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胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血损伤的抗氧化作用及剂量优化研究
目的 通过正交试验优化胡黄连苷Ⅱ治疗大鼠脑缺血损伤的佳剂量和时间窗.方法 应用双侧颈总动脉结扎法(BCCAO)建立大鼠前脑缺血模型,按照正交试验设计分组,经腹腔注射胡黄连苷Ⅱ干预治疗,应用黄嘌呤氧化酶法、化学比色法和光化学法分别检测血清和脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)和过氧化氢酶(CAT)的活性.结果 胡黄连苷Ⅱ治疗脑缺血损伤的佳效果:根据血清SOD、GSHPx和CAT活性分析,分别为脑缺血1.5 h腹腔注射20 mg·kg-1、1.5 h/10 mg·kg-1和1.5 h/20 mg·kg-1体重.根据脑组织SOD、GSHPx和CAT活性分析,分别为脑缺血1.5 h腹腔注射20 mg·kg-1、2.0 h/20 mg·kg-1和1.5 h/10 mg·kg-1体重.结论 从用药剂量小化和治疗时间窗大化原则综合评价,胡黄连苷Ⅱ治疗脑缺血损伤的佳治疗时间窗和剂量为脑缺血1.5~20 h腹腔注射10~20 mg·kg-1体重.
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HPLC测定清肝疏郁颗粒剂中4种成分的含量
目的:建立清肝疏郁颗粒中胡黄连苷Ⅰ,Ⅱ,芍药内酯苷和芍药苷的HPLC定量分析方法.方法:超声提取目标物;采用HPLC-DAD系统,Diamonsil(2)-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.05％甲酸水溶液梯度洗脱,检测波长264 nm(胡黄连苷Ⅰ,Ⅱ),230 nm(芍药苷,芍药内酯苷).结果:胡黄连苷Ⅰ,Ⅱ,芍药苷,芍药内酯苷的线性范围分别为0.0672～6.72 μg(r=0.9996),0.0174～17.4 μg(r=0.9998),0.01 ～10.00 μg(r=0.9995),0.06～6.00 μg (r=0.999 1).加样回收率分别为98.55％,100.95％,97.90％,97.90％;RSD分别为1.7％,2.4％,1.4％,1.7％.结论:该方法准确、灵敏、简便、重复性好,为清肝疏郁颗粒剂的质量控制提供了科学基础.
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胡黄连苷Ⅱ对体外H2O2诱导肝细胞(L-02)损伤Keap1_Nrf2(ARE)抗氧化通路mRNA表达的影响
目的:研究在H2O2诱导发生的肝细胞(L-02)的氧化损伤过程中,胡黄连苷Ⅱ对抗氧化通路Keap1_Nrf2(ARE)信号蛋白的mRNA表达的影响.方法:用不同浓度胡黄连苷Ⅱ(0.5、5mmol/L)处理人正常肝细胞株(L-02)3h后,加入0.6mmol/L的H2O2作用1h造成氧化应激损伤,同时设对照组,采用荧光探针2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞内活性氧的含量,于24和48h通过实时荧光定量PCR技术检测各组细胞的Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1),核转录因子E2相关因子(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白的mRNA的表达情况.结果:胡黄连苷Ⅱ预处理后,肝细胞内活性氧含量较模型组(仅H2O2作用后)明显减少(p＜0.05),药物高浓度干预组Nrf2、HO-1的mRNA表达较模型组显著增高(P＜0.05),且随浓度的提高而增加.结论:通过影响抗氧化通路Keap1_Nrf2(ARE),增加下游抗氧化蛋白表达,清除细胞内活性氧,可能是胡黄连苷Ⅱ发挥保护H2O2诱导的肝细胞损伤作用机制之一.
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胡黄连苷Ⅱ对过氧化氢诱导急性肝细胞损伤中Ⅱ相代谢酶mRNA表达的影响
目的:研究胡黄连苷Ⅱ(PicrosideⅡ,PicⅡ)对过氧化氢(H2O2)诱导的人肝细胞系L-02氧化损伤中转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)及下游Ⅱ相抗氧化解毒酶表达的影响,探讨胡黄连苷Ⅱ抗氧化保护肝细胞的作用机制.方法:用0.5 mmol/L,5mmol/L picⅡ干预L-02细胞3h作为干预组,用DMEM培养作为对照及模型组,除对照组外各组均加入终浓度为0.6 mmol/L的H2O2作用1h造成急性氧化应激损伤,后继续培养24 h,MTT法检测细胞增殖状况,速率法检测细胞培养液AST和ALT的水平,通过实时荧光定量RT-PCR检测各组的Nrf2、NQO1、GST、Gclc和Gclm的mRNA的表达变化.结果:胡黄连苷Ⅱ可降低由H2O2诱导的L-02细胞损伤(P＜0.01),模型组AST、ALT水平较对照组显著升高(P＜0.01),胡黄连苷Ⅱ干预组较模型组均降低(P＜0.01);模型组NQO1、Gclc、Gclm和GST的mRNA表达较对照组明显降低(P＜0.01),而胡黄连苷Ⅱ干预组Nrf2、NQO1、Gclc、Gclm的mRNA表达水平均较模型组明显升高(P＜0.05),且呈一定程度浓度依赖性(P＜0.05).结论:PicrosideⅡ通过诱导氧化损伤L-02细胞中Nrf2表达上调,促进下游抗氧化蛋白及Ⅱ相代谢酶表达,可能是其抗氧化损伤、发挥保护肝细胞作用的机制之一.
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胡黄连苷Ⅱ在大鼠脑缺血损伤中的抗氧化作用及其佳治疗剂量和时间窗
目的通过正交试验优化胡黄连苷Ⅱ治疗大鼠脑缺血损伤的佳剂量和时间窗。方法应用双侧颈总动脉结扎法建立大鼠前脑缺血模型，按照正交试验设计分组，经腹腔注射胡黄连苷Ⅱ干预治疗。应用硫代巴比妥酸法、硝酸还原酶法和光化学法，分别测定血清和脑组织中脂质过氧化物丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和过氧化氢(H2O2)的含量。结果胡黄连苷Ⅱ治疗脑缺血损伤的佳效果，根据血清MDA、NO和H2O2含量分析，分别为脑缺血1.5 h腹腔注射10、20、10 mg/kg体质量。根据脑组织MDA、NO和H2O2含量分析，分别为脑缺血1.5 h腹腔注射10、20、20 mg/kg体质量。结论从用药剂量小化和治疗时间窗大化的角度综合评价，胡黄连苷Ⅱ治疗脑缺血损伤的治疗时间窗和剂量佳组合为脑缺血1.5 h腹腔注射10～20 mg/kg体质量。
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利用分子印迹技术从中药粗提物中定向分离胡黄连苷Ⅱ的研究
胡黄连苷Ⅱ为神经保护的中药活性成分,但其传统的分离工艺较复杂,效率较低,溶剂用量大,环境不友好,而分子印迹技术是一门分子识别技术,其制备的分子印迹聚合物因具有特异性结合位点而对目标分子有较高的选择吸附性,能够克服传统分离技术的以上缺点.该研究以胡黄连苷Ⅱ为模板,采用沉淀聚合法制备了胡黄连苷Ⅱ的分子印迹聚合物,并对其性能进行了研究.结果表明合成的聚合物微球不仅表面光滑,大小均匀,而且Scatchard分析得出胡黄连苷Ⅱ分子印迹聚合物的大表观结合位点数Qmax3.02 mg·g-1,远远高于其空白印迹聚合物.充分证明利用沉淀聚合法可以合成形貌和靶向吸附能力均较好的黄连苷Ⅱ分子印迹聚合物,可用于从中药粗提物中靶向分离胡黄连苷Ⅱ及其结构类似物,有利于减少中药提取分离过程中有机溶剂的使用,环境友好,且操作简便,为中药胡黄连苷Ⅱ的高效分离提供了新的方法.
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胡黄连苷Ⅱ对脑缺血损伤大鼠ERK1/2信号通路的影响
目的 探讨胡黄连苷Ⅱ对脑缺血损伤后细胞外调节蛋白激酶1/2 (ERK1/2)通路的影响及其神经保护作用机制.方法 应用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,按随机数字表将96只造模成功大鼠分为模型组、治疗组、脂多糖(LPS)组和U0126组,每组再分为缺血6、12、24 h3个亚组.治疗组缺血后2h腹腔注射胡黄连苷Ⅱ(20 mg/kg).LPS组在缺血后2h腹腔注射LPS(20 mg/kg)和胡黄连苷Ⅱ(20 mg/kg).U0126组在缺血后2h腹腔注射U0126-EtOH (20 mg/kg)和胡黄连苷Ⅱ(20 mg/kg).模型组和对照组同步腹腔注射等体积的生理盐水.采用改良的神经功能评分(mNSS)法评价大鼠神经行为功能;HE染色观察神经细胞形态结构;原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡;免疫组织化学和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脑组织pERK1/2表达.结果 大鼠脑缺血损伤后,随着时间的延长,模型组大鼠神经功能缺损评分升高,皮质区神经细胞损伤加重,凋亡细胞增多,pERK1/2蛋白表达较对照组明显增强(P＜0.05).治疗组和U0126组大鼠皮质区神经元细胞损伤较轻,凋亡细胞,pERK1/2表达较模型组明显降低(P＜0.05).LPS组大鼠神经元细胞早期损伤较重,凋亡细胞与pERK1/2表达水平较高,但后期pERK1/2表达水平有所下降,大鼠神经行为功能损伤略有恢复.结论 脑缺血损伤后激活ERK1/2通路介导神经细胞凋亡和炎症反应,胡黄连苷Ⅱ可能通过降低ERK1/2通路的活化,抑制神经细胞凋亡和炎症反应而保护神经系统.
关键词： 胡黄连苷Ⅱ 脑缺血 炎症反应 凋亡 细胞外调节蛋白激酶1/2 -
胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血再灌注损伤的干预作用
目的 研究胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用.方法 应用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)模型,经尾静脉注射胡黄连苷Ⅱ(10mg/kg) 和丹参素钠(10mg/kg)干预治疗,Bederson法评价动物的神经行为功能,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察脑梗死体积,组织病理学观察神经细胞结构,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.结果 脑缺血再灌注损伤后,大鼠均表现神经行为功能障碍,缺血侧出现脑梗塞病灶,神经细胞凋亡数量均高于假手术组.胡黄连苷Ⅱ和丹参素钠治疗后,神经细胞凋亡数量明显减少、脑梗塞体积显著缩小,动物神经行为功能明显改善,与模型对照组比较均有显著性差异(P<0.05).胡黄连苷Ⅱ组脑梗塞体积显著小于丹参素钠组(P<0.05).结论 胡黄连苷Ⅱ可能通过抑制细胞凋亡,缩小梗死体积而改善大鼠的神经行为功能.
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胡黄连苷Ⅱ对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障的保护作用机制探讨
目的 探索胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血再灌注(I/R)后血脑屏障(BBB)的保护作用和机制.方法 将150只Wistar大鼠随机分为5组(剔除死亡),假手术组、模型组、胡黄连苷Ⅱ治疗组、夹竹桃麻素阳性对照药物组、胡黄连苷Ⅱ与夹竹桃麻素共同作用组,每组25只大鼠.应用栓线法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,腹腔注射胡黄连苷Ⅱ干预治疗.大鼠脑缺血2 h再灌注22 h后,ELISA检测脑组织活性氧(ROS)的含量,TTC染色测量梗死体积,依文思蓝法检测BBB的通透性,硝酸镧透射电镜观察BBB的结构,Western blotting检测ROCK、MLCK、MMP-2、Claudin-5的表达水平.结果 大鼠造模后,脑组织ROS含量增高,皮质区梗死明显,BBB的通透性增加、结构受损,大鼠脑组织ROCK、MLCK、MMP-2蛋白表达明显增强,Claudin-5表达明显减弱;胡黄连苷Ⅱ治疗后,大鼠脑组织梗死体积明显缩小(14.12％±1.73％比34.75％±4.32％,P<0.01),BBB渗漏率和镧颗粒漏出显著减少,ROS含量明显降低(P<0.05).ROCK、MLCK、MMP-2蛋白表达下降(P<0.05),Claudin-5表达明显增强(P<0.05).结论 胡黄连苷Ⅱ可能通过下调ROCK、MLCK、MMP-2表达,上调Claudin-5表达,从而减轻BBB损伤,发挥神经保护作用.
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胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血损伤后S100β蛋白表达的影响
目的:通过正交试验优化胡黄连苷Ⅱ治疗大鼠脑缺血损伤的佳治疗时间窗和剂量.方法:应用双侧颈总动脉结扎法建立前脑缺血模型,按照正交试验设计分组,经腹腔注射胡黄连苷Ⅱ干预治疗.应用Holzer胶质细胞染色法观察胶质细胞反应性增生,末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP缺口末端标记(TU-NEL)法检测细胞凋亡,免疫组化染色和Western blotting检测神经胶质细胞标志蛋白(S100β)表达,逆转录-PCR定量检测脑组织S100β mRNA表达水平.结果:胡黄连苷Ⅱ可以明显抑制脑缺血损伤后胶质细胞反应性增生、神经细胞凋亡以及S100β表达.其佳治疗时间窗和剂量,根据TUN EL染色结果分析为脑缺血2.0h腹腔注射5mg/kg体重,根据免疫组化、Western blotting和RT-PCR结果分析为脑缺血1.5h腹腔注射5mg/kg体重.结论:胡黄连苷Ⅱ可能通过抑制S100β表达减轻缺血性脑损伤.从治疗时间窗大化和用药剂量小化的角度综合评价,其佳治疗时间窗和剂量为脑缺血1.5-2.0h腹腔注射5mg/kg体重.
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胡黄连苷Ⅱ对H2O2损伤L-02细胞的保护作用
目的:探讨胡黄连苷Ⅱ(picroside Ⅱ)对氧化应激损伤L-02细胞的保护作用.方法:H2O2损伤的L-02细胞作为氧化应激损伤模型,MTT法检测细胞增殖状况,膜联蛋白(Annexin-Ⅴ)和碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡,罗丹明123染色FCM检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial potential membrane,△Ψm),双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量.结果:0.6 mmol/L H2O2可诱导L-02细胞凋亡.细胞内ROS浓度增加,细胞线粒体跨膜电位明显下降.预先经过0.05,0.5,5 mmol/L浓度的胡黄连苷Ⅱ处理后,H2O2诱导的L-02细胞凋亡明显减少(30.8%±9.09%,10.2%±9.82%,8.2%±7.10%vs 42.8%±8.28%,均P＜0.01),同时明显减弱H2O2对细胞内ROS浓度和线粒体跨膜电位的影响.结论:胡黄连苷Ⅱ对氧化应激损伤L-02细胞具有保护作用,其机制可能与降低细胞内ROS含量,进而抑制△Ψm的降低有关.
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胡黄连苷Ⅱ在大鼠脑缺血损伤中治疗剂量和时间窗的优化
目的 探讨胡黄连苷Ⅱ治疗大鼠脑缺血损伤的佳治疗剂量和时间窗. 方法 应用双侧颈总动脉结扎法建立大鼠脑缺血模型,将48只大鼠模型,按二因素四水平[L16(4 5)]正交试验设计分组.治疗时间窗设定缺血1.0、1.5、2.0、2.5h,共4个水平,治疗剂量设定5、10、20、40 mg/kg共4个水平.按照设定剂量经腹腔注射胡黄连苷Ⅱ干预治疗,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清和脑组织水通道蛋白4(AQP-4)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和环氧合酶2(COX-2)的水平,评价胡黄连苷Ⅱ治疗大鼠脑缺血损伤的疗效. 结果 ①根据血清和脑组织AQP-4水平分析结果,胡黄连苷Ⅱ治疗脑缺血损伤的佳治疗时间窗和剂量分别为脑缺血2.0h,腹腔注射20 mg/kg；脑缺血1.5h,腹腔注射20 mg/kg.②根据血清和脑组织MMP-9水平分析结果,佳治疗时间窗和剂量分别为脑缺血1.5h,腹腔注射20 mg/kg；脑缺血2.0h,腹腔注射20 mg/kg.③根据血清和脑组织COX-2水平分析结果,佳治疗时间窗和剂量分别为脑缺血1.5h,腹腔注射10 mg/kg；脑缺血1.5h,腹腔注射20 mg/kg. 结论 根据用药剂量小化和治疗时间窗大化的原则综合评价,根据AQP-4、MMP-9、COX-2测定结果,胡黄连苷Ⅱ治疗脑缺血损伤的佳治疗时间窗和剂量为脑缺血1.5～2.0h,腹腔注射剂量10～20 mg/kg.
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胡黄连苷Ⅱ治疗脑缺血损伤佳剂量和时间窗的研究
目的 研究胡黄连苷Ⅱ治疗大鼠脑缺血损伤的佳剂量和时间窗.方法 应用双侧颈内动脉结扎法建立大鼠前脑缺血模型,按照正交试验设计分组,经腹腔注射胡黄连苷Ⅱ于预治疗,酶联免疫吸附法检测血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质细胞标志蛋白S100B、髓鞘碱性蛋白(MBP)的含量,综合评价胡黄连苷Ⅱ在脑缺血损伤中的疗效.结果 据血清NSE、S100B和MBP含量分析,胡黄连苷Ⅱ治疗脑缺血损伤的佳治疗时机和剂量分别为脑缺血1.5 h、腹腔注射20 mg/kg.结论 从治疗时间窗大化和用药剂量小化原则综合分析,在脑缺血损伤治疗中,在脑缺血1.5 h腹腔注射胡黄连苷Ⅱ20 mg/kg体重疗效好.
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胡黄连苷Ⅱ对大鼠肾缺血再灌注损伤后肾细胞凋亡反应的保护作用
目的 观察胡黄连苷Ⅱ对大鼠肾缺血再灌注损伤后肾细胞凋亡的保护作用.方法 建立肾缺血再灌注损伤大鼠模型,将实验大鼠随机分为3组,即假手术组、缺血再灌注组和胡黄连苷Ⅱ组,每组10只.全自动生化分析仪检测大鼠血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)浓度,光镜观察病理组织变化,免疫组化检测Caspase-3表达,Realtime PCR及Western blot检测Bax、Bcl-2和PARP-1表达水平.结果 与假手术组比较,缺血再灌注组Cr、BUN 水平均明显增高;光镜病理组织可见肾小管损伤明显;免疫组化示Caspase-3表达增强;Real-time PCR及Western blot检测Bax、PARP-1表达增强,而Bcl-2表达减轻,差异有统计学意义(P＜0.05).胡黄连苷Ⅱ组与缺血再灌注组比较,肾功能指标明显减低,肾小管上皮细胞损伤减轻,Caspase-3表达显著减弱,Bax与PARP-1的活性明显下降;Bcl-2表达显著增强,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 胡黄连苷Ⅱ在肾脏缺血再灌注损伤时能有效地保护肾功能,其作用机制可能与增加Bcl-2表达,降低Bax、PARP-1、Caspase-3等凋亡基因的表达有关.
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胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血损伤后H2O2含量和CAT活性的影响
目的 通过正交试验优化胡黄连苷Ⅱ治疗大鼠脑缺血损伤的佳剂量和时间窗.方法 应用双侧颈总动脉结扎法(BCCAO)建立大鼠前脑缺血模型,按照正交试验设计分组,经腹腔注射胡黄连苷Ⅱ干预治疗,应用光化学法测定血清和脑组织中过氧化氢(H2O2)的含量和过氧化氢酶(CAT)的活性.结果 胡黄连苷Ⅱ治疗脑缺血损伤的佳效果,根据血清和脑组织中H2O2 含量分析,分别为脑缺血1.5 h/(10 mg·kg)和脑缺血1.5 h/(20 mg·kg)体重.根据血清和脑组织中CAT 活性分析,分别为脑缺血1.5 h/(20 mg·kg)和脑缺血1.5 h/(10 mg·kg)体重.结论从用药剂量小化和治疗时间窗大化的角度综合评价,胡黄连苷Ⅱ治疗脑缺血损伤的治疗时间窗和剂量佳组合为脑缺血1.5 h 腹腔注射10 ～ 20 mg/kg 体重.
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胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血损伤后NO含量和GSHPx活性的影响
目的通过正交试验优化胡黄连苷Ⅱ治疗大鼠脑缺血损伤的佳剂量和时间窗。方法应用双侧颈总动脉结扎法（BCCAO）建立大鼠前脑缺血模型，按照正交试验设计分组，经腹腔注射胡黄连苷Ⅱ干预治疗，应用硝酸还原酶法测定血清和脑组织中一氧化氮（NO）的含量。化学比色法检测血清和脑组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）的活性。结果胡黄连苷Ⅱ治疗脑缺血损伤的佳效果，根据血清和脑组织NO含量分析，均为脑缺血1.5 h，腹腔注射20 mg/kg体重。根据血清和脑组织GSHPx活性分析，分别为脑缺血1.5 h，腹腔注射10 mg/kg和脑缺血2.0 h，腹腔注射20 mg/kg体重。结论从用药剂量小化和治疗时间窗大化的角度综合评价，胡黄连苷Ⅱ治疗脑缺血损伤的治疗时间窗和剂量佳组合为脑缺血1.5~2.0 h，腹腔注射10~20 mg/kg体重。
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胡黄连苷Ⅱ对脑缺血再灌注损伤后电压依赖性阴离子通道1表达的影响
目的 研究胡黄连苷Ⅱ对脑缺血再灌注损伤后线粒体电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)表达的影响和意义.方法 应用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,按随机数字表法将造模成功的70只大鼠分为假手术组、模型组、胡黄连苷组、VDAC1选择性抑制剂钌红组、钙红+胡黄莲苷组、VDAC1选择性激动剂精胺组、精胺+胡黄连苷组,每组10只.改良神经功能缺损评分(mNSS)评价动物神经行为功能;ELISA检测脑组织活性氧(ROS)含量;HE染色观察神经细胞形态;原位末端标记(TUNEL)检测神经细胞凋亡;免疫组化染色和Western印迹检测VDAC1和核酸内切酶(EndoG)表达水平.结果 与假手术组比较,模型组大鼠mNSS评分明显升高[(9.6±1.9)分],ROS含量增加[(47.6 ±2.7)U/ml],皮质区变性细胞(0.79±0.04)和凋亡细胞增加(23.8±2.8),VDAC1 (0.94 ±0.06)和EndoG[胞质(0.76±0.06),胞核(0.75±0.06)]表达均显著增强(P＜0.05).与模型组比较,胡黄连苷组大鼠mNSS评分下降[(5.7±0.9)分],ROS含量降低[(35.6 ±2.2)U/ml],皮质区变性细胞(0.48±0.04)和凋亡细胞减少(14.5±2.1),VDAC1 (0.63 ±0.06)和EndoG[胞质(0.34±0.05),胞核(0.31±0.06)]表达均显著降低(P＜0.05).结论 胡黄连苷Ⅱ可通过下调脑缺血再灌注后VDAC1表达而减少线粒体凋亡蛋白EndoG的释放,发挥神经保护作用.
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胡黄连苷Ⅱ对哮喘大鼠的抗炎平喘作用
目的:评价胡黄连苷Ⅱ对哮喘大鼠气道炎症和气管收缩的作用.方法:将Wistar大鼠随机分为正常组、哮喘组和干预组,每组10只.用卵白蛋白系统致敏加局部激发的方法制作哮喘模型.干预组d8起每天给予胡黄连苷Ⅱ(100mg/kg)灌胃,连续14d.哮喘组、干预组大鼠均d15予2%卵白蛋白液诱喘,记录诱喘潜伏期.d22测定气道阻力,进行支气管肺泡灌洗液的细胞计数、分类计数及肺组织病理观察.结果:与哮喘组相比,干预组大鼠诱喘潜伏期显著延长(P＜0.01),哮喘反应减轻;基础呼气阻力显著降低(P＜0.05),肺顺应性显著升高(P＜0.05);支气管肺泡灌洗液的细胞总数和嗜酸性粒细胞计数均显著减少(均P＜0.01);支气管炎性病理改变减轻.结论:胡黄连苷Ⅱ可减轻气道炎症,抑制支气管收缩,对哮喘大鼠有抗炎平喘作用.
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胡黄连苷Ⅱ对大鼠缺血再灌注损伤后炎性反应的影响
目的 观察胡黄连苷Ⅱ对大鼠肾缺血再灌注损伤后炎症反应的影响.方法 建立肾缺血再灌注损伤大鼠模型,实验大鼠随机分为3组:即假手术组(sham)、缺血再灌注组(Ischemia and Reperfusion,I/R)和胡黄连苷Ⅱ组(Picroside Ⅱ),每组10只.检测大鼠血清肌苷(Cr)和尿素氮(BUN),光镜观察病理组织变化,免疫组化及Western blot检测Toll样受体-4(TIR4)和核因子-κB (NF-κB)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应(QRT-PCR)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)细胞因子水平.结果 与假手术组比较,缺血再灌注组Cr、BUN水平均明显增高;光镜病理组织可见肾小管损伤明显;免疫组化观察见TLR4和NF-κB表达明显增强,Western blot检测TLR4和NF-κB蛋白表达显著增加,QRT-PCR检测示TNF-α、IL-1β和ICAM-1表达升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).胡黄连苷Ⅱ组与缺血再灌注组相比,肾功能指标明显减低,肾小管上皮细胞损伤减轻,TLR4和NF-κB表达显著减弱,TNF-α、IL-1β和ICAM-1表达降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 胡黄连苷Ⅱ在肾脏缺血再灌注损伤时能有效的保护肾功能,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB通路表达进而抑制炎症反应有关.
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胡黄连苷Ⅱ对大鼠睾丸缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨胡黄连苷Ⅱ在大鼠睾丸缺血再灌注损伤过程中的保护作用.方法 选取成年雄性SD大鼠45只随机分为3组,每组15只:睾丸缺血再灌注+胡黄连苷Ⅱ组(睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组);睾丸缺血再灌注组(睾丸IRI组);对照组.睾丸IRI组和睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组大鼠分别建立睾丸扭转复位模型,睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组在再灌注同时腹腔注射胡黄连苷Ⅱ(10 mg/kg).HE染色观察睾丸组织病理改变;测定丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)含量;采用原位缺口末端标记检测细胞凋亡指数;免疫组化检测睾丸组织中的Bax和Caspase-3的表达情况;RT-PCR检测TNF-α和IL-1βmRNA表达水平.结果 睾丸IRI组可见生精上皮排列紊乱,生精细胞广泛脱落等表现;3组的凋亡指数分别为(4.28±0.36)％、(18.93±1.27)％、(9.53±1.02)％,SOD活性分别为(0.83±0.05)、(0.28±0.03)、(0.54±0.03)U/mg蛋白,MDA含量分别为(1.92±0.26)、(5.23±0.78)、(2.97±0.35)nmol/g蛋白,各组上述指标相互比较均有统计学意义(P＜0.05);睾丸IRI组中Bax及Caspase-3表达明显高于对照组,睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组明显改善IRI引起的表达变化;与对照组相比,睾丸IRI组中TNF-α和IL-1βmRNA表达水平明显增高.和睾丸IRI组比较,睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组中TNF-α和IL-1βmRNA表达水平明显减低,各组上述指标相互比较均有统计学意义(P＜0.05).结论 胡黄连苷Ⅱ可减轻氧化应激水平,发挥抗炎及抗凋亡作用,从而在睾丸组织在缺血再灌注损伤过程中发挥保护作用.
