224巴西蜂胶提取物对小鼠巨噬细胞样J774.1细胞生成NO的抑制作用

黄芪对脂多糖活化小鼠巨噬细胞产生一氧化氮的影响

目的 研究黄芪经水提醇沉所得提取物及黄芪甲苷对脂多糖(LPS)活化小鼠巨噬细胞RAW 264.7细胞产生一氧化氮(NO)的影响作用,并测定提取物中黄芪甲苷的含量.方法小鼠三磷腺苷荧光试剂盒(ATPliteTM)测定黄芪提取物及黄芪甲苷对RAW 264.7细胞的毒性作用,Griss法测定样品对LPS活化RAW 264.7细胞后细胞培养液中亚硝酸盐(NO2-)的含量间接反映NO生成量,姜黄素为阳性对照.液相色谱仪测定提取物中黄芪甲苷的含量.结果 黄芪提取物在200~400 μg·mL-1、黄芪甲苷在10~20 μg·mL-1的剂量范围内均表现出显著抑制NO生成的作用(P＜0.05).每1 mg提取物中含6.1 μg黄芪甲苷,400 μg·mL-1提取物的抑制作用(其中含黄芪甲苷2.4 μg·mL-1)与20 μg·mL-1的黄芪甲苷相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论黄芪具有抑制LPS活化小鼠巨噬细胞产生NO的作用,黄芪甲苷为其效应成分之一.

芦荟及其复方提取物对RAW264.7细胞炎症因子的影响

目的:观察芦荟及其复方提取物对小鼠巨噬细胞炎症因子的影响.方法:RAW264.7细胞按2×105/mL稀释,100μL/孔接种入96孔板,药物质量浓度为250,125,62.5 g?L-1下采用噻唑蓝比色法(MTT法)作用4h,检测芦荟及其复方提取物对小鼠巨噬细胞的毒性作用；药物质量浓度为50,25,12.5 g?L-1下采用硝酸还原酶法作用24 h,测定小鼠巨噬细胞一氧化氮(N0)含量,并用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定其在单纯药物及脂多糖(LPS)1 mg?L-1诱导情况下小鼠巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)的含量.结果:芦荟及其复方提取物具有促进巨噬细胞释放NO的作用,并与药物浓度成正相关(P＜0.01)；芦荟有促进TNF-α分泌(P＜0.01)和抑制IL-10分泌(P＜0.05)的作用,其复方在LPS诱导下则对TNF-α和IL-10都有抑制作用(P＜0.01).结论:芦荟在250～7.8 g?L-1下对臣噬细胞无细胞毒性,其复方则有一定毒性；芦荟及其复方对小鼠巨噬细胞炎症因子的释放有一定影响.

人参多糖对LPS诱导小鼠巨噬细胞炎症因子生成的抑制作用及其机制

目的:研究人参多糖对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制作用及机制.方法:细胞以2×104个/mL的密度接种于6孔培养板,将细胞分为空白组,LPS组,LPS+地塞米松组,LPS加人参多糖组(质量浓度分别为31.25,62.6,125,250,500 mg·L-1).用LPS(1 mg·L-1)刺激生长良好的RAW264.7细胞24 h建立体外细胞炎症模型,Griess试剂法检测—氧化氮(NO)含量,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TN F-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测—氧化氮(NO),TNF-α和IL-6 mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞K基因结合核因子抗体核转录因子-κB(NF-κB) p65蛋白的表达.结果:与空白组比较,LPS模型组细胞因子NO,TNF-α,IL-6表达量显著升高(P＜0.01),炎症模型建立成功.给予人参多糖干预后,与LPS组比较,31.25 ～500 mg·L-1的人参多糖可以明显降低LPS诱导的RAW264.7细胞释放炎症因子NO,TNF-α和IL-6水平(P＜0.05,P＜0.01),抑制iNOS,TNF-α和IL-6 mRNA的转录(P＜0.05,P＜0.01),与LPS组比较,125 ～ 500μmol·L-可以显著抑制细胞核内NF-KB p65的表达(P ＜0.05,P＜0.01).结论:人参多糖能明显抑制巨噬细胞炎症因子NO,TNF-α和IL-6过度表达,从而抑制炎症反应,其机制可能与抑制相关炎症因子和mRNA的表达和抑制NF-κB信号通路相关.

独活挥发油对N-脂肪酰基乙醇胺水解酶的抑制作用及抗炎作用研究

目的:研究独活挥发油对内源性大麻素水解酶N-脂肪酰基乙醇胺水解酶(N-acylethanolamine-hydrolyzing acid amidase,NAAA)水解活性的影响以及对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症反应模型的抗炎作用.方法:采用水蒸气蒸馏法提取独活挥发油,GC-MS检测化学成分；采用LC-MS检测NAAA水解活性；采用LPS诱导RAW264.7细胞建立细胞炎症反应模型；采用LC-MS检测细胞内棕榈酸乙醇胺(N-palmitoylethanolamine,PEA)水平；采用实时定量PCR检测肿瘤坏子因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和白细胞介素-6(IL-6)mRNA表达；采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α含量；采用Griess法检测一氧化氮(NO)含量.结果:独活挥发油可抑制NAAA水解活性,升高LPS诱导的RAW264.7细胞内PEA水平；独活挥发油可下调LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子TNF-α,iNOS,IL-6 mRNA表达；独活挥发油可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α和NO释放.结论:独活挥发油能够抑制NAAA水解活性,升高细胞内PEA水平,降低炎症因子表达,具有一定的抗炎作用.

EV-A71感染小鼠巨噬细胞诱导促炎细胞因子和趋化因子反应

为初步探索EV-A71在小鼠巨噬细胞中的复制情况和抗病毒的固有免疫应答,本文以小鼠巨噬细胞系RAW264.7为细胞模型,通过建立EV-A71绝对定量qPCR方法检测EV-A71病毒载量;EV-A71和紫外灭活的EV-A71感染RAW264.7,不同时间点提取总RNA,RT-qPCR检测促炎细胞因子、趋化因子和模式识别受体的mRNA表达变化水平.本研究成功建立了EV-A71的绝对定量qPCR检测方法,并发现EV-A71感染RAW264.7后随着感染时间的延长,EV-A71病毒载量呈递减趋势;EV-A71和紫外灭活的EV-A71可以引起IL-1β、IL-6、TNF-α促炎细胞因子和IP-10、MCP-1、MIP-1α趋化因子反应,上调TLR2、TLR1、TLR6、MDA5和RIG-Ⅰ mRNA表达.研究结果显示,EV-A71在小鼠巨噬细胞中具有较低水平的复制,同时产生促炎细胞因子和趋化因子反应.

艾灸对小鼠巨噬细胞IL-12mRNA表达的影响

为了验证IL-12在艾灸前后的变化及探讨IL-12在艾灸抑瘤中的作用,我们观察了艾灸对小鼠腹腔巨噬细胞IL-12的诱生能力及IL-12的mRNA表达.

鼠肝炎病毒3型N蛋白Ⅰ区激活mfg12凝血酶原酶基因

目的:研究鉴定激活mfgl2凝血酶原酶基因之冠状病毒3型或A59型鼠肝炎病毒(MHV-3,MHV-A59)核心(N)蛋白的功能区域.方法:应用定点突变技术、与mfgl2启动子共转染实验明确mfgl2凝血酶原酶基因之MHV-3或MHV-A59 N蛋白的功能区域.N蛋白内含Ⅰ基因突变病毒株Alb 110和其野生株Alb 111体外感染Balb/cJ小鼠巨噬细胞、Ⅰ基因表达载体与mfgl2启动子共转染实验阐明Ⅰ蛋白在mfgl2基因激活中的作用.结果:N蛋白包含由两个可变间隔区(A,B)隔开的三个结构区(Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ),MHV-A59N蛋白Ⅰ区可增强mfgl2转录活性,当其基因序列突变为非嗜肝性MHV-JHM或MHV-21区序列时,则丧失激活mfgl2启动子转录活性的功能.Ⅰ基因突变病毒株Alb 110和其野生株Alb 111体外感染Balb/cJ小鼠巨噬细胞后对mfgl2的激活无显著差异,共转染实验阐明Ⅰ蛋白并非mfgl2基因激活中的必备因素,该组mfgl2启动子转录活性与对照组无显著差异,而N蛋白可激活mfgl2启动子,使其转录活性提高62倍.结论:鼠肝炎病毒N蛋白Ⅰ区为激活mfgl2凝血酶原酶基因的病毒蛋白功能区域.

木犀草素对巨噬细胞炎症极化的影响及机制

目的 探讨木犀草素对细菌分泌的内毒素脂多糖(LPS)和γ-干扰素(IFN--γ)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症极化的影响及机制.方法 以脂多糖和IFN-γ刺激RAW264.7细胞诱导M1型极化;白细胞介素(IL)-4刺激细胞诱导其向M2型极化.木犀草素处理后,激光共聚焦显微镜观察细胞形态的改变.流式细胞术检测细胞膜表面CD86的表达.qPCR分别检测M1型标志分子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、IL-1β、IL-6和M2型标志分子精氨酸酶(Arg)1、CD206、CD163等基因的表达.ELISA检测上清IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌.Western blotting检测蛋白通路磷酸化信号转导和转录激活因子(p-STAT)3(ser727)和p-STAT6(tyr641)的变化.结果 活化的M1细胞形态变化明显,细胞呈梭形、树突状,胞核明显,表明M1细胞被极化.5、10、20μmol/L木犀草素作用于M1细胞后,M1型炎症因子iNOSmRNA的相对表达(分别为95.45±1.64、92.73±16.96、29.52±3.07)与M1组(98.91±10.65)相比明显下调(P＜0.05),IL-1bmRNA的相对表达(分别为103.14±2.58、78.38±8.65、41.59±6.80)与M1组(110.69±4.12)相比明显下调(P＜0.05),IL-6 mRNA的相对表达(分别为177.51±19.28、106.14±5.63、27.15±1.26)与M1组(394.10±33.47)相比明显下调(P＜0.05或P＜0.01);而与M2型相关的抗炎因子Arg1 mRNA的相对表达(分别为3.22±1.44、4.99±0.99、7.63±2.33)与M1组(1.61±0.50)相比明显上调(P＜0.05),CD206 mRNA的相对表达(分别为1.21±0.44、1.70±0.53、4.23±1.71)与M1组相比(0.68±0.19)明显上调(P＜0.05),CD163 mRNA的相对表达(分别为0.62±0.39、1.38±0.40、2.06±0.12)与M1组(0.41±0.14)相比明显上调(P＜0.05);信号转导蛋白p-STAT3的表达明显下调;而p-STAT6的表达明显上调.结论 木犀草素可能通过下调p-STAT3及上调p-STAT6来调节RAW264.7细胞的M1/M2极化,从而发挥抗炎作用.

当归多糖对照射小鼠巨噬细胞产生NO及IL-2含量的影响

当归多糖(AP)是从具有补血益气、调经止痛、滋阴壮阳、扶正固本等功效的中药当归中提取的一种有效成分.许多实验研究表明,当归多糖对正常机体具有免疫作用,但当归多糖对放射损伤小鼠一氧化氮(NO)及IL-2的影响报道较少.笔者就此进行了初步的研究,并对当归多糖的作用机理进行初步的探讨.

养阴抗毒散对X射线辐射损伤小鼠巨噬细胞免疫活性的防护作用

已有研究表明[1],电离辐射可对白细胞与红细胞免疫功能造成严重损伤,养阴抗毒散作为一种纯中药制剂,对此种损伤有明确的保护作用.笔者在临床上用来减轻肿瘤患者放疗后的副反应,并取得了肯定的疗效.

小分子干扰RNA沉默髓样细胞触发受体1对内毒素诱导小鼠巨噬细胞株RAW264.7分泌炎性因子的影响

目的 利用小分子干扰RNA探讨髓样细胞触发受体1在内毒素刺激小鼠巨噬细胞株RAW264.7分泌肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β中的作用 .方法 设计并合成干扰率高的小分子干扰RNA,以pLKO1.1为载体构建pLKO1.1-髓样细胞触发受体1干扰质粒将小鼠巨噬细胞株RAW264.7分为4组:空白组；内毒素组；空质粒组(pLKO1.1组):采用脂质体法将pLKO1.1转染细胞；干扰组(小分子干扰RNA组):将pLKO1.1-髓样细胞触发受体1转染细胞,内毒素刺激24 h后实时定量PCR分别检测髓样细胞触发受体1、肿瘤坏死因子α与白细胞介素1β的mRNA水平；以ELISA法分别检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β含量.结果 与内毒素组比较,小分子干扰RNA组细胞中髓样细胞触发受体1、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β的mRNA含量显著下降(P＜0.01)；细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β含量明显降低(P＜0.01).结论 小分子干扰RNA可能通过抑制髓样细胞触发受体1基因的表达而减少内毒素诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β的分泌.

云木香中抑制小鼠巨噬细胞状细胞生长的倍半萜内酯类化合物

脂多糖刺激RAW264.7和Ana-1形态改变及细胞因子表达的差异

目的 比较两株小鼠来源的巨噬细胞株RAW264.7和Ana-1经脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导后在形态及细胞因子表达等方面的差异.方法 MTT法检测小同终浓度(0.1 mg/L、1 mg/L、10 mg/L、100 mg/L)LPS作用后两株细胞增殖活力,确定佳作用浓度.选择1 mg/L LPS刺激RAW264.7和Ana-1细胞,ELISA法分别于0 h、4 h、8 h、12 h、24 h检测两株细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-10的表达量.结果 LPS终浓度为1 mg/L时两株细胞存活率分别为(162.05±28.14)%、(159.92±20.43)%,显著大于同细胞其他浓度组别(P<0.01);1 mg/L LPS刺激后,两株细胞各细胞因子表达均为随时间呈先增多后减少趋势,峰值出现时间RAW264.7细胞早于Ana-1细胞.TNF-α的表达4 h时RAW264.7细胞高于Ana-1(P<0.01),8 h、12 h时低于后者(P<0.05);IL-1β的表达各时间点比较RAW264.7均高于Ana-1(P<0.05);IL-6的表达各时间点比较RAW264.7均低于Ana-1(P<0.05);IL-10的表达于刺激后4 h,RAW264.7细胞高于Ana-1细胞(P<0.05).结论 当LPS浓度为1 mg/L时,Ana-1与RAW264.7细胞存活率均强;经LPS刺激后,RAW264.7细胞TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10表达高峰早于Ana-1细胞,各细胞因子表达量各有侧重.研究者进行炎症相关实验时对Ana-1和RAW264.7的选择需考虑两者之间的差异.

胸腺基质淋巴细胞生成素对小鼠巨噬细胞抗原提呈功能及炎性分泌功能的影响

目的:研究胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对小鼠巨噬细胞抗原提呈能力及炎性分泌功能的影响和可能作用机制.方法:分离野生型C57B小鼠及TSLPR基因敲除(TSLPR-/-)C57B小鼠腹腔巨噬细胞,给予TSLP进行刺激.采用流式细胞术检测巨噬细胞MHCⅡ、CD86的表达;采用实时定量PCR以及ELISA方法检测小鼠巨噬细胞内以及培养上清液炎症因子MCP-1、TNF-α和IL-10的表达.结果:与野生型对照组比较,野生型实验组小鼠巨噬细胞表面抗原提呈分子(MHCⅡ,CD86)表达明显升高,炎症因子MCP-1和TNF-α表达及分泌均增高,IL-10表达及分泌无明显变化;与TSLPR基因敲除对照组相比较,TSLPR基因敲除小鼠巨噬细胞经TSLP刺激后细胞表面抗原提呈分子(MHCⅡ,CD86)表达及炎症因子MCP-1、TNF-α和IL-10的表达及分泌均无明显变化;与野生型实验组相比较,TSLPR基因敲除可明显抑制TSLP诱导的小鼠巨噬细胞抗原提呈分子增加以及炎症因子表达.结论:TSLP可通过与TSLPR结合促进小鼠巨噬细胞活化,增加巨噬细胞抗原递呈能力,产生炎症因子,促使小鼠巨噬细胞向促炎巨噬细胞表型M1型转化.

芹菜素抑制脂多糖诱导小鼠巨噬细胞分泌炎症介质的分子机制

目的：：观察芹菜素对脂多糖( LPS)诱导小鼠巨噬细胞分泌炎症介质的影响,并探讨其分子机制。方法：体外培养小鼠巨噬细胞RAW 264．7,用不同浓度的芹菜素处理后,加入LPS刺激。 Western blot检测血红素氧合酶-1(HO-1)、环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的表达以及p38和IκB的磷酸化；比色法检测亚硝酸盐和硝酸盐(NOx)的含量；ELISA检测PGE2的产生；报告基因分析芹菜素对NF-κB激活的影响。结果：芹菜素可显著诱导RAW 264．7细胞表达HO-1,采用p38抑制剂SB203580预处理细胞后,可抑制芹菜素诱导的HO-1表达；同时,芹菜素能降低胞浆内核转录因子Nrf2含量,并增高其在细胞核内水平；采用siRNA干扰Nrf2表达后,HO-1表达量降低。此外,芹菜素也能抑制LPS诱导RAW264．7细胞产生NOx和PGE2,下调COX-2和iNOS表达,以及抑制IκB磷酸化和NF-κB激活。而用HO-1 siRNA转染后,能在一定程度上抑制芹菜素的上述效应。结论：芹菜素可能通过诱导HO-1表达、抑制NF-κB的激活而发挥抗炎症作用。

防己水煎液及其不同拆分部位对脂多糖诱导下 RAW264．7细胞炎症因子的影响

目的：观察防己水煎液及其不同拆分部位对脂多糖（LPS）诱导下RAW264．7细胞炎症因子的影响。方法：采用噻唑蓝比色法（ MTT法）测定防己水煎液及其不同拆分部位对RAW264．7细胞的毒性作用，格里斯氏试剂（ Griess法）测定细胞炎症反应产生的NO含量，酶联免疫吸附法（ ELISA）检测细胞上清液中肿瘤坏死因子－α（TNF－α），白介素－6（IL－6）的含量。结果：防己水煎液及其生物碱拆分组分可抑制LPS诱导的RAW264．7细胞释放细胞炎症因子NO（P＜0．01），TNF－α（P＜0．01），IL－6（P＜0．01），其他组分无明显效果。结论：防己水煎液及其不同拆分部位在浓度小于312．50mg／L的范围内对RAW264．7细胞无显著毒性。防己水煎液及其生物碱拆分组分可能通过抑制细胞因子NO，TNF－α，IL－6的释放发挥其抗炎作用。

086 LPS预处理致内毒素耐受不能改变C3H/HeJ小鼠的 NF-κB的活性

在多器官功能失常综合征(MODS)的发展过程中,存在多种炎症刺激的序惯性作用.严重脓毒症的患者很可能在其发病过程中遭受到不止一次的LPS攻击.LPS刺激巨噬细胞分泌细胞因子需要NF-κB的活化和转位.采用低剂量LPS预处理可使C3H/HeN小鼠(LPS反应敏感型)TNF分泌减少、NF-κB活性改变,并对内毒素产生耐受.C3H/HeJ小鼠巨噬细胞(Mψ)存在的基因缺陷而使得它们对LPS耐受.有鉴于此,文章作者力图探明,在C3H/HeN小鼠Mψ对LPS耐受所致NF-κB活性的改变是否同样可见于C3H/HeJ小鼠.

A类Ⅰ型清道夫受体调节小鼠腹腔巨噬细胞抗肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌感染

本研究旨在探讨A类Ⅰ型清道夫受体（scavenger receptor class A type I ，SR‐AI）在呼吸道感染常见病原体肺炎克雷伯菌及铜绿假单胞菌感染过程中的免疫调节功能。以肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌临床分离株与野生型小鼠和 SR‐A I－／－小鼠腹腔原代巨噬细胞互作，研究SR‐AI在吞噬和炎症反应中的作用。荧光染料染色菌体及检测胞内荧光强度，数据显示 SR‐A I敲除后巨噬细胞对肺炎克雷伯菌的吞噬能力下降，但对铜绿假单胞菌的吞噬能力升高。采用实时定量荧光聚合酶链反应检测相关炎症因子mRNA水平，发现 SR‐A I敲除后肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌刺激巨噬细胞引发的炎症反应均增强。结果表明，SR‐AI参与巨噬细胞对肺炎克雷伯菌的吞噬，但不参与对铜绿假单胞菌的吞噬，且可能抑制了肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌引发的炎症反应。

女贞子药材及贞芪利咽颗粒中齐墩果酸和熊果酸的测定

女贞子(Fructus Ligustri lucidi)系木犀科女贞属植物女贞(Ligustrum lucidum Ait.)的果实,含有多种化学成分,如齐墩果酸(oleanolic acid,1)、熊果酸(ursolic acid,2)、乙酰齐墩果酸等.1为女贞子中的主要有效成分,含量可达1.1%～14.8%.药理实验结果表明1具有促进淋巴细胞增殖和动物巨噬细胞吞噬功能,并与白介素2(IL-2)具协同作用[1].2在与1相同的剂量下,亦能明显增强正常小鼠巨噬细胞的吞噬功能.贞芪利咽颗粒为六类中药新药,由女贞子、黄芪、丹参、泽漆四味药材提取加工而成,用于治疗慢性咽炎.其中女贞子为君药,在制剂中应检测其有效成分1、2含量.现行标准中采用TLC法,误差大、重现性差,且难以将二者有效分离.