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抗纤灵方通过PI3K/AKT/mTOR信号通路干预肾纤维化机制研究
目的:研究抗纤灵方对PI3 K/AKT/mTOR信号通路的影响及抗肾纤维化作用机制.方法:将60只C57小鼠,随机分为假手术组10只和手术组50只,手术组行5/6肾切除术.术后2周,手术组随机分为模型组、抗纤灵低、中、高剂量组及雷帕霉素阳性药组,各组10只.假手术组给予0.5 mL生理盐水ig,抗纤灵方低、中、高剂量组分别给予0.5 mL抗纤灵药物ig(0.1,0.2,0.4 mg·kg-1),阳性药组给予0.5 mL雷帕霉素ig(0.016 μg·kg-1),ig12周后处死小鼠,在处死小鼠前1d收集24 h尿液检测24 h蛋白定量,眼眶采血测血肌酐、尿素氮,取残肾采用HE观察肾脏组织形态改变,PCR法检测肾组织中PI3 K/AKT/mTOR mRNA表达.结果:与假手术组比较,模型组24 h尿蛋白定量,血肌酐,尿素氮,PI3K/AKT/mTOR mRNA表达均显著升高(P＜0.01),肾脏病理形态改变明显;与模型组比较,各治疗组24 h尿蛋白定量,血肌酐,尿素氮,PI3 K/AKT/mTORmRNA表达均下降(P＜0.05),肾脏组织学形态改善.结论:抗纤灵方能降低小鼠24 h尿蛋白定量,改善肾功能,延缓肾纤维化发生;其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路表达相关.
关键词： 抗纤灵方 5/6肾切除 PI3K/AKT/mTOR信号通路 肾纤维化 -
抗纤灵方对5/6肾切除小鼠肾组织纤维化作用机制研究
目的:研究抗纤灵方对5/6肾切除小鼠肾纤维化的作用及机制研究.方法:将60只C57小鼠,随机分为假手术组10只和手术组50只,手术组行5/6肾切除术.术后2周,手术组随机分为模型组、抗纤灵低、中、高剂量组(0.1,0.2,0.4 mg·kg-1)及雷帕霉素组(0.16 μg·kg-1),各组10只.各组于术后2周分别给予0.5 mL生理盐水、雷帕霉素及抗纤灵煎剂灌胃.治疗8周后处死小鼠,在处死小鼠前1d收集24 h小便测24 h尿蛋白(UPRO)定量,眼眶采血测血肌酐(SCr),尿素氮(BUN);取残肾应用免疫荧光法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;系用Western blot法检测肾组织Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白表达.结果:与假手术组比较,模型组24 h UPRO定量,SCr,BUN,α-SMA,Ⅰ型及Ⅲ型胶原表达显著升高(P＜0.01);与模型组比较,各治疗组24 h UPRO定量,SCr,BUN,α-SMA,Ⅰ型及Ⅲ型胶原表达均有所下降(P＜0.05).结论:抗纤灵方能降低小鼠24 h UPRO定量,改善肾功能,延缓肾纤维化发生,其机制可能与下调α-SMA表达,抑制肾脏Ⅰ型及Ⅲ型胶原表达相关.
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从血管活性因子角度研究抗纤灵方改善肾功能抑制肾纤维化的作用机制
目的:通过对慢性肾脏病3期患者临床疗效及体内血管活性因子的影响,研究活血化瘀通络法能延缓慢性肾衰的进展的机制.方法:观察抗纤灵方对血管紧张素Ⅱ、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、血清纤维蛋白原,血及尿TGF-β1的影响,并与氯沙坦组相比较.结果:抗纤灵方组降低血清中Ⅰ型、Ⅲ型胶原水平,减少尿TGF-β1,与氯沙坦组比较差异有统计学意义(P＜0.05);两组治疗后血管紧张素Ⅱ较治疗前均下降(P＜ 0.01,P＜0.05);血纤维蛋白原及血TGF-β1变化两者差异无统计学意义.结论:抗纤灵方可能通过抑制体内血管活性因子,减少胶原蛋白在肾脏的沉积,延缓肾衰的进展.
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抗纤灵方对Ang Ⅱ诱导肾纤维化小鼠肾组织α-SMA和Ⅰ型胶原的影响
目的:观察抗纤灵方对该模型小鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)的作用,探讨其作用机制.方法:将测得血压＜120mmHg的小鼠随机分为5组,每组12只,其中模型组、蒙诺组、抗纤灵组行单侧肾切除及微渗泵灌注血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ),正常组不做处理,生理盐水对照组行单侧肾切除及微渗泵灌注0.9％氯化钠溶液.各组均自由进食,抗纤灵组抗纤灵方2.3g/100g灌胃,蒙诺对照组蒙诺0.03g/100g灌胃,其余各组自来水灌胃,均为每日1次.上述治疗,4周后检测处死小鼠.将取出的肾组织,免疫组化法观察石蜡切片和冰冻切片α-SMA、Collagen Ⅰ在各组小鼠的表达.用Western blot比较α-SMA、Collagen Ⅰ在各组小鼠的表达.结果:免疫组化检测法显示,与正常组比较,模型组的α-SMA、Collagen Ⅰ的阳性率显著上升(P＜0.01);与模型组比较,抗纤灵组、蒙诺组的α-SMA、Collagen Ⅰ阳性率显著下降(P＜0.05,P＜0.01).Western blot检测法显示,与正常组比较,模型组的α-SMA、Collagen Ⅰ的灰度值显著上升(P＜0.01);与模型组比较,抗纤灵组、蒙诺组的α-SMA、Collagen Ⅰ的灰度值显著下降(P＜0.05,P＜0.01).结论:抗纤灵方能抑制α-SMA的表达,并减少Collagen Ⅰ的生成,降低肾纤维化发生发展,进而减缓高血压肾损伤后的肾纤维化进程.
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抗纤灵方对5/6肾切除小鼠p38MAPK/NF-κBp65介导的炎症因子的影响
目的 观察抗纤灵方对慢性肾衰模型小鼠酪氨酸磷酸化蛋白激酶/核转录因子p65(p38MAPK/NF-κBp65)介导的炎症因子的影响.方法 56只C57BL/6J雄性小鼠,随机选取10只作为假手术组,余46只采用5/6肾切除制备慢性肾衰模型,2周后将造模成功的33只小鼠按照肌酐水平分层分为模型组、雷帕霉素组及抗纤灵方组,每组11只.雷帕霉素、抗纤灵方组每日分别给予雷帕霉素(0.13 mg/100 g)及抗纤灵方组(2 g/100 g)各0.5mL灌胃治疗,模型组及假手术组灌胃等量蒸馏水,连续用药8周后处死小鼠,采用免疫组化法观察中性粒细胞表达水平;应用免疫印迹法(Western blot)及real-time PCR法检测肾脏组织p38 MA PK、NF-κBp65蛋白及TN F-rα、IL-6 mRNA表达水平.结果 与假手术组比较,模型组中性粒细胞阳性细胞数增多,p38MAPK、NF-κBp65蛋白及TNF-α、IL-6mRNA表达水平增高(P ＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,雷帕霉素及抗纤灵方组中性粒细胞阳性细胞数减少,p38MAPK、NF-κBp65蛋白及TNF-α、IL-6mRNA表达水平降低(P ＜0.05,P＜0.01).雷帕霉素除在降低p38MAPK蛋白表达方面优于抗纤灵方组(P＜0.05)外,余指标比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 抗纤灵方参与p38MAPK/NF-κBp65介导的炎症因子的调控,对肾纤维化所致的肾衰有一定的改善作用.
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抗纤灵方对5/6肾切小鼠肾组织中基质金属蛋白酶2及基质金属蛋白酶组织抑制因子1 mRNA表达的影响
目的 观察抗纤灵方抗肾纤维化的作用机理. 方法 180只C57小鼠随机取出30只作为假手术组,其余150只采用5/6肾切除方法制作肾功能衰竭模型,造模成功后随机分为模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、西药组,每组30只.假手术组及模型组给予0.5ml自来水灌胃,低、中、高剂量组分别给予抗纤灵方水煎剂(药物剂量依次为0.2 g/kg、0.4g/kg、0.8 g/kg) 0.5ml灌胃治疗,西药组给予雷帕霉素溶液(药物剂量0.0000016 g/kg)0.5ml灌胃,每日灌胃1次,各组疗程均为12周.在灌胃后第4、8、12周末,每组分别取出10只小鼠处死,检测肾组织中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1 (T IMP-1) mRNA的表达. 结果 与假手术组比较,第4、8、12周末模型组小鼠MMP-2 mRNA、IIMP-1 mRNA表达水平均显著升高(P＜0.01);与模型组比较,在第8、12周末低、中、高剂量组和西药组MMP-2 mRNA表达水平均显著下降(P＜0.05),第4、8、12周末低、中、高剂量组TIMP-1 mRNA表达降低(P＜0.05);与低剂量组比较,高剂量组第8、12周末MMP-2 mRNA表达水平均明显下降(P＜0.05);与本组第4周末比较,低、中、高剂量组第8、12周末TIMP-1 mRNA表达水平均降低(P＜0.05).结论 抗纤灵方抗肾纤维化的作用机理可能与抑制MMP-2 mRNA表达、TIMP-1 mRNA表达相关.
关键词： 肾纤维化 抗纤灵方 基质金属蛋白酶2 基质金属蛋白酶组织抑制因子1 -
抗纤灵方对肾纤维化小鼠肾组织CD68、CD45、VCAM-1表达的影响
目的 探讨抗纤灵方治疗肾纤维化的可能作用机制. 方法 将测得血压＜ 120 mmHg的小鼠随机分为正常组、手术组、模型组、抗纤灵组、蒙诺组,每组12只.除正常组、手术组外,其余各组小鼠采用单侧肾切除及微渗透泵灌注血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)建立肾纤维化小鼠模型,手术组仅行单侧肾切除手术后微渗透泵灌注0.9％氯化钠溶液.在植入微渗透泵后,抗纤灵组给予抗纤灵方2.3g/100g灌胃,蒙诺组给予福辛普利钠片0.03 g/100g灌胃,正常组、手术组和模型组给予自来水灌胃.各组均每日1次,每次0.5ml,灌胃4周.4周后采用免疫组织化学法和Western Blot法检测小鼠肾组织CD68、CD45、血管内皮细胞黏附分子1(VCAM-1)表达. 结果 免疫组织化学法检测结果显示,与模型组比较,抗纤灵组和蒙诺组小鼠肾组织CD68、CD45、VCAM-1表达灰度值均有不同程度下降(P＜0.05或P＜0.01);抗纤灵组小鼠肾组织VCAM-1表达灰度值高于蒙诺组(P＜0.05).Western Blot法检测结果显示,与模型组比较,抗纤灵组和蒙诺组小鼠肾组织CD68表达降低(P＜0.01),CD45表达与模型组比较差异无统计学意义(P＞0.05);蒙诺组小鼠肾组织VCAM-1表达低于模型组和抗纤灵组(P＜0.05或P＜0.01);而抗纤灵组VCAM-1表达与模型组比较差异无统计意义(P＞0.05). 结论 抗纤灵方可降低肾纤维化小鼠肾组织CD68、CD45、VCAM-1的表达,这可能是其治疗肾纤维化的作用机制之一.
关键词： 高血压肾损伤 肾纤维化 抗纤灵方 炎症因子 血管内皮细胞黏附分子1 -
抗纤灵方对5/6肾切除小鼠肾功能及脂质代谢的作用
目的:研究抗纤灵方对5/6肾切除小鼠肾功能及脂质代谢影响. 方法:采用5/6肾切除方法制作慢性肾衰竭模型,造模成功后将60只小鼠按血肌酐水平随机分为假手术组、模型组、抗纤灵低、中、高剂量组和对照组,每组10只,治疗组分别给予抗纤灵方煎剂低、中、高剂量灌胃治疗,对照组给予雷帕霉素灌胃,假手术组和模型组给予生理盐水灌胃,在灌胃8周末收集24 h尿液测24 h尿蛋白,眼眶采血测血肌酐、尿素氮,胆固醇,三酰甘油,高低密度脂蛋白. 结果:与假手术组比较模型组24 h尿蛋白定量明显增多,血肌酐、尿素氮、胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白值均明显上升,高密度脂蛋白明显下降(P<0. 01);与模型组比较各治疗组24 h尿蛋白定量减少、血肌酐、尿素氮值、胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白均有不同程度下降,高密度脂蛋白轻度上升(P<0. 05). 结论:抗纤灵方能改善肾功能,延缓慢性肾脏病进展,改善脂质代谢.
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抗纤灵方抑制肾络病慢性肾衰竭大鼠TGF-β／P13 K／Akt信号旁路的实验研究
目的：采用5／6肾切除方法建立慢性肾衰竭大鼠模型，观察抗纤灵对5／6肾切除大鼠肾组织中TGF-β／PI3k／Akt信号通路的影响。方法：将SD大鼠分为正常组、模型组（生理盐水）、治疗组（抗纤灵）各12只，除正常组外均采用5／6肾切除方法建立慢性肾衰竭大鼠模型，疗程2个月。应用生化、放射免疫法、western blot等技术，检测肾功能、24 h尿蛋白定量、肾脏病理，检测TGF-β／P13K／Akt信号通路蛋白表达。结果：实验结束时，与模型组相比较，抗纤灵组的血肌酐数值显著下降（ P﹤0．01）、蛋白尿下降差异有统计学意义（ P﹤0．05）；病理MASSON染色：抗纤灵组肾小球肥大减弱，毛细血管基底膜增厚减轻，系膜基质明显减少，胶原纤维成分低于模型组；western blot检测，与模型组相比，抗纤灵组的p-Akt灰度比值显著下降。结论：抗纤灵方可能通过抑制TGF-β／PI3K／Akt信号通路，从而有效地降低5／6肾切除大鼠的血肌酐，减轻肾组织纤维化、改善肾功能、降低蛋白尿。
关键词： 抗纤灵方 慢性肾衰竭 PI3K/Akt信号通路 肾纤维化 -
抗纤灵方对CKD3～4期患者疗效及机制的临床多中心随机对照研究
目的:通过对CKD3～4期患者临床疗效及体内血管活性因子的影响,证实活血化瘀通络法能有效改善临床症状,延缓慢性肾衰的进展.方法:观察抗纤灵方对临床症状、肾功能、血脂、血管紧张素Ⅱ、纤维蛋白原、Ⅰ型胶原、血及尿TGF-31的影响,并与对照组科素亚相比较.结果:抗纤灵冲剂改善临床症状,降低血清中血管紧张素Ⅱ、Ⅰ型胶原水平,增加尿TGF-β1排出、降低血清中甘油三酯和胆固醇,减少蛋白尿.结论:抗纤灵冲剂可能通过抑制体内血管活性因子,减少Ⅰ型胶原蛋白在肾脏的沉积,干预脂质代谢、减轻蛋白尿,从而延缓肾衰的进展.
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抗纤灵方对阿霉素肾病大鼠肾纤维化指标的影响
目的 研究探讨阿霉素肾病大鼠肾纤维化的改变及抗纤灵方的干预作用.方法 将40只SD大鼠随机分为正常组8只,假手术组8只,模型组24只.采用右侧肾切除加尾静脉2次注射阿霉素3 mg/kg制备肾硬化大鼠模型,将造模成功后大鼠随机分为造模组,抗纤灵组,科素亚组.每组分别给予对应药物灌胃,其中抗纤灵组(丹参、制大黄、黄芪、牛膝、桃仁、仙灵脾组成)给药量30g/(kg·d),科素亚组给药量33mg/(kg·d),其余各组均给予生理盐水,每次2mL,共观察8周.通过观察治疗前后大鼠血清生化指标肾功能,尿蛋白定量水平,转化生长因子书(TGF-β)、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达,肾脏组织病理形态的变化研究抗纤灵的干预机制.结果 抗纤灵方能显著降低血清肌酐,尿素氮,24h尿蛋白定量,改善肾功能,差异有统计学意义(P＜0.05),在24h尿蛋白的降低方面,抗纤灵组优于科素亚组(P＜0.05);抗纤灵组下调TGF-β和CTGF在肾组织蛋白表达,与对照模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),并且抗纤灵组在TGF-β表达水平改变优于科素亚组;在肾组织病理形态观察提示科素亚和抗纤灵组均能从微观形态学观察到肾纤维化的改善,且抗纤灵组优于科素亚组.结论 抗纤灵方通过下调TGF-β和CTGF的表达,使阿霉素肾病大鼠的肾功能,24h蛋白尿得到改善,使肾脏纤维化病理形态缓解改善,并且抗纤灵方疗效优于科素亚.
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miRNA表达谱在肾纤维化中的差异表达及抗纤灵的干预研究
目的 筛选观察在阿霉素肾病大鼠模型特异性miRNA表达谱,观察抗纤灵方干预的作用.方法 将SD雄性大鼠随机分为6组,每组8只.其中假手术组仅于右侧肾切除,灌于生理盐水,余下40只SD大鼠均采取右侧肾切除加尾静脉注射阿霉素制备大鼠硬化模型.将造模成功后的大鼠分成模型组、科素亚组、抗纤灵低,中,高5组,分别给予相对应的药物共8周,观察各组大鼠肾脏组织TGF-β、Smad3 mRNA水平改变.同时对各组实验肾脏标本,运用miRNA高通量测序,检测miRNA表达谱,分析差异表达谱,观察抗纤灵方干预的作用.结果 抗纤灵方对阿霉素肾病模型大鼠能降低TGF-β、Smad3 mRNA水平,差异有统计学意义(P<0.05).随着抗纤灵剂量增加,其抗纤维化效应更明显,差异有统计学意义(P<0.05).通过筛选miRNA表达谱,差异表达分析中发现假手术组与模型组表达谱差别大,假手术组与抗纤灵高剂量治疗组差别小.从差异表达分析中,观察到了药物处理剂量越大,样本的表达谱越与假手术组相近.结论 抗纤灵方能改善肾纤维化,并且随着剂量增大抗纤维化的效果越好,推测其机制可能通过调节miRNA谱的差异表达,降低TGF-β、Smad3 mRNA水平,来改善肾纤维化.
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抗纤灵方对阿霉素肾病大鼠肾纤维化作用机制的研究
目的 观察抗纤灵方对阿霉素肾病模型大鼠肾纤维化的作用机制.方法 将SD雄性大鼠随机分为7组,每组8只.其中正常组不做处理,假手术组仅于右侧肾切除,注射0.9％NaC1溶液,余下40只SD大鼠均采取右侧肾切除加尾静脉注射阿霉素制备大鼠阿霉素肾病模型.将造模成功后的大鼠分成模型组,科素亚组,抗纤灵低、中、高剂量组,分别给予相应药物共8周.观察大鼠血清肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)表达,HE染色观察肾组织病理.结果 抗纤灵方能抑制模型大鼠α-SMA的表达,并减少FN的生成,差异有统计学意义(P＜0.05);同时降低24 h蛋白尿,降低血清肌酐、尿素氮,改善肾功能,延缓肾纤维化发展,差异有统计学意义(P＜0.05);随着抗纤灵剂量增加,其抗纤维化效应更明显,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 抗纤灵方能降低24 h尿蛋白定量,改善肾功能,使肾脏病理组织形态学改善,并且呈剂量效应.其机制可能是通过下调α-SMA的表达,抑制FN的生成,从而改善肾纤维化.
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抗纤灵方对高血压肾损害模型小鼠肾功能的影响
目的 观察抗纤灵方对高血压肾损害模型小鼠肾功能的影响.方法 将小鼠随机分为5组,每组12只.正常组不做处理,模型组、蒙诺组、抗纤灵组行单侧肾切除及微渗泵灌注血管紧张素Ⅱ,生理盐水对照组行单侧肾切除及微渗泵灌注0.9％ NaCI溶液.各组进行相应干预.造模前及造模后第2、4周无创血压仪测小鼠血压,4周后收集实验各组小鼠的尿液测24 h尿蛋白定量,眶静脉采血检测血肌酐、尿素氮.结果 ①造模后第2周,与正常组比较,生理盐水对照组、模型组血压升高(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,抗纤灵组、蒙诺组血压下降(P＜0.05).造模后第4周,抗纤灵组及蒙诺组血压较模型组下降(P＜0.05).②与正常组比较,模型组及生理盐水对照组的血肌酐水平均上升(P＜0.05),模型组及蒙诺组的血尿素氮上升(P＜0.05),模型组24 h尿蛋白定量显著下降(P＜0.01),而抗纤灵方组和蒙诺组血肌酐较正常组差异无统计学意义(P＞0.05),抗纤灵方组血尿素氮较正常组差异无统计学意义(P＞0.05).与模型组比较,生理盐水对照组及蒙诺组24 h尿蛋白定量显著下降(P＜0.01).结论 抗纤灵方可降低高血压肾损害模型小鼠的血压,并具有保护肾功能的作用.
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抗纤灵方对大鼠单侧输尿管梗阻所致肾纤维化的防治作用
目的:探讨中药抗纤灵方对大鼠单侧输尿管结扎(UUO)所致肾纤维化的防治作用及机制.方法:用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,动态观察4周.治疗组以抗纤灵方在造模的同时开始灌胃,1次/d,共4周.治疗的第2周末检测BUN、Scr含量等指标,观察肾功能变化;第4周末采用HE染色、丽春红染色观察肾组织病理变化和胶原纤维沉积变化;采用RT-PCR法观察梗阻肾皮质C-Met、HGF、Erk1 mRNA表达.结果:模型组大鼠BUN、Scr明显升高;肾小管和间质的结构基本消失,呈现弥漫的细胞增殖;肾间质胶原纤维增生和大炎细胞浸润;肾组织C-Met mRNA表达显著上调,而HGF mRNA水平显著下调.中药抗纤灵方治疗组肾脏炎性细胞浸润及间质损伤均轻于模型组;BUN含量显著降低,Scr含量趋向正常;肾组织C-Met mRNA表达明显减少,HGF mRNA水平明显上调.ERK总基因水平的表达在假手术组、模型组及中药治疗组之间比较无明显差异.结论:抗纤灵方可能与抑制肾组织C-Met mRNA表达并增加抗肾纤维化的细胞因子HGF mRNA表达来改善大鼠梗阻性肾间质纤维化及肾功能有关.
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抗纤灵方对5/6肾切除小鼠肾衰模型肾纤维化作用及机制研究
目的 研究抗纤灵方对5/6肾切除小鼠肾纤维化的作用及机制研究.方法 将60只C57小鼠,随机分为假手术组10只和手术组50只,手术组行5/6肾切除术.术后2周,手术组随机分为模型组、抗纤灵低、中、高剂量组及雷帕霉素阳性对照组,各组10只.各组于术后2周分别给予生理盐水、雷帕霉素及相应剂量的抗纤灵灌胃.治疗12周后处死小鼠,取肾组织检测肾脏病理(HE,MASSON染色);应用免疫荧光法检测肾组织平滑肌肌动蛋白(a-SMA)表达,采用PCR法检测a-SMA及纤维粘连蛋白(FN)表达.结果 与假手术组比较,模型组病理损伤程度显著增加,a-SMA及FN表达明显(P＜0.01);与模型组比较各治疗组病理损伤减轻,a-SMA及FN表达减少(P＜0.05),且呈剂量依赖关系;高剂量组与雷帕霉素组比较差异无显著性(P＞0.05).结论 抗纤灵能改善肾脏纤维化,延缓肾脏病进展,其机理可能与下调肾脏a-SMA及FN表达相关.
