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HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立与鉴定
目的:采用胰岛素体外诱导法建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型,为研究胰岛素抵抗及2型糖尿病提供一种可靠的体外胰岛素抵抗模型.方法:采用含不同胰岛素浓度的RPMI 1640培养基作用于HepG2细胞,葡萄糖-己糖激酶法检测作用不同时间点培养基中葡萄糖含量,MTT法检测各胰岛素浓度对HepG2细胞存活率的影响,确定胰岛素抵抗佳作用浓度及时间；并以油红0染色观察细胞形态的变化；Real-time PCR法检测IRS-2 mRNA的表达,酶联免疫法检测葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)的表达.结果:细胞产生胰岛素抵抗的佳作用时间为36 h,佳胰岛素浓度为1 × 10-8 mol·L-1.建立模型后鉴定,模型细胞与正常细胞相比脂滴明显增多；IRS-2 mRNA的表达较正常细胞明显降低(P＜0.05),G-6-Pase的表达较正常细胞明显升高(P＜0.05).结论:采用胰岛素体外诱导的方法,在胰岛素浓度为1×10-8mol·L-1,作用36 h后,可建立稳定的HepG2细胞胰岛素抵抗模型.
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丹皮多糖降血糖有效成分的筛选及其作用研究
目的:筛选丹皮多糖降血糖的有效成分,研究其降糖作用及机理.方法:用小鼠和大鼠制造葡萄糖性高血糖及四氧嘧啶性糖尿病模型,氢化可的松琥珀酸钠(HCSS)造成胰岛素抵抗,观察丹皮多糖粗品和纯品对正常和高血糖模型动物血糖的影响,并测定糖尿病动物SOD、Insulin、GHb、ApoA1等水平.结果:丹皮多糖纯品2b(PSM2b)可降低葡萄糖和四氧嘧啶诱发的鼠高血糖,优于粗品和其他纯品,并能升高糖尿病小鼠SOD和大鼠ApoA1水平,降低GHb水平,改善小鼠口服葡萄糖耐量和胰岛素抵抗.结论:PSM2b为丹皮多糖中降血糖有效成分,它可有效地控制实验性高血糖,其降糖机理可能与促进外周组织对葡萄糖的作用,提高机体对胰岛素的敏感性有关.
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胰岛素抵抗模型大鼠的中医证候研究
目的：探讨胰岛素抵抗(IR)模型大鼠的中医证候。方法：用含60%蔗糖饲料诱导大鼠产生IR，对造模后有关指标的相关系数进行聚类分析。结果：IR大鼠的指标变化可分为3类，并与中医的痰浊、瘀血、内毒有密切的联系。痰浊证表现为血脂(甘油三酯、总胆固醇)升高，糖化血清蛋白增多；瘀血证表现为凝血酶原时间缩短，血浆纤维蛋白原含量升高，血液高粘状态，红细胞和血小板数升高及血压变化；内毒证主要表现为葡萄糖毒性和肿瘤坏死因子α毒性及血清胰岛素升高。结论：IR大鼠模型具有痰浊、瘀血和内毒互结的中医证候，为中医临床与实验研究提供了理论依据。
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碳酸镧诱导人骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型构建
目的 探讨碳酸镧处理人骨骼肌细胞能够否建立骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型.方法 将配制好的成人骨骼肌细胞细胞直接在培养基中进行培养,培养基样板为96孔.将细胞分为对照组、胰岛素组和碳酸镧组,后两组分别添加不同浓度的胰岛素(5 ×10-7μmol/L、1×10-7μmol/L)和碳酸镧(5μmol/L、10μmol/L、100μmol/L、1 000 μmoL/L).培养6h、12h、24 h、36 h后,使用葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖浓度.结果 培养24 h后,10 μmol/L、100 μmol/L、1 000 μmol/L碳酸镧组及5×10-7 μmol/L胰岛素组中,葡萄糖含量与对照组细胞相比均有不同程度的增加(P＜0.05).在100 μmol/L、1 000 μmol/L的碳酸镧培养基中培养的时间达到6h后,胰岛素将会对溶液中葡萄糖的浓度产生较大的影响.结论 碳酸镧处理骨骼肌细胞能够引发胰岛素抵抗,可为研究转胰岛素抵抗发病机制和药物筛选提供新的骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型.
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葛根素对前脂细胞分化及胰岛素抵抗模型糖摄取的影响
目的 探讨葛根素对3T3-L1前脂细胞分化及胰岛素抵抗模型糖摄取的影响.方法 ①实验分为葛根素3,10,30,100,300 μmol/L组、空白组、罗格列酮20 μmol/L组,各加药组分别给予相应浓度药物对3T3-L1前脂细胞进行干预,空白组常规培养,采用油红O染色法检测各组3T3-L1前脂细胞分化情况.②实验分为葛根素3,10,30,100,300μmol/L组、空白组、罗格列酮20 μmol/L组,除空白组外,其余各组应用地塞米松对3T3-L1前脂细胞诱导进行胰岛素抵抗模型的建立,然后分别给予相应浓度药物对3T3-L1前脂细胞进行干预,空白组常规培养,检测各组细胞葡萄糖摄取量.结果 葛根素3,10 μmol/L组细胞分化成脂的相对变化率与空白组比较差异均无统计学意义(P均＞0.05),葛根素30,100,300μmol/L组和罗格列酮20 μmol/L组细胞分化成脂的相对变化率均明显高于空白组(P均＜0.05);葛根素3,10 μmol/L组胰岛素抵抗模型3T3-L1前脂细胞葡萄糖摄取相对变化率与空白组比较差异均无统计学意义(P均＞0.05),葛根素30,100,300 μmol/L组和罗格列酮20 μmol/L组胰岛素抵抗模型3T3-L1前脂细胞葡萄糖摄取相对变化率均明显高于空白组(P均＜0.05).结论 低浓度葛根素对3T3-L1前脂细胞影响较小,高浓度的葛根素能够促进3T3-L1前脂细胞分化及提高胰岛素抵抗模型3T3-L1前脂细胞葡萄糖摄取率.
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高脂饮食诱导胰岛素抵抗模型大鼠血清内脂素变化
目的:研究发现内脂素在多种代谢性疾病患者体内出现升高或高表达.实验旨在构建高脂饮食诱导胰岛素抵抗大鼠模型,并观察脂肪细胞因子内脂素在血清中的变化.方法:实验于2007-06/11在广州体育学院运动生化省重点实验室进行.①实验动物:将24只雄性SD大鼠随机分为对照组和高脂组,每组12只.实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求.高脂饲料配方:猪油15%、白糖20%、蛋黄粉5%、胆盐0.2%、维生素0.05%、氯化胆碱0.15%、矿物质0.2%、基础饲料59.4%.②实验方法:适应性饲养1周后,分别喂以普通饲料和高脂饲料.6周末,禁食12 h,麻醉后,腹主动脉取血,检测两组大鼠空腹血糖和空腹血胰岛素水平,用胰岛素抵抗指数模型评价胰岛素抵抗造模是否成功,并测定血清内脂素的浓度.分离附睾及肾脏周围脂肪垫,称质量,计为内脏脂肪总质量.结果:24只大鼠均进入结果分析.①6周末高脂组空腹胰岛素水平、胰岛素敏感指数和胰岛素抵抗指数高于对照组(P<0.01,P<0.05).②6周末高脂组大鼠内脏脂肪总质量高于对照组(P<0.01).③高脂组大鼠血清内脂素水平高于对照组(P<0.01).结论:高脂饮食成功诱导胰岛素抵抗大鼠模型.胰岛素抵抗大鼠血清内脂素浓度明显增加,提示血清内脂素在胰岛素抵抗的发生和发展过程中可能起一定的作用.
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三黄片对胰岛素抵抗大鼠TNF-α、FFA的影响
目的:探讨三黄片改善大鼠胰岛素抵抗的作用机制.方法:应用4%果糖水喂养大鼠制作胰岛素抵抗的动物模型,观察中药三黄片和西药二甲双胍片对大鼠胰岛素敏感性及TNF-α、FFA的影响.结果:经4%果糖喂养5周后,造模组大鼠较正常对照组大鼠空腹血糖及空腹胰岛素均明显增高,血清和肝组织TNF-α、血清游离脂肪酸亦明显增高.而二甲双胍组和三黄片组的各项指标均较造模组明显下降(P均<0.05),但两药物治疗组之间无明显差异.结论:三黄片可明显改善实验大鼠的胰岛素抵抗,其效果与二甲双胍相似.可能与抑制TNF-α的分泌,降低血清游离脂肪酸的水平有关.
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脂联素影响骨骼肌胰岛素抵抗模型中葡萄糖转运蛋白4表达的研究
目的：通过建立骨骼肌L6细胞胰岛素抵抗模型，探讨骨骼肌L6细胞中脂联素（ APN）的分泌，以及脂联素对骨骼肌胰岛素抵抗模型中葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）表达的影响。方法（1）体外培养大鼠L6成肌细胞，诱导分化后，给予不同浓度的棕榈酸（PA），测定不同时间细胞培养上清液葡萄糖浓度，观察PA对L6细胞摄取葡萄糖的影响，建立胰岛素抵抗模型；（2）根据实验条件的不同分为三组：NC组（正常对照组，即骨骼肌L6细胞组）；IR组（胰岛素抵抗模型组）；IR＋PIO组（胰岛素抵抗模型＋吡格列酮组）。应用Western blot方法分别测定上述三组APN和GLUT4表达水平。结果（1）0．4 mmol· L-1的棕榈酸在作用12、24、36 h以及0．6～0．8 mmol· L-1棕榈酸作用8～36 h后，细胞培养上清液中葡萄糖含量，明显高于对照组。胰岛素抵抗模型建立；（2）Western blot结果显示：①与NC组比较，IR组APN和GLUT4表达均减少，差异有统计学意义；②与IR组比较，IR＋PIO组其APN和GLUT4表达均增加，差异有统计学意义。结论（1）大鼠L6成肌细胞培养并诱导分化后，经过一定条件下PA刺激，可以建立胰岛素抵抗模型；（2）大鼠L6细胞可分泌和表达脂联素，骨骼肌源性脂联素上调L6细胞GLUT4的表达；（3）吡格列酮作为PPAR-γ激动剂，可增加大鼠L6细胞脂联素的分泌，进而改善胰岛素敏感性。
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东北红豆杉枝叶不同提取部位体外降血糖活性研究
目的：探讨东北红豆杉枝叶不同提取部位对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗量和抑制α－葡萄糖苷活性的影响。方法采用胰岛素抵抗HepG2细胞和α－葡萄糖苷酶作为体外受体模型，研究东北红豆杉枝叶不同提取部位的降血糖效果。结果对于胰岛素抵抗HepG2细胞，醇提液、乙酸乙酯部位和正丁醇部位均能促进胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量，其中醇提液和乙酸乙酯部位在浓度为0．01mg? mL －1效果佳，正丁醇部位在浓度为0．05mg? mL －1效果佳，而且都与模型组相比具有极显著性差异（P＜0．01）；东北红豆杉提取物均有不同程度抑制α－葡萄糖苷酶活性，以乙酸乙酯部位效果佳（IC50＝17．08mg? L －1），其次正丁醇部位（IC50＝28．48mg? L－1）和醇提物（IC50＝31．03mg?L －1），水部位（IC50＝80．99mg? L －1）石油醚部位（IC50＝132．38mg? L －1）弱。结论初步确定东北红豆杉具有降血糖潜力的部位在乙酸乙酯与正丁醇部位。
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葫芦巴碱对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响
目的:探讨葫芦巴碱对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响.方法:培养HepG2细胞,MTT法检测葫芦巴碱对HepG2细胞增殖的影响以确定可作用于HepG2细胞的葫芦巴碱的浓度;将HepG2细胞置于含胰岛素浓度为1×10-6mol/L的培养液中,培养36 h成功建立胰岛素抵抗模型后,每孔加入100 μL不同浓度的含药培养基,用葡萄糖检测试剂盒检测葫芦巴碱对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响.结果:葫芦巴碱浓度为3,000、2,500、2,000、1,500、1,000、500 μmol/L时的细胞存活率分别为21.38％、39.23％、51.43％、73.36％、86.23％、91.88％,葫芦巴碱浓度＞ 1,000 μmol/L时对细胞有明显的毒性,故选择终浓度为1,000、500、250、100、50、25 μM/L进行实验,各浓度葫芦巴碱对胰岛素抵抗的HepG2细胞的葡萄糖消耗分别为(4.679±0.04)、(3.994±0.062)、(3.683±0.094)、(3.633±0.120)、(3.619±0.119)、(3.503±0.128) μmol/L,其中,前两个浓度与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:葫芦巴碱对HepG2细胞胰岛素抵抗有改善作用.
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两种新的小鼠2型糖尿病胰岛素抵抗模型
目的:复制与临床更为接近的2型糖尿病胰岛素抵抗模型.方法:采用肌肉注射地塞米松造糖耐量降低模型,静脉注射小剂量四氧嘧啶并灌服高浓度葡萄糖造2型糖尿病胰岛素抵抗模型,通过检测糖耐量、血糖、胰岛素、胰岛素敏感指数、β细胞功能指数、胰岛细胞病理改变来观察造模药物对小鼠的影响.结果:2mg/kg地塞米松可造成小鼠糖耐量降低模型,小剂量四氧嘧啶50mg/kg分别于实验第1、14天注射并灌服高浓度葡萄糖能使血糖升高,胰岛素敏感性下降,胰岛β细胞损伤.结论:2mg/kg地塞米松可造成小鼠糖耐量降低模型;注射小剂量四氧嘧啶并灌服高浓度葡萄糖能造成2型糖尿病胰岛素抵抗模型.
