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移植病人中HCMV激活感染标志的研究进展
HCMV感染率在我国人群中(≥90%)乃至在全世界均很高.移植受者中由于大剂量免疫抑制剂的投予,诱发潜伏的病毒激活,导致严重的临床症状,往往是至死性的.幸于目前抑制DNA多聚酶的丙氧鸟苷、磷甲酸等有效阻碍HCMV繁殖药物的问世.适时干预、早期治疗对移植受者免遭HCMV威胁是至关重要的.由于移植人群的特殊性,亦决定了潜伏病毒激活表现的复杂性,本文就新近有关研究移植病人中HCMV激活特点作一归纳.
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CDglyTK自杀基因系统治疗小鼠慢性粒细胞白血病皮下移植瘤的研究
为了探讨逆转录病毒介导的CDglyTK自杀基因系统对K562细胞的体内外杀伤作用,将逆转录病毒介导的CDglyTK自杀基因转染入K562细胞,体外实验用MTT法观察5-氟胞嘧啶/丙氧鸟苷(5-fluorocytosine/ganciclovir,5-FC/GCV)对K562/CDglyTK细胞的生长抑制率.体内实验时将K562/CDglyTK细胞和K562细胞接种于裸鼠皮下,使用GCV和5-FC后,观察裸鼠肿瘤体积的变化及裸鼠的生存率.体外实验表明,GCV联合5-FC对K562/CDg-lyTK细胞具有明显的杀伤作用;体内实验结果显示,皮下注射K562细胞和K562/CDglyTK细胞后小鼠成瘤率无明显区别;使用5-FC/GCV可明显抑制裸鼠体内的肿瘤形成;经5-FC/GCV治疗后K562/CDglyTK组的肿瘤体积较对照组明显缩小,裸鼠生存率也较对照组明显提高.结论:双自杀基因在体内外对K562细胞均有杀伤作用.
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逆转录病毒介导HSVtk基因转导体外抗结肠癌的作用
原发性大肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一[1],传统的手术、放疗和化疗等措施对提高生存率和生活质量取得了一定的成绩[2-5],但对于中晚期癌特别是伴有局部复发和远处转移者的治疗效果仍不能令人满意[6,7].基因治疗为其提供了新的治疗途径[8-13].单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSVtk)/丙氧鸟苷(GCV)系统疗法已广泛用于胶质瘤、肺癌、肝癌、乳腺癌、黑素瘤及淋巴肉瘤等多种恶性肿瘤的试验性治疗研究[14-19],在基础实验和临床试验中取得了肯定疗效[ 8,20.该疗法是通过病毒载体将HSVtk基因导入肿瘤细胞,其表达产物可将无毒性的药物前体(GCV)代谢为三磷酸化产物,取代鸟苷酸掺入DNA,并抑制DNA聚合酶而杀伤肿瘤细胞[21].我们用逆转录病毒载体携带HSVtk基因转染人大肠癌LoVo细胞,研究HSVtk/GCV系统体外治疗大肠癌的作用.
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CD-TK双自杀基因系统联合染料木黄酮对鼠前列腺癌的治疗作用
CD-TK双自杀基因包含单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因,能将丙氧鸟苷(GCV)及5-氟胞嘧啶(5-Fc)等无毒的前体药物转化成毒性药物,抑制RNA及DNA合成,从而导致肿瘤细胞的凋亡,研究表明二者协同可以显著增强对肿瘤细胞的杀伤作用[1].而染料木黄酮具有弱雌激素作用,能够显著抑制前列腺癌(PCa)细胞的生长[2].我们通过实验研究探讨染料木黄酮和CD-TK双自杀基因联合应用对PCa的治疗作用,现报告如下.
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放疗联合TK/GCV自杀基因系统对肺腺癌细胞凋亡活性的影响
目的 研究放疗联合高效表达的胸苷激酶/丙氧鸟苷(TK/GCV)自杀基因系统对人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡活性的影响,探寻肺腺癌放化疗联合治疗的新途径.方法 利用前期研究成功构建的可调控自杀基因TK高效表达的pfos-iNOS/TK治疗载体转染A549细胞筛选阳性克隆.将阳性转染细胞(转染治疗载体组)和未转染的对照细胞(未转染组)分别给予2 Gy的X射线照射和10 μmol/L、1000 μmol/L的GCV.荧光显微镜观察细胞凋亡情况,检测各组细胞的凋亡率.结果给予10 μmol/L、1000 μmol/L的GCV作用后,治疗载体组凋亡率高于未转染(P＜0.05);X射线照射联合GCV作用后,转染治疗载体组大量细胞发生凋亡,而未转染组仅有少量细胞发生凋亡(P＜0.01).结论 放疗联合高效表达的TK/GCV自杀基因系统显著提高了对肺腺癌细胞的杀伤作用,为肺癌治疗带来了新的希望.
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丙氧鸟苷治疗高龄急性视网膜坏死综合征4例报告
急性视网膜坏死(acute retinal necrosis,ARN)是疱疹族病毒感染所致的视网膜炎,约65%的患者双眼受累.
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造血干细胞移植后特发性肺炎综合征的临床分析
近年来,随着预防性丙氧鸟苷(DHPG)的广泛使用,巨细胞病毒(CMV)肺炎的发病率和病死率明显下降[1,2].还有一部分肺炎并不是由于明确的感染所致,被称为"特发性肺炎综合征(IPS)".IPS可以是移植前放化疗造成的肺损伤,也可能为慢性移植物抗宿主病(GVHD)累及肺组织所致,但也不能排除一些其他未知的病原体[3].IPS在国外有报道,而国内尚少见系统报道.我们回顾分析了36例特发性IPS,对其临床特点,进行了总结分析.
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H-2半相合CD34+细胞和TK+T细胞对移植物抗白血病效应的研究
移植物抗白血病(graft-versus-leukemia, GVL)效应是异基因造血干细胞移植免疫清除白血病细胞和防止复发的主要机制,对异体造血干细胞移植治愈白血病起着十分重要的作用.单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)系统在治疗移植物抗宿主病(GVHD)的同时能否保留GVL效应是一个值得研究的问题,我们对此作了初步探讨.
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allo-BMT后CMV感染性间质性肺炎并心肺功能衰竭治疗成功一例
患者,男,10岁,因异基因骨髓移植(allo-BMT)术后8个月,咳嗽、气促、心悸7 d于2000年9月入院.患者因患非霍奇金淋巴瘤规则化疗1年后复发,于1999年12月经白消安+环磷酰胺预处理后行allo-BMT并获成功.受者及供者移植前巨细胞病毒血清学阳性(CMV IgG阳性),采用丙氧鸟苷(GCV)及丙种球蛋白预防CMV感染.具体方法:分两个阶段静脉用GCV (5 mg*kg-1*d-1),即移植前第9天～移植前第2天及移植后中性粒细胞≥1×109/L始,用至移植后第100天;静脉用丙种球蛋白,隔日1次,每次2.5～5.0 g,从移植前第9天至移植后第100天.
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婴儿巨细胞病毒感染31例临床及治疗观察
目的:探讨婴儿巨细胞病毒(CMV)感染的临床特点及治疗.方法:对经酶免疫斑点技术确诊的31例小儿CMV感染,总结其临床特点并选用丙氧鸟苷治疗.结果:高胆红素血症占58.06%,支气管肺炎占25.80%,中枢神经系统损害占16.13%.31例均给丙氧鸟苷治疗,疗程3～8 w,结果25例痊愈,5例好转,1例死亡.结论:婴儿巨细胞病毒感染以高胆红素血症、支气管肺炎及中枢神经系统损害为主;丙氧鸟苷是治疗小儿CMV感染的首选药物.
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丙氧鸟苷对K562细胞抑制增殖和诱导分化作用
目的研究丙氧鸟苷(GCV)抑制K562细胞增殖作用和机制。方法细胞培养、集落培养、联苯胺染色。结果 0.625～40 μmol浓度的GCV对K562细胞有明显的抑制增殖作用，作用4 d时的半数抑制量(IC50)为2.99 μmol，作用7 d后克隆形成抑制率达43%，联苯胺染色阳性细胞百分率随药物剂量的增加和培养时间的延长而逐渐增加。结论 GCV体外抑制K562细胞增殖并能诱导其向红系分化。
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肾移植术后巨细胞病毒病的预防--CMV抗原检测指导的预防性抗病毒治疗
目的:探讨肾移植术后巨细胞病毒(CMV)病的预防. 方法:采用免疫组化法检测外周血白细胞CMV-PP65抗原,术后头3个月每周检查1次,初次检测CMV-PP65抗原阳性者,24h内给予丙氧鸟苷2.5～5mg/(kg.d)静滴,疗程至少4周或至CMV-PP65抗原阴转后续用7～14天;无效或出现丙氧鸟苷毒副作用时改用磷甲酸钠. 结果:100例受者术后头3个月检出CMV-PP65抗原阳性42例,58例抗原阴性的受者仅1例发生CMV病.42例CMV-PP65抗原阳性受者丙氧鸟苷治疗后36例(85.7%)抗原阴转,6例经磷甲酸钠治疗抗原也阴转,平均阴转时间为24.6±11.3天,平均疗程为34.2±7.1天;仅1例发展为CMV病.与没有给予预防性抗病毒治疗的对照组受者相比,CMV病的发病率和死亡率(P＜0.01)明显降低. 结论:CMV-PP65抗原检测可用于指导肾移植受者CMV感染的预防性治疗;预防性抗病毒治疗可有效降低CMV抗原阳性者CMV病的发病率和死亡率.
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HSV-TK/GCV自杀基因系统治疗小鼠乳腺癌的研究
目的:探讨HSV-TK/GCV自杀基因系统对小鼠乳腺癌细胞系MA782/5S-8102形成肿瘤的体内杀伤作用及其产生的旁观者效应.方法:体内实验分动物致瘤组、抑瘤实验组和治疗实验组.分别按实验组别要求接种5.0×106细胞/只于BALB/C小鼠的右腋窝皮下,观察各组肿瘤形成及肿瘤治疗情况并统计各组生存期.治疗结束后将标本制成石蜡切片进行病理学分析,RT-PCR检测HSV-TK基因在肿瘤组织中的表达情况.统计学处理采用SPSS软件进行完全随机的方差分析(ANOVA).结果:实验结果显示小鼠成瘤率为100%.丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)可明显抑制MA782/5S-8102/TK细胞在BALB/C小鼠体内的肿瘤形成.经GCV治疗后,MA782/5S-8102/TK组和混合细胞组的肿瘤体积分别较对照组肿瘤体积缩小约36.7%和28.6%(均P＜0.001);生存期也明显延长(P＜0.001);RT-PCR检测HSV-TK基因在肿瘤组织中有表达.实验组肿瘤组织与对照组相比存在明显的病理学改变.结论:逆转录病毒可介导HSV-TK基因转入小鼠乳腺癌细胞MA782/5S-8102并获稳定表达,HSV-TK/GCV自杀基因系统在体内对乳腺癌细胞有杀伤作用,且存在明显的旁观者效应.
关键词： 单纯疱疹病毒胸苷激酶 丙氧鸟苷 旁观者效应 逆转录病毒载体 小鼠乳腺癌 -
188Re标记丙氧鸟苷白蛋白纳米微球的制备
目的 制备188Re标记丙氧鸟苷(GCV)白蛋白纳米微球(188Re-GCV-BSA-NP).方法 通过蛋白交联固化的方法制备GCV-BSA-NP,并测定GCV-BSA-NP的体外释药特性;采用预锡化直接标记法对ccv-BSA-NP进行188Re标记,同时观察188Re-GCV-BSA-NP体外稳定性.结果 GCV-BSA-NP为大小不等的规则性微球,微球直径不等,但多集中在250-290 am.GCV-BSA-NP总的标记率>90%,放化纯>95%,放射性比活度1.85x105 MBq/μmol.标记物放置于37℃的PBS(pH 7.4)溶液中,在24 h时放化纯为95%.结论 预锡化直接标记法简便快速,能够得到较高的标记物放化纯度,稳定性好,GCV-BSA-NP具有明显的缓释功能.
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丙氧鸟苷结合HSV-TK基因治疗乳腺癌的实验研究
目的:探讨丙氧鸟苷(GCV)结合HSV-TK基因对人乳腺癌细胞系体外及体内杀伤作用及其产生的旁观者效应.方法:采用脂质体转染法将GINaTK载体转入包装细胞PA317.取病毒上清液感染人乳腺癌细胞,得到带有HSV-TK基因的TK细胞,并将其分别用于体外和体内实验.结果:体外实验结果显示,当TK细胞数占混合细胞10%时,低浓度(10 μg/mL)的GCV就可将50%左右的肿瘤细胞杀死.体内实验结果显示GCV可明显抑制TK细胞在BALBPC小鼠体内的肿瘤形成.经GCV治疗后,肿瘤体积分别较对照组缩小约11.1%、30.6%和47.2%(P<0.01);实验组肿瘤组织与对照组相比存在明显的病理学改变.结论:逆转录病毒可介导HSV-TK基因转入小鼠乳腺癌细胞并获稳定表达,GCV结合HSV-TK基因在体内外对乳腺癌细胞均有杀伤作用,且存在明显的旁观者效应.
关键词： 丙氧鸟苷 单纯疱疹病毒胸苷激酶 乳腺癌 -
WTp53基因联合TK/GCV、CD/5-Fc系统治疗人结肠癌的实验研究
目的:观察WTp53基因联合TK/GCV、CD/5-Fc系统对人结肠癌的治疗效果,并探讨其作用机理.方法:采用培养细胞移植法,将人结肠癌细胞系SW480接种于裸鼠背部皮下,建立裸鼠人结肠癌移植瘤模型,将32只裸鼠随机分为4组:对照组、WTp53组、TK、CD组、WTp53与TK、CD组,每组8只,WTp53采用脂质体介导,TK、CD采用逆转录病毒介导.将WTp53、TK、CD注入移植瘤体内,瘤内注射TK、CD的裸鼠同时腹腔注射GCV、5-Fc治疗,观察各组小鼠的生存状况及肿瘤体积、瘤重、肿瘤生长抑制率、常规病理、生存期等指标,比较观察各治疗组的治疗效果及对荷瘤裸鼠存活的影响.结果:各治疗组裸鼠人结肠癌移植瘤的生长均受到显著抑制,裸鼠存活期显著延长,联合基因治疗组效果更好,WTp53与TK、CD有交互协同作用.结论:WTp53、TK/GCV、CD/5-Fc对人结肠癌SW480细胞有明显抑制作用,WTp53基因联合TK/GCV、CD/5-Fc系统效果更强.
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HSV-TK/GCV系统在难治性卵巢癌裸鼠移植瘤模型中的实验研究
目的:建立人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠模型,用HSV-TK/GCV自杀基因系统治疗模型动物,观察疗效及协同因素.方法:常规培养携带HSV-TK基因的重组逆转录病毒包装细胞PA317,测定病毒滴度.在移植瘤内多点注射包装细胞,观察GCV、ATRA、TPT对移植肿瘤独立及协同治疗后的肿瘤体积变化.治疗结束后分析移植肿瘤组织病理,PCR检测TK基因在NIH3T3细胞及移植肿瘤组织的转导.结果:人卵巢癌标本裸鼠原代移植成功率16.7%,鼠间传代移植成功率89.7%;重组逆转录病毒滴度为6×104cfu/ml;HSV-TK/GCV系统或TPT治疗后肿瘤生长受到抑制(P＜0.05),两者联合治疗后,抑制更明显(P＜0.05);ATRA灌胃未显示独立或协同治疗作用(P＞0.05);HSV-TK/GCV组、TPT组及两者联合组有明显的治疗反应;PCR检测证实,TK基因在NIH3T3细胞及肿瘤组织中的转导.结论:HSV-TK/GCV系统及TPT对人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠有单独及协同治疗作用,全反式维甲酸灌胃对人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠疗效不明显.
关键词： 单纯疱疹病毒腺苷激酶 丙氧鸟苷 难治性卵巢癌 肿瘤移植 -
TK/GCV、CD/5-Fc双自杀基因系统治疗人结肠癌的动物实验研究
目的:观察胸苷激酶/丙氧鸟苷(thymidine kinase/ganciclovior, TK/GCV)、胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶(cytosine deaminase/5-fluorocytosine, CD/5-Fc)双自杀基因系统对人结肠癌的治疗效果.方法:采用培养细胞移植法,将人结肠癌细胞系SW480接种于裸鼠背部皮下,建立裸鼠人结肠癌移植瘤模型,将32只裸鼠随机分为4组:对照组、TK/GCV组、CD/5-Fc组、TK-CD联合治疗组,每组8只,TK-CD采用逆转录病毒介导,采用瘤体内直接注射法,同时腹腔注射GCV、5-Fc治疗,观察各组小鼠的生存状况及肿瘤体积、瘤重、肿瘤生长抑制率、常规病理、生存期等指标,比较观察各治疗组的治疗效果及对荷瘤裸鼠存活的影响.结果:成功构建了SW480皮下移植瘤动物模型.各治疗组裸鼠人结肠癌移植瘤的生长均受到显著抑制,裸鼠存活期显著延长,联合基因治疗组效果更好,TK/GCV与CD/5-Fc有交互协同作用.结论:TK/GCV与CD/5-Fc对人结肠癌SW480细胞有明显抑制作用,TK/GCV、CD/5-Fc双自杀基因系统效果更强.
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丙氧鸟苷对亚致死量照射H-2半相合小鼠CD34+细胞植入的影响
①目的探讨丙氧鸟苷(GCV)对亚致死量照射H-2半相合小鼠CD34+细胞移植的影响.②方法从亲代雄性供鼠骨髓分离CD34+细胞,同时取脾脏T细胞转染TK基因.雌性F1受鼠60Co亚致死量照射7.0 Gy后随机分为4组,第1组输入1×105 CD34+细胞,其他3组输入1×105 CD34+细胞和5×105 TK+ T细胞.第3、4组分别于移植后0和7 d给予GCV治疗,然后观察各组移植物抗宿主病(GVHD)发生情况和生存情况.③结果单纯输入CD34+细胞组小鼠未能植活,但自体造血恢复.输入CD34+和TK+ T细胞组小鼠出现急性GVHD,表现为体质量下降;自小鼠外周血扩增出Y染色体片段.输入CD34+和TK+ T细胞后应用GCV组小鼠未发生急性GVHD;0 d应用GCV组80%小鼠未扩增出Y染色体片段;7 d应用GCV组80%小鼠扩增出Y染色体片段.7d应用GCV组植入率与未应用GCV组相比差异无显著性(χ2=0.89,P>0.05);7d应用GCV组植入率高于0d应用组(χ2=2.64,P<0.05).④结论移植后1周应用GCV对CD34+细胞植入影响较小.
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Ad-HSV-TK/GCV自杀基因系统对人卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响
目的 探讨腺病毒介导的单纯疱疹病毒腺苷激酶(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)自杀基因系统对人卵巢癌细胞SKOV-3增殖、凋亡的影响.方法 以人卵巢癌细胞SKOV-3为实验组,人成纤维细胞株MRC-5为对照组,两组分别取对数生长期,调整细胞浓度为1×107/mL.采用Ad-hTERT-HSV-TK分别转染两组细胞48 h,然后分别给予不同浓度的GCV(0.1、1、5、10、20、50、100、200 μg/mL)作用48 h.采用MTT法检测各组OD值,计算并比较两组细胞增殖率、凋亡率.结果 5、10、20、50、100、200 μg/mL GCV作用下实验组细胞增殖率较对照组降低(P＜0.05),实验组GCV 10、100 μ/mL作用下细胞凋亡率高于对照组(P＜0.05).结论 腺病毒介导HSV-TK基因转入人卵巢癌SKOV-3细胞并获稳定表达,Ad-HSV-TK/GCV自杀基因系统能明显抑制卵巢癌细胞增殖,促进卵巢癌细胞凋亡.
