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应用ELISA和IHA检测粤东梅州丘陵山区人群血清弓形虫抗体
为了解粤东丘陵山区健康人群弓形虫病的感染情况.方法:用ELISA和IHA两种血清学检测方法进行互补检测.结果:共检1 010人,血清弓形虫抗体阳性157人,阳性率为15.54%.在157例阳性中,除90例双阳性外(ELISA和IHA),还有67例单项阳性(ELISA或IHA),其中ELISA阳性而IHA阴性23例,IHA阳性而ELISA阴性44例.结论:地处粤东丘陵山区的梅州市人群弓形虫病感染率较高,应引起重视.对弓形虫病的实验诊断以选用两种血清学方法同时检测为佳.
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上海市长宁区156例麻疹疑似病例血清IgM抗体检测结果分析
目的 分析近年来上海市长宁区麻疹的流行情况,评价麻疹疑似病例的血清学诊断.方法 对2002年1月至2006年3月长宁区麻疹疑似病例的流行病学调查和血清学检测结果进行分析.结果 156例麻疹疑似病例麻疹IgM抗体阳性率为85.90%.不同年龄组间IgM抗体阳性率差异有显著的统计学意义,＜8月龄组和≥20岁的成年人组IgM抗体阳性率较高,而8月龄至4岁及5～19岁组阳性率较低.不同免疫史组间IgM抗体阳性率差异也有显著的统计学意义,有免疫史组的阳性率低于无免疫史及免疫史不详组.不同采样时间IgM抗体阳性率不同,出疹当天采集的血清阳性率低.结论 继续做好麻疹疫苗的常规免疫和强化免疫工作,控制成年人麻疹病例的发生,提高麻疹实验室监测的敏感性和准确性可促进麻疹的控制与消除.
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2例乙型脑炎流行病学调查报告
2003年5-7月份,广东省部分地区发生乙脑疫情.2003年6月中山市某医院报告2例乙脑疑似病例,根据临床症状、流行病学调查及血清学诊断为乙脑的散发流行.现将调查情况报告如下.
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Trustline结核分枝杆菌IgG/IgM抗体检测试剂盒(胶体金法)的临床应用评价
目的 评价Trustline结核抗体IgG/IgM检测试剂盒临床应用效果.方法 选用3家医院的1009份血清标本,其中628份为结核病患者血清(308例菌阳病例,320例菌阴病例)；对照组381份非结核病血清.采用Trustline 试剂盒及一种已上市的试剂盒(对照试剂盒)分别检测1009份血清,计算多项检测指标,从而评价试剂盒的检测效果.结果 通过检测1009份临床血清标本,Trustline试剂盒检测血清抗体(IgG+ IgM)的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、Youden指数分别为61.3％、79.8％、83.3％、55.6％和0.411,对照试剂盒检测血清抗体(IgG)的结果分别为53.7％、89.0％、88.9％、53.8％和0.426.经统计分析表明Trustline试剂盒的灵敏度显著优于对照试剂盒(P＜0.01),特异度低于对照试剂盒(P＜0.01),但阳性诊断效率和阴性诊断效率方面差异无统计学意义,Youden指数相接近.进一步分析显示Trustline试剂盒对菌阳样本及菌阴样本的检出率分别77.6％和44.7％,对照试剂盒则为67.9％和40.0％,对菌阳样本检出率的差异有统计学意义.检测1009份标本,Trustline试剂盒共得lgM阳性35例,其中结核组阳性30例(4.8％),非结核组阳性5例(1.3％).结论 Trustline试剂盒检测结核抗体的灵敏度显著优于对照结核抗体试剂盒,并可同时用于检测IgG/IgM抗体,可以应用于结核病的快速诊断.
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结核分枝杆菌MPT64蛋白的表达、纯化及初步应用
目的获得重组MPT64蛋白，研究其免疫学特性，评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法应用基因工程技术表达、纯化MPT64蛋白，通过Western blotting分析其抗原性。分别以结核分枝杆菌PPD或纯化的rMPT64蛋白为抗原，通过ELISA方法及结核病一步法检测血清中抗结核抗体。结果重组质粒pET 15b-MPT64测序表达除83位密码子由CCA突变为CCG外，其余密码子均与报道的相同，但其氨基酸序列无变化。它在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内以包涵体形式存在，表达量占菌体总蛋白的20～30%，分子量约26kDa，Western blotting分析它与抗结核分枝杆菌多克隆抗体具有良好的免疫反应性。纯化后的rMPT64样品经SDS-PAGE和光密度扫描分析表明其纯度约为80%左右，每100ml培养菌可获得10mg左右的重组蛋白。以33例正常人血清的OD值+2S为正常界限值，PDD的特异性和敏感性分别为94%(31/33)、63.7%(21/33)、66.7%；rMPT64纯化蛋白分别为 94%(31/33)、30.3(10/33)；一步法分别为88%(29/33)、66.7%(22/23)。结论 pET15b-MPT64大肠杆菌工程菌能以包涵体形式高效表达重组MPT64蛋白，该蛋白具有较高的抗原特异性和免疫反应性。rMPT64纯化蛋白有可能成为结核病血清学诊断的组合抗原之一。
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结核分枝杆菌分泌蛋白及血清学诊断应用前景
结核病是一种由于结核分枝杆菌感染而引起的慢性疾病.在发展中国家,它是主要的传染病之一,近年由于结核分枝杆菌耐多药菌株的增多及HIV/TB双重感染,某些发达国家也出现了上升趋势.目前全球结核病的疫情依然十分严峻,全世界已有近1/3的人口受到结核分枝杆菌的感染,每年有大约800万新病例和300万死亡病例[1-2].
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结核杆菌重组Rv3425蛋白的结核病血清学诊断价值的评价
[目的]评价结核分支杆菌重组Rv3425蛋白在结核病血清学诊断中的价值.[方法]以重组Rv3425作为抗原,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测151份确诊结核病人、143份健康人、38份卡介苗接种阳转者和42份非结核病人血清中的抗结核抗体水平,并与结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)、Ag85B蛋白及TB-DOT、TB-CHECK-1试剂盒的检测结果进行比较,以此来评价重组Rv3425蛋白在结核病诊断上的价值.[结果]Rv3425与PPD和Ag85B抗原一样能够诊断结核病人,但PPD不能有效区分结核病人和BCG接种者,Rv3425和Ag85B蛋白可以明确区分.[结论]虽然重组Rv3425蛋白对结核病的阳性率尚不能与试剂盒媲美,但由于其能够有效区分结核病人和BCG阳转者,在结核病诊断方面具有很大的应用价值,可以作为结核病诊断的备选抗原之一.
关键词： 分支杆菌 结核 重组Rv3425蛋白 血清学诊断 -
大连口岸HIV感染者的流行病学调查
[目的]了解大连口岸出入境人员中艾滋病感染的情况,掌握流行病学资料,为制定预防和控制艾滋病政策提供科学依据.[方法]采用酶联免疫吸附试验或颗粒凝集试验进行HIV抗体初筛检测,检出的阳性样品用蛋白印迹试验进行确认.[结果]从1997～2001年共检出HIV感染者9例.在9例HIV感染者中,30～39岁年龄组所占比例高,为55.6%,是HIV感染者的高发年龄;男性所占比例为88.9%,女性所占比例为11.1%,男性感染者显著高于女性;9例感染者中7例为中国籍,2例为外籍;职业分布上看,8例为国际远洋船员,1例为外籍厨师,可以看出国际远洋船员是HIV感染的高危人群.[结论]对口岸出入境人员进行HVI感染监测,加强艾滋病知识的宣传教育和预防干预措施,将有效地控制艾滋病的传入和传出.
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苏州口岸出入境人员乙型肝炎监测结果分析
[目的]了解苏州出入境人员乙型肝炎病毒(HBsAg)感染情况,为乙型肝炎的有效控制、预防及做好旅行卫生保健工作提供科学依据.[方法]所有出入境人员均采用酶联免疫吸附试验检测HBsAg,并对其结果进行统计分析.[结果]在4758名出入境人员中,共检测出HBsAg阳性263人,阳性率为5.5%.其中入境人员阻性率为8.2%,出境人员为4.8%;男性阳性率为6.6%,女性为4.2%;30～50岁年龄段阳性率高;“大三阳”、“小三阳”共198例,占HBsAg阳性总数的75.1%.[结论]应加强对出入境人员HBsAg的监测,向国际旅行者提供相应的卫生保健知识,切实保护人体健康.
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重组结核分枝杆菌PPE17蛋白原核可溶性表达纯化和血清学诊断研究
目的 利用原核系统可溶性表达结核分枝杆菌PPE17蛋白并进行纯化,研究其免疫学特性,并评价该重组蛋白在结核病血清学诊断方面的价值.方法 从结核分枝杆菌H37Rv基因组中利用PCR扩增PPE17核酸序列然后克隆至融合表达载体pET-DsbC中,转入大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导、表达和纯化,用Western Blot和EL ISA方法进行抗原性初步评价.结果 融合蛋白Ds-bC-PPE17在原核系统内经IPTG诱导表达后,主要以可溶性形式表达存在,经镍柱层析获得了纯的重组蛋白,纯度达95％以上.Western Blot和EL ISA方法结果证明重组DsbC-PPE17蛋白具有较强的抗原活性.用纯化的PPE17蛋白做抗原,临床诊断结核病人血清,阳性率达60％.结论 融合蛋白DsbC-PPE17在大肠埃希菌中以可溶性表达形式存在,高纯度的重组融合蛋白有可能成为结核病的血清学诊断抗原.
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济宁市任城区1999～2002年麻疹发病情况分析
按照山东省与世界卫生组织/美国疾病控制与预防中心合作麻疹疫情监测项目要求,济宁市任城区从1999年起进一步完善了麻疹监测系统.现对1999～2002年麻疹监测系统报告的疑似病例中经血清学诊断的麻疹病例的发病情况进行分析.
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SARS冠状病毒结构蛋白在血清学诊断中潜在应用价值的比较
为了确定特异的SARS抗体检测抗原,比较了SARS冠状病毒(SARS-CoV)主要结构蛋白与SARS患者血清的反应性.从SARS死亡患者的肺组织提取的总RNA为模板,用RT-PCR技术分别扩增S、N、M和E 4种结构蛋白基因,对3种S截短突变体和N、M、E的重组蛋白在大肠杆菌中进行表达.以表达的蛋白为抗原,应用Westernblot跟踪检测11例SARS患者血清54份.结果显示:SARS-CoV的重组N蛋白和S蛋白有很强的抗原性,S蛋白的3个区段的抗原性强弱存在差异,S3抗原性强于S1和S2;在患病第1周、2周、3周及3周以上,N蛋白和S3蛋白抗体检出率分别为40%、65.2%、100%、100%和40%、61%、76.2%、100%;提示SARS-CoV重组N蛋白和S3蛋白在SARS的血清学诊断中有一定的应用价值.
关键词： SARS冠状病毒 结构蛋白 Western blot 血清学诊断 -
六种致病性白蛉病毒原核表达核蛋白抗原性初步研究
初步研究六种致病性白蛉病毒原核表达核蛋白(Nucleocapsid protein,NP)抗原的抗原性,为开发相应的血清学诊断试剂提供理论依据.利用原核表达系统表达纯化六种致病性白蛉病毒核蛋白,并分别免疫新西兰白兔.通过间接ELISA方法及Western-blotting方法对所获得的兔免疫血清进行交叉反应检测,确定其抗体ELISA滴度.此外,分别用上述六种致病性白蛉病毒NP抗原包被ELISA反应板并对发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)病人血清进行间接ELISA检测,确定其血清学交叉反应及IgG抗体滴度.通过原核表达系统表达并纯化的六种白蛉病毒NP抗原浓度及纯度均达到免疫和检测要求.ELISA及Western-blotting检测结果显示六种病毒NP抗原兔免疫血清中的每种血清与其余五种病毒NP抗原可能存在血清学交叉反应.SFTSV病人血清与除SFTSV-NP以外的五种NP抗原亦可能存在部分交叉反应.本研究初步评价了原核表达的六种致病性白蛉病毒核蛋白的抗原性和免疫反应性,为相应诊断试剂的研制奠定了基础.
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寨卡病毒IgG抗体间接ELISA检测方法的初步建立
初步建立了寨卡病毒(Zika virus) IgG抗体的间接ELISA检测方法,为开发相应的血清学诊断试剂提供理论依据.选取寨卡病毒四种抗原,即E蛋白胞外区(Ectodomain)、NS1蛋白、C蛋白和rEⅢ蛋白进行重组表达和纯化,分别包被ELISA板并用间接法检测寨卡病人临床血清和正常人血清,确定每种检测抗原的检测敏感度和特异度.重组表达并纯化的四种寨卡病毒抗原浓度和纯度均达到检测要求.间接ELISA检测结果显示E蛋白胞外区和NS1蛋白的检测敏感度和特异度均达到较高水平,但C蛋白和rEⅢ蛋白的检测敏感度很低,不适合作为寨卡病毒的检测抗原.本研究初步评价了寨卡病毒四种抗原检测相应IgG抗体的敏感度和特异度,为研制血清学诊断试剂奠定了基础.
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济南市2011年急性脑膜炎/脑炎症候群病例哨点监测分析
目的 了解济南市2011年急性脑膜炎/脑炎症候群(Acute Meningitis/Encephalitis Syndrome,AMES)哨点监测病例的主要病毒性病原及其流行病学特征.方法 在济南市选取省、市、县级各2所医院作为哨点医院,收集2011年AMES病例血清和脑脊液(Cerebrospinal Fluid,CSF)标本,采用酶联免疫吸附试验对4种病毒特异性免疫球蛋白(Immunoglobilin,Ig)M进行血清学诊断.结果 济南市2011年报告的AMES病例集中在5～9月,高峰出现在6 ～8月,峰值出现在7月,但≥15岁的病例数无季节性高峰.所有病例的血清和CSF标本均检测了流行性乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)IgM,阳性率为7.1％(46/647例),比2008 ～ 2010年明显下降,其差异有统计学意义(x2=12.6,P＜0.05).其余血清标本IgM检测结果为:人类肠道病毒(Human Enterovirus,HEV)阳性率为18.5％(61/330例),流行性腮腺炎病毒(Mumps Virus,MuV)阳性率为13.9％(46/330例),单纯疱疹病毒(Her-pes Simplex Virus,HSV)阳性率为13.0％(43/330例).不同年龄组病例的主要病原存在差异,＜5岁以HEV感染为主,而≥15岁则以HSV为主.与其他3种病毒的季节分布不同,MuV感染全年无明显差异(x2=5.4,P=0.36).4种病毒中,仅HSV感染有明显的性别差异(x2=5.1,P=0.02),女性感染较多.结论 济南市2011年6所哨点医院AMES病例的主要病毒性病原体依次为HEV、MuV、HSV、JEV.由于不同病毒的流行病学特征不同,需针对病毒的特性制定个性化监测方案,并加强实验室检测.
关键词： 急性脑膜炎/脑炎症候群 哨点监测 病毒感染 血清学诊断 特异性免疫球蛋白M -
天津市2005年一起麻疹爆发的回顾性调查
2005年春,天津市一外资企业出现麻疹爆发,现将回顾性流行病学调查结果报告如下.调查对象为2005年1～4月各医疗单位诊断的该企业麻疹病例,均经血清学诊断证实.使用统一设计的麻疹病例个案调查表进行调查.
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一起高校麻疹、风疹混合流行的调查分析
2001年3月1日～5月25日,西安市某高校发生出疹性疾病的流行,市卫生防疫站于3月20日接到报告后,依据流行病学调查、临床表现、实验室检测结果判定为一起麻疹、风疹混合流行,现将调查情况报告如下.1 诊断标准根据<全国麻疹监测方案(试行)>要求,对现症病人进行流行病学个案调查,并查阅患者住院病历,采集血标本进行血清学诊断.由市卫生防疫站采用酶联免疫吸附试验(ELISA)捕捉法检测麻疹、风疹IgM抗体.麻疹按<全国麻疹监测方案(试行)>中标准麻疹定义判定.风疹按<传染病诊断标准及处理原则>的要求判定.
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旋毛虫氨基肽酶的表达及其血清学诊断价值的研究
目的 构建旋毛虫氨基肽酶(TsAP)基因重组质粒,表达重组TsAP蛋白,评价该蛋白的血清学诊断价值.方法 通过RT-PCR扩增TsAP基因,构建重组质粒pGEX-6p-1-TsAP,测序及酶切鉴定后转化E.coli BL21,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,表达产物经GST Sefinose Resin (BBI)亲和层析纯化后应用SDS-PAGE和Westernblot进行鉴定.应用旋毛虫重组rTsAP蛋白ELISA(rTsAP-ELISA)对旋毛虫感染小鼠血清进行检测,观察旋毛虫感染小鼠后不同时间的血清抗体阳性率,并与旋毛虫肌幼虫ES抗原ELISA (ES-ELISA)的检测结果进行比较.结果 构建的重组表达载体pGEX-6p-1-TsAP能表达TsAP蛋白.SDS-PAGE结果显示,rTsAP的分子质量单位约为80 ku,以IPTG诱导4h后表达量大.rTsAP-ELISA及ES-ELIS对旋毛虫感染小鼠血清的抗体检出率均为100％(40/40),与曼氏裂头蚴、弓形虫感染小鼠及正常小鼠血清均无交叉反应,与日本血吸虫感染小鼠血清的交叉反应率分别为93.75％(15/16)和50.00％(8/16)(P＜0.05).rTsAP-ELISA与ES-ELISA对旋毛虫感染2周的小鼠血清抗体检出率分别为50.00％(11/22)和81.82(18/22),差异无统计学意义(P＜0.05),至感染后6周抗体检出率均达100％.结论 重组TsAP蛋白具有良好的反应原性,但与日本血吸虫感染小鼠血清有较高的交叉反应.
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细粒棘球绦虫EgAgB8/1重组抗原和EgAgB8/1-EgAgB8/2重组嵌合抗原的表达及血清学诊断价值的比较
目的 诱导表达并纯化细粒棘球绦虫EgAgB8/1重组抗原和EgAgB8/1-EgAgB8/2重组嵌合抗原,比较两个重组蛋白对囊型包虫病(CE)的血清学诊断价值.方法 IPTG诱导转染至E.coli BL21(DE3)LysS的pET32aEgAgB8/1和pET32a-EgAgB8/1-EgAgB8/2重组原核表达质粒,表达和纯化EgAgB8/1重组蛋白和EgAgB8/1-EgAgB8/2重组嵌合蛋白,用SDS-PAGE电泳分析鉴定重组蛋白,并通过超声裂解法进行纯化,以CE病人及囊虫病人血清为一抗,Western blot法检测两个重组蛋白免疫反应性.结果 细粒棘球绦虫重组抗原pET32a-EgAgB8/1和pET32a-EgAgB8/1-EgAgB8/2重组原核表达质粒得到成功诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析,重组蛋白分子质量单位为28 ku和38 ku;Western blot结果 表明,EgAgB8/1重组蛋白和EgAgB8/1-EgAgB8/2重组嵌合蛋白均能被CE病人血清特异性识别,16份CE病人血清中,以EgAgB8/1重组蛋白为抗原时11份阳性,以EgAgB8/1-EgAgB8/2重组蛋白为抗原时13份阳性;用EgAgB8/1和EgAgB8/1-EgAgB8/2重组蛋白检测12份囊虫病人血清,分别有5份和3份阳性.结论 EgAgB8/1-EgAgB8/2重组嵌合蛋白具有抗原特异性,对囊型包虫病的血清学诊断价值优于EgAgB8/1重组蛋白.
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ELISA检测特异性IgG4诊断肺吸虫病的效果观察
目的探讨用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测特异性IgG4诊断肺吸虫病的效果.方法采用ELISA法检测了肺吸虫病病人血清中的特异性IgG和IgG4抗体及肝吸虫、囊虫、旋毛虫、日本血吸虫病病人和正常人血清中的交叉抗体.结果检测肺吸虫病病人血清中IgG4的敏感性为95.35%,检测正常人血清的特异性为100%,与常规使用的酶联葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA)检测结果及检测IgG结果比较差异无显著性(P均＞0.05);与其他寄生虫病病人血清中的交叉反应率,IgG4显著低于用常规HRP-SPA检测结果. 结论ELISA法检测肺吸虫病病人血清中特异性IgG4具有较高的诊断应用价值.
