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高效液相色谱法测定萝藤安神片中钩藤碱的含量
目的:建立萝藤安神片中钩藤碱的HPLC测定方法.方法:Diamonsil ODS C18(200 mm×4.6 mm,5 μm)柱,甲醇-水(48:52)含10 mmol·L-1三乙胺溶液,用醋酸调pH=5.0为流动相,流速1.0ml·min-1检测波长为254 nm.结果:钩藤碱的线性范围是0.20～0.99μg(r=0.999 8),平均回收率为97.9%,RSD=1.0%.结论:方法简单准确,可作为该制剂的质量控制.
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高效液相色谱法测定小儿七星茶冲剂中钩藤碱含量
目的:建立小儿七星茶冲剂中钩藤碱的含量测定方法.方法:以高效液相色谱法测定,色谱柱:Phenomexne BDSC18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇-水(加0.5%三乙胺,冰醋酸调节pH5.2)(70:30);检测波长为254nm.结果:钩藤碱线性范围为10.8～64.8μg,平均回收率91.34%,RSD为1.88%.结论:方法可靠,简单可行,为控制小儿七星茶冲剂的质量提供了科学依据.
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钩藤碱含量测定方法研究概述
钩藤碱是钩藤中的主要生物碱之一,主要作用于心血管系统和中枢神经系统,具有降低血压、扩张血管、减慢心率和抑制心肌收缩力等生物效应.为了更好地开发利用钩藤碱,对其进行质量控制,对近五年来学者采用的钩藤碱含量测定方法进行了综述.
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钩藤生物碱提取工艺研究
目的:优选钩藤生物碱的佳提取工艺.方法:以钩藤总碱的含量,钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱的含量总和及浸膏得率为评价指标,对比了水煮、渗漉、索式回流和回流四种方法的提取效果,优选出回流的提取方法,并采用正交设计的方法考察溶剂浓度、溶剂倍量、提取时间及提取次数对钩藤生物碱的提取率和含量的影响.结果:钩藤生物碱的佳提取工艺为:10倍量90％乙醇,回流提取2次,每次1h.结论:优选确定的工艺简便、稳定可行.
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正交设计优选钩藤碱的提取工艺
目的:优化钩藤中钩藤碱的提取工艺.方法:以钩藤碱得率为检测指标, 采用L9(34)正交试验, 考察乙醇体积分数、提取时间和提取次数3个影响因素, 采用高效液相色谱法进行钩藤碱测定.结果:提取次数和乙醇的体积分数对检测指标均有显著影响,提取时间影响不显著.佳提取工艺条件为90 %乙醇热回流3 次, 每次3 h.结论:优选得到的工艺稳定、方法可行.
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钩藤碱对自发性高血压大鼠心肌保护作用实验研究
目的:研究钩藤碱(Rhy)对自发性高血压大鼠(SHR)的降压效果及对心肌的保护作用.方法:将自发性高血压大鼠分为正常组、SHR模型组、阳性对照组(Cap 6.25mg/kg)、Rhy低(1.25mg/kg)、中(2.50mg/kg)、高(5.00mg/kg)剂量组,连续给药3周,用药期间观察各组大鼠的一般状态,每周测定各组大鼠尾动脉收缩压、心肌肥厚指数、心肌血管紧张素Ⅱ、血清NO及NOS含量指标.结果:①Rhy可显著改善SHR的一般状态;②Rhy给药3周可显著降低SHR尾动脉收缩压,与SHR模型组及用药前比较差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);③Rhy可显著降低心肌AngⅡ含量并增加NO及NOS的活性,与SHR对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);结论:Rhy对自发性高血压大鼠有显著的降压作用,且对心肌有保护作用.
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中药钩藤优醇提工艺研究
目的:考察中药钩藤优醇提工艺.方法:以钩藤碱和异钩藤碱的总量及浸膏得率为考察指标设立单因素考察,得出醇提的佳溶媒浓度和提取次数.通过正交实验方案设计,以药材浸泡时间、提取时间和加醇量为因素,确定合理可行的提取工艺.结果:用70％的乙醇,分两次提取,提取前浸泡0.5 h,加醇量分别为饮片的6、4倍,提取时间分别为1.5、1.0 h.结论:试验表明,通过该提取工艺钩藤碱和异钩藤碱总提取率可达24.34％,浸膏得率可达12.97％.
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钩藤碱和异钩藤碱对血管紧张素Ⅱ致血管平滑肌细胞凋亡的影响及其机制
目的 探讨钩藤碱和异钩藤碱对血管紧张素Ⅱ致血管平滑肌细胞凋亡的影响及其机制.方法 建立血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞凋亡模型,通过倒置相差显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞术和逆转录聚合酶链反应观察钩藤碱和异钩藤碱对细胞形态、细胞凋亡率、细胞[Ca2+]I浓度、Bcl-2和Bax蛋白表达与mRNA转录的影响.结果 钩藤碱和异钩藤碱能诱导血管平滑肌细胞凋亡,提高细胞凋亡百分率,降低细胞[Ca2+]I浓度,下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达,升高Bax mRNA/Bel-2mRNA的比值.结论 钩藤碱和异钩藤碱具有诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用,其机制与降低细胞[Ca2+]I浓度、下调Bcl-2蛋白表迭及mRNA转录、上调Bax蛋白表达及mRNA转录有关.
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高效液相色谱法测定新乐康片中钩藤碱的含量
目的 建立新乐康片中钩藤碱的含量测定方法.方法 采用HPLC法,Phenomexne BDS C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.5%三乙胺(冰醋酸调节pH值5.2)(70:30);检测波长为254 nm;流速为0.8 mL·min-1,柱温为室温.结果 钩藤碱进样量在0.010 2～0.061 2μg与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率101.7%,RSD为1.87%.结论 该方法可靠、简单可行,为控制新乐康片的质量提供了科学依据.
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钩藤碱对惊厥持续状态幼年大鼠血清SOD水平和海马组织TLR4表达的影响
目的:观察钩藤碱对惊厥持续状态幼年大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和海马组织Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法:160只幼年SD雄性大鼠随机分成正常组、模型组和钩藤碱低、中、高各剂量组,每组32只,各组再按不同时间点分为4h、24 h、48 h和72h4个亚组.采用腹腔注射氯化锂-匹鲁卡品复制幼年大鼠惊厥持续状态模型,钩藤碱低、中、高剂量组于造模后分别给予钩藤碱[10、20、40 mg/(kg·d)]腹腔注射,每天1次,连用3天,正常组、模型组腹腔注射等体积生理盐水.羟胺法检测大鼠血清中SOD活性,免疫组化法检测大鼠海马组织中TLR4的表达情况.结果:模型组大鼠惊厥后4h时血清SOD活性降低,海马组织TLR4的表达增加,48 h达到峰值,4个时间点模型组大鼠血清SOD值均低于正常组,海马组织TLR4的表达均高于正常组(P＜0.01).与模型组比较,钩藤碱各剂量组大鼠血清SOD活性均显著升高,以24 h、48 h和72 h时较明显;钩藤碱各剂量组大鼠海马组织TLR4的表达均显著降低(P＜ 0.05,P＜0.01),钩藤碱各剂量组大鼠血清SOD活性随着钩藤碱剂量增大而增强,海马组织TLR4的表达随着钩藤碱剂量增大而减少.结论:钩藤碱可增加惊厥持续状态幼年大鼠血清SOD活性,下调海马组织TLR4的表达,提示钩藤碱可能对持续惊厥引起的脑损伤有保护作用.
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广东钩藤属4种植物生物碱含量的UV、HPLC测定
目的:建立UV、HPLC测定广东钩藤属4种植物的总碱以及钩藤碱、异钩藤碱含量的方法,比较其不同品种、不同部位间有效成分的含量变化.方法:以UV测定总碱含量,检测波长为242 nm；以HPLC测定钩藤碱、异钩藤碱含量,采用Hypersil ODS C18(4.6mm×200 mm,5μm)色谱柱,甲醇-水(含0.50％三乙胺,冰乙酸调pH 6.33)=63:37为流动相,流速为0.80 mL/min,进样量5.00 μL,柱温为室温,245nm波长下检测分析.结果:钩藤碱、异钩藤碱在0.02～5.00 μg范围内线性关系良好,钩藤碱的r1=0.9999,异钩藤碱的r2=1.0000,平均回收率分别为.98.52％、99.12％ (RSD1 =2.05％,RSD2 =2.17％)；总碱含量在不同品种、不同部位里存在差异性,其线性范围为6.00～14.00 μg/mL,r =0.9989.结论:该法准确,操作简便、快速,重复性较好,精密度较高,可用于对广东钩藤属植物不同品种、不同部位的总碱以及钩藤碱、异钩藤碱含量测定.
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高效液相色谱法测定安神养血口服液中钩藤碱和异钩藤碱含量
目的:建立安神养血口服液的含量测定方法.方法:运用HPLC测定安神养血口服液中钩藤碱和异钩藤碱含量.色谱柱:依利特Kromasil C18柱(5μm,4.6mm×250mm);流动相:甲醇-水(55: 45)(含0.01mol/L三乙胺,用冰醋酸调pH值至7.5);柱温:25℃;检测波长:254nm; 流速:1.0mL/min.结果:钩藤碱的平均回收率为99.04%,异钩藤碱为98.75%.钩藤碱在进样量0.12～1.20μg 范围内线性关系良好(r1=0.9999),异钩藤碱在进样量0.08～0.80μg 范围内线性关系良好(r2=0.9993).结论:该方法简便、快速、准确,可用于安神养血口服液的质量控制.
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钩藤药材商品规格等级标准的调查及初步评估
目的:了解钩藤药材商品规格等级标准的演变历史,并对现行标准的合理性进行初步评估.方法:查阅相关本草文献、现代中医药文献及结合钩藤主产地和部分药材市场的实地考察,对钩藤商品规格等级及销售情况进行系统调研,并以钩藤碱、异钩藤碱为指标成分,对其划分依据进行初步评估.结果:调查结果显示,至今尚未形成全国性的钩藤商品规格等级标准,仅有个别地方标准形成;人们对钩藤药材的商品规格等级划分重视度不足,市场执行力差;钩藤指标成分与药材钩型、大小及销售价格并无相关性.其中,异钩藤碱和钩藤总碱的含量与其药材颜色具有显著相关性.结论:传统钩藤商品规格等级标准合理性差,需尽快建立相关国家标准,以规范钩藤药材市场.
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UPLC法同时测定钩藤提取物中4种生物碱类成分的含量
目的:建立UPLC法同时测定钩藤提取物中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量.方法:采用BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm);以5 mmol/L醋酸铵缓冲液(0.01％氨水调pH =9)(A)-甲醇(B)-乙腈(C)三元体系为流动相进行梯度洗脱;流速:0.44 mL/min;柱温:30℃;检测波长:245 nm.结果:钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的质量浓度在2.97～296.67μg/mL、1.31～450.00 μg/mL、1.58 ～433.33μg/mL、1.28～438.33 μg/mL的范围内线性关系良好,r为0.9993 ～ 0.9995;各成分平均加样回收率在97.34％ ～101.85％,RSD≤2.65％.钩藤提取物中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量分别为23.48、6.19、6.73、9.22 μg/g.结论:该方法准确可靠,便于操作,可用于同时测定钩藤提取物中4种生物碱的含量.
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钩藤碱对阿霉素诱导的大鼠肾损伤的作用及其机制
目的:探讨钩藤碱(rhynchophylline,RHL)对阿霉素致大鼠肾功能损伤的作用及其机制.方法:将52只雌性SD大鼠随机分为生理盐水组(NSG,n=10)、模型组(MG,n=14)、钩藤碱低剂量治疗组(RHL-LG,n=14)和高剂量治疗组(RHL-HG,n=14).后3组经尾静脉注射阿霉素(5 mg·kg-1)建立肾病模型,NSG注射等容量生理盐水(NS);2周后,RHL-LG和RHL-HG分别给予腹腔注射RHL 5mg·kg-1和15mg·kg-1,NSG和MG分别给予等容量NS.8周后采集血、尿及肾组织标本,检测尿蛋白、血尿素氮(BUN)、血清肌酐 (SCr)、组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,进行肾组织病理学观察,RT-PCR检测肾组织中血管紧张素Ⅱ受体1、2(AT1,2-R)、血管紧张素转换酶(ACE)及血管紧张素原(AGT)mRNA的表达.结果:MG的蛋白尿、BUN、SCr和MDA含量明显高于NSG 、RHL-LG和RHL-HG(P<0.05),而以RHL-HG的BUN、SCr和MDA含量降低得为明显;RHL-HG的SOD活性明显高于RHL-LG和MG(P<0.05);MG肾组织病理损伤严重,而RHL-LG和RHL-HG损伤程度明显减轻,RHL-HG轻于RHL-LG;MG肾组织中的AT1-R、ACE和AGT mRNA表达均显著高于RHL-LG,而RHL-LG显著高于RHL-HG(P<0.05),MG AT2-R mRNA表达显著低于RHL-LG,RHL-LG则显著低于RHL-HG(P<0.05).结论:RHL能减缓阿霉素所致的大鼠肾功能损伤,其机制可能与其减轻肾脏脂质过氧化损伤,调控肾组织中AT1,2-R、ACE和AGT mRNA的表达,增加肾血流量等因素有关.
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钩藤碱对自发性高血压大鼠心室重构过程中TGF－β1／Smad 通路的影响
目的：观察钩藤碱对自发性高血压大鼠血压、心肌肥厚及心肌纤维化的影响并探讨其可能的作用机制。方法：32只自发性高血压大鼠随机分为模型组、钩藤碱高（10 mg? kg －1? d－1）、低（2．5 mg? kg－1? d－1）剂量组、卡托普利组（17．5 mg? kg－1? d－1），每组8只。另设8只Wistar－Kyoto大鼠作为正常对照组。分别于给药前和给药后每2周测量尾动脉收缩压（ SBP ）。治疗10周后处死大鼠，取其心脏计算全心重量指数和左心室重量指数；检测心肌中羟脯氨酸（ HYP）及血浆中血管紧张素Ⅱ（ AngⅡ）的含量；HE染色观察心肌病理学变化，Masson染色观察心肌胶原纤维变化；免疫组化法和Western blot法测心肌组织转化生长因子－β1（ TGF－β1）和Smad3蛋白的表达。结果：与模型组相比，钩藤碱能明显降低自发性高血压大鼠的血压（ P＜0．05），降低心肌HYP含量及血浆AngⅡ的含量（P＜0．05），减轻心肌组织的病理损伤和胶原纤维沉积，下调TGF－β1和Smad3蛋白的表达（P＜0．01）。结论：钩藤碱能降低自发性高血压大鼠的血压、调节改善自发性高血压大鼠的心室重构，其机制可能与其影响TGF－β1／Smad通路以及降低AngⅡ含量有关。
关键词： 钩藤碱 自发性高血压大鼠 TGF-β1/Smad通路 心室重构 -
藤菔降压片质量控制研究
目的 建立藤菔降压片的质量控制方法.方法 采用薄层色谱法(TLC)对藤菔降压片中芥子碱硫氰酸盐、钩藤碱进行定性鉴别;采用高效液相色谱法(HPLC)测定芥子碱硫氰酸盐和钩藤碱的含量.结果 TCL专属性强,简单可行.HPLC法测定芥子碱硫氰酸盐在41.2～ 412μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9998),平均加样回收率为100.78 ％(RSD=3.98％,n=6);钩藤碱在9.54 ～ 159 μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为101.50 ％(RSD=2.06％,n=6).限定本品每片含芥子碱硫氰酸盐(C6H24NO5· SCN)含量限量在6.001 ～ 7.335 mg之间.限定本品每片含钩藤碱(C22H28N2O4)含量限量在1.182 ～ 1.444 mg之间.结论 建立的定性、定量方法简单,重复性好,结果准确可靠,可作为藤菔降压片的质量控制方法.
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钩藤中钩藤碱、异钩藤碱的提取与含量测定
目的 研究和探讨钩藤药材中钩藤碱与异钩藤碱的佳提取与含量测定方法.方法 采用Phenomenex C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以甲醇-0.01 mmol·L-1三乙胺水溶液(70:30,冰醋酸调pH 7.0)为流动相;流速:0.5 mL·min-1;柱温:30℃;进样器温度:5℃;检测波长为245 nm,测定和考察钩藤不同时间的水煎液和不同条件下甲醇冷浸超声提取液中主要有效成分钩藤碱和异钩藤碱含量的变化.结果 钩藤碱回归方程Y=76.7170X-0.0727(r=0.999 8),在2.5～80.0μg·mL-1范围内线性关系良好,平均加样回收率99.84%～116.91%,RSD小于8.8%;异钩藤碱回归方程Y=87.4729X-0.3666(r=0.999 7),在2.0～80.0μg·mL-1范围内线性关系良好,平均加样回收率87.08～104.97%,RSD小于7.3%;甲醇冷浸超声提取液中钩藤碱与异钩藤碱的提取率大约是水煎液中的十倍.在甲醇提取工艺中,影响提取率的因素从大到小依次为超声时间、甲醇用量、冷浸时间,经正交实验优选的佳提取工艺为用20倍质量的甲醇,冷浸24h,超声60min.结论 钩藤药材中有效成分钩藤碱与异钩藤碱的提取,采用甲醇冷浸超声法优于水煎法.该含量测定方法快速、简便、准确,可为评价钩藤药材的质量提供依据.
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钩藤碱对甲基苯丙胺依赖斑马鱼行为学的影响及机制
目的 观察钩藤碱对甲基苯丙胺诱导斑马鱼条件性位置偏爱的影响,并探讨其相关机制.方法 实验分空白对照组、甲基苯丙胺模型组、模型+钩藤碱低剂量组(50mg/kg)、模型+钩藤碱高剂量组(100 mg/kg)和模型+氯胺酮组(150mg/kg).条件性位置偏爱训练方法建立甲基苯丙胺诱导的斑马鱼CPP模型.Noldus Ethovision XT system测试斑马鱼在非位置偏爱箱(伴药箱)的停留时间以及在CPP箱的运动路线图.利用western blotting的方法检测斑马鱼脑中NR2B、TH和GLUR2三种蛋白表达.结果 与空白组相比,模型组斑马鱼训练前后在伴药箱停留的时间变化以及运动距离有显著性差异(P＜0.05),NR2B、TH和GLUR2三种蛋白表达的OD值也有显著性差异(P＜0.05).与模型组相比,高剂量钩藤碱组斑马鱼在伴药箱停留的时间变化以及运动距离均具显著性差异(P.＜0.05),NR2B、TH和GLUR2三种蛋白表达的OD值也有显著性差异(P＜0.05).结论 钩藤碱对斑马鱼的甲基苯丙胺依赖有一定的抑制作用,其机制与干预脑内TH、NR2B、GLUR2蛋白表达有关.
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不同干燥方法对钩藤药材中钩藤碱含量的影响
目的:考察不同干燥方法对钩藤药材中钩藤碱含量的影响.方法:采用HPLC法,以钩藤中钩藤碱含量为指标,测定不同干燥方法中钩藤药材钩藤碱的含量.色谱条件:Intertsll ODS-SP C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-水(含0.002 mol/L 三乙胺,用冰醋酸调 pH到7.0)＝70:30;流速:1 mL/min;检测波长:254 nm.结果:阴干与阳光下暴晒的样品中钩藤碱含量较其他方法干燥的样品高,分别为0.416%和0.408%,且含水量均达到2010年版<中国药典>的要求.结论:钩藤药材宜采用阴干或暴晒的干燥方法,尽量避免长时间高温干燥.
