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气相色谱法与离子色谱法测定饮用水消毒副产物中二氯乙酸的方法比对
目的 探讨气相色谱法(GC)与离子色谱法(IC)检测饮用水消毒副产物中二氯乙酸(DCAA)的一致性.方法 对灵敏度、精密度、准确度等指标作比对,并对水样测定结果进行统计学分析.结果 两种方法均能较好地对饮用水中的二氯乙酸进行定性和定量分析,测定结果无显著性差异.结论 IC法线性范围宽,前处理简单,建议作为《生活饮用水标准检验方法消毒副产物指标》(GB/T 5750.10-2006)二氯乙酸检测方法的补充方法.
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二氯乙酸对胎鼠中脑细胞增殖和分化的影响
氯化消毒已经成为世界各国多年来饮用水的主要消毒过程.近,大量的毒理学实验和流行病学调查结果提示,氯化消毒副产物(chlorination disinfection by-products,DBPs)对低出生体重、早产、自发性流产、死胎以及中枢神经系统均具有不同程度的损害[1].而二氯乙酸(dichloroacetic acid,DCAA)作为DBPs中非挥发性氯化副产物的主要指标,其对神经管和颅面发育损伤及透发心脏畸形具有直接的影响[2].为此,我们采用大鼠胚胎中脑神经细胞微团培养技术[3],观察DCAA对分化期神经元细胞集落形成的影响,通过细胞增殖和分化测定结果来判断DCAA的致畸作用,为进一步阐明氯化消毒饮用水中DBPs的潜在发育毒性及致畸性作用机制提供实验依据.
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二氯乙酸对ras基因的DNA损伤作用
目的 研究二氯乙酸(dichloroacetic acid,DCA)对ras基因的DNA损伤作用,探讨其致癌作用分子机制.方法 制备各ras基因外显子单链探针;DCA染毒TK6细胞,提取基因组DNA,再经RDPCR扩增,扩增产物与探针杂交显色.结果 成功制备各ras基因外显子单链探针,Southern杂交检测到DCA对N-ras基因外显子2和H-ras基因外显子2的DNA损伤片段杂交条带,未检测出其对N-ras基因外显子1和H-ras基因外显子1的DNA损伤作用.结论 DCA可造成ras基因DNA损伤,可能与其致癌作用机制密切相关,属于遗传毒性物质.
关键词： 二氯乙酸 ras基因 DNA损伤 依赖随机化末端连接物聚合酶链式反应 -
二氯乙酸对人尿路上皮细胞膀胱癌相关基因甲基化、转录和蛋白表达的影响
目的 探讨二氯乙酸对人尿路上皮SV-HUC-1细胞膀胱癌相关癌基因c-myc和抑癌基因APC、SFRP1、SFRP5甲基化、转录水平以及蛋白表达量的影响,为阐明其毒性机制提供科学依据.方法 采用CCK-8法检测二氯乙酸对SV-HUC-1细胞的细胞毒性,确定不显著影响细胞存活率的浓度及处理时间.以1和2 mmol/L浓度二氯乙酸分别对SV-HUC-1细胞染毒24、48和72 h,采用甲基化特异性PCR(MSP)和real-time PCR对细胞中c-myc、APC、SFRP1和SFRP5基因的甲基化状态和mRNA表达量进行检测.以2 mmol/L浓度二氯乙酸对SV-HUC-1细胞染毒72 h,采用Western blot 对c-myc蛋白进行蛋白表达量检测.结果 二氯乙酸可使SV-HUC-1细胞中c-myc基因非甲基化程度升高,mRNA和蛋白表达量上升;可使APC、SFRP1和SFRP5基因甲基化程度升高,mRNA表达量下降.结论 二氯乙酸可影响SV-HUC-1细胞癌基因c-myc和抑癌基因APC、SFRP1、SFRP5的甲基化和表达,提示其可能有一定的表观遗传毒性.
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离子色谱法测定饮用水中氯化消毒副产物二氯乙酸、三氯乙酸方法研究
目的:研究饮用水中氯化消毒副产物二氯乙酸(DCAA)和三氯乙酸(TCAA)的离子色谱测定方法.方法:采用阴离子分析柱(250×4mmid),淋洗液浓度梯度洗脱,对水中氯化物含量较低的样品可直接测定,对水中氯化物含量较高的样品用Ag+/H+复合小柱预处理后测定.结果:方法定量检出限5μg/L;线性相关系数大于0.999;高、中、低浓度加标回收率DCAA 为99.8%-101.1%,TCAA 为96.8%-102.0%.结论:离子色谱法直接进样测定水中DCAA和TCAA各项技术指标均能满足卫生标准要求.
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MEBO治疗尖锐湿疣147例临床报告
目的:观察MEBO治疗尖锐湿疣的效果.方法:用二氯乙酸涂抹疣体表面15分钟,再用生理盐水擦洗,即于疣体表面及带部涂MEBO.136例患者每6小时～8小时给药一次,8病例每12小时用药一次,疣体较大范围较广泛的3例患者,增加换药次数,并行分期治疗.结果:每日接受3次换药治疗者4天～6天痊愈,每12小时治疗一次的病例半月内痊愈,并经随访观察,未见复发.结论:MEBO对尖锐湿疣有良好地的治疗作用.
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二氯乙酸眼部烧伤25例临床分析
我院自2001年1月～2002年3月共收治二氯乙酸(CH2C1-CHClOOH)眼部烧伤25例(31眼),其中门诊治疗22例(25眼),住院治疗3例(6眼),通过综合疗法均取得良好的治疗效果,现报告如下:
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饮水氯化消毒副产物的氯乙酸类化合物的DNA损伤效应
目的研究二氯乙酸(DCA)和三氯乙酸(TCA)的DNA损伤效应.方法分别以10、20、40μg/ml DCA和10、20、40、80 μg/ml TCA染毒V79细胞和昆明种小鼠肝原代细胞,染毒1 h后进行彗星试验.电泳结束后,溴化乙啶(EB)染色,在荧光显微镜下观察、计数拖尾细胞的尾长.结果DCA在10～40 μg/ml、TCA在10～80 μg/ml时,各试验组V79细胞的平均尾长均大于阴性对照组尾长,差异均有统计学意义(均P＜0.01).DCA为20～80μg/ml、TCA为10～80μg/ml时,各试验组肝原代细胞的平均尾长均大于阴性对照组尾长,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论DCA和TCA可以造成哺乳动物细胞DNA链断裂损伤,其致癌作用可能通过损伤DNA引发,均可能属遗传毒性致癌物.
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全国实验室生活饮用水中二氯乙酸检测的能力验证结果分析
目的 通过能力验证计划,对全国实验室的生活饮用水中二氯乙酸含量检测能力进行分析和评价.方法 能力验证计划中使用的被测样品参考二级标准物质制备方法制备,采用单因子方差分析法和线性拟合趋势分析法分别对其进行均匀性检验和稳定性检验.将参加能力验证的全国174家实验室提交的结果进行迭代稳健统计分析,采用z值评定各参加实验室的测试结果.结果 获得满意结果的实验室162家,结果满意率为93.1％,可疑结果的有4家,结果可疑率为2.3％,离群结果的有8家,结果离群率为4.6％.结论 能力验证统计结果表明,国内实验室的生活饮用水中二氯乙酸检测能力总体较好,少部分实验室的检测能力有待改进提高.
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游泳池水中氯化消毒副产物的离子色谱测定法
目的 建立游泳池水中氯化消毒副产物(cDBP)的离子色谱检验方法.方法 采用DIONEX ICS600型离子色谱仪,IonPac AS23阴离子分析柱及AG 23保护柱,淋洗液为4.0 mmol/L Na2CO3-0.8 mmol/L NaOH溶液,流速为1.0 ml/min,进样量为250μl,电导检测,峰面积定量.结果 测定方法线性相关性好(r2＞0.999),亚氯酸盐、氯酸盐、二氯乙酸、三氯乙酸检测限分别为0.015、0.009、0.028、0.033 mg/L,精密度在0.387％～5.58％,回收率在93.5％～110.8％.结论 该方法操作简单,灵敏度高,适用于游泳池水中cDBPs的检测,测定结果为游泳池水质安全预警提供佐证.
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小体积水样测定饮用水中二氯乙酸、三氯乙酸的含量
目的 优化生活饮用水标准检验方法,建立利用小体积水测定生活饮用水中微量二氯乙酸(DCAA)、三氯乙酸(TCAA)的气相色谱测定方法.方法 饮用水中DCAA、TCAA经过酸化、萃取、衍生后,采用气相色谱电子捕获检测器定量检测.结果 DCAA、TCAA在谱图上能够很好的分离,相关系数均大于0.999 5,回收率为94.5％ ～ 109.1％,RSD为3.1％～6.5％.结论 该方法快速,准确,灵敏度高,适用于生活饮用水的常规批量检测.
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离子色谱法测定空气中氯乙酸
作业环境空气中氯乙酸(chloroaetic acid)的测定,国外报道采用高效液相色谱法[1]、气相色谱法[2]、离子色谱法[3～5]、分光光度法[6];近年来国内报道用气相色谱法[7],该法操作简便、实用,但灵敏度较低,且所用填充柱不能将二氯乙酸、三氯乙酸等微量共存物分离测定.我们参照国内外文献对离子色谱法测定空气中氯乙酸进行了规范化研究.结果报告如下.
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离子色谱法同时测定生活饮用水中消毒副产物和除草剂方法研究
目的 建立并优化对饮用水中二氯乙酸、三氯乙酸、2,4-滴、草甘膦和灭草松5个项目同时测定的离子色谱法.方法 通过离子色谱仪采用外标法测定方法的检出限、回收率及精密度.结果 方法检出限为0.01 mg/L和0.04 mg/L,加标回收率为74.8％ ～ 111.5％,精密度为0.12％ ～ 12.65％.结论 该技术适用于生活饮用水中消毒副产物和除草剂的检测,为生活饮用水的检测提供了高效便捷的方法.
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DCA干预对缺氧复氧肥大心肌细胞能量代谢及细胞凋亡的影响
目的:探讨缺氧复氧损伤诱导体外培养的新生大鼠肥大心肌细胞凋亡及能量代谢途径变化及药物干预的作用.方法:取体外培养的新生大鼠心肌细胞,以血管紧张素Ⅱ诱导其肥大,分4组:一组于3%O2、5%CO2、92%N2三气培养箱中培养12 h,再恢复正常条件培养4h,建立缺氧复氧损伤的肥大心肌细胞模型;另三组加入二氯乙酸盐(DCA)使其终浓度分别为10-3mmol/L、10-4mmol/L和10-5mmol/L,再缺氧复氧相同时间.电镜观察肥大心肌细胞及凋亡细胞的超微结构变化,Hochest33342/PI荧光染色识别凋亡细胞;TUNEL法观察心肌细胞凋亡形态学特征,并记数凋亡心肌细胞数,检测心肌细胞凋亡率;以同位素液闪计数法测定丙酮酸脱氢酶(PDH)内碱脂酰转移酶-1(CPT-1)活性,以及葡萄糖有氧氧化率,葡萄糖酵解率和脂肪酸有氧氧化率.结果:肥大心肌细胞在缺氧12h复氧4h,TUNEL法可检测到阳性的凋亡细胞,凋亡率为(19.99±4.88)%,肥大心肌细胞缺氧培养12h后加入DCA10-3 mmol/L、10-4 mmol/L和10-5 mmol/L再复氧4h检测其凋亡率分别为(16.5±3.24)%、(17.4±3.72)%和(18.4±3.44)%;与正常心肌细胞比较,肥大心肌细胞总的PDH活性没有明显改变.但活化型PDH活性和葡萄糖氧化代谢率(GOR)显著增强,CPT-1活性和脂肪酸有氧氧化代谢率(FOR)显著降低;与对照肥大心肌细胞比较,二氯乙酸(DCA 10-3 mmol/L-DCA 110-3mmol/L)呈剂量依赖性的升高PDH活性和GOR,抑制CPT21活性,FOR和葡萄糖酵解率(glucolysis rate,GLR).结论:DCA对缺氧复氧损伤引起的肥大心肌细胞凋亡有抑制作用.肥大心肌细胞能量代谢向糖代谢转化,DCA可进一步增强糖有氧氧化代谢抑制脂肪酸代谢.
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离子色谱法测定水中二氯乙酸不确定度评定
目的 分析离子色谱法测定水中二氯乙酸不确定度的来源,建立离子色谱测定法的不确定度评价方式.方法 按照测量不确定度的评定原理,确定不确定度的来源,计算出合成标准不确定度和绝对扩展不确定度.结果 水样中二氯乙酸的浓度为0.107 mg/L时,其绝对扩展不确定度为0.004 mg/L,k=2.结论 该报告方法在实际工作中有较强的参考价值.
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二氯乙酸对膀胱癌细胞株T24增殖、凋亡的影响及其机制探讨
目的 观察二氯乙酸(DCA)对膀胱癌细胞株T24增殖、凋亡的影响,并探讨其相关机制.方法 培养T24细胞并随机分成4个组,其中实验1组、实验2组和实验3组分别加入含5、10、20 mmol/L DCA的培养基,对照组加入等量含0.1%DMSO的培养基.分别于给药24、48、72 h后采用MTT法检测细胞增殖能力.给药48 h后,行Hoechst33258荧光染色观察并计数凋亡细胞,采用JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位,采用Western blotting法检测各组细胞中的Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白.结果 实验1、2、3组给药24、48、72 h细胞增殖能力均低于对照组,且随着DCA作用时间浓度增大、给药时间延长,细胞增殖抑制越明显(P均<0.05).实验1、2、3组凋亡细胞数均高于对照组,线粒体膜电位均低于对照组(P均<0.05).实验1、2、3组细胞中Bax、Caspase-3相对表达量高于对照组,Bcl-2相对表达量低于对照组(P均<0.05).结论 DCA可抑制膀胱癌细胞株T24的增殖并诱导其凋亡,推测作用机制与线粒体膜电位降低、Bcl-2表达下调及Bax、Caspase-3表达上调有关.
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气相色谱法测定饮用水中二氯乙酸、三氯乙酸
目的:通过优化卤乙酸衍生化条件和改进色谱条件,建立一种快速测定饮用水中消毒副产物二氯乙酸(DCAA)、三氯乙酸(TCAA)的检验方法.方法:水样经过硫酸酸化,甲基叔丁醚萃取,甲醇酯化衍生,用带电子捕获器的气相色谱进行测定.结果:DCAA在线性范围1μg/L～100 μg/L,TCAA在线性范围0.5μg/L～50 μg/L线性关系良好,线性相关系数均＞0.999,加标回收率在82％～117％,相对标准偏差(RSD)＜10％.结论:该方法操作简单,快速,重现性好,适用于水中二氯乙酸、三氯乙酸含量的测定.
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呼和浩特市生活饮用水中二氯乙酸,三氯乙酸含量测定
目的:建立测定水中二氯乙酸、三氯乙酸的气相色谱测定方法.了解了呼和浩特市枯、丰水期的水源水、出厂水中的二氯乙酸、三氯乙酸含量情况.方法:水中的微量二氯乙酸、三氯乙酸经液-液萃取衍生后,用HP-5毛细管色谱柱,在程序升温条件下进行气相色谱分析,以保留时间定性,内标法定量.结果:二氯乙酸的线性范围为0.0 μg/L ～ 150.0 μg/L,低检出浓度为0.0010 mg/L,三氯乙酸的线性范围为0.0 μg/L ～ 75.0 μg/L,低检出浓度为0.0005 mg/L,相关系数均≥0.9990,水样加标回收率为76.0％ ～91.3％,RSD为4.8％～7.9％.结论:方法仅用21.5 min完成饮用水中二氯乙酸和三氯乙酸的测定,操作简便、灵敏度高.
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离子色谱法测定表面活性剂中的一氯乙酸和二氯乙酸
目的 建立表面活性剂中一氯乙酸和二氯乙酸的离子色谱检测法.方法 利用Metrohm 882离子色谱仪,选用Metrosep A Supp5阴离子色谱分析柱,进样体积20μl,3.2 mmol/L Na2CO3和1.0 mmol/L NaHCO3混合溶液做流动相,流速0.7 ml/min,电导检测器,0.45 μm滤膜过滤后直接进样.结果 本法相关性r＞0.999,一氯乙酸和二氯乙酸的低检出限分别为0.002 mg/L和0.005 mg/L,相对标准偏差在1.12％～ 3.35％,回收率在92.4％～ 103.5％.结论 本法具有简便快速,灵敏准确及安全实用的特点,适合表面活性剂中一氯乙酸和二氯乙酸的检测.
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免试剂离子色谱法测定饮水消毒副产物二氯乙酸、三氯乙酸
目的 建立离子色谱法快速测定饮水消毒副产物二氯乙酸和三氯乙酸的方法.方法 选用Ionpac AS19阴离子分析柱,在线产生8mmol/L～ 45 mmol/L KOH为淋洗液,梯度淋洗,流速0.8 ml/min,电导检测器检测,进样体积500μl.结果 二氯乙酸和三氯乙酸在0 mg/L～ 0.20 mg/L范围内线性良好,精密度高(RSD＜％4.0),二氯乙酸相关系数0.9991,回收率在90.5％ ～ 99.4％之间,低检出限为1.22 μg/L;氯酸盐相关系数0.9995,回收率在86.5％ ～97.0％之间,低检出限为1.90 μg/L.结论 方法简单、快速、灵敏,可适用于饮水消毒副产物二氯乙酸和三氯乙酸的检测.
