以悬浮培养15～18d的单细胞为材料,接种密度为5×103个/毫升时,进行条件培养和看护培养,植板率达21.63%.本研究结果可供利用细胞培养技术筛选冬凌草高产冬凌草素细胞株时参考.

红豆杉细胞培养过程中抗褐变剂研究进展

利用红豆杉细胞培养技术直接分离得到紫杉醇是解决紫杉醇供需矛盾的佳途径之一.如何减轻和控制细胞培养过程中发生的褐变问题,又成为细胞培养法成败的关键因素.现就近几年来红豆杉细胞培养法生产紫杉醇过程中有关抗褐变剂方面的研究,从愈伤组织诱导、继代及细胞悬浮培养3个环节分别进行了简要论述.

在杂种红豆杉细胞悬浮培养中用茉莉酮酸刺激紫杉烷的产生

药用植物细胞悬浮培养产生次生代谢产物的研究进展

自20世纪50年代至今,植物细胞培养技术取得了重大的发展.目前被研究的植物有1 000多种,获得天然活性产物达500多种[1].细胞悬浮培养是植物细胞培养技术的应用和发展,中国已建立了人参、西洋参、紫草等药用植物细胞悬浮培养体系,有效成分含量已达到或超过原植株[2].1 影响次生代谢产物积累的培养条件1.1 愈伤组织及其接种量 生长力旺盛、表面颗粒突起、质地疏松、淡黄色的胚性愈伤组织是建立细胞悬浮系和提高次生代谢产物积累量的基础[3].

高山红景天细胞悬浮培养生长和产物积累动力学

目的 研究高山红景天悬浮细胞生长、红景天多糖和红景天苷合成动力学特征,为培养过程的优化控制提供理论依据.方法 考察1个培养周期内高山红景天细胞的鲜重、干重和红景天苷、红景天多糖的含量,绘制生长曲线、生长速率曲线和比生长速率曲线.结果 高山红景天细胞悬浮培养的生长周期约为16 d,0～4 d为细胞的延滞期,4~12 d为对数期,13~15 d为稳定期,在第14 天时细胞鲜、干质量达到大,分别为266.13 g · L-1和13.41 g · L-1;红景天苷在培养的第12 天达到大,其质量分数为0.585%;第10天时红景天多糖的含量达到大,其(质量分数为13.824%).结论 确定细胞生长和产物积累的变化规律,可以提高生产效率,为培养过程的优化控制提供理论依据.

银杏愈伤组织和悬浮细胞培养及黄酮类化合物的产生

进行了银杏愈伤组织和悬浮细胞培养及其次生代谢产物--黄酮类化合物的研究.考察了不同理化因子对各种银杏外植体黄酮含量的影响.对银杏细胞培养物中的芦丁、槲皮素和山奈酚进行了HPLC的定量测定.