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滋补脾阴方药对脾阴虚痴呆大鼠脑内NMDA受体mRNA表达的影响＊
目的：观察滋补脾阴方药对脾阴虚痴呆大鼠脑内N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）亚单位NR1、NR2A、NR2B mRNA表达的影响。方法：运用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术，对NMDAR亚单位NR1、NR2A、NR2B mRNA在各脑区的表达状况作相应的检测。结果：痴呆组以及脾阴虚痴呆组大鼠NMDAR亚单位NR1、NR2A、NR2B mRNA在各脑区表达均明显减弱下调（P<0.05）；ZBPYR治疗组NMDAR亚单位NR1、NR2A、NR2B mRNA均明显上调（P<0.05）。结论：使用ZBPYR治疗的大鼠NMDAR mRNA的表达水平在各脑区均明显上调，这表明ZBPYR以提升NMDAR mRNA的方式，使得NMDAR蛋白的含量显著增多，而发挥其抗痴呆作用。
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NR1和NOS在骨癌痛小鼠脊髓背角中的表达
目的:探讨NR1和NOS在小鼠癌性痛产生和维持中的作用.方法:选用雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为实验组:接种Lewis肺癌细胞;对照组:接种等容积的PBS液;空白对照组:只做假手术.于建模后第23天取腰段脊髓行NR1免疫组化检测和NOS测定.结果:模型组NR1染色实际灰度与IOD值分别为95.400±6.076、11.383±2.277,对照组分别为58.257±9.781、6.283±1.900,空白对照组分别为52.689 ±10.290、5.972 ±1.352,分别与空白对照组和对照组相比均有显著差异(P＜0.05);而对照组与空白对照组相比无明显差别(P＞0.05);脊髓NOS测定,模型组为2.842 ±0.663,对照组为1.770 ±0.149,空白对照组1.445 ±0.134,模型组与空白对照组以及对照组相比均有显著差异(P＜0.05);而对照组与空白对照组相比无统计学意义(P＞0.05).结论:骨癌痛小鼠脊髓背角NR1与NOS表达增高,说明脊髓NR1及NOS可能在骨癌痛形成中起重要作用.
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N-甲基-D-天冬氨酸受体在神经系统疾病中的作用研究进展
一、概况N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体是一种配体门控型离子通道,通过不同的亚单位组成,与胞内多种蛋白相互作用.NMDA受体主要集中在突触后膜,在神经传递中发挥以下几种作用:(1)NMDA受体的活化与突触长度的长效性变化有关;(2)传入神经纤维的组成与靶向神经元的发生发展有关;(3)参与谷氨酸介导的兴奋性神经毒性.NMDA受体已知的亚单位有7种:NR1,NR2A~D,NR3A~B.亚单位NR1(NMDA receptor subunit 1)在所有功能性NMDA受体通道中普遍存在,是NMDA受体发挥功能所必需的.
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参松养心胶囊对心肌梗死大鼠心室NR1表达及室性心律失常的影响
目的 研究参松养心胶囊(以下简称参松)治疗对大鼠心肌梗死(以下简称心梗)后心室NR1受体和心律失常的影响,评价参松养心胶囊对心肌梗死的治疗作用.方法 将SD雄性大鼠40只随机分为3组:假手术组(n=10),心肌梗死组(n=15),心肌梗死后+参松养心组(参松组,n=15).结扎冠状动脉左前降支制作心肌梗死模型,运用Masson染色检测心肌纤维化,采用Western blot法检测海马NR1的表达,运用ECG植入子检测心律失常的发生率.结果 与假手术组相比,参松养心组较心肌梗死组大鼠心肌纤维化程度较轻(366.05％±94.04％ vs 955.27％±502.44％).与假手术组相比,心肌梗死组、参松养心组心肌组织中NR1含量分别上升了39.9％±4.9％和27.03％±2.48％;参松养心治疗后可减少心肌梗死大鼠心肌NR1的表达;心律失常发生率参松养心组与心肌梗死组相比,发生率下降(5.40±1.18次vs 7.93±1.66次).结论 参松养心胶囊可减少大鼠心肌梗死后心肌纤维化,并可通过下调NR1蛋白的表达,减少心律失常的发生.
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NR3亚单位的研究进展
NMDA受体属于配体门控阳离子通道.传统NMDA受体主要由NR1亚单位和不同的NR2亚单位组成.NR1是形成NMDA受体的基本亚单位,NR2为调节亚单位.NR1亚单位上有甘氨酸结合位点,NR2亚单位上有谷氨酸结合位点.NMDA受体激活的条件是:神经细胞膜去极化使结合于通道内的Mg2+移出,同时甘氨酸和谷氨酸分别与NR1、NR2上相应的位点结合.受体激活后,除Na+和K+通透性增加外,主要引起Ca2+通透性增加,Ca2+大量内流.
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糖尿病神经痛大鼠脊髓背角NMDA受体表达的变化
目的 探讨糖尿病神经病理性痛(DNP)大鼠脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体表达的变化.方法 SD雄性大鼠24只,4周龄,体重130～150 g,随机分为2组,DNP组(D组,n=15)腹腔注射链尿佐菌素(STZ)50 mg/kg制备成DNP模型,正常对照组(C组,n=9)给予等容量0.9%氯化钠溶液.给予STZ或0.9%氯化钠溶液后3、5、7周时分别取D组( 5只)和C组(3只)大鼠,测量体重,采集静脉血样,测定空腹血糖浓度,然后测定机械缩足阈值,取脊髓组织,采用免疫组织化学法分别测定脊髓背角NR1和NR2B亚单位表达水平.结果 与C组比较,在各时间点,D组体重下降,血糖升高,机械缩足阈值明显降低(P<0.05),脊髓背角NR1和NR2B亚单位免疫阳性细胞数表达明显增加(P<0.05).结论 脊髓背角NMDA受体在脊髓水平参与了大鼠糖尿病神经病理性痛的形成.
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补阳还五汤对全脑缺血再灌大鼠皮层神经元NR1的影响
目的:研究补阳还五汤抗全脑缺血后再灌注损伤的分子机制.方法:将66只SD大鼠随机分为3组,即正常组、模型组和药物组(补阳还五汤预干预),模型组和药物组再分别设置2、24h2个观察时间点.连续给药5d后,采用改良的Pulsinelli四血管闭塞法复制全脑缺血大鼠模型,再灌后2、24 h采用免疫组化法检测各组大鼠皮质神 经细胞NMDA受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor)亚单位NR1的表达水平、结果:与正常组比较,模型组2、24h2个不同时间点,NR1的表达水平显著升高(P＜0.05);与模型组比较,药物组再灌注后2、24h 2个不同时间点,NR1表达水平显著降低(P＜0.01).结论:补阳还五汤预干预对全脑缺血再灌注模型大鼠大脑皮层神经元NR1表达水平的增高有调低作用.
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逍遥散对肝郁气滞证视神经炎大鼠视路NR1表达研究
目的:研究逍遥散对肝郁气滞证视神经炎大鼠视路外侧膝状体、视皮质NR1表达的影响.方法:将60只大鼠按RAND函数随机分为正常组、肝郁气滞证视神经炎组(病证结合组)、逍遥散加肝郁气滞证视神经炎组(给药组)3组.采用EAE动物模型方法建立视神经炎大鼠模型,同时应用慢性束缚应激方法增加肝郁气滞因素,终形成肝郁气滞证视神经炎大鼠模型.观察大鼠行为学,记录旷场实验,利用上述指标评价模型造模成功后,免疫组化法检测各组大鼠外侧膝状体、视皮质NR1的动态变化.结果:逍遥散能降低EAE神经功能评分,旷场实验总分降低,病证结合组外侧膝状体、视皮质NR1表达增高,给药组表达降低.结论:逍遥散可以降低肝郁气滞证视神经炎大鼠视路NR1的表达,可调节肝郁气滞证视神经炎大鼠的功能紊乱.
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三七总皂苷对脑出血大鼠前脑兴奋性氨基酸受体NR1表达的作用
目的:研究三七总皂苷对脑出血大鼠前脑兴奋性氨基酸受体NR1的作用.方法:用免疫组化法观察胶原酶诱导的脑出血大鼠前脑内NR1在给药组和对照组的表达变化.结果:脑出血后大鼠前脑NR1在病灶内部少量表达,病灶周围、大脑皮质、海马等部位均有不同程度的高表达,给药组在皮层、病灶周围阳性细胞明显减少,反应强度减弱.结论:三七总皂苷明显降低NR1在病灶周围、皮层海马神经元的阳性表达,从而发挥对受损神经元的保护作用.
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电针对CFA慢性炎性痛大鼠患侧背根神经节NR1及其丝氨酸890位点磷酸化的影响
[目的]观察电针(EA)对完全弗氏佐剂(CFA)诱导的慢性炎性痛大鼠患侧背根神经节(DRG)N－甲基－D－天门冬氨酸受体亚基1(NR1)受体及NR1丝氨酸890位点磷酸化(pNR1 serine－890)的影响。[方法]健康雄性SD大鼠30只，随机分为正常对照组(N组)，模型对照组(CFA组)，电针组(EA组)，每组10只。右后足底注射CFA 0．1ml以建立慢性炎性痛模型，分别测量大鼠造模前，造模后第1d、3d、5d、7d、9d患侧痛阈变化。免疫荧光法检测大鼠患侧DRG中NR1阳性细胞表达率，免疫印迹法检测大鼠患侧DRG中pNR1 serine－890的表达量。[结果]CFA造模后1d，CFA组与EA组足缩腿阈(PWTs)均低于N组(P<0．01)，CFA组与EA组差异无统计学意义；治疗3d起，EA组PWTs呈现升高趋势，于第9d明显高于同时点CFA组(P<0．01)。CFA造模后第9d，与N组比较，CFA组大鼠患侧NR1和pNR1表达均有显著上升(P<0．01，P<0．01)；与CFA组比较，EA组大鼠患侧NR1和pNR1表达均下降(P<0．01，P<0．01)。[结论]电针能有效拮抗CFA诱导的大鼠慢性炎性痛，此作用可能与电针下调大鼠患测DRG中的NR1表达量以及减少NR1丝氨酸890位点磷酸化相关。
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补阳还五汤对全脑缺血再灌注后大鼠皮层神经元NR1 mRNA表达的影响
目的 观察补阳还五汤对全脑缺血再灌注后大鼠皮层神经元NR1 mRNA表达的影响,研究补阳还五汤抗全脑缺血后再灌注损伤的分子机制.方法 SD大鼠随机分为3组,即正常组、模型组和药物组(补阳还五汤预干预),模型组和药物组再分别设置2,24h两个观察时间点.连续给药5d后,采用改良的Pulsinelli四血管闭塞法复制全脑缺血大鼠模型,再灌后2,24h采用RT-PCR技术检测各组大鼠皮质神经细胞NMDA受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor)亚单位NR1的mRNA表达水平.结果 与正常组比较,模型组2h,24h等2个不同时间点,NR1的mRNA表达水平显著升高(P＜0.05);与模型组比较,药物组再灌注后2h,24h等2个不同时间点,NR1 mRNA表达水平显著降低(P＜0.01).结论 补阳还五汤预干预对全脑缺血再灌注模型大鼠大脑皮层神经元NR1 mRNA表达水平的增高有调低作用.
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舍曲林对心梗后抑郁大鼠行为学及海马NR1表达的影响
目的:研究心梗后抑郁大鼠行为学及海马NR1蛋白表达的变化,以及舍曲林的干预作用.方法:将80只SD大鼠随机分为5组:正常对照组(n=10),心梗组(n=20),抑郁组(n=10),模型组(n=20),舍曲林组(n=20).通过结扎冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,予慢性不可预见性温和刺激建立抑郁模型,通过糖水消耗试验及旷场试验对动物进行行为学评分,采用Western blot方法对海马组织NR1的表达进行定量检测.结果:①与正常组相比,心梗组、抑郁组及模型组行为学评分下降:糖水偏爱百分比下降,运动减少,直立次数减少.②与正常组相比,心梗组、抑郁组及模型组海马NR1的表达量分别下降了12％±5％、30％±11％和57％±9％；舍曲林干预可增加模型组海马NR1表达(17％±6％).结论:舍曲林可能通过调节海马NR1表达,改善心梗后抑郁大鼠抑郁样行为.
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补肾活血化痰开窍方对耳鸣大鼠耳蜗螺旋神经节神经元NMDA受体亚型表达的影响
[目的]观察补肾活血化痰开窍方对耳鸣大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(SGN)中N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚型1、2A、2B(NR1、NR2A、NR2B)表达的影响,并探讨其作用机制,以期为临床应用补肾活血化痰开窍方治疗耳鸣提供实验依据.[方法]将60只大鼠随机分为正常组,模型组,中药低、中、高剂量组,西药组6组,每组10只.采用大鼠腹腔注射水杨酸钠联合"饮水抑制"法建立大鼠耳鸣模型.造模成功后,中药低、中、高剂量组给予补肾活血化痰开窍方(剂量分别为5.5、11、22 g·kg-1·d-1)灌胃,西药组给予卡马西平(剂量为5 mg·kg-1·d-1)灌胃,模型组和正常组给予2 mL生理盐水灌胃,每天1次,连续治疗8周.采用免疫印迹法和实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测其耳蜗SGN中NR1、NR2A、NR2B在耳鸣大鼠的表达情况.[结果]与正常组比较,模型组NR1、NR2A、NR2B在模型组中表达升高,差异具有统计学意义(均P<0.05);与模型组比较,中药各剂量组耳蜗SGN中NR1、NR2A、NR2B的表达均明显降低(均P<0.05).[结论]补肾活血化痰开窍方可有效缓解大鼠耳鸣,其机制可能与降低耳鸣大鼠耳蜗SGN中增高的NMDA受体亚型NR1、NR2A、NR2B表达有关.
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自制中药颗粒对铅中毒模型大鼠学习记忆的干预作用研究
目的 探讨慢性铅中毒导致的模型大鼠学习记忆能力损伤及中药的干预作用.方法 60只大鼠随机分为2组,其中空白组12只,饮用双蒸水;造模组48只,饮含0.02％醋酸铅的双蒸水,连续60d后将造模动物随机分为4组:高剂量治疗组(按3.0 g·kg-1·d-1的剂量灌胃自制中药颗粒)、低剂量治疗组(0.6 g·kg-1·d-1)、阳性对照组(依地酸钠钙加普鲁卡因肌肉内注射,50 mg·kg-1·d-1)及模型组(不予任何治疗),连续60d后进行隐藏站台试验及空间探索试验,采血检测血铅,RT-PCR检测脑组织海马区NR1、NR2B mRNA表达.结果 经统计,与模型组比较,其他各组体重、血色素、穿过平台次数、第3象限活动时间、NR1、NR2B mRNA表达均显著增加(P＜0.05),血铅含量、Morris水迷宫试验d4潜伏期显著降低(P＜0.05);与阳性对照组比较,中药高剂量组体重、第3象限活动时间、NR1mRNA表达、NR2B mRNA表达显著增加(P＜0.05).结论 自制中药颗粒通过增加脑组织海马区NRlmRNA、NR2BmRNA的表达,改善慢性铅中毒导致的学习记忆能力损伤.
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左旋延胡索乙素对吗啡条件性位置偏爱大鼠伏核NR1蛋白表达的影响
目的 研究左旋延胡索乙素(l-tetrahydropalmatine,l-THP)对吗啡诱发条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)大鼠伏核(nucleus accumbens,NAc)中N-甲基-D-天冬氨酸受体NR1亚基(NR1)表达改变的影响.方法 大鼠随机分组,即正常对照组、模型CPP组、生理盐水治疗组及l-THP低(0.94 mg/kg)、中(1.88 mg/kg)和高(3.76 mg/kg)治疗组.正常对照组皮下注射等量生理盐水外,剩余各组大鼠采用颈背部皮下剂量递增法注射吗啡(起始剂量10 mg/kg,每天递增10 mg/kg,至注射10 d时为100 mg/kg),经CPP训练10 d,末次训练后48 h进行CPP检测确认CPP模型成功.各治疗组大鼠灌胃给药,每天1次,连续治疗6d后进行CPP检测,之后处死大鼠并采用脑立体定位仪取大鼠NAc脑组织,利用Western Blot方法检测NR1基因的蛋白表达.结果 经CCP检测,模型组大鼠在白箱(吗啡伴药箱)停留时间,与生理盐水组比较明显延长(P＜0.05),而经l-THP 1.88和3.76 mg/kg治疗后,停留时间恢复至正常对照组水平.Western Blot检测到CPP大鼠NAc核团NR1的蛋白表达较正常对照组显著增加(P＜0.01),l-THP 1.88和3.76 mg/kg治疗后,NR1蛋白表达被逆转.结论 在大鼠吗啡精神依赖过程中l-THP可显著抑制NAc核团中NR1蛋白表达的增加,这一作用可能是l-THP加速大鼠吗啡CPP效应消退的机制之一.
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NR1基因RNA干扰的海马神经干细胞体系的构建
目的:构建NR1基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)的海马神经于细胞体系,用于离体水平研究NR1对精神分裂症模型海马神经发生的调控作用.方法:利用293T细胞,将病毒原液稀释至不同病毒梯度,经过逐孔稀释法检测慢病毒滴度;体外培养海马神经干细胞,分别加入MOI值为100、10、1的慢病毒,确定海马神经干细胞的适MOI值;海马神经干细胞体系中加入浓度为200 μmol/L的MK-801 24 h后,加入干扰NR1亚基的慢病毒12 h,通过荧光显微镜观察海马神经干细胞干扰效率,通过Western Blot检测转染后海马神经干细胞NR1的蛋白表达.结果:(1)重组的慢病毒滴度可达2×108 ～2×109 TU/mL.MOI值为100时,海马神经干细胞转染率可达90％;(2) Western Blot结果显示:感染慢病毒的海马神经干细胞中NR1蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).结论:成功构建了NR1基因RNA干扰的海马神经干细胞体系,慢病毒介导的shRNA可有效的干扰海马神经干细胞中NR1亚基的表达,为进一步探讨NR1对精神分裂症海马神经发生调控机制的研究提供了依据.
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侧脑室注射NMDA对精神分裂症小鼠海马颗粒细胞层NMDA受体NR1亚基表达的调控
目的:阐明N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位1(NR1)在精神分裂症小鼠海马CA1、CA3、DG区颗粒细胞层的表达及NMDA对其表达的调控作用.方法:将小鼠随机分为实验组、对照组及空白组,实验组每日连续腹腔注射MK-801 (0.6 mg/kg) 14 d后侧脑室注射NMDA 1次,72 h后取材,应用免疫荧光标记法检测各组小鼠海马CA1、CA3、DG区颗粒细胞层NR1阳性细胞的表达.结果:对照组小鼠DG区NR1阳性细胞的表达比实验组和空白组明显升高(P＜0.05);在CA1区,实验组NR1的表达与对照组及空白组相比显著降低(P＜0.05);在CA3区,对照组NR1的表达与空白组相比显著降低(P＜0.05).结论:(1)精神分裂症小鼠海马颗粒细胞层NR1阳性细胞的表达在DG区和CA1区显著升高,CA3区显著降低;(2) NMDA可调节精神分裂症小鼠海马结构颗粒细胞层NR1阳性细胞的表达趋于正常水平.
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侧脑室注射NMDA受体激动剂后精神分裂症小鼠海马齿状回内NR1和BrdU的改变
目的:探讨精神分裂症(schizophrenia,SP)小鼠侧脑室注射N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体激动剂后,海马齿状回(dentate gyrus,DG)颗粒细胞层NR1和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)阳性细胞数量的改变.方法:选择健康6周龄雄性C57小鼠,地卓西平马来酸盐(MK-801)慢性给药制备精神分裂症动物模型,实验分为NMDA组、生理盐水组、SP组和空白对照组共四组,NMDA组侧脑室注射NMDA受体激动剂.BrdU标记后行免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜下观察和计数DG颗粒细胞层NR1和BrdU阳性细胞的表达和数量变化.结果:(1)NR1阳性细胞数在NMDA组、空白对照组、SP组和生理盐水组分别为16.1 ±2.08,14.5±2.17,19.4±4.65,19.5±4.33,经比较,NMDA组和空白对照组NR1阳性细胞的数量明显少于SP组(P＜0.05),但NMDA组与空白对照组相比无明显差异(P＞0.05),SP组与生理盐水组相比也无明显差异(P＞0.05).(2) BrdU阳性细胞数在NMDA组、空白对照组、SP组和生理盐水组分别为5.2±2.53、5.3±0.82、3.4±1.58、3.5±1.35,经比较,NMDA组和空白对照组分别多于SP组(P＜0.05),和生理盐水组(P＜0.05);但NMDA组较空白对照组无明显差异(P＞0.05),SP组较生理盐水组亦无明显差异(P＞0.05).结论:SP小鼠侧脑室注射NMDA受体激动剂后,可引起DG颗粒层NR1阳性细胞数减少和BrdU阳性神经细胞数的增多.
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吗啡精神依赖大鼠VTA-NAc-PFC神经环路NR1表达的变化
目的:研究吗啡诱导条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)大鼠中脑腹侧被盖区-伏核-前额叶皮质(VTA-NAc-PFC)神经环路各核团中N-甲基-D-天冬氨酸受体NR1亚基(NR1)表达的变化.方法:20只大鼠随机分为生理盐水对照组和吗啡条件性位置偏爱模型组,模型组采用大鼠颈背部皮下吗啡剂量递增注射(起始剂量10 mg/kg,每天递增10 mg/kg,至注射10 d时为100 mg/kg),CPP训练10 d,末次训练后48hCPP检测确认模型建立成功后取材,利用Western Blot方法检测VTA,NAc和PFC内NR1蛋白的表达情况.结果:经CCP检测,模型组大鼠在白箱(吗啡伴药箱)停留时间在训练前和训练后分别为408±93 s和528±81 s,与生理盐水组比较(训练前和训练后分别为393±81 s和416±58 s)明显有所延长(P＜0.05).Western Blot检测到吗啡诱导条件性位置偏爱大鼠的NAc核团NR1表达水平较生理盐水组显著增加(P＜0.05),而VTA和PFC两个核团的NR1表达水平则未见明显改变.结论:NR1在吗啡精神依赖过程中NAc核团中表达增加,而在VTA和PFC核团中没有增加.
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NMDA受体NR1亚单位与GABAA受体在精神分裂症小鼠海马齿状回颗粒细胞层的表达
目的:明确NMDA受体NR1亚单位、GABAA受体与精神分裂症(SP)小鼠海马齿状回颗粒细胞层新生颗粒细胞的共存模式;阐明NR1、GABAA受体在SP小鼠海马中的表达.方法:实验组小鼠腹腔注射MK-801(每日0.6 mg/kg),对照组注射等量的生理盐水,连续注射14 d后对两组动物分别进行BrdU标记,断头并进行如下处理:(1)免疫荧光染色,观察海马DG区中NR1和GABAA的表达以及与BrdU标记的新生颗粒细胞的共存模式;(2)利用RT-PCR技术,检测海马GABAA及NR1 mRNA表达水平的改变.结果:(1)停药后实验组与对照组比较,海马神经细胞的增殖率下降了23.1％ (P ＜0.05),GABAA、NR1两种神经细胞增殖数无差异性改变(P＞0.05);(2)实验组小鼠海马GABAAmRNA的表达量较对照组显著下降(P＜0.05),而NR1 mRNA的表达量较对照组明显增高(P＜0.05).结论:(1)小鼠精神分裂症后可引起海马齿状回神经细胞增殖的降低;(2)小鼠精神分裂症后,在mRNA水平上,海马GABAA的表达降低,NR1的表达升高.
