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凉血化瘀方对肝衰竭大鼠细胞凋亡相关基因表达的调控作用
结论:凉血化瘀方能够调节细胞凋亡相关基因从而抑制肝细胞凋亡,主要是通过下调凋亡诱导相关基因的表达,同时也少量上调凋亡抑制基因的表达.
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从线粒体途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α致肝细胞凋亡的保护作用
目的:从线粒体途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α(TNF-α)和D-氨基半乳糖(D-GaIN)所致肝细胞凋亡的保护作用.方法:体外培养人正常肝L02细胞,用TNF-α(100 μg·L-1)和D-GaIN(44 mg·L-1)诱导肝细胞损伤模型,荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化；采用细胞增殖实验(MTT)法检测细胞活力；Annexin V-FITC/PI双染色法结合高内涵细胞成像系统检测肝细胞凋亡；罗丹明123(Rh123)染色结合高内涵分析系统检测线粒体跨膜电位；Western-blot检测线粒体途径凋亡标志蛋白凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1)、细胞凋亡诱导因子(AIF)、胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9)表达水平的变化.结果:与正常对照组相比,TNF-α和D-GalN可明显抑制L02肝细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞线粒体跨膜电位明显下降,并使促凋亡蛋白Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达显著增加.不同浓度的凉血化瘀方作用后,与TNF-α/GalN损伤组相比,可显著减轻L02肝细胞的增殖抑制、减少细胞凋亡,抑制细胞线粒体跨膜电位的下降,并促使凋亡蛋白Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达量呈逐渐下降的趋势.结论:凉血化瘀方对TNF-α和D-GaIN所诱导的肝细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与稳定线粒体的膜电位和下调促凋亡基因Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达有关.
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凉血化瘀方拮抗内质网应激引起的L02肝细胞凋亡作用及机制研究
内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)启动的细胞凋亡是近年才发现的一种新的凋亡途径,本研究从ERS途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α(TNF-α)和D-氨基半乳糖(D-GalN)所致肝细胞凋亡的保护作用.研究发现,TNF-α和D-GalN可明显抑制L02肝细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞质内游离钙离子含量明显上升,并使ERS凋亡相关信号分子磷酸化PERK,磷酸化elF2α,cleaved Caspase-12,GRP78,CHOP的蛋白表达显著增加.不同浓度的凉血化瘀方作用后,与TNF-α/GalN损伤组相比,可显著减轻L02肝细胞的增殖抑制、减少细胞的凋亡,抑制细胞质内游离钙离子含量的增高,并使磷酸化PERK,磷酸化elF2α,cleaved Caspase-12,GRP78,CHOP的蛋白表达量呈逐渐下降的趋势.这些发现说明:凉血化瘀方对TNF-α和D-GalN所诱导的肝细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与维持内质网腔钙稳态平衡和下调ERS凋亡相关信号分子磷酸化PERK,磷酸化elF2α,cleaved Caspase-12,GRP78,CHOP的表达有关.
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凉血化瘀方治疗湿性老年性黄斑变性患者90例临床观察
目的 观察凉血化瘀方治疗湿性老年性黄斑变性(AMD)患者的临床疗效和安全性.方法 收集临床确诊为湿性AMD患者共90例109眼,患者口服凉血化瘀方治疗后连续观察6个月,分别于治疗后1、2、3、6个月观察平均视力情况及眼底平均出血、渗出、累积损害面积,并观察药物不良反应.结果 治疗3个月后,视力提高25眼(22.94%),稳定74眼(67.89%),降低10眼(9.17%);治疗6个月后视力提高32眼(29.36%),稳定60眼(55.05%),降低17眼(15.6%).治疗3、6个月后患者眼底出血面积、渗出面积和累积损害面积与治疗前比较差异无统计学意义(P＞0.05).17例患者发生轻微不良反应.结论 凉血化瘀方治疗湿性AMD患者在6个月观察期内具有一定提高视力的作用,能使眼底出血、渗出和累积损害情况稳定,不良事件发生率低,是治疗湿性AMD患者较安全有效的方法.
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凉血化瘀方治疗湿性老年黄斑变性临床研究
目的 初步评价凉血化瘀方治疗湿性老年黄斑变性的疗效.方法 随机纳入湿性老年性黄斑变性患者54例54只眼.初诊时查对数视力表、眼底彩照、荧光素眼底血管造影及眼底光学相干断层扫描,并予以凉血化瘀方进行治疗.观察治疗后视力、荧光素眼底血管造影和眼底光学相干断层扫描的变化.结果 视力治疗前后结果:治疗1个月后,54例患者中,视力改善显著者4眼(7.41%),稳定者47眼(87.04%),下降者3眼(5.56%).6个月复诊患者38例,视力改善者7眼(18.42%),稳定者26眼(68.42%),下降者5眼(13.16%).光学相干断层扫描前后结果:初诊时患者黄斑区视网膜厚度基线为287.461μm,6个月时基线为240.62μm(P<0.01).初诊时黄斑区总容积基线值为7.43mm<'3>,6个月时为6.88mm<'3>(P<0.01).结论 凉血化瘀方治疗湿性老年性黄斑变性具有较好的临床疗效.
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凉血化瘀方对蓝光诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响
目的 探讨唐由之研究员经验方凉血化瘀方对蓝光诱导体外培养的人视网膜色素上皮(retinal pigrnent epithelium,RPE)细胞凋亡的影响.方法 将RPE细胞分为四组,用波长为470～500 Bin,光照强度在(2000±500)LUX的蓝光照射12小时,处理组分别于光照前30分钟加入不同浓度的凉血化瘀方中药粗提物及100 umol/L的维生素C,终止光照后用,用荧光素标记的连接素V/碘化丙锭(Annexin V-fluorescein isothiocyanate/Propidium iodium,Annexin V-FITC/PI)双染色法,上流式细胞仪检测,观察细胞凋亡的情况及不同浓度的凉血化瘀方中药粗提物对蓝光诱导RPE细胞凋亡的影响.结果 蓝光照射体外培养人RPE细胞后,引起的细胞变化以细胞凋亡为主,光照前加入不同浓度的凉血化瘀方中药粗提物及维生素C后,凋亡细胞数量明显减少,且凉血化瘀方组凋亡细胞数量少于维生素C组.结论 凉血化瘀方对蓝光诱导体外培养的人视网膜色素上皮凋亡具有保护作用.
关键词： 凉血化瘀方 人视网膜色素上皮细胞 凋亡 年龄相关性黄斑变性 -
凉血化瘀方治疗小儿过敏性紫癜临床观察
为观察凉血化瘀方治疗小儿过敏性紫癜的临床疗效,设治疗组30例,用凉血化瘀方治疗;对照组26例,采用西医常规治疗方法,疗程均为8周.结果:治疗组和对照组疗效差异有显著性意义(P＜0.05).提示凉血化瘀方对小儿过敏性紫癜有较好的疗效.
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龙葵银消片联合凉血化瘀方治疗银屑病疗效及对血清相关因子水平影响分析
目的:探讨龙葵银消片联合凉血化瘀方治疗银屑病的临床疗效,并分析其对血清相关因子的影响.方法:选取2017年3月-2017年10月我院收治的银屑病患者82例为研究对象,采用随机数字表法分为研究组与对照纽,各41例.对照组患者给予凉血化瘀方治疗,研究组患者给予龙葵银消片联合凉血化瘀方治疗,对比两组患者临床疗效,并对比治疗前后银屑病皮损面积严重指数(PASI)、T淋巴细胞亚群水平、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-17(IL-17)水平变化,后观察两组患者不良反应发生情况.结果:研究患者的总有效率87.80％,明显高于对照组总有效率75.60％(P＜0.05);治疗前,两组患者的PASI评分比较无明显差异(P＞0.05),治疗后两组患者的PASI评分均较治疗前明显降低,且治疗组患者的PASI评分明显低于对照组(P＜0.05),且治疗前后治疗组患者的PASI差值明显高于对照组(P＜0.05);治疗前,两组患者的T细胞亚群水平、炎症因子水平比较无明显差异(P＞0.05),治疗后,研究组与对照组TNF-α、IL-6、IL-17水平较治疗前明显降低,且研究组患者的TNF-α、IL-6、IL-17水平低于对照组(P＜0.05);治疗后,研究组与对照组患者的CD4+/CD8+、CD4+水平均较治疗前升高,CD8+较治疗前降低(P＜0.05),且研究组患者CD4+/CD8+、CD4+高于对照组,CD8+低于对照组(P＜0.05);研究组与对照组不良反应发生率比较无明显差异(P＞0.05).结论:在凉血化瘀方治疗的基础上联用龙葵银消片治疗银屑病可显著提高临床疗效,减轻患者皮损严重程度,并能有效改善患者免疫功能,减轻炎症反应状态,且安全性高,值得临床推广.
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凉血化瘀方对瘀热证脑缺血大鼠炎症和凝血功能相关分子物质的影响
.结论:凉血化瘀方治疗瘀热证脑缺血的作用与其调节血液学凝血功能及炎症反应有关.
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凉血化瘀方对肝细胞损伤中自噬与凋亡相关蛋白的影响
目的 研究凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α(TNF-α)联合D-氨基半乳糖(D-GalN)所致肝细胞损伤中自噬和凋亡相关途径的影响,并探讨其分子调控机制.方法 体外培养人正常肝LO2细胞,用TNF-α(100 ng/mL)和D-GalN(44 μg/mL)诱导肝细胞损伤模型,荧光显微镜观察细胞的形态学变化;MTT法检测细胞活力;Western blot检测凋亡和自噬标志蛋白caspase-3、Beclin1、LC3 Ⅰ 、LC3Ⅱ,凋亡和自噬调节蛋白Bax、Bcl-2和mTOR信号通路调控途径mTOR蛋白表达水平的变化.结果 凉血化瘀方能改善肝细胞病理损伤,并表现有剂量依赖性;治疗组细胞凋亡和自噬标志蛋白caspase-3、Beclin1、LC3Ⅱ表达下调,凋亡和自噬调控蛋白中负相关的Bcl-2表达上调、正相关的Bax表达下调,并呈现一定的量效关系,同时mTOR蛋白的表达也体现了剂量相关的下调作用.结论 凉血化瘀方对TNF-α+D-GalN所致肝细胞损伤的保护作用,与抑制细胞自噬和凋亡相关,其机制主要是参与自噬和凋亡相关途径中蛋白的表达调控.
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血浆置换联合凉血化瘀方治疗慢性重型肝炎的临床观察
目的 观察血浆置换(PE)联合中医凉血化瘀方治疗重型肝炎的临床疗效.方法 选择本院血浆置换联合凉血化瘀方治疗慢性重型肝炎热毒血瘀证患者43例为观察组,40例仅接受血浆置换以及基础治疗的患者为对照组.治疗8周后,观察2组患者肝功能指标、凝血指标、T细胞亚群等变化.结果 观察组有效率为81.39％,对照组为65.0％,有统计学差异(P＜0.05).2组患者经治疗后临床症状、中医证候积分、肝功能指标、凝血指标以及T细胞亚群均明显改善(P＜0.01),观察组中医证候积分、肝功能指标、凝血指标、CD4+百分比以及CD4+/CD8+改善,明显优于对照组(P＜0.05～0.01).结论 血浆置换联合凉血化瘀方可有效治疗重型肝炎,改善患者肝功能、凝血功能以及T细胞亚群.
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凉血化瘀方对实验性脉络膜新生血管VEGF与PEDF表达的影响
目的 观察凉血化瘀方时氪激光诱导的实验性脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)中新生血管内皮生成因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和色素上皮衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)水平的影响.方法 BN大鼠32只,随机分为对照组及凉血化瘀方组(中药组),每组大鼠各16只.采用氪激光击破大鼠Bruch膜的方法诱导实验性CNV BN大鼠.观察激光光凝后1周、2周、3周、4周时2组大鼠眼底CNV形成情况,采用免疫组织化学法测量VEGF和PEDF的表达水平.结果 光凝后2组均有CNV形成.中药组大鼠在2-4周时CNV荧光素渗漏面积较对照组小,差异均有统计学意义(均为P<0.05).免疫组织化学结果示对照组VEGF表达在4周时达到高峰,积分光密度(integral optical density,IOD)均值为1 552.66±753.50,中药组在2周时达到高峰,IOD均值为212.83±160.20,3周时表达下调,光凝后2-4周,2组VEGF光密度值差异均有统计学意义(均为P<0.05);对照组和中药组的PEDF在1周时表达水平高,IOD均值分别为162.42±45.58和493.85±127.35.此后2组表达水平均呈下降趋势,光凝后1-4周.2组间PEDF IOD均值差异均有统计学意义(均为P<0.05).结论 凉血化瘀方中药抑制实验性CNV生长的作用可能是通过下调VEGF表达和上调PEDF表达而实现的.
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凉血化瘀方对内毒素所致肝细胞凋亡的干预作用
目的:研究内毒素脂多糖(LPS)诱导的肝细胞凋亡在暴发性肝衰竭(HFH)发病机制中的作用及凉血化瘀方对其的影响.方法:腹腔注射LPS于D-氨基半乳糖(GalN)致敏的小鼠,造成HFH模型,用脱氧核苷酸转移酶介导的缺口原位末端标记技术(TUNEL法)、苏木精-伊红染色及透射电镜观察肝细胞凋亡和病理损伤情况及药物的干预作用.结果:造模6 h模型组大量凋亡阳性细胞表达,治疗组则明显减少(P＜0.01).至24 h肝细胞损害以坏死为主,其程度与细胞凋亡相一致.结论:肝细胞凋亡存在于内毒素肝损伤过程中,且与肝细胞损害程度相关,凉血化瘀方对HFH的治疗作用可能与其对肝细胞凋亡的抑制有关.
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凉血化瘀方干预内毒素致肝细胞凋亡研究进展
肝细胞凋亡是肝脏受损后肝细胞发生嗜酸性变而不断固缩,胞质变得致密,胞体不断缩小,细胞核浓缩而后消失,终形成嗜酸小体[1].内毒素是一种脂多糖,是革兰阴性杆菌胞壁的重要成分,其大量聚集可引发内毒素血症,导致机体炎症反应、白细胞增多、高热、微循环障碍,严重的会引起休克.随着研究的深入,人们发现内毒素与肝细胞凋亡具有密切联系.内毒素导致肝细胞凋亡的机制较为复杂,包括内毒素促进细胞合成并分泌细胞因子及炎性介质,内毒素影响肝细胞基因的表达等而加速肝细胞凋亡.中医研究发现,中药在干预内毒素所致的肝细胞凋亡中效果显著,其通过抑制肝损伤基因表达及阻断内毒素诱发的凋亡信号而发挥干预作用[2].
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凉血化瘀方治疗湿性老年性黄斑变性临床观察
目的:观察凉血化瘀方治疗湿性老年性黄斑变性患者临床疗效.方法:26例(42只眼)湿性老年性黄斑变性患者,给予凉血化瘀方治疗,治疗1月.分别于治疗前后采用国际标准视力表、眼压测量仪、眼底彩照、荧光素眼底血管造影、光学相干断层扫描(OCT)对患者视力状况进行评价.结果:治疗后第1、2、3、6月随诊患者视力改善总有效率分别为95.24％、92.86％、90.48％、90.48％,各时间段的总有效率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).治疗后6月患者黄斑区视网膜厚度基线、黄斑区总容积基线均低于治疗前,与治疗前比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:凉血化瘀方治疗湿性老年性黄斑性患者临床疗效明显,能改善患者视力,延缓病情的发展.
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凉血化瘀方对急性肝损伤大鼠线粒体和内质网应激凋亡途径的影响
目的 观察凉血化瘀方对大鼠急性肝损伤的保护作用,并探讨其机制.方法 SD健康雄性大鼠50只,随机分为正常对照组,D-氨基半乳糖(GalN)+脂多糖(LPS)模型组,凉血化瘀方高、中、低剂量治疗组.末次给药后1h除正常组外其余4组按0.1 mL/10 g腹腔注射D-GalN (50 mg/mL)加LPS (0.48 μg/mL),造成大鼠急性肝损伤模型.用HE染色,观察肝组织病理变化;电镜观察肝细胞形态及结构;TUNEL法检测肝细胞凋亡;Western blot检测细胞凋亡蛋白Caspase-9、Caspase-3、Bcl-2、Chop的表达情况.结果 各剂量凉血化瘀方均改善肝组织病理损伤;凉血化瘀方各剂量组细胞凋亡蛋白Caspase-9、Caspase-3、Chop的表达下调(P均＜0.05或0.01),而抗凋亡蛋白Bcl-2表达上调,肝细胞形态改善明显.结论 凉血化瘀方能抑制肝细胞凋亡,机制主要与调控线粒体和内质网应激途径诱导的细胞凋亡相关.
