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  • 二黄方对EAE大鼠急性期血浆MCP-1、TNF-α水平的影响

    作者:樊永平;周莉;王蕾;龚海洋;叶明

    目的 探讨二黄方对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠急性期血浆单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法 用MBP免疫Lewis大鼠诱导EAE模型,随机分为模型组、激素组、中药组及空白组,分别在造模后第7天、14天采集血样,检测血浆MCP-1、TNF-α水平.结果 模型组血浆MCP-1、TNF-α水平在免疫后第7天升高,免疫后第14天达高峰,显著高于正常组(P<0.01);造模后第14天,激素组血浆MCP-1、TNF-α水平低于模型组(P<0.05);造模后第14天,中药组血浆TNF-α水平低于模型组和激素组(P<0.05).结论 二黄方可减轻EAE疾病严重程度,可能通过下调急性期血浆TNF-α水平发挥治疗EAE的作用.

  • 中药成分与复方防治实验性自身免疫性脑脊髓炎的研究进展

    作者:叶明;樊永平

    多发性硬化(multiple sclerosis,MS),是中枢神经系统自身免疫性脱髓鞘疾病,其确切病因及发病机制尚不明确,较公认的观点认为MS可能是遗传易患个体与环境因素相互作用而发生的CNS自身免疫性疾病,其以高复发率、高致残率严重威胁着人类的健康[1].实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)是实验动物由神经组织或其中的成分,或病毒诱导产生的,由免疫细胞介导的,局限于CNS内反应的迟发性超敏反应型自身免疫病[2].

  • 补肾益髓方促进实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠髓鞘再生的作用

    作者:王永强;师一民;安辰;赵晖;李明;齐放;张秋霞;陈振振;樊永平;王蕾

    目的:观察补肾益髓方促进实验性自身免疫性脑脊髓炎( experimental autoimmune en-cephalomyelitis,EAE)小鼠髓鞘再生的作用。方法80只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照、模型、醋酸泼尼松及补肾益髓方组。以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白( myelin oligodendroglia glycoprotein, MOG)35-55诱导小鼠EAE模型。治疗组小鼠每天给予相应药物灌胃治疗,共40天,醋酸泼尼松为阳性对照药物。每天观察动物的一般情况,记录小鼠神经功能评分,统计小鼠的发病率、潜伏期、病程和疾病负荷等。取小鼠脑和脊髓经固蓝染色观察其髓鞘变化,免疫组化法测定髓鞘再生相关蛋白硫酸软骨素蛋白多糖2胶质细胞和髓鞘碱性蛋白( myelin basic protein,MBP)的表达。结果补肾益髓方能够延长小鼠发病潜伏期、缩短EAE病程、降低小鼠疾病负荷(P<0.05),减少小鼠脑和脊髓内炎细胞浸润和髓鞘脱失;本方还可促进NG2和MBP蛋白的表达(P<0.01)。结论补肾益髓方对EAE小鼠有神经保护作用,并能减轻髓鞘损伤和促进髓鞘修复。

  • 痰热清注射液对实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠炎性因子及炎性损伤影响的研究

    作者:樊永平;杨涛;郑琦;王蕾;袁春晓;房玲

    目的:观察痰热清注射液对实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental allergic enceph-alomyelitis,EAE)小鼠炎性损伤的影响,应用HE染色、ELISA方法检测炎性浸润程度及炎性因子含量,从组织、分子层面揭示痰热清注射液治疗多发性硬化的科学内涵,为中医治疗多发性硬化提供科学依据。方法 SPF级C57BL/6雌性小鼠100只,将小鼠随机分为正常组,模型组,激素组,痰热清注射液大剂量组,痰热清注射液小剂量组。模型及治疗组注射 MOG35-55抗原乳剂及 PTX诱导EAE。免疫当天痰热清注射液组进行腹腔注射治疗,激素组在发病后进行激素灌胃治疗。其余均以生理盐水代替。观察小鼠行为学的变化,在急性期及缓解期取小鼠大脑组织,HE观察病理组织学改变ELISA检测IL-17A等炎性因子的表达。结果(1)造模各组小鼠从免疫第8天开始发病,发病率为100%,痰热清注射液小剂量组发病潜伏期低于痰热清注射液大剂量组(P<0.05)。造模各组在第21天达到高峰,模型组高,神经功能评分达到2.35。痰热清注射液大剂量组及激素组评分低,与模型组相比有统计学意义(P<0.01)。(2)HE染色光镜下显示EAE模型各组在第21天可见大脑内小血管周围炎性细胞浸润和神经细胞核固缩,以第三脑室及侧脑室周围为主,大量的淋巴细胞聚集在血管周围,并形成典型的袖套状改变。第40天炎症浸润较第21天炎症浸润有所缓和。(3)痰热清注射液对EAE小鼠炎性因子的影响:ELISA统计结果发现:痰热清注射液小剂量组可以有效的抑制IL-6、IL-10、IL-17A、IL-23、TGF-β1多种细胞因子的表达(P<0.05)。结论痰热清可以有效的减少EAE的炎症反应及炎性因子的表达,从而抑制EAE的炎性进程。

  • 益肾达络饮对EAE小鼠小胶质细胞活化的影响

    作者:朱文浩;刘璐;董兴鲁;房位昊;郭盛楠;高颖

    目的:研究益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠小胶质细胞活化的影响.方法:将48只雌性SJL(8-12周龄)小鼠随机分为4组,即正常组、模型组、中药组和激素组,每组各12只.除正常组外,其余各组小鼠上腹部分两点皮下注射抗原乳剂200μL(含PLP139-151 150μg、H37RA 400μg),记为第1天;分别在第1天和第3天给予每只小鼠尾静脉注射百日咳杆菌液100 μL(含百日咳杆菌0.6×106个);造模的第7天给药,正常组和模型组灌胃给予生理盐水(0.1 mL/10 g),中药组灌胃给予益肾达络饮(0.2 g生药/10 g),激素组灌胃给予泼尼松药液(0.039 mg/10 g),共干预15天.免疫后每天记录各组小鼠的神经功能评分.采用免疫组化和Western blot法测定EAE小鼠脑组织内钙离子连接蛋白-1(Iba-1)的表达.结果:与模型组比较,中药组和激素组EAE小鼠的神经功能评分明显降低,发病时间明显延迟(P<0.05);Iba-1的表达明显降低(P<0.05).与正常组比较,模型组、中药组和激素组EAE小鼠Iba-1的表达明显升高(P<0.05).结论:小胶质细胞的激活参与了EAE的发病,益肾达络饮可通过抑制小胶质细胞的激活降低EAE小鼠的神经功能评分,延迟发病时间,但其具体抑制机制需进一步研究.

  • ERK1/2通路及其介导多发性硬化发病的研究进展

    作者:李鑫;朱文浩;高颖

    丝裂原活化蛋白激酶1/2(ERK1/2)通路是第一个被发现的细胞信号转导通路,由Ras、Raf、MEK1/2和ERK1/2组成.ERK1/2通路激活后可以将细胞外信号从细胞膜转到细胞核,参与了细胞的多种生理病理功能,如细胞的生长、增殖、分化和凋亡等,并且与多种疾病的发病有关,包括多发性硬化(MS)和实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE).ERK1/2通路的激活可以引起星形胶质细胞、MG、T细胞、巨噬细胞等活化,释放多种炎性因子,引起髓鞘损伤,导致MS/EAE的发病.多项研究表明,通过抑制ERK1/2通路可以减少炎性因子的释放,减轻髓鞘损伤,改善MS/EAE的病情,为治疗MS药物的开发提供了重要的靶点.

  • 补肾益髓方及其拆方对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑和脊髓中p-Tau和Beta-tubulin表达的影响

    作者:师一民;王永强;安辰;赵晖;齐放;张秋霞;陈振振;樊永平;李明

    目的:观察补肾益髓(Bu Shen Yi Sui,BSYS)方及其拆方补肾(Bu Shen,BS)和化痰活血(Hua Tan Huo Xue,HTHX)方对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE)小鼠脑和脊髓中p-Tau和Beta-tubulin的作用.方法:C57 BL/6小鼠雌性随机分为正常对照(NC)、模型(MO)、醋酸泼尼松(PA)、梓醇(CA)、BSYS、BS和HTHX组.造模当天与造模后第7天于小鼠背部两侧皮下注射抗原,即50 μg髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)3565、完全弗氏佐剂(CFA)与结核分支杆菌(TB)混合,并在免疫当天和2d后腹腔注射500 ng的百日咳毒素(PTX).每天对小鼠进行灌胃,观察其体重及神经功能评分,并于造模第20 d和第40d分别取脑和脊髓进行病理检测.采用免疫组化法检测p-Tau和beta-tubulin的表达.结果:与MO组比较,BSYS、BS和HTHX组体重与神经功能评分均出现明显上升,HE染色可观察到炎细胞显著减少,核固缩减轻,同时,BSYS、BS和HTHX方均可明显下调p-Tau表达(P<0.05,P<0.01),上调beta-tu-bulin蛋白表达(P<0.05,P<0.01).结论:BSYS方及其拆方BS和HTHX均对EAE小鼠有神经保护作用,表现在减少体重丢失,降低神经功能评分,减轻炎炎性细胞浸润,减轻轴突损伤及促进其修复,尤以BSYS全方更为显著.

  • 补肾益髓方及其拆方对自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑和脊髓中BDNF/TrkB的影响

    作者:师一民;王永强;安辰;赵晖;李君玲;齐放;张秋霞;陈振振;樊永平;李明;王蕾

    目的:观察补肾益髓(Bu Shen Yi Sui,BSYS)方及其拆方补肾(Bu Shen,BS)和化痰活血(Hua Tan Huo Xue,HTHX)方对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE)小鼠脑和脊髓中脑源性神经营养因子(Brain-derived Neurotrophic Factor,BDNF)与受体TrkB的影响.方法:将EAE造模小鼠于当天和第7天背部皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein,MOG)35-55抗原,并在免疫当天和第2天后腹腔注射百日咳毒素(Pertussis toxin,PTX).每日对小鼠进行不同药物的灌胃,并于造模第20和40天分别取脑和脊髓,采用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)与Western Blot法检测BDNF和TrkB的表达.结果:BSYS及其拆方BS方与HTHX方均可明显上调EAE小鼠脑和脊髓BDNF和TrkB mRNA与蛋白的表达,与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).BSYS方作用优于其BS与HTHX方,但差异无统计学意义(P>0.05).结论:BSYS及其拆方促进轴突修复的作用可能与增强BD-NF/TrkB表达有关,BSYS全方更有显著趋势.

  • 益肾达络饮对EAE小鼠p-JNK1/2,JNK1/2,COX-2的影响

    作者:朱文浩;刘璐;高颖

    目的:研究益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠磷酸化c-Jun氨基末端激酶1/2(p-JNK1/2),c-Jun氨基末端激酶1/2(JNK1/2)及环氧合酶-2(COX-2)的影响.方法:将48只雌性SJL小鼠(8~12周龄)随机分为4组,即正常组、模型组、益肾达络饮组和泼尼松组,每组各12只.在模型组、益肾达络饮组和泼尼松组每只小鼠上腹部,分两点ih抗原乳剂200 μL[含髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP)139-151150 μg,H37 Ra 400 μg],记为第1天;分别在第1天和第3天给予每只小鼠尾静脉注射百日咳杆菌液100 μL(含百日咳杆菌0.6×106个).造模的第7天给药,正常组和模型组给予生理盐水10 mL·kg-1ig,益肾达络饮组给予益肾达络饮生药量20 g·kg-1ig,泼尼松组给予泼尼松药液3.9 mg· kg-1ig,共干预15d.免疫后每天记录各组小鼠的神经功能评分;Western blot法测定EAE小鼠脑组织内p-JNK1/2,JNK1/2,COX-2的表达.结果:与正常组比较,模型组EAE小鼠的神经功能评分明显升高(P<0.01),p-JNK1,p-JN K2和COX-2的表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,益肾达络饮组和泼尼松组明显降低EAE小鼠的神经功能评分(P<0.05),明显降低p-JNK1,p-JNK2和COX-2蛋白表达的水平(P<0.05,P<0.01);泼尼松组COX-2的表达水平低于益肾达络饮组(P<0.05).结论:JNK1/2通路和COX-2与EAE的发病有关,益肾达络饮可通过降低p-JNK2和COX-2的表达降低EAE小鼠的神经功能评分,但其具体的机制需进一步探讨.

  • 苦参素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠CCL2,CCR2 mRNA表达的影响

    作者:潘清霞;吕莹;张晓坚;赵晓玉;吕鹏;张光先;朱琳

    目的:观察目前国际上公认的人类多发性硬化(MS)的理想动物模型-实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠模型脊髓中单核细胞趋化蛋白2(CCL2),单核细胞趋化蛋白受体2(CCR2) mRNA表达,探讨苦参素对EAE大鼠的保护作用,为临床应用提供依据.方法:将50只雌性Wistar大鼠随机分5组,分别为正常组,模型组,苦参素低、高剂量组(150,250 mg· kg-),地塞米松组(1 mg·kg-1),每组10只,自免疫当天起连续给药16d,同期正常组、模型组ip等量生理盐水,观察记录大鼠的临床症状,并检查组织病理学变化,采用RT-PCR法检测脊髓中CCL2,CCR2 mRNA的表达.结果:与模型组比较,苦参素有效延迟EAE大鼠的发病时间,明显降低临床神经功能学评分(P<0.01),改善EAE大鼠中枢神经系统炎症浸润(P<0.01)和髓鞘脱失(P<0.01)程度,下调脊髓中CCL2,CCR2 mRNA的表达(P<0.01,P<0.01).结论:苦参素对EAE大鼠有防治作用,其作用机制可能与下调大鼠脊髓中CCL2,CCR2 mRNA的表达有关.

  • 益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎TNF-α的影响

    作者:关东升;高颖

    目的:研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的作用,观察中药复方益肾达络饮干预EAE的疗效,探讨其治疗EAE的作用机制.方法:选用雌性SJL/J小鼠95只,随机分为正常组、泼尼松3.9 mg·kg-1组、益肾达络饮20 g·kg-1组、益肾达络饮20 g·kg-1加泼尼松3.9 mg·kg-1组,从开始造模后7d开始ig给药,连续15 d,从急性期、复发期采用免疫蛋白印迹法、免疫组化法测定EAE小鼠中枢神经组织中TNF-α蛋白表达的变化.结果:益肾达络饮能降低EAE的复发率(P<0.05),改善EAE模型小鼠神经功能评分(P<0.05).与模型组相比,泼尼松3.9 mg·kg-1组、益肾达络饮20 g·kg-1组、益肾达络饮20 g·kg-1加泼尼松3.9 mg·kg-1组中枢神经组织TNF-α表达水平明显降低(P<0.05).结论:降低TNF-α的表达水平,有助于缓解EAE病损程度;益肾达络饮能降低EAE的复发率,有效改善EAE小鼠神经功能损伤;醋酸泼尼松和益肾达络饮调节TNF-α的表达水平可能是治疗EAE的机制之一.

  • EAE小鼠中枢神经系统中CD11b mRNA的变化及益肾达络饮对其的影响

    作者:吴彦青;高颖;朱陵群;娄丽霞;张冬梅

    目的:观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠不同发病时期脑和脊髓组织中CD11b mRNA的表达变化,明确益肾达络饮的干预机制.方法:采用MOG35-55抗原免疫C57BL/6小鼠诱导EAE模型,随机选取分为正常组,佐剂组、模型组、醋酸泼尼松3.9 mg·kg-1组、益肾达络饮20 g·kg-1组,在造模后第7天开始灌胃给药,直到相应时间点进行取材.采用实时荧光定量PCR测定免疫后7d(发病前期)、14 d(发病初期)、24 d(发病急性期)、40 d(慢性持续期)4个不同时间点EAE小鼠脑和脊髓组织中CD11b mRNA表达的变化.结果:与正常组比较,在免疫后14,24,40d,模型组EAE小鼠大脑中CD11b mRNA表达分别升高至2.39±1.09,3.20±1.14,1.58±0.36(P <0.05).与模型组比较,在免疫后40 d激素组和益肾达络饮组EAE小鼠大脑中CD11b mRNA的表达水平明显降低(P<0.05);与正常组比较,激素组、益肾达络饮组在免疫后40 d CD11b mRNA在EAE小鼠大脑中表达水平无显著改变;在免疫后14 d激素组EAE小鼠脊髓中CD11b mRNA的表达水平明显降低.结论:单核细胞是实验性自身免疫性脑脊髓炎的潜在调节细胞;中药复方益肾达络饮干预EAE的作用机制与中枢神经系统单核细胞黏附分子CD11b的调节密切相关.

  • 六味地黄和金匮肾气丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠淋巴细胞亚群和NK细胞的影响

    作者:刘妍;王蕾;赵晖;穆阳;李梦园;李明;齐放;王义周

    目的:观察六味地黄丸和金匮肾气丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠淋巴细胞亚群和自然杀伤(NK)细胞的影响.方法:皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)与完全弗氏佐剂(CFA)混合的抗原,辅以腹腔注射百日咳毒素(PTX),建立EAE模型.每天记录各组小鼠体重及神经功能评分;造模后第12,25及40天,用流式细胞仪检测小鼠外周血淋巴细胞亚群及NK细胞;取各组小鼠脑和脊髓,进行病理观察.结果:模型组小鼠造模后第9天开始陆续发病,第22天达到高峰,神经功能评分为4.0分,体重明显降低,淋巴细胞亚群中CD8+明显降低,CD4+/CD8+比值明显升高,NK细胞水平明显降低.各治疗组小鼠的神经功能评分均比模型组降低,病程缩短,CD8+,CD4+/CD8+比值及NK细胞水平基本调节至正常.病理观察发现模型组小鼠大脑和脊髓病变表现为小静脉周围炎性细胞浸润形成袖套样改变及神经核固缩.激素组、六味地黄丸组和金匮肾气丸组均有不同程度减轻,病灶区域的炎性浸润细胞数较少,袖套样改变少见.结论:六味地黄丸和金匮肾气丸均有防治EAE的作用.其作用机制可能与调节细胞免疫系统有关.六味地黄丸在改善EAE小鼠体重、神经评分及调节细胞免疫等方面要优于醋酸泼尼松和金匮肾气丸.

  • 黄芪糖蛋白对EAE小鼠的神经保护作用及其修复机制分析

    作者:邢雁霞;刘斌钰;赵一锦;张丽红;张光先;薛慧清;马存根;章培军

    目的:观察黄芪糖蛋白(HQGP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的保护作用,并探讨其神经修复机制.方法:复制髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)多肽诱导的小鼠EAE模型,20只C57BL/6雌性小鼠随机分为EAE组和HQGP组.HQGP组于免疫后第3日起,按1 mg·kg-1 ·d-1腹腔注射HQGP,持续给药18d.通过五级临床症状评分和小鼠体质量变化观察HQGP对EAE小鼠的干预效应;取小鼠脊髓进行苏木精-伊红(HE)和固蓝(LFB)染色观察HQGP的神经保护作用;免疫组织化学法检测小鼠脊髓白细胞分化抗原(CD)68+巨噬细胞的浸润以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS),微管相关蛋白2(MAP-2)和神经元核抗原(NeuN)的表达;免疫荧光组织化学双染法检测小鼠脊髓CD11b+细胞和趋化因子配体-5(CCL-5)的表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠脾脏单个核细胞(MNC)培养上清液中相关细胞因子的变化.结果:HQGP有效缓解EAE小鼠的临床症状,推迟发病时间,减轻中枢神经系统的炎性反应和髓鞘脱失;HQGP能减少小鼠脊髓CD68+巨噬细胞和CD11b+细胞的数量,抑制脊髓iNOS和趋化因子CCL-5的表达,增加MAP-2和NeuN的表达水平;HQGP能明显降低EAE小鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-6的分泌,促进IL-10和γ-干扰素(IFN-γ)的分泌.结论:HQGP具有治疗EAE的潜在作用,其神经保护机制与抑制炎症反应、调控免疫细胞表达及细胞因子的分泌、减轻髓鞘脱失并促进轴突修复和神经元发育有关.

  • 左归丸和右归丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠中枢神经系统IFN-γ、MMP-9免疫组化表达的影响

    作者:樊永平;宋丽君;龚海洋;王蕾;叶明;周莉

    目的:观察大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型脑、脊髓组织干扰素γ(IFN-γ)与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)免疫组化的表达,探讨滋阴补肾法(左归丸)与温阳补肾法(右归丸)治疗EAE的作用机制.方法:用髓鞘碱性蛋白(MBP)免疫Lewis大鼠诱导EAE模型,120只大鼠随机分为正常组、模型组、激素组、左归丸组及右归丸组,每组24只.正常对照组和模型组给予生理盐水灌胃,3mL/(只·d);激素组免疫后给予生理盐水灌胃,3mL/(只·d),发病后改为醋酸泼尼松混悬液灌胃,5 mg·kg~(-1)·d~(-1);左归丸组免疫后给予左归丸混悬液,2mg·kg~(-1)·d~(-1);右归丸组免疫后给予右归丸混悬液.3mg·kg~(-1)·d~(-1).直至处死.分别于急性期(免疫后15d)和缓解期(免疫后27d)随机选取各组大鼠,取脑组织切片进行IFN-γ、MMP-9免疫组化染色.结果:在造模后15d和27d,模型组大鼠脑和脊髓IFN-γ、MMP-9表达染色IOD值均较正常组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);各治疗组IFN-γ的IOD值在给药后减低,同模型组相比差异均有统计学意义(P<0.05).造模后左归丸组MMP-9表达较模型组明显减少,差异有统计学意义(P<0.01).造模后27d,左归丸组脑和脊髓组织MMP-9表达较模型组显著降低(P<0.01),且左归丸组脑组织中MMP-9表达染色IOD值较免疫后15d显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);右归丸组MMP-9表达较免疫后15d明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论:左归丸和右归丸可下调EAE大鼠中枢神经系统IFN-γ、MMP-9表达,其中左归丸可下调急性期MMP-9表达,右归丸可下调缓解期MMP-9表达来治疗EAE.

  • 梓醇配伍大黄酸对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠大脑内髓鞘碱性蛋白的影响

    作者:杜宗攀;杨涛;康越之;程翠翠;王静文;樊永平

    目的:探讨梓醇配伍大黄酸对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠神经保护作用及髓鞘碱性蛋白(MBP)表达的影响.方法:C57BL/6j小鼠随机分为正常组、模型组、激素组、梓醇大黄酸组,以MOG35-55多肽免疫诱导产生EAE.HE染色观察炎性浸润情况,透射电镜观察髓鞘脱失及轴突损伤情况,免疫组化检测MBP的表达情况.结果:梓醇配伍大黄酸能够减少EAE小鼠外观行为改变率、降低死亡率,延长外观行为改变潜伏期;改善其临床症状和神经功能评分,在第20天和第40天,梓醇大黄酸组评分与模型组同期比较具有显著差异(P<0.05).脑组织病理学检查结果显示:HE染色下各治疗组急性期和缓解期的炎性反应程度有所减轻;透射电镜下各治疗组髓鞘环形层状结构松散变形程度较模型组减轻;正常组MBP平均光密度值显著高于其他各组(P<0.05);急性期与缓解期,激素组、梓醇大黄酸组MBP平均光密度值显著高于模型组同期(P<0.05).结论:梓醇配伍大黄酸能减轻EAE小鼠炎性反应,减轻EAE小鼠病理改变,缓解EAE小鼠髓鞘损伤.

  • 补肾益髓方及其拆方对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的神经保护作用及NF200和CSPGs表达的影响

    作者:安辰;王永强;师一民;赵晖;李明;齐放;张秋霞;陈振振;樊永平

    目的:观察补肾益髓(BSYS)方及其拆方补肾(BS)和化痰活血(HTHX)方对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的神经保护作用及脑和脊髓神经丝蛋白(NF) 200和硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)表达的影响.方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型组、醋酸泼尼松组、梓醇组、BSYS组、BS组和HTHX组.各造模小鼠以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG) 35-55诱导EAE模型.各治疗组小鼠每日予相应药物灌胃,共40d.醋酸泼尼松和梓醇为阳性对照药物.每日观察小鼠神经功能评分.取小鼠脑和脊髓,HE染色观察其病理变化,透射电镜观察轴突和髓鞘变化,免疫组化法测定NF200和CSPGs蛋白表达.结果:发病第25-40天,BSYS方和BS方明显降低小鼠神经功能评分(P<0.05,P<0.01);第37--40天,BSYS方优于BS方(P<0.05).BSYS方及BS方可明显减轻小鼠脑和脊髓内炎细胞浸润评分(P<0.05,P<0.01);降低髓鞘/轴突面积比值(P<0.05,P<0.01),明显减轻髓鞘及轴突损伤;升高NF200蛋白表达(P<0.05,P<0.01);下调CSPGs表达(P<0.05,P<0.01).HTHX方只升高NF200蛋白表达(P<0.05).结论:补肾益髓方及其拆方补肾方具有明显的神经保护作用.并通过上调NF200及下调CSPGs促进轴突修复及再生,化痰活血方的作用不明显.

  • 左归丸与右归丸对EAE大鼠淋巴细胞亚群和NK细胞的影响

    作者:叶明;樊永平;王蕾;龚海洋;周莉;王雅杰

    目的:通过观察左归丸与右归丸对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型(EAE)的影响,了解两者作用机制的异同.方法:应用髓鞘碱性蛋白与完全福氏佐剂按体积比1:1制成抗原并于Lewis大鼠双后足垫下注射,建立EAE模型.通过流式细胞仪技术观察淋巴细胞亚群及NK细胞水平.结果:造模后第15天,左归丸组CD4+细胞显著升高(P<0.05);模型组CD4+/CD8+比值高于正常组(P=0.052).造模后第27天,模型组CD4+/CD8+比值明显升高(P<0.05);左归丸组CD4+/CD8+比值明显降低(P<0.05);左归丸组和右归丸组NK细胞明显升高(P<0.05).结论:EAE大鼠CD4+/CD8+比值升高,这在EAE发病中发挥重要作用.滋阴补肾法可上调急性期CD4+细胞水平,下调缓解期CD4+/CD8+比值来治疗EAE.左归丸与右归丸可下调急性期NK细胞水平,上调缓解期NK细胞水平治疗EAE.

  • 益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠细胞外信号调剂激酶1/2通路的影响

    作者:朱文浩;高颖;刘璐

    目的:研究益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠ERK1/2通路的影响.方法:将60只雌性SJL小鼠随机分为5组,即正常组、模型组、中药组、西药组和PD98059组,每组各12只.模型组、中药组、西药组和P D98059组分两点皮下注射抗原乳剂共200μL(含PLP139-151150μg、H37Ra 400μg);分别在造模第1天、第3天再给予每只小鼠尾静脉注射百日咳杆菌液100μL(含百日咳杆菌0.6×106个).造模第7天给予相应药物治疗,共干预15d,免疫后每天记录各组小鼠的神经功能评分.用Western blot法测定EAE小鼠脑组织内Ras、p-c-Raf、c-Raf、p-MEK1/2、MEK1/2、p-ERK1/2和ERK1/2的表达.结果:与模型组比较,中药组、西药组和 PD98059组EAE/小鼠第21天的神经功能评分显著降低(P<0.05).模型组p-c-Raf、p-MEK 1/2和p-ERK1/2的表达水平显著高于正常组(P<0.05);中药组、西药组和PD98059组p-c-Raf、p-MEK1/2和p-ERK1/2的表达水平显著低于模型组(P<0.05).名组Ras、c-Raf、MEK1/2和ERK1/2的表达水平无显著差异.结论:益肾达络饮可通过降低p-MEK 1/2和p-ERK1/2的表达抑制ERK1/2通路的激活,从而降低EAE小鼠的神经功能评分,延迟发病时间,但益肾达络饮抑制ERK 1/2通路后引起的下游生物学效应尚不明确,需进一步研究.

  • 益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎NF-κB信号传导通路的影响

    作者:关东升;高颖;娄丽霞;朱陵群

    目的:研究NF-κB信号传导通路在EAE发病中的作用,观察中药复方益肾达络饮干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的疗效,探讨益肾达络饮治疗EAE的作用机制.方法:采用免疫蛋白质印迹法、免疫组化法测定EAE小鼠中框神经组织中NF-κBp65、1κB-α蛋白表达的变化.结果:中药复方益肾达络饮能降低EAE的复发率(P<0.05),改善EAE模型小鼠神经功能评分(P<0.05).与模型组相比,激素组、中药组、中药加激素组NF-κBp65表达水平明显降低.hB-α表达水平明显升高(P<0.05).结论:在EAE中,NF-κB介导的炎性级联反应是EAE小鼠CNS炎性浸润、轴索损伤的重要原因;中药复方益肾达络饮能降低EAE的复发率,有效改善EAE小鼠神经功能损伤;中药益肾达络饮干预EAE的作用机制与对NF-κB信号通路的调节密切相关.

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