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多伞阿魏体外抗胃癌活性筛选、细胞凋亡及周期阻滞机制
目的:研究确定新疆特色维族药多伞阿魏体外抗胃癌活性部位及其敏感胃癌细胞系,并探讨多伞阿魏诱导胃癌细胞凋亡和细胞周期阻滞情况,为其进一步在抗胃癌方面的研究、开发与应用提供实验依据.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同质量浓度多伞阿魏不同提取物(挥发油,95％乙醇提取物,及其石油醚部位,三氯甲烷部位,乙酸乙酯部位,正丁醇部位,水部位)分别对5种胃癌细胞系(AGS,MKN-45,BGC-823,MGC-803,SGC-7901)的增殖抑制作用;采用Hoechst33258荧光染色法观察多伞阿魏挥发油和三氯甲烷部位对胃癌细胞AGS和SGC-7901的影响情况;并应用细胞流式仪检测多伞阿魏不同提取部位作用胃癌细胞AGS和SGC-7901的凋亡和周期阻滞影响情况.结果:与空白组比较,多伞阿魏挥发油,95％乙醇提取物,石油醚部位,三氯甲烷部位,乙酸乙酯部位对5种胃癌细胞均有不同程度的增殖抑制作用(P<0.05),并呈现浓度依赖关系.挥发油对胃癌细胞AGS呈现出较强的增殖抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)为(7.98 ± 2.62)mg·L-1,三氯甲烷部位对5种胃癌细胞系均具有较好的敏感性,对胃癌细胞SGC-7901为敏感,其IC50为(8.73 ± 0.55)mg·L-1,而正丁醇部位和水部位未呈现出明显的细胞增殖抑制作用;多伞阿魏挥发油和三氯甲烷部位作用胃癌细胞AGS和SGC-7901后,细胞核被Hoechst33258染色呈亮蓝色,且随着药物浓度的增加蓝色荧光越强;流式细胞凋亡检测结果显示,多伞阿魏不同提取部位诱导胃癌细胞AGS和SGC-7901发生不同程度的凋亡(P<0.05),且随着药物浓度的增加,细胞总凋亡率明显增高;流式细胞周期检测结果显示,与空白组比较,多伞阿魏挥发油使胃癌细胞AGS的周期发生明显改变,细胞休眠期/DNA复制前期(G0/G1期)细胞比例增高,DNA复制期(S期)细胞比例降低,DNA复制后期/有丝分裂期(G2/M期)比例降低(P<0.05);与空白组比较,多伞阿魏三氯甲烷部位使胃癌细胞SGC-7901的周期也发生显著改变,G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例增高,G2/M期比例降低(P<0.05).结论:多伞阿魏挥发油对胃癌细胞AGS呈现出较强的细胞毒活性,三氯甲烷部位对5种胃癌细胞均具有较好的增殖抑制作用,尤其对胃癌细胞SGC-7901 为敏感;多伞阿魏各提取部位诱导胃癌细胞AGS和SGC-7901主要发生晚期凋亡,而多伞阿魏乙酸乙酯部位诱导胃癌细胞AGS主要发生细胞早期凋亡;多伞阿魏挥发油能够将胃癌细胞AGS阻滞于G0/G1期,阻止细胞进入S期及G2/M期;伞阿魏三氯甲烷部位将胃癌SGC-7901细胞周期阻滞于S期.研究表明多伞阿魏挥发油和三氯甲烷部位具有较好的抗胃癌活性作用,具有潜在的研究价值和开发利用空间,并为多伞阿魏体内抗胃癌及其抗胃癌机制研究提供了一定的科学依据.
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人参果总皂苷抗肿瘤活性研究
目的:研究人参果总皂苷对体外培养肿瘤细胞的作用,并初步探讨其作用机制.方法:MTT法测定人参果总皂苷的人肺腺癌细胞(SPC-A1)、人胃腺癌(SGC-7901)、人宫颈癌细胞(Hela)、人结肠癌细胞(SW-111C)和人神经胶质瘤细胞(U251)等5个人肿瘤细胞株增殖的影响；电镜观察人参果总皂苷对肿瘤细胞形态学的影响；Western blot免疫印记法检测人参果总皂苷对SPC-A1细胞周期相关蛋白表达的影响.结果:0.5 μg/ml人参果总皂苷对5个人肿瘤细胞株的增殖均有抑制作用；0.5μg/ml人参果总皂苷作用于SPC-A1细胞后,透射电镜下可见细胞核染色质边集、核碎裂及凋亡小体情况,具有一定的促进肿瘤细胞凋亡的作用；cyclinD和CDK4的蛋白表达逐渐减少,周期蛋白cyclin及其相关激酶CDK2和CDK1蛋白表达量随着药物作用时间的延长均有所增加.结论:人参果总皂苷对肿瘤细胞的增殖具有抑制作用,其作用机制可能与促进肿瘤细胞的凋亡有关诱导其凋亡使细胞停滞于G2/M期密切相关.
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天然产物诱导肿瘤细胞DNA损伤应答的研究进展
细胞在生长增殖过程中受到内源或外源性的因素而使DNA结构发生变化或受损,如果不能在短时间内修复,将引起周期阻滞,甚至凋亡.利用肿瘤细胞快速增殖的特性,通过诱导其DNA损伤、细胞周期阻滞和凋亡已成为抗肿瘤药物研究的重要策略.研究显示,一些天然化合物可通过诱导肿瘤细胞DNA损伤抑制肿瘤细胞增殖,具有抗肿瘤药物研发价值.
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力达霉素诱导人多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞凋亡和周期阻滞
目的 研究力达霉素(LDM)的抗骨髓瘤作用,并探讨抗骨髓瘤的作用机制.方法 处于对数增殖期人多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226细胞随机分为空白对照组及0.1、0.5和1 nmol/L LDM组,用MTS法和流式细胞术检测细胞增殖率、细胞周期分布和凋亡情况,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白和周期相关蛋白的表达量.结果 细胞培养48 h后,不同浓度LDM组细胞增殖数显著低于空白对照组数(P＜0.05),LDM组S期和G2/M期的细胞数显著高于对照组数(P＜0.05),细胞凋亡率显著高于空白对照组数(P＜0.05),LDM的增殖抑制作用和凋亡诱导作用呈剂量依赖性.不同浓度LDM组细胞caspase-3、caspase-7、caspase-9和poly ADP-ribose polymerase (PARP)的蛋白被切割明显高于对照组(P＜0.05),P21和P27蛋白的表达量明显高于对照组数(P＜0.05).结论 LDM能诱导人多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226细胞凋亡并诱导S期和G2/M期阻滞,其诱导凋亡和周期阻滞的机制有待于进一步深入研究.
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2-甲氧基雌二醇对白血病细胞周期的影响及其机制
2-甲氧基雌二醇(2-ME2)是17β-雌二醇在体内的生理代谢产物.近来研究发现诱导肿瘤细胞发生周期阻滞是2-ME2发挥其抗肿瘤作用的重要机制.但目前关于2-ME2对白血病细胞周期影响的报道尚少.我们以淋系白血病细胞株CEM和髓系白血病细胞株K562作为研究对象,初步探讨2-ME2对白血病细胞周期的影响及可能的作用机制.
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蟾蜍灵对胃癌组织MGC-803细胞周期作用机制的研究
目的:探讨蟾蜍灵对胃癌MGC-803细胞周期及周期蛋白的影响.方法:采用台盼蓝拒染法测定细胞增殖活力;瑞士-姬姆萨染色观察细胞形态学的变化;流式细胞仪检测细胞周期;免疫组织化学方法检测细胞周期相关蛋白p16、p21、pRb的表达.结果:1)蟾蜍灵抑制胃癌MGC-803细胞的增殖,24、48、72 h的IC50分别为0.086、0.048和0.036μmol/L.2)蟾蜍灵在0.01～0.1umol/L时作用24～72 h,形态学上可见细胞体积增大,出现双核、多核细胞.3)流式细胞仪显示蟾蜍灵浓度为0.01～0.1μmol/L时可明显诱导细胞周期G2/M期阻滞.4)蟾蜍灵作用于胃癌MGC-803细胞,观察到p16、p21、pRb蛋白的表达明显上调.结论:蟾蜍灵引起胃癌MGC-803细胞的周期阻滞可能与p16、p21、pRb蛋白的上调有关.
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毛萼乙素抑制非霍奇金淋巴瘤细胞增殖作用及其机制探讨
目的 毛萼乙素(EriocalyxinB,EriB)是一种从唇形科植物疏花毛萼香茶菜中提取的二萜类化合物,具有很强的抗肿瘤细胞活性.本研究探讨EriB对非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)细胞增殖抑制及凋亡诱导、周期阻滞作用及机制.方法 采用MTT法检测5个浓度(0、0.2、0.4、0.6、0.8和1μmol/L) EriB处理72 h淋巴瘤细胞株的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化;蛋白质印迹法分析不同信号通路蛋白的表达.结果 0、0.2、0.4、0.6、0.8和1μmol/L浓度的EriB对淋巴瘤细胞均有增殖抑制作用,且抑制作用随着浓度增加而增强,半数生长抑制浓度在0.2～1.0μmol/L.流式细胞术检测显示,0.4μmol/L EriB作用Namalwa细胞24 h后G0/G1期细胞百分率为(44.71±4.10)％,对照组为(33.79±1.86)％,差异有统计学意义,Z=17.78,P=0.041;FCM结果显示,分析0.4μmol/L EriB作用Namalwa细胞6、12和24 h凋亡率分别为(4.21±1.06)％、(20.34±4.71)％和(29.91±5.39)％,显著高于对照组的(3.04±0.96)％,差异有统计学意义,H=8.56,P＜0.001.蛋白质印迹法分析显示,EriB处理后的Namalwa细胞蛋白p21、p27、p-Caspase-3、p-Caspase-8和p-Caspase-9表达上调,磷酸化NF-κB和其激活子IκB激酶表达下调.结论 EriB可能通过下调NF-κB信号通路诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G0/G1期,抑制淋巴瘤细胞增殖.
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MTBD抗肿瘤细胞活性及作用机制研究
目的:对新发现的Aurora-B激酶抑制剂4-[2-(3-甲基噻吩-2-基)噻唑-4-基]-苯-1,2-二醇(MTBD)进行肿瘤细胞增殖抑制活性和作用机制的研究.方法:MTT法检测MTBD对肿瘤细胞的增殖抑制活性；流式细胞术检测MTBD对Hela细胞的周期阻滞和组蛋白3的磷酸化；ELISA方法检测MTBD对Aurora-B激酶的抑制活性；RT-PCR技术检测MTBD对S期检查点的相关蛋白转录水平的影响.结果:MTBD能够抑制Hela细胞、HepG2细胞和A549细胞的增殖,其IC50分别为(1.03±2.23)、(1.72±3.78)和(2.01±1.23) μmol/L;MTBD能够诱导Hela细胞发生G2/M期和S期阻滞,并诱导细胞发生凋亡；MTBD能够抑制Aurora-B激酶活性,其IC50为(1.70±2.02) μmol/L,但未能检测到Hela细胞内组蛋白3(Ser10)磷酸化水平下降；S期检查点相关基因p21和p53转录上调,CDK2、Cyclin A1和pCNA转录不同程度下调.结论:MTBD能抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞周期阻滞和凋亡；MTBD抗肿瘤活性的发挥可能不是主要通过Aurora-B激酶抑制,而是与多个细胞周期因子相关,并且对于不同肿瘤细胞株有不同的作用机制.
关键词： Aurora-B激酶 周期阻滞 细胞周期因子 -
应用MR氢谱检测大鼠脑胶质瘤C6细胞放射损伤
目的 应用高分辨率MR氢谱检测大鼠脑胶质瘤细胞系C6的放射损伤并初步探讨其机制.方法 以C6细胞为研究对象,应用MR氢谱检测细胞内多种代谢物浓度;彗星实验检测DNA损伤;流式细胞术检测周期进程及凋亡率;克隆形成实验观察克隆形成率并初步探讨放射损伤作用机制.采用单因素方差分析,Pearson法相关分析.结果 照射剂量由0 Gy增加为1、5、10、15 Gy时,DNA损伤逐渐加重且有剂量依赖性(P=0.000～0.690),G1期所占百分比显著增加(P=0.026～0.749),凋亡率逐渐上升(P=0.000～0.000),克隆形成率逐渐降低(P=0.000～0.004);同时,代谢物比值Lac/Cr逐渐减少(P=0.000～0.015),与DNA损伤参数(尾长、彗尾中DNA含量、尾矩)呈线性负相关(r=-0.971、-0.998、-0.995),与凋亡率呈线性负相关(r=-0.978).结论 MR氢谱检测发现C6细胞照射后Lac/Cr比值变化与肿瘤细胞凋亡有明显相关性,MR氢谱具有预测脑胶质瘤放射损伤的潜力.
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TUNEL与PI双染流式细胞术在细胞周期与细胞凋亡检测上的应用
电离辐射对细胞凋亡和细胞周期的各自影响已见诸多报道.但采用一种方法对凋亡和周期同时进行定量检测的流式细胞术,目前在国内尚未见报道.笔者将TUNEL与PI染色的方法加以结合,借以探讨这一新方法以及该方法所揭示出凋亡与周期阻滞的内在关系.
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定靶突变温敏酵母模型在Pin1抑制剂筛选中的应用
利用定靶突变温敏酵母模型寻找Pin1的新型抑制剂,并探讨阳性化合物的体内外抗肿瘤活性.采用MTT法、流式细胞仪法、免疫印迹法、划痕实验和虚拟对接检测阳性化合物的体外活性.利用移植瘤裸鼠模型检测阳性化合物的体内活性.结果发现,酵母模型初筛得到的阳性化合物8-11在体外,对Pin1的IC50值为(10.40±1.68)μmol·L-1,能抑制多种肿瘤细胞的增殖,诱导HeLa细胞G1期阻滞和凋亡,降低Cyclin D1的蛋白水平表达,降低肿瘤细胞迁移能力,虚拟对接中与Pin1的活性结构域呈现出较高的亲和性;在体内,8-11抑制裸鼠移植瘤生长.本研究首次证实8-11可通过抑制Pin1发挥抗肿瘤作用.
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沙蟾毒精抑制血管生成的作用
探讨沙蟾毒精(arenobufagin)对体内外血管生成的抑制作用.采用MTT法检测沙蟾毒精对人鼻咽癌细胞(CNE-2)、人喉癌细胞(Hep2)、人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)、人结肠癌细胞(LOVO)、人前列腺癌细胞(PC-3及DU145)和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的细胞毒性及运用光学显微镜观察细胞形态的变化,发现沙蟾毒精剂量依赖性抑制CNE-2、Hep2、SH-SY5Y、LOVO、PC-3、DU145和HUVECs增殖,且在对人癌细胞亚细胞毒浓度下能够有效抑制HUVECs的增殖.采用鸡胚尿囊膜(chick embryo chorioallantoic membrane,CAM)模型观察新生血管的生成,结果发现沙蟾毒精作用24 h后,尿囊膜新生血管生成明显减少.采用细胞周期分析法观察到沙蟾毒精阻滞HUVECs于G<,2>/M期,且随着浓度增加,细胞出现sub-G<,1>凋亡峰.运用流式细胞术检测沙蟾毒精作用HUVECs后的凋亡现象以及线粒体膜电位的变化,确证沙蟾毒精呈时间和剂量依赖性诱导HUVECs凋亡,同时检测到线粒体膜电位下降.Western blotting检测发现,沙蟾毒精作用HUVECs后,凋亡标志分子PARP被切割.上述研究表明,沙蟾毒精具有明显的体内外抑制血管生成作用,其抑制作用可能与诱导血管内皮细胞周期阻滞及凋亡有关.
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龙葵碱损伤睾丸支持细胞诱导生精障碍的研究
目的:通过龙葵碱对睾丸支持细胞的损伤研究,阐释龙葵碱诱导生精障碍的途径.方法:选取小鼠睾丸的支持细胞进行实验,体外实验观察流式细胞仪检测细胞的周期变化,CyclinA和CDK2蛋白的表达;激光共聚焦检测细胞早期凋亡形态;免疫组化法测定支持细胞波形蛋白表达;体内实验Western blot法测定雄激素结合蛋白(ABP蛋白)表达.结果:龙葵碱引起支持细胞S期周期阻滞;降低睾丸支持细胞内Cycli-nA和CDK2蛋白的表达量;细胞出现早期凋亡的形态学特征;龙葵碱使支持细胞波形蛋白解聚消失;ABP蛋白的表达显著下降(P＜0.01).结论:龙葵碱通过周期阻滞诱导睾丸支持细胞出现凋亡,同时对支持细胞的骨架和分泌功能产生影响造成生精障碍.
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新型对映-贝壳杉烷二萜化合物jaridonin体外抗肿瘤活性及其作用机制探讨
目的 研究新型二萜类化合物jaridonin体外抗肿瘤活性及其诱导癌细胞凋亡的部分作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测jaridonin对HeLa、Spc-A1、HT-29、EC-1等4种人癌细胞株增殖抑制作用并计算IC50值,光学显微镜进行细胞形态学观察,流式细胞术分析其对细胞周期、细胞凋亡以及线粒体膜电位的影响,Western blot法检测jaridonin对细胞凋亡通路相关蛋白表达的影响.结果 Jaridonin能较好抑制4种癌细胞的增殖,并能显著诱导细胞凋亡.Jaridonin作用于EC-1细胞后明显引起G2/M期细胞周期阻滞,上调p53,Bax,p21和p27蛋白表达水平,使线粒体膜电位下降以致细胞色素C从线粒体释放到细胞质,活化caspase-9和caspase-3,诱导细胞凋亡.结论 Jaridonin对食管癌细胞有明显的抑制生长及诱导凋亡作用,其作用机制可能与诱导细胞周期阻滞以及激活线粒体凋亡途径有关.
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抑制STAT5a、STAT5b 对大肠癌细胞增殖、周期和凋亡的影响
分析和探讨信号转导与激活因子STAT5 的两个亚型STAT5a、STAT5b 对大肠癌细胞增殖、周期及凋亡的影响.方法 培养大肠癌细胞SW1116 和LoVo,分别瞬时转染小干扰RNA 静默 STAT5a、STAT5b.CCK8 试剂盒检测细胞增殖情况;同时以流式细胞仪分析SW1116 和LoVo 细胞周期;Annexin V/PI 染色检测凋亡;提取细胞蛋白,Western blot 检测下游周期相关蛋白(p16INK4A 和p27kip1)和凋亡相关蛋白(BCL-2 和survivin)的表达变化.结果 大肠癌细胞SW1116 和LoVo 静默 STAT5a 和STAT5b 后,细胞增殖能力明显降低,细胞发生G1 期阻滞,并且发生凋亡.周期相关蛋白p16INK4A 和p27kip1 明显增高,凋亡相关蛋白BCL-2、survivin 明显降低.并且,STAT5b 对大肠癌增殖凋亡的影响比STAT5a 明显,STAT5a 与STAT5b 对大肠转移癌LoVo 的影响比大肠原位癌SW1116 明显.结论 抑制STAT5 两亚型可通过调节下游周期及凋亡相关蛋白的表达从而降低结肠癌细胞的增殖能力,且其在大肠转移癌中的作用可能更为重要.
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c-Met抑制剂SGX523诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞系的凋亡
目的:研究c-Met小分子抑制剂SGX523对人乳腺癌细胞株的增殖抑制和凋亡诱导作用.方法:以不同浓度的SGX523作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231.采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT) 法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 (Caspase-3)、PARP的表达和c-Met及Akt磷酸化水平的变化.结果:SGX523能明显抑制乳腺癌细胞的增殖 (P<0.05),其对MDA-MB-231细胞的半数抑制浓度 (IC50 ) 值为 (0.767±0.115)μmoL/L.SGX523处理MDA-MB-231细胞48 h后,可诱导乳腺癌细胞凋亡和细胞周期G0/G1期阻滞.同时,SGX523可促进凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP的剪切,并有效抑制c-Met及AKT的磷酸化水平,呈一定的剂量依赖关系.结论:c-Met抑制剂SGX523通过诱导凋亡和G0/G1期阻滞来抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,其机制可能与c-Met/PI3K/AKT信号转导通路的磷酸化水平受抑制相关.
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桔梗皂苷-D诱导肺腺癌A549和A549/DDP细胞凋亡和周期阻滞
目的:探究桔梗皂苷-D(Platycodin-D,PD)诱导肺腺癌细胞(A549)和A549顺铂耐药细胞(A549/DDP)凋亡和周期抑制的作用机制,为PD治疗非小细胞肺癌和产生顺铂耐药的非小细胞肺癌提供实验基础.方法:采用MTT法检测细胞的增殖抑制率和耐药指数;流式细胞术检测细胞周期阻滞和凋亡作用;Hoechst-33258荧光染色观察细胞核形态的变化;Western-blot蛋白印迹法分析凋亡通路和细胞周期相关蛋白表达水平的变化.结果:MTT检测结果显示,PD对A549和A549/DDP细胞的增殖抑制呈浓度和时间依赖性.Hoechst 33258荧光染色发现,随着PD浓度增加,两种细胞核形态都有明显的改变.进一步流式细胞术结果表明,PD诱导A549和A549/DDP细胞凋亡和周期阻滞.Western-blot检测结果表明,PD通过上调Bax、Caspase-9、cleaved-Caspase-3和PARP的表达,下调Bcl-2和Caspase-3的表达诱导A549和A549/DDP细胞凋亡.此外,PD通过下调Cyclin-D1、Cyclin-D3、CDK4、CDK6、E2F1和p-Rb及上调P18的蛋白水平诱导A549细胞周期G0/G1阻滞.同时,PD通过下调Cyclin-B1、p-Cdc2、E2F1和p-Rb及上调P27的蛋白表达诱导A549/DDP细胞周期G2/M阻滞.结论:PD通过线粒体途径诱导A549和A549/DDP细胞凋亡诱导,并且引发A549细胞G0/G1周期阻滞和A549/DDP细胞G2/M阻滞周期阻滞.
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新型微管抑制剂Yf9b能够诱导Hela细胞G2/M期阻滞和凋亡
目的 考察新型微管抑制剂2-甲氧基-5-(4-(3,4,5-三家氧基苯基)-1,3-硒唑-5-基)苯胺[2-methoxy-5-(4-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-l,3-selenazol-5-yl)aniline,Yf9b]对多种人源性肿瘤细胞的抗肿瘤活性,并研究Yf9b抑制人宫颈癌Hela细胞增殖的机制.方法 采用MTT法考察Yf9b对多种肿瘤细胞的增殖抑制作用.免疫荧光染色观察Yf9b与康普瑞丁(combretastatinA-4,CA-4)对微管的抑制作用.流式细胞技术考察Yf9b与CA-4对Hela细胞周期的影响,并考察Yf9b诱导Hela细胞凋亡的情况.结果 Yf9b的作用时间与剂量依赖性地抑制Hela细胞增殖,半数抑制浓度(IC50)为(42.9 ±2.7)nnol·L-1.Yf9b同母体化合物CA-4一样能抑制微管聚合,将Hela细胞阻滞在G2/M期,并终诱导细胞凋亡.结论 Yf9b是一种新型微管抑制剂,能够诱导Hela细胞G2/M期阻滞和凋亡.
关键词： combretastatinA-4(CA-4) 微管 凋亡 周期阻滞 -
新型微管抑制剂BZML诱导H1299细胞G2/M期阻滞及细胞凋亡
目的 研究新型微管抑制剂5-(3,4,5-三甲氧基苯甲酰基)-4-甲基2-(对甲苯基)咪唑[5-(3,4,5-trimethoxybenzoyl)-4-methyl-2-(p-tolyl) imidazole,BZML]抑制人非小细胞肺癌H1299细胞增殖的机制.方法 采用MTT法评价BZML体外抑制H1299细胞的活性.免疫荧光染色观察BZML对微管的抑制作用.采用流式细胞技术考察BZML对H1299细胞周期的影响,并检测H1299细胞活性氧(ROS)的产生及细胞凋亡的情况.结果 BZML时间及剂量依赖性地抑制H1299细胞增殖,半数抑制浓度(IC50)为14.6 nmol· L-1.BZML通过抑制微管聚合,引起H1299细胞发生G2/M期阻滞,并通过诱导活性氧的产生,终导致细胞凋亡.结论 BZML是一种新型的微管抑制剂,能诱导H1299细胞发生G2/M期阻滞,并通过诱导ROS的产生引起细胞凋亡的发生.
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miR-106b-93-25簇对子宫内膜癌细胞的调控作用研究
目的:检测miR-106b-93-25基因簇对子宫内膜癌细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其机制.方法:qRT-PCR检测临床子宫内膜癌标本及癌旁正常组织中miR-106b、miR-93和miR-25及其宿主基因MCM7的表达情况.将microRNA及其拮抗剂转染ECC-1细胞后,MTT实验检测ECC-1细胞增殖情况,流式细胞术检测ECC-1细胞周期及细胞凋亡情况.荧光素酶报告系统验证miR-106b和miR-25分别直接调控p21和Bim.结果:临床标本子宫内膜癌组织与癌旁正常组织相比miR-106b-93-25簇及其宿主基因MCM7的表达明显增高.miR-106b-93-25簇能够促进ECC-1细胞增殖,减少凋亡.转染miR-106b和miR-93的细胞出现明显的S期阻滞,过表达miR-25的细胞凋亡明显减少.miR-106b-93-25簇通过抑制靶基因p21和Bim的表达,引起促增殖、抗凋亡作用.结论:miR-106b-93-25簇能够促进子宫内膜癌细胞增殖,抑制凋亡,并使细胞发生S期阻滞.miR-106b-93-25簇在子宫内膜癌的发生与发展中具有重要的作用.
关键词： miR-106b-93-25簇 p21 BIM 细胞凋亡 周期阻滞
