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星点设计-效应面法优化龙须藤的大孔树脂纯化工艺
目的:优选D-101型大孔树脂纯化龙须藤的工艺条件.方法:采用HPLC测定3',4',5',5,7-五甲氧基黄酮(黄酮1)和3',4'-亚甲二氧基-5',5,6,7-四甲氧基黄酮(黄酮2)含量,流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0 ～ 20 min,30％～ 40％A;20 ～ 36 min,40％～48％ A),检测波长324 nm.以黄酮1和黄酮2洗脱率和纯度的“总评归一值”为因变量,上样液质量浓度、乙醇体积分数和用量为自变量,通过星点试验对自变量各水平进行多元线性回归和二项式拟合,利用效应面法优选纯化工艺并进行预测分析.结果:二次多项式拟合的相关系数明显优于多元线性回归方程,佳纯化工艺参数为上样液质量浓度0.11 g·mL-1,洗脱剂乙醇体积分数84.41％,乙醇用量13.94 BV;黄酮1和黄酮2平均洗脱率分别为78.45％(RSD 0.32％),78.55％(RSD 0.33％),纯度依次为1.14％(RSD 0.88％),0.67％(RSD 1.49％).结论:通过星点设计-效应面法优选的龙须藤大孔树脂纯化工艺稳定可行,预测性好.
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星点设计-效应面法优化龙须藤提取工艺
目的:优选龙须藤的提取工艺.方法:以乙醇体积分数、液料比、提取时间为自变量,浸膏得率、3',4',5',5,7-五甲氧基黄酮(黄酮1)和3 ',4'-亚甲二氧基-5',5,6,7-四甲氧基黄酮(黄酮2)含量的总评“归一值”为因变量,通过Design-Expert7.0.0软件对自变量各水平进行多元线性回归和二项式拟合,利用效应面法优选提取工艺并进行预测分析.采用HPLC测定黄酮1和黄酮2含量,色谱条件为流动相乙腈(A)-水(B)洗脱梯度(0～20 min,30％～40％ A;20～36 min,40％ ～48％A),检测波长324nm.结果:二项式拟合的复合相关系数较高,总评“归一值”达0.995 6;佳提取工艺为加14倍量45％乙醇提取2次,每次116 min;黄酮1和黄酮2的质量分数依次为0.046％,0.027％,浸膏得率21.21％.结论:利用星点设计-效应面法优化的龙须藤提取工艺稳定简便,具有良好的预测性.
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HPLC法测定龙须藤中没食子酸的含量
目的 研究建立龙须藤的质量标准.方法 用高效液相色谱(HPLC)法测定龙须藤中没食子酸的含量.结果 没食子酸对照品Y=8.34×106X-1.9598×104,r=0.9998,在0.0816～0.816ug范围内呈良好线性关系,加样回收率为98.81%,RSD=0.45%(n=5).结论 本方法操作简便,结果准确,重复性好,可作为龙须藤的质量控制标准.
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龙须藤多甲氧基总黄酮对小鼠的急性毒性及抗胃溃疡作用研究
目的 对龙须藤多甲氧基总黄酮(PMFBC)的小鼠急性毒性及抗胃溃疡作用进行评价.方法 以Bliss法测定PMFBC的半数致死量(LD50),评价其急性毒性;采用吲哚美辛、乙醇、水浸应激3种胃溃疡模型评价PMFBC对小鼠急性胃溃疡的保护作用.结果 PMFBC ig给药对小鼠的LD80值为1 256.319 mg/kg,表现出一定的急性毒性;PMFBC对3种胃溃疡模型均有较好的保护作用,可使小鼠胃溃疡面积明显减小,具有较高的溃疡抑制率.结论 PMFBC对小鼠胃溃疡的形成具有明显抑制作用,在一定剂量范围内可安全使用.
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龙须藤5种多甲氧基黄酮分子靶标的预测
目的 预测龙须藤5,6,7,5'-四甲氧基-3',4'-亚甲二氧基黄酮(PMF1)、5,6,7,3',4',5'-六甲氧基黄酮(PMF2)、5,6,7,3',4'-五甲氧基黄酮(PMF3)、4',5'-亚甲二氧基-5,7,3'-三甲氧基黄酮(PMF4)和5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮(PMF5)的分子靶标.方法 通过反向分子对接法进行靶标预测,利用PDTD、TTD和DrugBank数据库对靶标综合分析.结果 多甲氧基黄酮可能在治疗类风湿性关节炎、心血管疾病和癌症等方面发挥作用.结论 该方法可为龙须藤及5种多甲氧基黄酮的药效学及分子作用机制研究提供线索.
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DAD-HPLC法同时测定龙须藤总黄酮中5种多甲氧基黄酮
目的 建立DAD-HPLC法同时测定龙须藤总黄酮中5种多甲氧基黄酮的含有量.方法 总黄酮甲醇提取液的分析采用Phenomenex Luna C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-水为流动相,等度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长332、320、338、328 nm.结果 5,6,7,5’-四甲氧基-3’,4’-亚甲二氧基黄酮(PMF1)在69.44 ～416.64 ng (R2 =0.999 97)、5,6,7,3’,4’,5’-六甲氧基黄酮(PMF2)在119.28 ～715.68 ng(R2=0.999 98)、5,6,7,3’,4’-五甲氧基黄酮(PMF3)在51 ～306 ng (R2=0.999 95)、3’,4’-亚甲二氧基-5,7,3’-三甲氧基黄酮(PMF4)在29.91 ～179.46 ng (R2 =0.999 89)、5,7,3’,4’,5’-五甲氧基黄酮(PMF5)在98.4 ～590.4 ng (R2=0.999 99)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为100.17％、99.81％、99.80％、100.09％、99.54％,RSD分别为1.15％、1.46％、1.29％、1.80％、1.81％.结论 该方法快速简便,灵敏度高,可用于龙须藤总黄酮的质量控制.
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反向分子对接法预测龙须藤两种多甲氧基黄酮的分子靶标
目的 预测龙须藤两种多甲氧基黄酮5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮(PMFA)及5,6,7,5'-四甲氧基-3',4'-亚甲二氧基黄酮(TMFA)的分子靶标.方法 采用反向分子对接法,对这两种成分进行分析.结果 PMFA和TMFA可能在抗癌、抗类风湿性关节炎及抗心血管疾病等方面发挥作用,并通过防止CTSK与DHODH靶点作用于Toll样受体、破骨细胞分化与嘧啶代谢等途径治疗类风湿性关节炎.结论 该方法可为龙须藤及两种多甲氧基黄酮的药效学及分子作用机制实验提供参考.
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RP-HPLC测定龙须藤中4种黄酮类成分的含量
目的 用HPLC梯度洗脱法测定龙须藤中4种黄酮类成分的含量,考察了杨梅素、槲皮素,表儿茶素和5,6,7,3',4',5'-六甲氧基黄酮4种成分在不同产地药材中的含量.方法 采用RP-HPLC测定,以Shimadzu C18(4.6mm×250 mm,5 μm)为色谱柱;流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液,梯度洗脱(0 min,乙腈-0.05%磷酸比例为20:80,5 min比例为30:70;10 min,比例为50:50;30 min,比例为50:50);流速1.0 mL·min-1,检测波长370 nm.结果 杨梅素在0.071 6～0.716 μg、槲皮素在0.122 8～1.228μg、表儿茶素在0.1024～1.024μg、5,6,7,3',4',5'-六甲氧基黄酮在0.090 2～0.902μg内呈良好的线性关系;重复性的RSD分别为1.32%,0.93%,1.02%,1.17%.不同产地中黄酮成分含量大小依次为福建青云山地区、广西隆安、江西安福、湖北宜昌、浙江缙云地区样品.结论 本方法精密度、重复性和分离效果好,分析快速,适合于该药材的含量测定,不同产地中成分存在一定的差异.
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龙须藤抗类风湿关节炎有效部位的研究
[目的]筛选龙须藤抗类风湿性关节炎的有效部位.[方法]采用系统溶剂提取法对龙须藤进行提取、分离得到不同部位的萃取物,采用牛Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型(CIA模型),以各组提取液灌胃给药,观察各组提取液对CIA模型大鼠的影响.[结果]龙须藤具有抗类风湿关节炎的有效部位为乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物,具有较强的抗类风湿关节炎作用,其他萃取物活性极弱.[结论]初步确定了龙须藤抗类风湿关节炎的有效部位为乙酸乙酯部位和正丁醇部位,为龙须藤深入研究抗类风湿关节炎奠定了基础.
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龙须藤提取物对胶原诱导性关节炎模型大鼠的影响
目的 研究龙须藤乙酸乙酯提取物对胶原诱导性关节炎模型大鼠滑膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的影响,探讨其作用机理. 方法 建立胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,观察大鼠足趾肿胀度的变化,用免疫组化法检测大鼠踝关节滑膜组织中TNF-α、IL-6、IL-8的含量. 结果 龙须藤乙酸乙酯提取物能抑制大鼠足趾肿胀及滑膜组织中TNF-α、IL-6及IL-8的表达. 结论 龙须藤乙酸乙酯提取物对类风湿性关节炎有一定的治疗作用,其作用机理是降低滑膜组织中TNF-α、IL-6、IL-8的表达水平.
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3种闽产中药体外对大鼠血小板聚集的影响
为观察闽产巴戟天、养心草、龙须藤85%乙醇提取物对体外ADP诱导的SD大鼠血小板聚集的影响,采用大鼠血小板加中药孵育,比浊法测定血小板聚集率.结果:巴戟天、养心草、龙须藤均具有抗血小板聚集作用,其中巴戟天、养心草、龙须藤的85%乙醇提取物在体外具有抗血小板聚集作用,巴戟天、养心草优于阿司匹林;龙须藤与阿司匹林相当.
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龙须藤研究进展
龙须藤(Bauhinia championi(Benth.)Benth.)为豆科羊蹄甲属木质藤本植物.龙须藤作为一种民间草药,所含化学成分复杂,具有多种药理活性,被广泛用于治疗风湿性关节炎、腰腿疼、跌打损伤、胃痛、小儿疳积,随着风湿、类风湿发病率的不断上升,该植物药逐渐受到国内外学者的关注.综述近年来国内外对龙须藤化学成分、药理作用、临床应用等方面的研究进展,为该植物药的进一步研究开发提供参考.
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龙须藤化学成分及其抗类风湿性关节炎活性研究
目的:研究龙须藤的化学成分及其对滑膜细胞的抑制作用.方法:运用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等方法,对龙须藤乙酸乙酯部位化学成分进行分离纯化,利用现代波谱学技术鉴定化合物结构,采用MTT法对分离得到的单体化合物进行体外抑制滑膜细胞增殖的活性筛选.结果:从龙须藤乙酸乙酯部位分离得到9个化合物,分别鉴定为:豆甾醇-4-烯-3-酮(1)、β-谷甾醇棕榈酸酯(2)、1-(2,4-二羟基苯基)-3-(3,4-二羟基苯基)-3-羟丙基-1-酮(3)、7-羟基香豆素(4)、没食子酸(5)、松柏醛(6)、1-(3,4-二甲氧基苯基)-1-丙醇(7)、丁香酸(8)、没食子酸乙酯(9).结论:其中,化合物1～4、6、7、9为首次从龙须藤中分离得到,化合物1、3、6、7、9为首次从该属植物中分离得到.MTT法结果显示化合物1～9均对滑膜细胞具有一定的抑制作用,其中化合物5抑制作用强.
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5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮平衡溶解度及油水分配系数的测定
目的 考察5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮在水和缓冲溶液中的平衡溶解度及表观油水分配系数.方法 采用HPLC法测定5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮在不同介质中的平衡溶解度,摇瓶法测定表观油水分配系数.结果 在37 ℃下,5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮及龙须藤总黄酮中的5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮在水中的平衡溶解度分别为0.603、77.702 μg/mL,相应的表观油水分配系数为246.24(lg Papp=2.39)、257.51(lg Papp=2.41).结论 5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮水溶性极差,脂溶性适中.与单体相比,龙须藤总黄酮中的5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮水溶性增大.
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龙须藤总黄酮抗凝血的作用
目的 观察龙须藤总黄酮的抗凝血作用.方法 采用毛细玻管法和断尾法分别测定龙须藤总黄酮对小鼠体内凝血时间和出血时间的影响;采用试管法测定龙须藤总黄酮对小鼠体外凝血时间的影响,并对小鼠血浆复钙时间进行测定.结果 龙须藤总黄酮能不同程度地延长小鼠体内凝血时间、出血时间和体外凝血时间,且能显著提高小鼠的血浆复钙时间.结论 龙须藤具有较强的抗凝血作用.
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龙须藤提取物的镇痛抗炎作用
目的 研究龙须藤乙醇提取物的镇痛抗炎作用,筛选出龙须藤镇痛抗炎作用的有效部位.方法 采用热板法和冰乙酸扭体法观察镇痛作用,采用二甲苯致小鼠耳郭肿胀法观察抗炎作用.结果 龙须藤醇提物具有较好的镇痛抗炎作用;龙须藤醇提物的乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物具有显著的镇痛作用,并能较好抑制炎症的组织液渗出.结论 龙须藤醇提物的乙酸乙酯部位和正丁醇部位可能是龙须藤镇痛抗炎作用的有效部位.
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龙须藤研究进展
龙须藤为我国少数民族的特色药,其药理作用广泛,尤以抗炎镇痛方面的疗效为著,常用于治疗风湿痹症.本文对其有效成分、药理作用及临床应用进行综述,为后续的开发利用及规范化研究提供参考.
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大孔吸附树脂分离纯化龙须藤总黄酮的工艺研究
目的 研究AB-8大孔树脂分离纯化龙须藤黄酮的工艺条件.方法 通过静态吸附-解吸附实验筛选佳大孔树脂,并以总黄酮含量为考核指标,采用L9(34)正交试验法对影响AB-8大孔树脂分离纯化龙须藤黄酮的因素进行考察,确定佳工艺条件.结果 佳工艺条件为:采用AB-8型大孔树脂,取龙须藤黄酮提取液(含生药0.5 g/mL)上样,树脂用量为4倍生药量,洗脱剂采用体积分数50%乙醇,用量为16倍生药量.结论该工艺条件科学合理,可有效地用于龙须藤黄酮的分离富集.
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龙须藤中黄酮类化合物提取条件的研究
目的 探讨龙须藤中以芦丁为指标的总黄酮佳提取条件.方法 正交试验法对龙须藤中黄酮类化合物的提取工艺进行优选,以提取时间、乙醇浓度、提取次数、料液比为因素,以总黄酮得率为指标进行试验.结果 佳提取工艺条件:60%(体积分数)乙醇溶液,提取时间3 h,提取次数3次,乙醇用量10倍,提取率为7.426%.结论 本实验结果可靠,方法简便,适合于该药材的批量提取.
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大孔树脂对龙须藤中4种多甲氧基黄酮类化合物的纯化研究
目的 优选分离纯化龙须藤中4种多甲氧基黄酮的大孔吸附树脂及相应的工艺条件.方法 采用HPLC法测定5,6,7,5'-四甲氧基-3',4'-亚甲二氧基黄酮(PMF1)、5,6,7,3',4',5'-六甲氧基黄酮(PMF2)、5,6,7,3',4'-五甲氧基黄酮(PMF3)和5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮(PMF4)的质量分数,考察树脂类型、上样吸附速率、乙醇体积分数、洗脱剂用量等参数,优选出佳的大孔吸附树脂纯化工艺.结果 NKA型大孔树脂用于分离纯化龙须藤中4种多甲氧基黄酮的效果较好,其佳纯化工艺参数为:上样液生药浓度0.66 g/mL,吸附速率为2 BV/h,以5 BV蒸馏水和8 BV的35%乙醇洗脱杂质,然后用75%乙醇10 BV洗脱.收集75%乙醇洗脱液,烘干,所得固体样品中4种多甲氧基黄酮的总质量分数为35.98%.结论 NKA型大孔树脂可用于龙须藤中多甲氧基黄酮的富集,优选得到的纯化工艺稳定可行.
