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寻常型银屑病湿热证与血热证的差异血清蛋白质组学表达初探
目的:应用同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)技术对寻常型银屑病(血热证、湿热证)患者与健康人差异且共有蛋白进行分析,探求两证之间差异性表达蛋白,从蛋白质组学角度揭示两证之间差异.方法:取寻常型银屑病血热证、湿热证患者血清,予纯化等处理后,SDS-PAGE电泳分离,经iTRAQ特异性标记酶解后的肽段,采用串联质谱分析与健康人比较寻找差异且两证共有蛋白,并将这些蛋白进行组间比较.结果:发现了19个显著性差异蛋白(P＜0.05),其中,强显著性差异的蛋白有6个(P＜0.01).结论:寻常型银屑病血热证与湿热证血清中存在表达差异性蛋白质,如糖蛋白类、脂蛋白类、免疫类等.是否为证型之间的特征性差异蛋白,有待进一步证实.
关键词： 银屑病 血热证 湿热证 蛋白质组学 同位素相对标记与绝对定量技术 -
基于iTRAQ蛋白组学技术的大肠癌和肝癌术后肝肾阴虚证血浆差异表达蛋白的研究
目的:筛选大肠癌和肝癌术后肝肾阴虚证的血浆差异表达蛋白,探索大肠癌和肝癌“异病同证”的物质基础.方法:纳入具有典型肝肾阴虚证的大肠癌和肝癌患者各10例,对照组为无证可辨的大肠癌和肝癌患者各10例.采集患者血浆并提取蛋白,然后进行蛋白变性、还原及酶解,后进行同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)标记和液相色谱串联质谱联用技术鉴定,得到的峰图采用Maxquant 1.3.0.5软件进行系统的蛋白差异表达分析.鉴定蛋白组间比值＞1.5或＜0.6被认为存在表达差异.结果:大肠癌术后肝肾阴虚证组共筛选出9个典型的差异表达蛋白,肝癌术后肝肾阴虚证组也筛选出9个典型差异表达蛋白,两组共同的差异蛋白有8个:激肽原1(KNG1)、血红蛋白α2 (HBA2)、血红蛋白β(HBB)、α1微球蛋白比库蛋白前体(AMBP)、性激素结合球蛋白(SHBG)、羧肽酶N催化链(CPN1)、血浆蛋白酶C1抑制剂(SERPING1)、间α胰蛋白酶抑制剂重链H1(ITHIH1).这些蛋白主要与补体和凝血级联途径有紧密联系.结论:本研究证实iTRAQ结合液相色谱串联质谱联用技术能够快速、有效地进行差异蛋白质组学研究,发现KNG1,HBA2等蛋白可能是大肠癌和肝癌“异病同证”的物质基础之一.
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基于iTRAQ技术的寻常型银屑病(血虚证)蛋白组学研究
应用同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)对寻常型银屑病(血虚证)患者的血清蛋白进行定量分析,探求其与健康人差异表达蛋白质,从蛋白组学角度揭示血虚证的部分内涵.本实验共鉴定定量了208个蛋白质,血虚证寻常型银屑病患者血清蛋白组与健康组比较,有109个蛋白质差异存在统计学意义(P＜0.05).寻常型银屑病(血虚证)血清中存在与健康人表达差异性蛋白质,如角蛋白类相关蛋白、凝血相关蛋白、脂蛋白类相关蛋白、免疫相关蛋白、肿瘤相关蛋白、甲状腺素结合球相关蛋白、血红蛋白类相关蛋白、细胞外基质类蛋白等.提示这些蛋白可能与寻常型银屑病血虚证有关.
关键词： 寻常型银屑病 血虚证 蛋白组学 同位素相对标记与绝对定量技术 差异蛋白 -
肝移植术后急性排斥患者血清的蛋白质组学分析
目的 寻找与肝移植术后急性细胞排斥反应(ACR)相关的血清蛋白标志物,并初探相应机制.方法 收集3例经肝移植手术、病理证实ACR患者血清为ACR组;3例肝移植术后、肝功能各项指标达到临床正常值,预后良好患者血清为No-ACR组;6例健康体检者血清等量混合后取出2份为Control组.应用蛋白质组学相关技术对血清蛋白质组进行分离,同位素标记相对与绝对定量(iTRAQ)技术筛选和鉴定出3组间的差异表达蛋白,并应用KEGG和STRING软件对其进行功能分析.结果 在ACR组与Control组间检出88个差异表达蛋白,No-ACR组与Control组间检出39个,ACR组与No-ACR组间检出10个;对比88个和10个差异表达蛋白,共同存在的有9个.88个差异表达蛋白中30个之间有直接的相互作用,并可被定位于软件中的13个信号通路,其中14个(46.67%)分布在补体和凝血级联反应通路;No-ACR组与Control组检出的39个差异表达蛋白中10个有直接相互作用,其中9个集中在补体和凝血级联反应通路.结论 应用蛋白质组学技术鉴定出的9种与ACR关系密切的差异表达蛋白,可作为开发ACR早期诊断标志物的候选蛋白;补体和凝血级联反应通路在肝移植术后被显著调节,预示与ACR的发生密切相关.
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肾小球疾病患者尿液比较蛋白质组学研究方法的建立
目的:采用蛋白质组学技术建立尿液蛋白质图谱分析方法,并通过对膜性肾病(MN)和局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患者尿液蛋白质图谱的比较分析,以期寻找到具有鉴别诊断意义的尿液蛋白质标志物. 方法:以肾病综合征为主要表现的MN和FSGS患者各15例,采用白蛋白/IgG抗体清除联合同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)标记二维液相色谱与串联质谱联用技术(2D-LC MS/MS)蛋白质组学技术对患者尿液蛋白质组进行全面分析,并获取差异表达蛋白.对鉴定蛋白和差异蛋白进行Gene ontology (GO)分析.对鉴定蛋白丰度排序前10位蛋白与血蛋白质组丰度排序前10位蛋白进行比较. 结果:共鉴定尿液蛋白809个,GO分析显示根据分子功能,鉴定蛋白主要属于催化活性、结合、受体活性三个类别;根据生物过程,鉴定蛋白主要属于代谢过程、细胞过程、发育过程三个类别;根据细胞定位,鉴定蛋白主要属于细胞外区域、细胞成分、细胞外基质三个类别.符合条件的差异蛋白16个,生物学功能包括参与纤溶调节、免疫反应、代谢过程、细胞增生等.对临床表现肾病综合征的MN和FSGS患者尿液鉴定蛋白丰度排序前10位蛋白与血蛋白质组丰度排序前10位蛋白进行比较显示有较大差异,提示即使在病理情况下,肾脏仍可对不同种类的蛋白保持不同的处理功能,蛋白尿可能有着不同于血蛋白质组的组成架构. 结论:从患者尿液中获得的蛋白质组学图谱为进一步开展基于蛋白质组学生物标志物的研究提供了基础,从MN和FSGS患者尿液中获得的差异蛋白有待进一步验证其与疾病诊断、治疗及预后的关系.
关键词： 蛋白组学 膜性肾病 局灶节段性肾小球硬化 同位素相对标记与绝对定量技术 标志物 -
SLE合并SONFH患者血清差异表达蛋白筛查
目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)合并激素性股骨头坏死(SONFH)患者血清蛋白质组学表达差异,寻找并鉴定诊断SONFH的潜在生物学标志物.方法 分别采集10例SLE合并SONFH患者(SONFH组)、5例健康者(对照组)的外周血,提取血清,去除高丰度血清蛋白质,采用同位素相对标记与绝对定量技术联合二维液相色谱-串联质谱技术进行蛋白组学分析,并进一步行GO和KEGG通路生物信息学分析,寻找并鉴定差异表达的蛋白质.结果 与对照组比较,SONFH组共鉴定出16个差异表达蛋白,其中铜蓝蛋白、结合珠蛋白、IGHG1蛋白、免疫球蛋白重链1、C反应蛋白、补体C9、o1-酸性糖蛋白表达上调(P均＜0.05),SERPINA4蛋白、凝溶胶蛋白、凝血因子Ⅻ、色素上皮细胞衍生因子、备解素、巯基氧化酶1、凝血因子XⅢ、KRTDAP蛋白、胰岛素样生长因子结合蛋白3表达下调(P均＜0.05).KEGG通路分析提示以上16个蛋白与补体及凝血级联反应、系统性红斑狼疮、肌动蛋白细胞骨架调节、p53信号通路、卟啉和叶绿素代谢、FcγR-介导吞噬信号通路密切相关.结论 成功从SLE合并SONFH患者血清筛选出差异表达蛋白,此16个蛋白可能是诊断SONFH的潜在生物学标志物.
