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来自腹泻合并急性肾衰病人疫区的99株E.coliO157:H7的鉴定结果分析
目的调查研究河南省2000年3月17日-7月6日发生的腹泻合并急性肾衰病人的致病菌.方法采集病人、外环境、家畜和家禽标本620份,采用免疫磁珠集菌法、CHROMAGAR-O157:H7显色培养基分离及营养肉汤增菌、rfbO157、rfbO111引物多重PCR扩增等方法进行病原菌的检测.结果分离出99份E.coli O157:H7菌株,其中rfbO157、志贺氏样毒素2(stx2)、溶血素(hlyA)、肠上皮细胞纤毛消除素(eaeA)基因和vero细胞毒性试验均阳性的有56株,其它基因组合7株,36株无毒力基因.结论99株E.coli O157:H7在CHROMAGAR-O157:H7显色培养基生长形态、颜色,生化反应及毒力基因表现等方面出现多样化,对于今后在制定对该菌的诊断标准、传染源的控制及细菌毒力学等方面的研究提供了依据.
关键词： E.coli O157:H7 免疫磁珠 多重PCR 毒力基因 -
江苏省福氏4c志贺菌病原特性及毒力基因检测
目的 了解江苏省福氏4c志贺菌生化特征、对抗生素耐药性及毒力基因携带情况.方法 采用国际金标准细菌鉴定(API)试剂条进行生化鉴定,用玻片凝集法进行血清分型,细菌药物敏感试验纸片扩散(K-B)法检测对抗生素的耐药性,聚合酶链反应(PCR)扩增ipaH、setl、sen和ial 4种毒力基因.结果 福氏4c志贺菌发酵葡萄糖、甘露醇,41.0%菌株发酵阿拉伯糖.对阿莫西林/棒酸和萘啶酸耐药率高达100.0%,氨苄西林、四环素和复方新诺明耐药率为89.7%;79.5%菌株耐受一半以上抗生素.ipaH、setl、sen、ial 毒力基因携带率分别为100.0%、100.0%、92.3%和92.3%,92.3%(36/39)菌株携带全部4种毒力基因.结论 福氏4c志贺菌多重耐药情况较为严重,敏感药物有庆大霉素、头孢类药物和诺氟沙星.菌株毒力基因携带率高,具有较强的致病性.
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118株单核细胞增生李斯特菌的毒力基因检测
目的 了解中国单核细胞增生李斯特菌(Lm)的毒力基因分布情况.方法 对Lm的6个毒力基因(hly、prfA、plcB、inlA、actA、iap)分别设计聚合酶链反应(PCR)引物,建立PCR检测方法.对hly、plcB、iap 3个基因的PCR方法进行了特异性试验.结果 对国内多个地区多种来源的118株Lm进行了PCR检测,结果表明除2株菌不含prfA基因外,其他菌株均包含6个毒力基因.PCR引物特异性试验结果表明hly、plcB、iap3个基因的PCR引物特异性良好,可用于Lm的鉴定.结论 Lm普遍具有毒力基因,具有潜在的爆发风险,应加强对其监测.
关键词： 单核细胞增生李斯特氏菌 毒力基因 PCR -
不同来源STECO157:H7生物学特性研究
目的 探讨浙江省产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7菌株PFGE分型及携带毒力基因以及耐药情况.方法 菌株生化、血清鉴定按API 20E鉴定系统;大肠杆菌O157:H7诊断血清凝集试验;采用聚合酶链反应(PCR)法检测O、H抗原及毒力基因SLT1、SLT2、Hly、eaeA;STEC O157:H7分型用脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophoresis,PFGE)方法进行;14种抗生素进行药敏试验采用K-B法.结果 5株可疑菌株经生化和血清鉴定符合O157:H7特性;毒力基因检测所有分离株SLT2、Hly、eaeA三种毒力基因均阳性而SLT1均阴性;脉冲场凝胶电泳分型结果显示,有2株菌PFGE电泳条带完全相同,其余3株菌电泳条带不同,5株菌共分为4个带型;经耐药性分析,菌株对头孢噻吩、头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星100%敏感;对复方新诺明、氨苄西林100%耐药.结论 STEC O157:H7菌株在浙江省一些地区存在,并且携带SLT2毒力基因,PFGE型别较多,同时也有人间感染病例的出现,提示应加强O157:H7监测力度,防止该菌在人间的感染和流行.
关键词： STECO157:H7 毒力基因 PFGE -
天津市蓟县小肠结肠炎耶尔森菌的带菌动物调查
目的 了解天津市蓟县动物宿主小肠结肠炎耶尔森菌的带菌情况,做好小肠结肠炎耶尔森菌感染的预防与控制工作.方法 2006年5～6月份在全县范围内开展易携带病原菌的猪、牛、羊、鸡等家禽家畜的监测工作.用冷增菌培养法进行分离培养.结果 从猪粪便中检出4株小肠结肠炎耶尔森菌,经聚合酶链反应(PCR)鉴定,其中3株菌株带有ail、ystA、yadA、virF 4种毒力基因,同时还具有O:3血清型特异性的rfbC基因,1株菌株带有ystB一种毒力基因.结论 猪为天津市该菌的动物宿主之一,猪粪可能成为食品污染的来源.
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2007-2011年江苏省南京市细菌性痢疾病原学监测结果分析
目的 对江苏省南京市2007-2011年细菌性痢疾的血清群(型)分布、耐药谱、毒力基因携带情况及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,为江苏省南京市细菌性痢疾的防控提供依据.方法 对从江苏省南京市2007-2011年各医院腹泻病患者中分离的75株志贺菌进行血清群(型)、耐药性和毒力基因检测,并进行PFGE分子分型.结果 75株志贺菌包括宋内志贺菌54株(72.0％),福氏志贺菌21株(28.0％),除2010年福氏X型为优势血清型外,其余年份宋内志贺菌为优势血清群；75株菌普遍对氨苄西林、四环素和磺胺甲恶唑耐药,耐药率在61.1％～95.2％之间；三重及以上耐药菌株占所有测试菌株的88.0％；毒力基因ipaH、Sen、setl、ial阳性率分别为100％、46.7％、24.0％、48.0％；福氏志贺菌优势毒力基因模式为Ⅰ型(66.7％),宋内志贺菌优势基因模式为Ⅶ型(61.1％)和Ⅳ型(25.9％)；宋内志贺菌分为20个PFGE基因型,其中以S7、S8、S1O三个带型为主,占宋内志贺菌的53.7％；相似度＞95％,可能来自于同一克隆系；福氏志贺菌分为17种带型,各带型较散在分布.结论 江苏省南京市志贺菌流行菌群不断变迁,宋内志贺菌有取代福氏志贺菌成为流行菌群的趋势；多重耐药现象严重；福氏志贺菌优势毒力基因模式为Ⅰ型、宋内志贺菌为Ⅶ型和Ⅳ型；PFGE型别呈现多元化流行特点.
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广州市一起非O1/O139群霍乱弧菌食物中毒分离株的病原特征分析
目的 了解2014年广州市某工厂发生的一起非O1/O139群霍乱弧菌食物中毒分离株的耐药特性及分子特征.方法 对分离到的6株非O1/O139群分离株进行生化鉴定、血清学鉴定、药物敏感性实验、毒力相关基因检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型分析.结果 6株分离株经生化鉴定、血清学鉴定为非O1/O139群.药物敏感性分析显示,6株分离株均对氨苄西林、头孢克肟、头孢拉定、阿米卡星、妥布霉素、庆大霉素和多粘菌素B耐药,对诺氟沙星、环丙沙星、复方新诺明、呋喃唑酮、四环素、吡哌酸、红霉素和氯霉素敏感.毒力基因聚合酶链反应检测结果显示,所有菌株均携带毒力表达调控基因(toxR和溶血素基因(hlyA),未检出霍乱肠毒素基因(ctxA)、毒力协同调节菌毛基因(tcpA)和肠毒素基因(ST);5株病例分离株和1株冷柜内壁分离株经限制性内切酶Not Ⅰ消化后的PFGE图谱为同一型别.结论 此次食物中毒的病原体为非O1/O139群霍乱弧菌,具有共同的遗传特征,菌株出现了多重耐药,提示应加强该类菌株的监测,防止大范围扩散或暴发流行.
关键词： 非O1/O139群霍乱弧菌 食物中毒 脉冲场凝胶电泳 毒力基因 耐药 -
2009-2014年浙江省余姚市志贺菌菌型分布及毒力基因分析
目的 了解近年来浙江省余姚市志贺菌菌型变化及毒力基因分布特征.方法 对2009-2014年监测到的82株志贺菌进行血清分型,采用6对引物IpaH、ial、set1A、set1B、sen、virA分别对志贺菌中毒力相关基因进行检测.结果 2009-2014年共检出收集到志贺菌株82株,以宋内志贺菌(42.5％)和福氏志贺菌(57.5％)为主.ipaH、ial基因的携带率为100％,set1A、set1B、sen、virA基因的携带率分别为79.3％、76.8％、96.3％和91.4％,set1基因在福氏志贺菌的携带率明显高于宋内志贺菌.结论 余姚市流行的志贺菌优势血清型每年都有变化,毒力相关基因不同菌型之间存在差异.
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一起食源性疾病暴发中的副溶血性弧菌病原学分析
目的 分析2016年夏季宁波市一起食源性疾病暴发中副溶血性弧菌的病原学特征.方法 采用血清凝集方法对所有分离菌株进行血清学分型.采用PulseNet China网络实验室的标准方法,对所有分离菌株进行脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分型,采用BioNumerics软件对菌株PFGE指纹图谱进行聚类分析;实时荧光PCR方法用于检测菌株的tdh、trh和tlh基因,MIC法检测菌株对10种抗生素的耐药性.结果 从腹泻患者粪便标本共分离到8株副溶血性弧菌.血清学分型鉴定为2株O3∶K6型,6株O4∶ KUT型.所有菌株经SfgiⅠ、NotⅠ酶切后分别分为3个和4个PFGE带型.VPAN 11.ZJNB002/VPAS12.ZJNB002带型为优势型,共4株细菌.副溶血性弧菌对10种选定的抗生素均敏感.结论 这是一起由混合血清型,并对应多种PFGE带型的多克隆副溶血性弧菌引起的食源性疾病暴发事件,应提高对多克隆副溶血性弧菌引起的混合感染性食物中毒的认识水平,防止漏检.未发现菌株对10种选定的抗生素产生耐药.
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2014-2017年烟台市腹泻病患者中致泻性大肠埃希菌的检测与病原特征分析
目的 了解烟台市腹泻病患者中致泻性大肠埃希菌(DEC)的感染状况和致病型分布特点,对社区和综合医院中两家哨点医院腹泻门诊的腹泻患者进行DEC监测,为DEC的防治提供依据.方法 采用全自动毛细管电泳仪对生化反应符合DEC特征的菌落进行聚合酶链式反应确认,根据5种DEC特征基因,确定型别.结果 在1 174例腹泻病患者的粪便中共检出生化反应鉴定为DEC的268株,进行基因确认25株,感染率为2.13％,其中肠聚集性大肠埃希菌(EAEC) 15株,占阳性菌株的60.00％,肠产毒性大肠埃希菌8株、肠致病性大肠埃希菌2株、肠出血性大肠埃希菌和肠侵袭性大肠埃希菌均未检出,毒力基因pic占53.33％,20～44岁年龄组患者检出率高(64.00％),6-10月检出率为84.00％.结论 烟台市DEC感染的致病型以EAEC为主,基因型以pic为主,DEC感染年龄主要集中在20～44岁年龄组,全年均有感染,夏秋季多发,应注意加强季节性防控.
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北京市昌平区食源性单增李斯特菌特征分析
目的 了解北京市昌平区食源性单增李斯特菌(Lm)的毒力基因携带情况、抗生素敏感性及分子特征.方法 对2010-2016年12类食品中分离的22株Lm进行血清型、毒力基因、抗生素敏感性、多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析.结果 22株Lm分为5种血清型(以1/2c、3a血清型为主);19种毒力基因携带谱(T1～ T19),毒力基因阳性数为6～12个;对氨苄西林、青霉素、美罗培南、复方新诺明、万古霉素和环丙沙星敏感,出现对四环素、红霉素耐药菌株;分为8个序列型(ST)(包括7个新型STA1～STA7),STA3为主要型别;分为17种PFGE带型,其相似系数为63.5％～ 100.0％,PTI为主要PFGE带型.结论 昌平区食源性Lm以1/2c、3a血清型为主,STA3为主要型别,PTI为主要PFGE带型,其毒力基因的携带具有差异性,出现对四环素、红霉素耐药株,为食源性Lm的研究提供了参考.
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2007-2011年浙江省余姚市感染性腹泻志贺菌监测结果分析
目的 了解浙江省余姚市感染性腹泻患者中志贺菌感染状况.方法 采集感染性腹泻患者的粪便或肛拭标本,进行增菌、分离、生化鉴定、血清分型、药敏试验和PCR毒力基因检测.结果 2007-2011年共检验标本1360份,检出志贺菌36株,检出率为2.65％,其中福氏2a志贺菌4株,占11.11％；福氏2b志贺菌3株,占8.33％；福氏1d志贺菌11株,占30.56％；福氏Xv志贺菌12株,占33.33％；宋内志贺菌6株,占16.67％；检出的志贺菌对多种抗生素耐药.结论 2007-2011年引起余姚市细菌性痢疾主要病原菌是福氏志贺菌,其次为宋内志贺菌；福氏志贺菌有多种血清型,其中Xv血清型分离率高；药敏试验以氨基糖苷类、喹诺酮类及部分头孢类抗生素敏感性较好；毒力基因呈现多样性.
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喜马拉雅旱獭源鹑鸡肠球菌的分离及其耐药性检测
目的 了解青藏高原喜马拉雅旱獭携带院内感染病原菌鹑鸡肠球菌情况,并检测其对临床常用抗菌药物的耐药性.方法 选择性培养基、革兰染色、生化反应和16S rRNA基因序列分析方法对细菌进行分离和鉴定;K-B纸片法检测菌株对15种抗菌药物的耐药情况,并应用PCR方法检测毒力基因和耐药基因.结果 79份喜马拉雅旱獭肠道样本中共分离到3株鹑鸡肠球菌,其中1株对利福平中介,3株均对奎奴普丁中介,对其他被检抗菌药物均敏感;未检测到常见肠球菌毒力基因(asa1、esp、hyl、gelE和cylA)和相关耐药基因.结论 首次在青藏高原旱獭粪便中分离到鹑鸡肠球菌,常见的毒力基因检测阴性,对常见抗菌药物敏感.
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浙江省非O1、非O139群霍乱弧菌快速检测与毒力基因研究
目的 建立一种快速检测非O1、非O139群霍乱弧菌方法,并对浙江省部分地区海水产品中非O1、非O139 群霍乱弧菌及其携带毒力基因开展快速检测.方法 采用三糖斜面、氧化酶实验、粘丝实验、无盐胨水等简单生化进行初筛,对全部结果阳性的菌株用聚合酶链反应(PCR)方法检测霍乱弧菌外膜蛋白OmpW以及毒力基因ctxA、hlyA和toxR.结果 按照方法用三糖斜面初筛后共有504份样本阳性,其中氧化酶、粘丝和无盐胨水全部为阳性的有434份；有388份样本OmpW PCR结果为阳性,其中ctxA结果均为阴性,toxR阳性hlyA阳性的有225株.结论 建立的快速检测方法提高了非O1、非O139群霍乱弧菌的检出率,缩短了检测时间,节约了检测成本.浙江省非O1、非O139群霍乱弧菌在海水产品中广泛存在,应对其致病性提高警惕,加强监测.
关键词： 霍乱弧菌 非O1、非O139群 快速检测 毒力基因 -
浙江省宁波地区腹泻患者中副溶血性弧菌检测与分析
目的 了解腹泻患者中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)携带、消长情况,建立分子溯源方法,发现流行优势型,分析疾病诱发因素,为控制副溶血性弧菌引起的食物中毒提供依据.方法 腹泻患者中副溶血性弧菌分离采用筛检法;采用API生化鉴定系统进行菌株鉴定;用血清凝集试验对菌株进行血清分群;药敏试验采用K-B法;利用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)进行分子分型;聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测细菌毒力基因.结果 从6216份腹泻患者标本中检出副溶血性弧菌901株,占检出致病菌的63.45％.副溶血性弧菌生物学性状典型,对氨苄西林等青霉素类抗生素的耐药率高,但对其他大多数抗生素敏感.480株副溶血性弧菌分成6个血清群,O:3血清群占72.71％,为流行优势群.根据PFGE图谱带型变化可分为19个不同的型别,其中食物中毒来源的菌株PFGE带型集中.tdh毒力基因阳性的副溶血性弧菌396株,阳性率为70.71％;trh毒力基因阳性的副溶血性弧菌79株,阳性率为14.11％;tdh、trh毒力基因均阳性的副溶血性弧菌18株,阳性率为3.21％;tdh阳性的副溶血性弧菌中有365株神奈川试验阳性,占73.14％.结论 宁波地区腹泻患者由副溶血性弧菌引起的比例较高,O3血清群为优势血清群.PFGE分型方法准确性、特异性高、重复性好、结果容易判读,分型效果更为明显,食物中毒来源的菌株带型集中,可用于确定菌株间的聚集性关系,提示传染源和传播途径,明确食物中毒是否为同一起暴发事件.患者中分离到的副溶血性弧菌大多数为带毒株,具有致病能力,与海产品和环境株不同,可用β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类等抗生素作为临床治疗用药.
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急性腹泻病患者与健康体检人员肠集聚性大肠埃希菌分子特征及耐药性研究
目的 比较急性腹泻病患者与健康体检人员肠集聚性大肠埃希菌(EAEC)在携带毒力基因、耐药性及分子分型之间的差异.方法 以PCR方法检测EAEC的7种毒力基因,微量肉汤稀释法检测菌株对13种抗菌药物的耐药性,脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型分析.结果 来自急性腹泻病患者的分离株中,毒力基因检出率高为air,体检分离株为sat.48株EAEC对13种抗菌药物中的12种均表现出不同程度的耐药,对亚胺培南完全敏感,急性腹泻病患者分离株耐药性较体检分离株强.PFGE分型共得到43种带型,均呈现高度多态性.结论 不同来源EAEC携带的毒力基因差异不显著,PFGE带型呈高度多态性,来源于腹泻病患者的EAEC耐药性明显高于健康体检人员.
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非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株血清型鉴定及主要毒力基因分析
目的 了解中国不同来源非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株血清型及主要毒力基因的流行情况.方法 采用O抗原基因簇特异性聚合酶链反应(PCR)结合全套O抗血清凝聚法确定O血清群,以PCR扩增和测序fliC基因确定H型;采用PCR方法对所有菌株进行stx1、six2、eae及ehxA基因检测.结果 434株非O157 STEC分离株中,除不可分型菌株外,共检测出82种O血清群和28种H型,其中O20∶H30、O2∶H32和O2∶ H45为优势血清型.stx1、stx2和stx1+stx23种志贺毒素基因型的检出率分别为25.35％、64.98％和9.68％,而eae和ehxA基因的阳性率分别为3.92％和32.95％.仅15株菌同时携带3种毒力基因,且主要为血清型O26∶ H11的腹泻患者分离株.结论 我国非O157 STEC分离株血清型复杂多样,同时检测eae和ehxA基因对于发现高致病潜力的菌株具有重要参考价值.
关键词： 产志贺毒素大肠埃希菌 志贺毒素 血清群 血清型 毒力基因 -
浙江省衢州市柯城区检出带毒力基因的肠出血性大肠埃希菌O157:H7
目的 了解浙江省衢州市柯城区肠出血性大肠埃希菌O157:H7人的感染、食品污染以及动物和媒介昆虫带菌情况.方法 采集腹泻患者粪便、动物粪便以及各类食品、蝇类等标本,MEC肉汤增菌后,用特异性免疫磁珠集菌,以科玛嘉显色平板分离,纯化的菌株经生化鉴定、血清分型及毒力基因检测.结果 2007年采集动物粪便标本300份,共检出O157:H7菌16株,总带菌率为5.33%,其中牛、羊、猪带菌率较高,分别为20.83%、12.70%和3.61%,腹泻患者、食品和媒介昆虫中均未检出.毒力基因检测所有分离株stx2、hly、eaeA 3种毒力基因均呈阳性,而stx1均呈阴性.结论 衢州市柯城区部分动物中存在O157:H7感染,且为产毒株,应加强O157:H7的综合监测.
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假结核耶尔森菌毒力相关基因的检测及序列分析
目的 对来自不同血清型的29株假结核耶尔森菌的主要毒力相关基因进行检测及序列分析,初步了解假结核耶尔森菌主要毒力基因的分布与变异情况.方法 应用的聚合酶链反应(PCR)技术进行血清学分型与毒力基因(inv、pYV、HPI毒力岛、ypm)检测,并对ypm基因扩增基因进行测序比较.结果 29株实验菌株均携带编码侵袭素的inv基因,15株携带毒力质粒(pYV),13株携带全部或部分HPIs基因簇,19株携带ypmA基因,1株携带ypmB基因,1株携带ypmC基因.结论 假结核耶尔森菌毒力基因的分布具有一定的多态性.
关键词： 假结核耶尔森菌 毒力基因 高致病性毒力岛 假结核耶尔森菌衍生丝裂原 -
副溶血性弧菌病原学和分子流行病学流行特征研究进展
副溶血性弧菌是导致我国细菌性食物中毒事件的首要原因.临床分离株和环境分离株的病原学特征有着明显的差异.临床分离株以O3∶K6血清型为主,tdh和(或)trh基因携带率较高,一般在80％以上,脉冲场凝胶电泳(PFGE)基因图谱具有明显的优势图谱,并且与血清分型具有一致性.而环境分离株(包括食品)多无优势血清型和优势PFGE图谱,tdh和(或)trh基因携带率远低于临床分离株,多在6％以下.各地临床分离株的耐药性差异较大,但对氨苄西林等早期药物耐药率均较高.环境分离株较临床分离株的耐药性更为严重和复杂.
