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熟地黄有效成分5-HMF对皮质酮损伤型海马神经元GCR、BDNF、SGK表达的影响
目的:观察熟地黄中有效成分5-羟甲基糠醛(5-HMF)对高浓度皮质酮(CORT)致海马神经元损伤及学习记忆相关蛋白学习记忆相关蛋白(GCR)、脑源性神经营养因子(BDNF)、血清和糖皮质激素调节蛋白激酶(SGK)蛋白表达的影响.方法:用24h新生大鼠原代培养海马神经细胞.第8天细胞用药处理,将细胞分为3组:正常对照组、模型组及5-HMF组.24h后,通过MTT法测定细胞活性,生化方法检测衰老特异性指标β-半乳糖苷酶活性,Western Blot检测学习记忆相关蛋白GCR、BDNF、SGK的基因表达.结果:与正常组相比,模型组细胞活力显著下降,β-半乳糖苷酶活性显著升高,GCR、BDNF、SGK蛋白表达显著性降低；0.5mg/L的5-HMF明显提高细胞活力,降低β-半乳糖苷酶活性,提高模型细胞GCR、BDNF、SGK基因表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:0.5mg/L 5-HMF可以保护大鼠海马神经细胞免遭高浓度皮质酮的损伤,通过调节GCR、BDNF、SGK的基因表达,可能在延缓学习记忆功能退化中发挥作用.
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shRNA抑制SGK1基因表达对人乳腺癌细胞系生物学特性的影响
目的 建立稳定抑制血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK1)表达的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,观察SGK1基因沉默对人乳腺癌细胞生物学特性的影响. 方法 构建针对SGK1的shRNA干扰质粒pGen -3-siSGK1和阴性对照质粒pGen-3-control.转染人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,经G418筛选得到稳定抑制SGK1表达的乳腺癌细胞模型；实时定量PCR、免疫荧光以及Western blotting检测shRNA干扰组、阴性对照组及未转染组细胞中SGK1的表达；四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞体外生长能力；体外浸润实验、细胞迁移实验检测各组癌细胞的侵袭和转移.结果 成功构建针对SGK1基因的shRNA干扰质粒,建立了稳定抑制SGK1表达的乳腺癌细胞模型；与阴性对照组和未转染组相比,肿瘤细胞中SGK1的表达水平显著降低(P＜0.01)；SGK1基因沉默后,人乳腺癌细胞的生长能力、浸润和迁移能力均明显降低(P＜0.05).实验中还发现抑制SGK1基因表达之后,β-catenin的含量也出现明显下降.结论 抑制SGK1基因的表达可以显著抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长,并降低其侵袭转移的能力,其中β-catenin参与了SGK1基因的抑制功能.
关键词： 乳腺癌 血清和糖皮质激素调节蛋白激酶 β-catenin RNA干扰 免疫印迹法 -
血清和糖皮质激素调节蛋白激酶对糖尿病视网膜病变的作用及研究进展
血清和糖皮质激素调节蛋白激酶-1(protein kinase regulation of serum and glucocorticoid,SGK1)是一个与丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶等第二信使具有极高同源性的蛋白激酶.它作为多种信号转导通路和细胞磷酸化的级联交汇点,参与离子通道调节、细胞增殖、存活的细胞转导.在糖尿病病人中,高糖诱导SGK1活化,SGK1使得上皮钠离子通道(Epithelial sodium channel,ENaC)的表达增加.近些年来各种研究发现ENaC表达于非上皮组织,且对糖尿病血管病变,尤其是糖尿病视网膜病变的发病将发挥一定的作用.ENaC通过肾素-血管紧张素-醛固酮系统(Renin-angiotensin-aldosterone system,RAAS系统)介导,血管内皮NO生成减少,血管功能障碍;NADPH氧化酶功能障碍,参与病理性血管的生成;在高血糖条件下SGK作用于下游转录调控因子核转录因子κB(Nuclear factorκB,NF-κB),使得其在细胞核中含量增加,上调凋亡基因的表达,周细胞的凋亡增加.
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血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1通过核因子-κB抑制Toll样受体4介导的炎性反应
目的 探讨血清和糖皮质激素调节蛋白激酶(SGK)1在TLR介导的炎性反应中的作用.方法 将小鼠给予腹腔内注射SGK1抑制剂EMD638683 10 mg/kg或不预处理,2h后注射大肠埃希菌脂多糖1 mg/kg,同时设立对照组(只注射PBS或EMD638683),注射脂多糖3、24 h后收取小鼠血清,使用ELISA检测小鼠IL-6、IL-12、TNF-α含量.同时取注射脂多糖后6、24 h的肝、肺组织,OCT包埋,HE染色.分离人PBMC后,使用SGK1或PI3K抑制剂预处理或不预处理,并给予脂多糖刺激,使用ELISA检测细胞因子IL-6、IL-12、TNF-α水平,使用Western印迹法检测细胞IKKα/p、IKBα和核因子-cB p65蛋白的表达.采用单因素方差分析.结果 在脂多糖诱导的小鼠脓毒血症体内实验中,SGK1抑制剂增加了小鼠炎性因子IL-6(t=3.007)、IL-12(t=4.413)、TNF-α(t=5.403)的产生(均P＜0.05),并且在早期(6 h)增加了小鼠重要脏器肝、肺炎性细胞的浸润,晚期(24 h)加重了器官损伤,引起肺泡组织塌陷与肝脏脂肪变性.在人PBMC中,SGK1抑制剂EMD638683增加了脂多糖诱导的炎性因子IL-6(t=18.540)、IL-12(t=16.520)、TNF-α(t=34.880)水平(均P＜0.01),同时抑制了IKKα/β、IKBα和核因子-κBp65的磷酸化.结论 SGK1通过核因子-κB负向调节TLR4介导的炎性反应.
关键词： 血清和糖皮质激素调节蛋白激酶 脓毒症 Toll样受体4 炎症因子 -
SGK在呼吸系统疾病中的研究进展
血清和糖皮质激素调节蛋白激酶(serum and glucocorticoid-inducible kinase, SGK)是一种属于丝氨酸/苏氨酸家族的蛋白激酶，在包括血清和糖皮质激素在内的多种刺激下进行快速的转录。 SGK与糖尿病肾病、高血压、肿瘤等疾病密切相关，在呼吸系统疾病中也起到非常大的作用，如肺动脉血管重建、肺水肿液清除、肺纤维化形成、肺癌发生发展等过程。本文简要介绍其结构构成、调节机制、功能特点等方面，同时描述此蛋白激酶在呼吸系统疾病的病理生理过程中的研究进展。
关键词： 呼吸系统疾病 血清和糖皮质激素调节蛋白激酶 信号转导 -
SGK-1在缺氧诱导小鼠垂体瘤细胞AtT-20增殖、凋亡中的表达及作用探讨
目的 观察血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK-1)在缺氧诱导小鼠垂体瘤细胞AtT-20增殖、凋亡中的表达,并探讨其在这一过程中的作用.方法 将AtT-20细胞随机分为观察组和对照组,观察组分别加入50、100、200 μmol/L CoCl2(模拟缺氧),对照组不处理,采用MTT法检测24、48、72、96 h时细胞增殖的A570值;将200 μmol/L CoCl2加入AtT-20细胞,培养0、24、48、72、96 h时采用流式细胞术测算细胞凋亡率,分别采用半定量PCR法和Western blot法检测SGK-1 mRNA及蛋白.将AtT-20细胞随机分为4组,A、B组转染干扰质粒SGK-1 siRNA,C、D组转染对照质粒siCon,转染24 h后A、C 组加入200 μmol/L CoCl2,B、D组不处理,分别采用MTT法和流式细胞术检测24、48、72、96 h时细胞增殖的A570值及细胞凋亡率.结果 缺氧处理72 h后,观察组随着CoCl2浓度增加及作用时间延长,AtT-20细胞增殖的A570值逐渐降低,与对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05).与0 h时比较,处理24、48 h时细胞凋亡率无明显变化,处理72、96 h时细胞凋亡率增加(P均<0.05);与0 h时比较,处理24、48时AtT-20细胞SGK-1 mRNA及蛋白表达量均增加(P均<0.05),72 h后其表达量无显著变化(P均>0.05).A组缺氧后各时点细胞增殖的A570值均低于其余各组,C组缺氧后72、96 h细胞增殖的A570值高于A组而低于B、C组(P均<0.05).A组缺氧后各时点细胞凋亡率均高于其余各组,C组缺氧后72 h细胞凋亡率低于A组而高于B、C组(P均<0.05).结论 缺氧可抑制AtT-20细胞增殖、促进其凋亡,该过程中SGK-1表达增加可保护细胞免受缺氧导致的损伤.
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联合应用SSH和cDNA表达谱芯片筛选肝星状细胞早期活化的相关基因
目的 利用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)和cDNA表达谱芯片筛选早期活化的肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)和大鼠正常肝脏组织、轻度肝纤维化组织、重度肝纤维化组织中差异表达的基因.方法 从SSH构建的大鼠轻度肝纤维化、重度肝纤维化2个差异cDNA文库中挑选1 000条上调显著的基因,与正常大鼠4 136条基因克隆制作成一张芯片,筛选早期活化的肝星状细胞相关基因.结果 获得与HSC早期活化相关的上调基因有202条,下调基因有80条,其中血清和糖皮质激素调节蛋白激酶(serum and glucocorticoid sensitive kinase,SGK)在正常大鼠基因克隆和2周及8周SSH上调差异基因中均呈上调信号.结论 联合应用SSH和cDNA表达谱芯片是筛选和鉴定不同样本中差异表达基因的快速、经济和有效的方法;SGK可能作为多种细胞信号传导通路和细胞磷酸化级联反应的一个功能性交汇点,参与了肝星状细胞的早期活化和信号传导.
