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小檗碱调控IR-HepG2细胞miR-29a-3p及胰岛素受体信号通路的作用机制研究
目的:探讨小檗碱(BBR)对胰岛素抵抗的HepG2细胞(IR-HepG2)中miR-29a-3p和胰岛素受体信号通路的调控机制.方法:建立胰岛素(100nm)诱导的IR-HepG2模型.生物信息学算法预测miR-29a-3p靶基因.通过RT-PCR检测miR-29a-3p和靶基因的mRNA表达.构建荧光素酶报告质粒,分析荧光素酶活性.将miR-29a-3p模拟物和抑制剂通过lipofectamine2000转染进IR-HepG2细胞.免疫印迹法检测胰岛素受体信号通路的各基因蛋白表达.结果:生物信息学提示IRS1是miR-29a-3p的靶基因.与对照组比较,模型组miR-29a-3p表达显著升高(P＜0.05),IRS1 mRNA表达水平显著降低(P＜0.01);BBR组抑制了这种变化(P＜0.05,P＜0.01).与阴性对照(NC)组比较,miR-29a-3p模拟物可显著抑制与IRS1 3'-UTR融合的荧光素酶报告基因的活性(P＜0.01).WB结果显示,miR-29a-3p下调IRS1蛋白表达,而miR-29a-3p则促进IRS1蛋白的表达.miR-29a-3p模拟物转染组IRS1mRNA表达下调,miR-29a-3p抑制剂转染组表达相反.BBR能够上调转染miR-29a-3p模拟物或抑制剂的IR-HepG2细胞中的IRS1 mRNA表达.在IR-HepG2细胞模型中,转染miR-29a-3p模拟物组的IRS1,pIRS1ser307、Akt、pAktser473和PDK1的蛋白表达均显著降低(P＜0.01),转染miR-29a-3p抑制剂后这些蛋白表达显著增加(P＜0.01).BBR治疗后,上述蛋白表达均显著增加.结论:miR-29a-3p在IR-HepG2细胞中能调控胰岛素受体信号传导通路,BBR能下调或维持miR-29a-3p水平,增加IRS1 mRNA和蛋白表达,调节胰岛素受体信号通路蛋白的表达.
关键词： 小檗碱 miRNA miR-29a-3p IRS1 胰岛素受体信号通路 -
miR-29 a-3 p调控COL1 A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程研究
目的 研究miR-29a-3p是否调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程.方法 前瞻性选取人喉癌Hep-2细胞,分为对照组、实验组1(miR-29a-3p过表达组)、实验组2(miR-29a-3p抑制组),对照组未进行任何处理,实验组1转染miR-29a-3p模拟剂,实验组2转染miR-29a-3p抑制剂.通过qRT-PCR法检测三组细胞miR-29a-3p及COL1A1基因表达,通过western blotting法检测三组细胞COL1A1蛋白表达.采用双荧光素酶报告基因分析法验证COL1A1是否是miR-29a-3p靶基因.采用MTT比色法检测三组细胞增殖能力,采用流式细胞术检测三组细胞凋亡情况.结果 miR-29a-3p模拟剂转染Hep-2细胞后miR-29a-3p表达升高,COL1A1表达降低;miR-29a-3p抑制剂转染Hep-2细胞后miR-29a-3p表达降低,COL1A1表达升高.双荧光素酶报告基因分析法证实COL1A1是miR-29a-3p靶基因.miR-29a-3p过表达能抑制Hep-2细胞增殖,增加细胞凋亡;miR-29a-3p抑制表达能增强Hep-2细胞增殖,抑制细胞凋亡.结论 miR-29a-3p调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程.
关键词： 喉癌 Hep-2细胞 miR-29a-3p COL1A1增殖凋亡 -
肺结核患者医院感染后外周血miR-29a-3p水平与巨噬细胞因子的相关性研究
目的 研究肺结核合并医院感染患者外周血miR-29a-3p水平与巨噬细胞相关因子的相关性.方法 将201 6年1月-2017年1月于医院结核内科住院的发生医院感染的32例LTBI患者和29例TBI患者纳入研究,将患者分为LTBI组和TBI组.抽取患者外周血提取总RNA反转录后进行qPCR反应检测miR-29a-3p表达水平.采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法对两组患者血清中白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介索-10(Interleukin-10,IL-10)及肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor,TNF-a)水平进行检测,Pearson法研究相关性.结果 LITB组患者外周血miR-29a-3p表达量(1.56±0.48)高于TBI患者表达水平(0.77±0.45)(t=5.599,P＜0.001);LITB组患者IL-6及TNF-α水平低于TBI组患者,IL-10水平高于TBI组患者(P＜0.05);Pearson相关性分析表明,LITB组与TBI组患者外周血中miR-29a-3p与IL-6及TNF-α均呈负相关关系,与IL-10呈正相关关系(P＜0.05).结论 miR-29a-3p在结核病发病具有重要作用,可能参与巨噬细胞抗结核免疫反应.
关键词： 肺结核 医院感染 miR-29a-3p 巨噬细胞 细胞因子 -
MiR-29a-3p通过调控MITOL参与带状疱疹后遗神经痛发生研究
[目的]研究miR-29a-3p是否调控MITOL参与带状疱疹后遗神经痛(PHN)的发生.方法 SD大鼠20只,左趾璞注射水痘带状疱疹病毒建立PHN动物模型.采用qRT-PCR法检测不同时间段大鼠脊髓背角组织miR-29a-3p及MITOL基因表达,采用Western blotting法检测不同时间段大鼠脊髓背角组织MITOL蛋白表达,采用双荧光素酶报告基因分析法,验证MITOL是否是miR-29a-3p靶基因.结果 与建模前比较,建模3、7、14、21 d后,大鼠脊髓背角组织miR-29a-3p降低,MITOL基因及蛋白表达升高;双荧光素酶报告基因分析法证实,MITOL是miR-29a-3p靶基因.结论 miR-29a-3p通过调控MITOL参与PHN的发生.
关键词： miR-29a-3p MITOL 带状疱疹后遗神经痛
