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肝豆汤改良方对Wilson's病模型TX乳鼠神经元内Cyt C/Caspase信号通路的分子调控机制
目的:探讨肝豆汤改良方调控TX乳鼠神经元内细胞色素C(Cyt C)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)信号通路的分子靶点并观察其相应的调控机制.方法:本实验乳鼠神经元通过原代方法分离培养所得,分为正常组、模型组、肝豆汤改良方组、丁苯酞组,正常组为正常DL乳鼠神经元,用完全培养基培养,模型组为TX乳鼠神经元,用10％空白兔血清培养,肝豆汤改良方组为TX乳鼠神经元,加入含体积浓度(5％,10％,15％,20％)肝豆汤改良方兔血清的培养基继续培养,丁苯酞组为TX乳鼠神经元,用10％含丁苯酞兔血清培养.采用原子吸收分光光度法检测不同浓度含肝豆汤改良方兔血清作用24 h后,对TX乳鼠神经元内微量元素的影响;流式细胞仪检测经肝豆汤改良方兔血清作用后活性氧(ROS)释放量的变化;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测经含肝豆汤改良方兔血清作用后Cyt C,Caspase-9,Caspase-3蛋白的表达.结果:与模型组比较,含肝豆汤改良方兔血清可显著降低TX乳鼠神经元内铜、铁含量,增加锌含量(P＜0.01).流式细胞仪检测发现,含肝豆汤改良方兔血清较模型组可显著降低TX乳鼠神经元内ROS的释放量(P＜0.01).Western blot检测结果显示与模型组比较,含肝豆汤改良方兔血清可显著降低TX乳鼠神经元内Cyt C,Caspase-9,Caspase-3蛋白表达(P＜0.01).结论:肝豆汤改良方可能是通过促进过量铜排出而抑制神经元内Cyt C,Caspase-9,Caspase-3表达,从而减轻高铜对神经元的损伤作用.肝豆汤改良方可通过减少脑内铜含量,进而调控Cyt C/Caspase信号通路达到减轻高铜诱导的神经元损伤的治疗效果.
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肝豆汤对Wilson病模型TX小鼠肝细胞内铜代谢通路的分子调控机制
目的:探讨肝豆汤调控毒牛奶(TX)小鼠肝细胞内铜转运通路的分子靶点并观察其相应的调控机制.方法:20只家兔适应性喂养3d后,随机分为空白组(生理盐水)和肝豆汤组(4.5 g·kg-1·d-1),每日2次ig,连续10 d,制得含药血清;采用2步灌注法分离提取DL,TX小鼠肝细胞,采用原子吸收法检测加含不同百分含量(5％,10％,15％,20％)含肝豆汤兔血清作用24 h后,对TX小鼠肝细胞内微量元素的影响,另设空白组;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测经含肝豆汤兔血清作用后腺嘌呤核苷三磷酸7b(adenosine triphosphate7b,ATP7b),抗氧化蛋白1(anti-oxidant1,ATOX1),铜转运体1(coppertransporter1,CTR1),金属巯蛋白(metallothionein,MT),超氧化剂物歧化酶铜伴侣蛋白(copper chaperone of superoxide dismutase,CCS),细胞色素氧化酶17(cytochrome-coxidase17,COX17)蛋白的表达.结果:与空白组比较,模型组TX小鼠肝细胞内铜含量升高,锌含量降低,铁含量升高,ATP7b,ATOX1,CCS,COX17蛋白表达明显降低,CTR1,MT蛋白表达显著升高(P＜0.01);与模型组比较,含肝豆汤兔血清可显著降低TX小鼠肝细胞内铜含量,增加锌含量,降低铁含量(P ＜0.05,P＜0.01);Western blot检测结果显示,含肝豆汤兔血清可明显增加ATP7b,ATOX1,CCS,COX17蛋白表达(P ＜0.05,P＜0.01),降低CTR1,MT蛋白表达(P＜0.01).结论:肝豆汤可能是通过调控细胞内铜代谢相关蛋白,上调ATP7b,ATOX1,CCS,COX17蛋白表达,抑制CTR1,MT表达,从而发挥细胞内排铜作用.肝豆汤可通过多靶点、多途径调控铜代谢通路达到降低肝细胞内铜含量的治疗效果.
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"肝豆状核变性"病名悖论
病名诊断是中医临床诊断的核心内容.针对肝豆状核变性病名在理论上、临床应用上存在的诸多问题,从病名科学化、标准化、规范化的角度,探讨了该病名的不足之处,在复习了大量的古典文献基础上,提出中医用Wilson病或中译名"威尔逊病"取代肝豆状核变性病名,更有利于该病的学术交流和研究.
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肝豆汤改良方对TX小鼠脑组织ASM、Cer及p38MAPK mRNA和蛋白表达的影响
目的:探讨肝豆汤改良方(MGDD)对TX小鼠脑组织酸性鞘磷脂水解酶(ASM)、神经酰胺(Cer)及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK) mRNA和蛋白表达的影响.方法:将140只TX小鼠随机分成1、3、5月龄模型组,3、5月龄MGDD组及3、5月龄丁苯酞组,每组20只,同时选用相同月龄60只DL小鼠分别为1、3、5月龄正常对照组,每组20只,饲养环境及喂食食物相同,均从入组时开始给药,MGDD治疗组按24.5g·kg-1·d-1灌胃,丁苯酞组给以丁苯酞混悬液0.156g·kg-1·d-1灌胃,正常对照组及模型组灌胃100mL·kg-1·d-10.9％氯化钠溶液,1次/d,收集处理标本,采用RT-PCR、免疫组织化学法及Wcstern blot技术检测脑组织内ASM、Cer及p38 MAPKmRNA及蛋白表达水平.结果:模型组小鼠脑组织ASM、Cer及p38 MAPK mRNA及蛋白表达程度伴随着月龄的增加,表达有增多趋势,MGDD治疗组较模型组可显著降低小鼠脑内ASM、Cer及p38 MAPK mRNA及蛋白表达水平(P＜0.05,P＜0.01),且随着疗程的延长,抑制更加显著.结论:MGDD可能通过下调小鼠脑组织神经酰胺信号通路中ASM、Cer、p38 MAPK mRNA及蛋白的表达水平,改善铜负荷引起的神经元损伤.
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中药肝豆汤含药血清对Wilson病模型TX小鼠肝细胞内ATP7b蛋白亚细胞定位和功能表达的影响
目的:观察肝豆汤调控TX小鼠肝细胞内铜转运通路的分子靶点,研究其调控机制.方法:免疫荧光双标记经激光共聚焦显微镜观察由含肝豆汤兔血清孵育后TX小鼠肝细胞内ATP7b蛋白的亚细胞定位变化.结果:ATP7b蛋白在DL小鼠肝细胞内定位于反面高尔基体管网状结构(TGN),位于高铜环境中则转运至顶端膜区,去除高铜环境则重新定位于TGN;ATP7b蛋白在TX小鼠肝细胞内不能定位于TGN及顶端膜区域,去除高铜环境也不能促使ATP7b蛋白重新定位于TGN.中药肝豆汤可促使ATP7b蛋白逐步重新定位于TGN.结论:肝豆汤可以通过诱-ATP7b蛋白重新定位于TGN,进而发挥细胞内排铜作用,改善Wilson病的临床症状.
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Wilson病患者神经心理特征与中医证型的相关研究
目的 探讨Wilson病(Wilson's disease,WD)患者神经心理变化特征与中医证型的关系,为辨证论治早期干预WD神经心理功能障碍提供依据.方法 对中医辨证符合为肝胆湿热证(31例)、肝肾阴虚证(47例)和气血亏虚证(1 8例)的96例WD患者进行瑞文标准推理测验(Raven's standard progressive matrices,R'SPM)、Stroop色—字干扰测验(Stroop color-word test,CWT)及连线测验(trailmaking test,TMT)3项神经心理测验,并分析中医证型积分与3项神经心理测验成绩的相关性.结果 (1)3个中医证型的R'SPM总分、CWT-字义干扰时间、TMT-干扰量比较,差异均有统计学意义(P＜0.01,P ＜0.05).气血亏虚证的R'SPM总分、CWT-字义干扰时间与肝肾阴虚证、肝胆湿热证比较,差异均有统计学意义(P＜0.05)；气血亏虚证、肝肾阴虚证TMT-干扰量与肝胆湿热证比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)3个中医证型积分均与R'SPM总分呈显著负相关(P＜0.01).肝胆湿热证积分与CWT-千扰量呈显著正相关(P＜0.01)；肝肾阴虚证积分与TMT-B项耗时数、TMT-干扰量呈显著正相关(P＜0.05)；气血亏虚证积分与CWT-字义干扰时间呈显著正相关(P＜0.05).结论 WD患者神经心理改变与中医证型具有相关性,受损程度气血亏虚证＞肝肾阴虚证＞肝胆湿热证,虚证严重程度高于实证.
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中国人Wilson病ATP7B基因Arg778Leu/Gln点突变与中医证型的相关性研究
目的:探讨中国人Wilson病(WD)ATP7B基因Arg778Leu/Gln点突变与中医证型的关系.方法:应用PCR技术分别扩增90例WD患者和30名健康人ATP7B基因的第8外显子,其PCR产物行限制性内切酶MspⅠ酶切分析.90例WD患者进行中医辨证分型.结果:90例WD患者有34例Arg778Leu/Gln点突变;WD患者中医辨证分型属肝风内动者Arg778Leu/Gln点突变占20例.结论:Arg778Leu/Gln点突变组患者的发病年龄迟于未见该点突变组的患者,Arg778Leu/Gln点突变可能与中医肝风内动证型相关.
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肝豆汤Ⅳ号联合短期驱铜治疗对肝豆状核变性患者肝纤维化血清学指标的影响
目的 观察肝豆汤Ⅳ号治疗对肝豆状核变性(WD)患者肝纤维化血清学指标的影响以及对肝功能的作用.方法 61例WD患者分为二巯基丙磺酸钠(DMPS)组(30例)和肝豆汤Ⅳ号组(31例).DMPS组单纯予DMPS驱铜,肝豆汤Ⅳ号组予DMPS驱铜同时,口服中药复方肝豆汤Ⅳ号,均治疗8个疗程(6天1个疗程).两组治疗前后测定肝功能,采用双抗体夹心ABC-EIASA法检测血清基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及其组织抑制因子(TIMP-1);放射免疫法(RIA)检测血清透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ).结果 治疗后DMPS组肝纤维化血清学指标及肝功能指标变化不明显(P＞0.05);而肝豆汤Ⅳ号组治疗后血清TIMP-1明显下降(P＜0.05),MMP-1/TIMP-1的比值明显升高(P＜0.01),血清HA、LN、PCⅢ仅略有下降(P＞0.05),血清C-Ⅳ、MMP-1略有升高(P＞0.05),肝功能指标明显下降(P＜0.05).结论 WD患者短期内单纯驱铜治疗并不能改变血清肝纤维化指标水平及肝功能,而联合应用中药肝豆汤Ⅳ号治疗可以明显改善肝功能,并且可能通过抑制TIMP-1水平,提高MMP-1/TIMP-1的比值,而发挥抗肝纤维化作用.
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Wilson病中医证型与客观指标相关性研究
目的 探讨Wilson病(Wilson's disease,WD)中医证型与临床资料及理化指标的相关性.方法 对116例WD患者进行中医辨证分型,以常见中医证型为因变量,临床及理化指标为自变量,运用SPSS 19.0软件进行二元Logistic逐步回归分析探讨中医证型与临床、理化指标的相关性.结果 WD中医证型以肝胆湿热(35.3％)、肝郁脾虚(1 3.8％)、肝肾阴虚(13.8％)、痰湿阻络(12.1％)4个证型常见.肝胆湿热证与K-F环分级、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、层粘蛋白(laminin,LN)正相关(P＜0.01);肝肾阴虚证与TBIL正相关(P＜0.01);痰湿阻络证与临床类型、铜蓝蛋白(cer uloplasm in,CP)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、总蛋白(total protein,TP)正相关(P＜0.01,P＜0.05);气血两虚证与病程、血氨、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、LN正相关(P ＜0.01,P＜0.05).结论 WD患者中医证型与临床资料、理化指标之间有一定的相关性,可以为中医辨证分型客观化提供试验依据.肝胆湿热、肝郁脾虚、肝肾阴虚、痰湿阻络为常见证型.
关键词： Wilson病 肝豆状核变性 中医证型 Logistic回归分析 -
肝豆扶木汤对TX小鼠肝纤维化的保护作用及机制研究
目的 探讨肝豆扶木汤(Gandou Fumu Decoction,GDFMD)对Wilson病肝纤维化模型TX(toxic milk)小鼠TGF-β1/Sm ad信号通路表达的影响.方法 60只TX小鼠随机分为模型组、GDFMD高、中、低剂量组和青霉胺组,每组12只,另设正常组12只.GDFMD高、中、低剂量组按31.2、15.6、7.8g生药/kg进行灌胃,青霉胺组按0.1 g/kg(0.2 mL/10 g)灌胃,模型组和正常组给予等容积生理盐水,每天1次,连续灌胃4周.采用赖氏法检测血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)活力,溴甲酚绿法检测血清白蛋白(album in,ALB)含量;采用HE染色、Masson染色观察肝组织病理变化;采用RT-PCR和Western blot检测肝组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7 mRNA和蛋白的表达.结果 (1)与正常组比较,模型组血清ALT、AST活力升高,ALB含量降低(P＜0.01),与模型组比较,GDFMD高、中剂量组和青霉胺组ALT、AST活力降低,ALB含量升高(P＜0.01),GDFMD低剂量组AST活力降低,ALB含量升高(P＜0.05).(2)模型组可见肝纤维化特征性病理表现,备用药组均有不同程度改善.(3)与正常组比较,模型组TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白表达升高,Smad7 mRNA和蛋白表达降低(P＜0.01),与模型组比较,GDFMD高、中剂量组和青霉胺组TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白表达降低,Smad7 mRNA和蛋白表达升高(P ＜0.05,P＜0.01),GDFMD低剂量组TGF-β31 mRNA和蛋白、Smad2蛋白表达降低,Smad7蛋白升高(P ＜0.05,P＜0.01).结论 GDFMD具有抗肝纤维化作用,其作用机制可能与调控TGF-β1/Smad信号通路相关因子的基因与蛋白表达有关.
关键词： 肝豆扶木汤 Wilson病 肝纤维化 TX小鼠 TGF-β1/Smad信号通路 -
肝豆状核变性基因突变的生物信息学分析
目的：分析预测肝豆状核变性（WD）基因突变与蛋白结构、功能改变的关系，为WD的早期基因诊断与治疗提供参考。方法：选取符合Wilson病诊断标准的患者6例及健康对照者6名作为研究对象，用盐析法抽提受试者基因组DNA并进行测序鉴定，检测受试者WD基因突变情况；通过生物信息学分析手段分析预测WD基因的生物学特性及理化性质，对WD基因编码蛋白及发生基因突变的外显子进行同源模建，分析基因突变与其空间构象变化的关系。结果：6例患者中有3例为第8外显子突变（2例为Arg778Leu，1例为Arg778Gln），有2例为第12外显子突变（Thr935Met和Arg919Gly），1例为第7外显子突变（Trp650Ser）；蛋白生物信息学分析发现，蛋白总体带负电荷，不稳定指数45.26，蛋白分子量为157.23kDa，蛋白具有两亲性分子的特点；蛋白有8个跨膜区，二级结构主要有α-螺旋，无规则卷曲，延伸结构及β-转角；同源模建结果显示，778位氨基酸的突变导致外显子8的空间构象发生明显改变；而外显子12的935和919位氨基酸突变则对其空间构象影响不大。结论：778位氨基酸突变或许不是一个温和突变，该位点的突变对本病的发生影响更为深刻。
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铜转运及相关基因病
铜是人体必需微量元素,与铜代谢有关的人类遗传性疾病主要有Menkes综合征和Wilson病.这两个疾病的相关蛋白被认为是铜转运磷酸化ATP酶.无论是人类还是酵母菌,铜转运是一个保守的过程.研究在酵母菌中铜的转运过程可以推及人类的这一相似转运通路,并有助于揭示其病理生理机制.
关键词： 铜 Wilson病 Menkes综合征 酵母菌 铜转运磷酸化ATP酶 -
Wilson病的临床表现与脑MRI特征研究
目的:探讨MRI对Wilson病的诊断价值.材料和方法:分析20例经临床确诊的Wilson患者的临床与脑MRI表现.结果:基底节对称出现的长T1长T2信号伴脑干病变是本病特征之一,苍白球T2低信号为本病特征之二;异常信号与神经系统症状、体征及病程有较好的相关性.结论:N\MRI在Wilson病的诊断、预后判断及研究影像与临床关系等方面有明显的优越性.
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Wilson病脑CT表现(附17例报告)
Wilson病是一种少见的常染色体隐性遗传性疾病,由Wilson于1912年早报道故得此名,又叫肝豆状核变性.本病是由于铜转运和代谢异常使铜首先在肝脏及脑部的豆状核等部位异常沉积所致.早期可导致肝硬化,随病情进展逐渐表现出一系列锥体外系症状.此组病例头部典型CT表现为豆状核、尾状核、丘脑等对称性核团状低密度灶,该病灶不被强化.后期大部分患者均可有不同程度的脑萎缩.现将我们遇到的17例患者,结合文献就其临床及脑CT表现分析如下.
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一例Wilson病的影像学表现
Introduction Wilson's disease is a rare inherited disorder of copper metabolism which is characterized by the inability to secrete the copper-ceruloplasmin complex into plasma and free copper into the bile.In the liver,the copper deposits in the periportal regions and incites an inflammatory reaction, resulting in chronic liver disease[1].
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一种简便、实用的铜染色法在Wilson病肝穿病理诊断中的应用
目的 探讨红氨酸铜染色法(rubeanic acid copper staining)的关键技术环节、注意事宜及在Wilson病肝穿病理诊断中的应用.方法 应用红氨酸铜染色法对58例Wilson病肝穿组织作铜染色,并进行效果评价,以10例原发性胆汁性肝硬化(PBC)、10例其他胆汁淤积性肝病、10例慢性乙型病毒性肝炎及5例健康肝移植供体肝组织作对照.结果 红氨酸溶液配制、恒温过夜及防组织脱片等是保证红氨酸铜染色效果的关键环节;本文58例Wilson病穿刺肝组织中87.3%铜染色阳性,表现为肝细胞内较弥漫性粗大铜颗粒沉积,而对照组PBC、其他胆汁淤积性肝病及慢性乙型病毒性肝炎肝组织内仅有少数肝实质细胞内检出疏细铜颗粒,5例健康肝移植供体肝组织内均未见红氨酸铜染色阳性着色.结论 红氨酸铜染色法是一种用于遗传代谢性肝病组织铜显示与评价的简便、实用性染色方法 .
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非病毒性严重肝病的病因治疗研究新进展
严重肝病的病因非常复杂,在我国以乙型肝炎和丙型肝炎为常见,但近年酒精性肝病、自身免疫性肝病等非病毒性严重肝病有上升趋势.严重酒精性肝病治疗迄今仍无特效药物,主要病因治疗是肾上腺皮质激素(GC)和己酮可可碱.对于自身免疫性肝病,目前仍采用免疫抑制剂和GC治疗,生物制剂干扰信号转导途径的研究有望成自身免疫性肝病新的治疗途径.Wilson病的治疗采用错时给药或交替联合给药,可避免不良反应的叠加;而细胞移植治疗和基因治疗将是未来研究的方向.总之,严重肝病治疗时应结合具体情况,采取有效治疗措施,争取提高患者的存活率.
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低铜蓝蛋白血症相关性运动障碍临床研究论文简介
目前已知与血清铜蓝蛋白(serum ceruloplasmin,sCP)降低或缺乏相关的神经系统疾病有Wilson病(Wilson's disease,WD)、遗传性铜蓝蛋白缺乏症(hereditary aceruloplasminemia,HA)和门客斯病(Menkes disease,MD)等.
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一家系中3例肝豆状核变性报告
肝豆状核变性(hepatolenticular degeneration,HLD)又称Wilson病(WD),是一种常染色体隐性遗传的铜离子代谢障碍疾病,由于铜离子在体内广泛沉积,导致各脏器不同程度的损害,临床上以脑部及肝脏症状为主要表现[1].WD作为目前少数几种可治疗的神经系统遗传性疾病之一,早诊断、早治疗、终身治疗是患者预后的关键.
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驱铜治疗对Wilson病免疫功能影响的观察
目的 了解Wilson病(WD)免疫功能及二巯基丙磺酸钠(DMPS)短期驱铜治疗和长期综合驱铜治疗对其影响;进而评价DMPS短期驱铜治疗及长期综合驱铜治疗的有效性、安全性、科学性.方法 选取正常对照组19名、未经治疗和长期正规综合驱铜治疗≥2年的WD患者各21例,长期综合驱铜治疗WD患者、未经治疗WD患者在接受DMPS短期治疗前、后及正常对照组均采取空腹静脉血:散射比浊法测定血清免疫球蛋白、补体水平及流式细胞术进行外周静脉全血T淋巴细胞亚群、CD3-CD16+CD56+及CD19+分析.结果 WD未经治疗组体液免疫指标之CD19+、IgG、IgM均较正常对照组显著升高,C4较正常对照组显著减低;细胞免疫指标之CD4+、CD3-CD16+CD56+及CD4+/CD8+均较正常对照组减低.DMPS短期驱铜治疗后CD19+、IgG显著减低.长期综合驱铜治疗后CD19+、IgG、IgM、C3、CD4+、CD4+/CD8+、CD3-CD16+CD56+均有显著恢复.结论 WD免疫功能紊乱:表现为体液免疫亢进,细胞免疫低下;DMPS短期驱铜治疗仅可恢复部分免疫学指标;长期综合驱铜治疗对免疫功能有显著恢复.从免疫学角度看,长期综合驱铜治疗是安全、必要的.
