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痹肿消汤拆方对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜ERK1/2、ERK5表达及其转导通路的影响
目的:检测痹肿消汤按湿、热、毒、瘀拆方对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、细胞外信号调节激酶5(ERK5)表达的影响,从湿、热、毒、瘀探讨类风湿性关节炎(RA)的作用机制.方法:采用皮下注射牛Ⅱ型胶原蛋白与完全弗氏佐剂诱导SD大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)模型,并设立正常组.采用免疫印迹法( Western blot)同步检测正常组、模型组、痹肿消汤组、清热解毒组(拆方Ⅰ组)、祛湿组(拆方Ⅱ组)、活血组(拆方Ⅲ组)大鼠在不同时间点滑膜ERK1/2、ERK5的磷酸化水平,运用灰度扫描软件对结果进行半定量分析.结果:造模14d后,模型组滑膜ERK1/2、ERK5表达高于正常组(P＜0.05).随着免疫时间延长,模型组ERK1/2、ERK5表达于21、28d呈递增趋势(P＜0.05),28d达到高.4用药组治疗后,ERK1/2、ERK5的磷酸化表达水平均低于同期模型组(P＜0.05).在21、28d水平,表达呈递减趋势(P＜0.05).痹肿消汤组的ERK1/2、ERK5各时间点的表达水平比拆方3组更低,拆方Ⅱ组的ERK1/2表达的下降幅度比拆方Ⅰ组、拆方Ⅲ组更明显(P＜0.05).而拆方Ⅰ组的ERK5表达的下降幅度比拆方Ⅱ组、拆方Ⅲ组更显著(P＜0.05).结论:拆方各组可有效地抑制ERK1/2、ERK5转导通路的活化,达到阻抑关节滑膜增殖、骨质侵蚀的作用.但清热解毒、祛湿通络、活血祛瘀各治法对上述通路调节作用优势有不同.
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细胞外信号调节激酶5在前列腺癌中的研究进展
前列腺癌是男性发病率高的恶性肿瘤，病死率较高，关于前列腺癌的发病机制尚未完全明确。细胞外信号调节激酶5是丝裂原活化蛋白激酶家族中研究相对较少的一条通路，但其已经被证明在癌症的发病中起着重要的作用，其对前列腺癌的生长发生、病理分期、预后以及转移侵袭都有影响。本文就细胞外信号调节激酶5在前列腺癌的研究进展及其与前列腺癌的关系作一综述。
关键词： 前列腺肿瘤 细胞外信号调节激酶5 癌基因 -
ERK5信号通路介导流体剪切力对 MC3 T3-E1 成骨细胞MMPs、TIMPs表达的影响
目的 观察流体剪切力( fluid shear stress, FSS)作用下, MC3T3-E1 成骨细胞中细胞基质金属蛋白酶( matrix metalloproteinases,MMPs)和基质金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)的表达情况,并探讨 ERK5 信号通路在其中的作用.方法 对MC3T3-E1 成骨细胞进行不同的处理,分为正常组、XMD8-92 组、FSS组和FSS+XMD8-92组,对FSS组施加12 dyn /cm2流体剪切力,采用蛋白免疫印迹法分别检测P-ERK5、ERK5、 MMPs和TIMPs 蛋白水平的变化.结果 生理强度(12 dyn/cm2)的流体剪切力作用于MC3T3-E1成骨细胞45 min后能显著上调MMPs的表达,下调TIMPs的表达,但此效应可被 ERK5 高选择性抑制剂 XMD8-92 阻断.结论 ERK5 信号通路调控流体剪切力对成骨细胞MMPs、TIMPs蛋白的表达.
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不同胎龄胎儿皮肤和增生性瘢痕中细胞外信号调节激酶5及MAPKK基因表达的变化
目的探讨细胞外信号调节激酶5(extracellular-signal regulated protem kinase 5,ERK5)及其上游信号分子MAPKK(MEK5)在不同胎龄的胎儿皮肤和不同形成时期的增生性瘢痕中的基因表达变化规律.方法用病理学技术检测不同发育时期的皮肤和增生性瘢痕的结构特征后,提取18例不同胎龄(13～32周)的胎儿皮肤、6例少儿皮肤、16例不同发生时期的增生性瘢痕(4个月～11年)和8例正常皮肤组织的总RNA后,用RT-PCR方法检测ERK5和MEK5在不同组织中的表达变化特征.结果随着胎龄的增加,胎儿皮肤中ERK5和MEK5基因表达水平逐渐降低;而在少儿皮肤中,基因的转录本含量明显减少(P＜0.05).在正常皮肤和不同形成时期的增生性瘢痕中,MEK5基因表达水平相近,而ERK5基因在正常皮肤中的表达水平较低,在增殖期和成熟期瘢痕中表达水平明显增强(P＜0.01).结论在早期妊娠胎儿皮肤中ERK5和MEK5基因的高表达可能是胎儿皮肤创面无瘢痕愈合的机制之一,而增生性瘢痕发生和形成也可能与这两种基因表达增强有关.
关键词： 细胞外信号调节激酶5 胎儿皮肤 无瘢痕愈合 增生性瘢痕 -
MAPK家族ERK5信号通路的研究进展
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是生物体内重要的信号转导系统之一,其亚族主要包括细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和细胞外信号调节激酶5(ERK5).近年来研究发现,ERK5对细胞的增殖、分化及调节细胞功能有重要作用,并参与一些疾病的发生和发展,故阐明ERK5通路的作用机制,将为一些疾病的诊治提供新的思路与方法.现重点对ERK5的蛋白结构、生物学功能以及与疾病的关系进行综述.
关键词： 细胞外信号调节激酶5 信号通路 作用机制 -
ERK5和MMP-9在骨肉瘤中的表达及其临床意义
目的:探讨细胞外信号调节激酶5(extracellular signal-regulated kinase 5,ERK5)蛋白和基质金属蛋白酶-9(matrix metallo proteinase-9,MMP-9)在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义.方法:选取71例骨肉瘤组织和40例正常骨组织,采用免疫组织化学法检测ERK5和MMP-9的表达,并分析ERK5和MMP-9的表达与骨肉瘤患者临床病理特征及预后之间的关系.结果:骨肉瘤组织中ERK5和MMP-9阳性表达率分别为85.9%(61/71)、74.65%(53/71),均明显高于正常骨组织中阳性表达率12.5%(5/40)、10.0%(4/40),差异均具有统计学意义(均P<0.05).ERK5和MMP-9的阳性表达与Enneking分期和转移相关(均P<0.05).Ka?plan-Meier生存分析显示在骨肉瘤组织中ERK5、MMP-9的阳性表达组患者生存时间均短于阴性表达组(均P<0.05).单因素Cox回归分析发现,肿瘤大小、Enneking分期、转移、ERK5和MMP-9阳性表达与患者总生存时间相关(均P<0.05);多因素分析证实Enneking分期、转移、ERK5和MMP-9蛋白的阳性表达可作为骨肉瘤患者独立的预后因子(均P<0.05).结论:ERK5和MMP-9在骨肉瘤组织中高表达,与骨肉瘤的病理特征及预后相关;二者可能在骨肉瘤发生发展的过程中起着重要作用.
关键词： 骨肉瘤 细胞外信号调节激酶5 基质金属蛋白酶-9 免疫组织化学 预后 -
痹肿消汤干预胶原诱导关节炎模型大鼠关节滑膜组织细胞外信号调节激酶1/2及细胞外信号调节激酶5的表达
背景:滑膜细胞信号转导异常是类风湿性关节炎的重要发病机制之一.中药复方痹肿消汤治疗类风湿性关节炎具有较好的临床疗效,但在细胞信号转导水平探讨痹肿消汤治疗类风湿性关节炎的作用机制是十分必要的.目的:观察中药复方痹肿消汤对胶原诱导关节炎模型大鼠滑膜细胞外信号调节激酶1/2,5表达的影响.方法:SD大鼠45只随机数字表法分为对照组、模型组、痹肿消汤组.胶原诱导关节炎模型大鼠,用痹肿消汤药液3.0～ 3.5 mL灌胃,1次/d,连续14 d.检测造模后第14,21,28天大鼠滑膜细胞外信号调节激酶1/2,5的磷酸化水平.结果与结论:造模后,大鼠滑膜细胞外信号调节激酶1/2,5的磷酸化表达随时间而增加(P < 0.05).痹肿消汤治疗后,细胞外信号调节激酶1/2,5磷酸化表达水平则明显下降(P < 0.05).提示痹肿消汤能抑制细胞外信号调节激酶1/2,5蛋白激酶的激活,从而抑制细胞外信号调节激酶1/2,5信号转导通路的活化,这可能是其阻抑类风湿性关节炎滑膜异常增殖、关节骨质侵蚀的重要机制之一.
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15-羟廿碳四烯酸对脑动脉平滑肌细胞ERK信号传导通路影响
目的 探讨缺氧时15-羟廿碳四烯酸(15-HETE)对细胞外信号调节激酶(ERK)1/2及ERK5通路的影响以及ERK1/2及ERK5通路在缺血缺氧性脑动脉收缩中的作用.方法 将大鼠脑动脉平滑肌细胞随机分为正常对照组、缺氧组、缺氧+去甲二氢愈创木酸(NDGA)组、缺氧+NDGA+15-HETE组、缺氧+NDGA+15-HETE+ERK抑制剂组、缺氧+ERK抑制剂组.将细胞分别应用Western blot技术和Real-time PCR技术检测大鼠脑动脉平滑肌细胞中p-ERK、ERK、电压门控性钾离子通道(Kv)2.1蛋白及mRNA的表达.结果 随着15-HETE作用时间延长,正常对照组中15-HETE活化ERK1/2以及ERK5作用降低;随着15-HETE浓度的升高,正常对照组中ERK1/2和ERK5的活性增加,差异均有统计学意义(P<0.05).随着15-HETE增多,p-ERK1/2表达增多,Kv2.1通道表达受抑制;加入ERK1/2抑制剂后,缺氧+NDGA+15-HETE+ERK1/2抑制剂组与缺氧+NDGA+15-HETE组相比较、缺氧+ERK1/2抑制剂组与缺氧组相比较,ERK1/2活性减弱的同时,Kv2.1通道表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05).随着15-HETE的产生增多,ERK5表达减少,Kv2.1通道表达降低.缺氧+NDGA+15-HETE+ERK5抑制剂组和缺氧+ERK5抑制剂组,分别与缺氧+NDGA+15-HETE组和缺氧组相比较,ERK5活性明显受抑制,Kv2.1通道表达增多,差异均有统计学意义(P<0.05).加入ERK抑制剂后,ERK mRNA表达明显被抑制,缺氧+NDGA+15-HETE+ERK抑制剂组与缺氧+NDGA+15-HETE组相比较、缺氧+ERK抑制剂组与缺氧组比较,Kv2.1 mR-NA均上调,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 在缺氧条件下,脑动脉平滑肌细胞中15-HETE可能是通过上调ERK1/2信号传导通路的表达而抑制Kv2.1通道的表达,终导致脑动脉收缩.
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β-葡聚糖对巨噬细胞的增殖及ERK5通路的影响
目的: 探讨β-葡聚糖对于小鼠巨噬细胞RAW264.7的生长增殖和诱导细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,以及细胞外信号调节激酶5(ERK5)信号通路在这一过程中的表达.方法: 以不同浓度(12.5,25,50,100,200和400 μg/ml)的β-葡聚糖刺激体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞后,用四唑盐比色实验(MTT)检测细胞的生长增殖; 瑞氏染色法检测RAW264.7 细胞的吞噬活性;用ELISA方法测定培养上清液中TNF-α的表达量;蛋白质印迹法检测ERK5及磷酸化ERK5 (p-ERK5)表达情况.结果: MTT实验结果显示不同浓度的β-葡聚糖对细胞的增殖有不同程度的促进作用,其中以100 μg/ml浓度时促进作用大,大剂量时则对细胞增殖产生抑制作用.在浓度为100 μg/ml时,TNF-α的表达量达到峰值,ERK5和p-ERK5被活化.结论: 一定浓度的葡聚糖对小鼠巨噬细胞的增殖和吞噬有明显的促进作用,细胞外信号调节激酶5信号通路参与了这一过程.
关键词： β-葡聚糖 肿瘤坏死因子-α 巨噬细胞 细胞外信号调节激酶5 -
周期性流体剪切力对成骨细胞增殖影响机制的实验研究
[目的]体外观察周期性流体剪切力(cFSS)作用下成骨细胞增殖情况的变化及细胞外信号调节激酶5( ERK5)在这一过程中的作用,探讨周期性流体剪切力对成骨细胞增殖的影响及其机制.[方法]体外运用5-溴-2'-脱氧尿苷( BrdU)标记成骨细胞(MC3T3 - E1)核,随机分为A、B、C、D共4组,A组为空白对照组,B和C组MC3T3- E1细胞通过流体剪切力加载装置施加周期性剪切力,C、D组MC3T3- E1细胞加入ERK5特异性阻断剂BIX02189,运用免疫荧光化学技术及IPP图像分析软件对各组成骨细胞增殖情况进行分析.[结果]A组细胞处于正常增殖状态,B组细胞增殖的阳性率与A组比较提高了200％ (P ＜0.05),ERK5活化量(累积光密度值)增加了30％ (P ＜0.05);C组细胞增殖情况比A组提高了40％ (P ＜0.05),而ERK5的活化量却无显著差异(P＞0.05);D组阳性率与A组比较降低了70％ (P ＜0.05),而ERK5的活化量降低了30％ (P ＜0.05).[结论]周期性流体剪切力促进成骨细胞增殖;ERK5在介导周期性流体剪切力促进成骨细胞增殖方面起着重要的作用.
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1,25二羟维生素D3通过ERK5通路调节破骨细胞分化
[目的]探讨体外1,25二羟维生素D3(1,25-(OH)2-VitD3)通过细胞外信号调节激酶5(extracellilarregulated kinase 5,ERK5)信号通路在诱导破骨细胞分化中的作用.[方法]对骨髓来源巨噬细胞(bone marrow macrophages,BMMs)进行不同浓度(0,10-9,10-8,10-7mol/L)1,25-(OH)2-VitD3孵育,明确1,25-(OH)2-VitD3能否激活ERK5信号通路,并筛选出合适浓度的1,25-(OH)2-VitD3激活ERK5.调配不同工作液,分为正常细胞对照组、XMD8-92组、1,25-(OH)2-VitD3组及1,25-(OH)2-VitD3+XMD8-92组,分别孵育BMMs细胞6d.采用TRAP染色检测4组破骨细胞的分化水平;Western Blot分别检测p-ERK5、ERK5等蛋白水平变化;RT-PCR检测NFATc1、CAMKⅡmRNA相对表达量.[结果]10-8mol/L的1,25-(OH)2-VitD3可显著激活ERK5磷酸化(P＜0.05)并通过ERK5通路促进破骨细胞分化(P＜0.01),但此效应可被ERK5高选择性抑制剂XMD8-92抑制(P＜0.05).ERK5激活可显著上调破骨细胞CAMKⅡ、NFATc1 mRNA的表达(P＜0.01);而XMD8-92可显著抑制CAMKⅡ mRNA的表达(P＜0.01),但对NFATc1 mRNA无显著影响(P＞0.05).[结论]体外低浓度(10-8mol/L)的1,25-(OH)2-VitD3通过激活ERK5信号通路促进破骨细胞分化,CAMKⅡ是破骨细胞中ERK5信号下游通路的重要靶点.
关键词： 1 25二羟维生素D3 细胞外信号调节激酶5 钙调蛋白依赖性蛋白激酶 破骨细胞 分化 -
阿戈美拉汀对创伤后应激障碍样大鼠记忆损害及海马ERK5表达的影响
目的 探讨阿戈美拉汀( agomelatine)对创伤后应激障碍( post-traumatic stress disorder, PTSD)样大鼠记忆损害及海马细胞外信号调节激酶5( extracellular signal-regulated kinase 5,ERK5)表达的影响.方法 将48只SD大鼠按照随机数字表法分为正常对照组( SHAM组)、创伤后应激障碍组(PTSD组)、阿戈美拉汀组(AGO组)和生理盐水组( PC组),每组12只.采用国际认定的单次延长应激(single prolonged stress,SPS)刺激建立大鼠PTSD模型,AGO组和PC组在造模8 h内通过灌胃给予等量阿戈美拉汀和生理盐水,持续14 d,通过旷场实验和Morris水迷宫实验观察大鼠的情绪唤醒水平和学习记忆能力改变,Western blot和qRT-PCR检测大鼠海马ERK5蛋白和ERK5 mRNA表达水平.结果 (1)旷场实验结果显示,与 SHAM 组[(38. 58±5. 76)次]比较,PTSD 组大鼠跨格次数[(29. 75±3. 75)次]减少(P<0. 01),AGO组[(41. 00±4. 49)次]相较于PC组[(28. 58±2. 91)次]跨格次数增加(P<0. 01). (2)Morris水迷宫结果发现,在定位航行实验阶段,与SHAM比较,PTSD组和PC组逃避潜伏期时间增加(P<0. 01),AGO组相较于PC组逃避潜伏期时间缩短(P<0. 01);空间探索实验阶段,与SHAM[(2. 12±0. 51)次]比较,PTSD组和PC组大鼠穿越次数[(1. 03±0. 43)次,(1. 23± 0. 59)次;均P<0. 01]减少,AGO组[(2. 75±0. 72)次]较PC组增加(P<0. 01);穿越潜伏期与SHAM [(12. 14±2. 53)s]比较,PTSD组[(27. 33±6. 54)s]和PC组[(29. 67±9. 72)s]增加(P<0. 01),AGO组[(14. 36±4. 27)s]较PC组减少(P<0. 01). (3)大鼠海马组织的Western blot及qRT-PCR结果显示,与SHAM组比较,PTSD组的ERK5及ERK5 mRNA表达水平上调(P<0. 01),与PC组比较,AGO组的ERK5及ERK5 mRNA表达水平上调(P<0. 01).结论 阿戈美拉汀可有效改善PTSD大鼠的学习记忆能力,可能与上调海马组织ERK5蛋白表达有关.
关键词： 阿戈美拉汀 创伤后应激障碍 细胞外信号调节激酶5 大鼠 -
细胞外信号调节激酶5在结肠癌组织的表达及意义
目的 观察细胞外信号调节激酶5(ERK5)在结肠癌及癌旁正常组织中的表达并分析其与临床相关病理参数间的关系.方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(SP)技术及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测106例结肠癌组织及距离病灶10 cm处的正常结肠黏膜组织中ERK5及其mRNA的表达,并且分析ERK5的表达与临床相关病理参数间的关系.结果 106例结肠癌组织中ERK5的阳性表达率及其mRNA的表达水平(75.47％;1.44±0.01)均高于癌旁正常组织(11.32％;0.54 ±0.02).结肠癌组织中ERK5的表达水平与病灶侵袭深度、分化程度、临床分期及是否有淋巴结转移有关.ERK5阳性表达患者的24个月生存率(22.20％)与阴性表达患者(43.67％)比较降低.结论 ERK5的阳性表达与结肠癌的发生有关.
关键词： 结肠癌 细胞外信号调节激酶5 免疫组织化学 -
温阳振衰颗粒对阿霉素诱导慢性心衰兔心肌细胞外信号调节激酶5表达的影响
目的 观察温阳振衰颗粒对阿霉素诱导慢性心衰模型兔心肌细胞外信号调节激酶5表达的影响.方法 健康新西兰兔60只,随机抽取15只为正常对照组,余45只兔耳缘静脉注射阿霉素4周后,先从中随机抽取13只为模型4周组,余下实验兔按心功能分层,随机分组,再随机分为模型8周组及各治疗组,各组用对应药物灌胃,连续4周.分别检测4、8周末兔心肌细胞外信号调节激酶5 (ERK5)的总蛋白及蛋白磷酸化(P-ERK5)水平.结果 阿霉素造模后,模型4、8周组心肌P-ERK5水平均下调,两者较正常对照组差异有统计学意义(P＜0.05),且模型8周组较模型4周组下调更为明显(P＜0.05)；各组经药物干预4周后心肌P-ERK5水平较正常对照组仍明显下调(P＜0.05),但均高于模型8周组(P＜0.05),其中以阳性对照组和温阳高剂量组心肌P-ERK5水平升高为明显(P＜0.05)；各组心肌ERK5水平相比差异无统计学意义.结论 温阳振衰颗粒能上调ERK5蛋白磷酸化的水平,从而激活ERK5信号转导通路,其中以高剂量温阳振衰颗粒为明显,这可能是其调控慢性心衰时心室重构和心肌细胞凋亡的重要机制之一.
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ERK5在胃腺癌组织中的表达及临床意义
目的 检测和分析细胞外信号调节激酶5(ERK5)在人胃腺癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中蛋白和mRNA表达情况,探讨ERK5表达的临床意义.方法 选取126例胃腺癌组织(胃腺癌组)和90例癌旁正常组织(正常组),采用免疫组织化学法检测两组ERK5蛋白表达,RT-PCR法检测ERK5 mRNA相对表达量,并分析ERK5蛋白、mRNA表达与胃腺癌临床病理参数的相关性.结果 胃腺癌组及正常组ERK5蛋白表达阳性率及mRNA的相对表达量分别为92.8％、72.2％和(0.82±0.14)、(0.61±0.03),两组ERK5蛋白和mRNA表达差异有统计学意义(p＜0.05).不同的病理分级分期的胃腺癌ERK5蛋白和mRNA表达差异有统计学意义(P＜0.05),而不同的性别、年龄的胃腺癌ERK5蛋白、mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).Sperman等级相关分析法分析表明,ERK5蛋白和mRNA表达呈正相关(r=0.835,P＜0.01).结论 胃腺癌组织中ERK5蛋白较癌旁正常组织高表达;分期越高分化程度越低及发生淋巴结转移的胃腺癌组织中ERK5的表达越高;提示ERK5和胃腺癌的恶性程度和转移密切相关.
关键词： 胃腺癌 细胞外信号调节激酶5 蛋白和mRNA表达 -
ER-α-ERK5信号通路介导流体剪切力促进MC3T3-E1细胞增殖
目的:研究雌激素受体α(ER-α)在流体剪切力促进细胞外信号调节激酶5(ERK5)活化以及ER-α-ERK信号通路在成骨细胞增殖中的具体分子机制.方法:给予成骨MC3T3-E1细胞孵育特异性ER-α-抑制剂MPP(methyl-piperidino-pyrazole,1μmol/L),孵育高选择性ERK5活性抑制剂XMD8-92(5 μmol/L),和/或加载12 dyn/cm2流体剪切力处理.采用MTT实验检测成骨细胞的增殖活性,采用蛋白免疫印记实验检测ER-α、P-ERK5、ERK5、CyclinD1(细胞周期蛋白)和CDK4(细胞周期蛋白依赖性激酶)蛋白的表达水平.结果:生理强度(12 dyn/cm2)的流体剪切力作用于成骨MC3T3-E1细胞60 min后能显著促进成骨细胞增殖,促进CyclinD1和CDK4的表达;同时ER-α和P-ERK5的表达显著增加.成骨细胞孵育MPP抑制ER-α后,P-ERK5的表达显著下降,CyclinD1和CDK4表达也显著降低.孵育XMD8-92抑制ERK5活性后,流体剪切力促进成骨细胞中CyclinD1和CDK4表达水平显著下降.结论:流体剪切力通过ER-α-ERK5信号通路上调CyclinD1和CDK4的表达水平,终导致成骨MC3T3-E1细胞增殖.
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神经调节素1β对脑缺血再灌注损伤ERK5信号通路的调节机制研究
目的 探讨神经调节素1β(NRGlβ)对脑缺血再灌注损伤后细胞外信号调节激酶5(ERK5)信号通路的调节机制. 方法 Wistar雄性大鼠50只按照随机数字表法分为假手术组、模型组、治疗组、抑制剂组、抑制剂+治疗组,每组10只.应用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,经颈内动脉注射5 μL(2 μg/kg)NRG1β干预治疗,抑制剂BIX02189于缺血前经颈内动脉注入.采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评价大鼠神经功能,采用TUNEL法检测神经细胞凋亡,采用免疫组化染色和Western blotting检测缺血脑组织磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶激酶5(MEKK5)、ERK5、肌细胞增强因子2C(MEF2C)表达. 结果 模型组大鼠表现出神经功能障碍,神经细胞凋亡增多,pMEKK5、pERK5、pMEF2C表达代偿性增强,较假手术组差异均有统计学意义(P＜0.05).治疗组大鼠pMEKK5、pERK5、pMEF2C表达进一步增强,神经细胞凋亡明显减少,神经功能改善,与模型组和抑制剂+治疗组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).抑制剂组细胞凋亡增多,pMEKK5、pERK5、pMEF2C蛋白表达显著下降,与模型组和抑制剂+治疗组比较差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 NRG1β可以通过激活MEKK5-ERK5-MEF2C信号通路,进一步上调pMEKK5、pERK5、pMEF2C表达而抑制脑缺血再灌注损伤引起的炎症反应以及神经细胞凋亡,从而发挥神经保护作用.
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人肝癌多药耐药细胞中ERK5的表达
目的 检测人肝癌多药耐药细胞(hepG2/ADM和BEL-7402/5-FU)及亲本细胞(hepG和BEL-7402)中ERK5的表达,探讨其对肝癌细胞多药耐药的影响.方法 MTT法测定人肝癌多药耐药细胞株多种化疗药物的交叉耐药性,实时荧光定量PCR检测ERK5在人肝癌多药耐药细胞及亲本细胞中mRNA水平的表达,western-blotting检测ERK5蛋白水平的表达.结果 hepG2/ADM对ADM、5-FU 、CDDP的耐药指数分别为12.34、5.74、3.81;BEL-7402/ 5-FU对5-FU、VCR、OHP、MTX和ADM的耐药指数分别为15.32、10.08、5.85、6.74和3.26.与亲本细胞相比较,在hepG2/ADM细胞中ERK5 mRNA和蛋白表达均升高,而在BEL-7402/5-FU细胞中ERK5 mRNA表达降低,ERK5蛋白表达升高.结论 ERK5的表达与人肝癌多药耐药的发生密切相关,为逆转治疗肝癌细胞多药耐药研究提供了新思路.
关键词： 肝癌 多药耐药 细胞外信号调节激酶5 -
木犀草素对肝星状细胞迁移和增殖的影响
目的:研究木犀草素对肝星状细胞迁移的影响.方法:体外培养肝星状T6(HSC-T6)细胞,细胞计数Kit8(CCK-8)法检测0、10、20、40 μmol/L木犀草素对HSC-T6细胞增殖的影响;通过划痕实验、Transwell实验观察0、10、20、40 μmol/L木犀草素对HSC-T6细胞迁移能力的影响;蛋白印迹法检测木犀草素对细胞外信号调节激酶(ERK)5蛋白磷酸化水平的影响.结果:20、40 μnol/L木犀草素能明显抑制HSC-T6细胞的增殖(P＜0.05);10、20、40 μmol/L木犀草素能明显抑制HSC-T6细胞划痕的修复(P＜0.05);10、20、40 μmol/L木犀草素能明显抑制HSC-T6细胞穿膜(P＜0.05);10、20、40 μmol/L木犀草素能明显抑制细胞中由血清诱导的去磷酸化(p)-ERK5表达(P＜0.05).结论:木犀草素呈浓度依赖性抑制HSC-T6细胞的增殖和迁移,其机制可能与抑制ERK5蛋白磷酸化水平有关.
关键词： 木犀草素 肝星状细胞 迁移 细胞外信号调节激酶5 -
ERK5信号通路参与BMP9诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞的分化
目的:研究细胞外信号调节激酶5(extracellular signal-regulated kinase 5,ERK5)信号通路在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化中的作用.方法:用AdBMP9和AdGFP转染C3H10T1/2细胞,流式细胞术检测转染效率,Westem blot检测磷酸化ERK5 (phosphorylation ERK5,p-ERK5)和ERK5的表达水平,免疫荧光检测p-ERK5在细胞内的表达位置;ERK5特异性抑制剂BIX02189预处理细胞再经AdBMP9诱导,Western blot检测p-ERK5和ERK5表达水平,RT-qPCR检测心肌特异性基因肌细胞增强因子(myocyte enhancer factor,MEF)2C、GATA结合蛋白4(GATA binding protein 4,GATA4)表达,Western blot检测心肌特异性蛋白缝隙连接蛋白43 (connexin 43,CX43)、心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)表达.结果:AdGFP与AdBMP9的转染效率达50％左右,经AdBMP9诱导后的细胞p-ERK5表达明显增高(P＜0.01),免疫荧光结果显示BMP9组p-ERK5表达明显增强且主要集中于胞核;15 μmol/L BIX02189可完全抑制p-ERK5的表达(P＜0.01),且明显降低了由AdBMP9诱导的C3H10T1/2细胞GATA4、MEF2C基因与CX43、cTnT蛋白表达(P=0.000).结论:BMP9可以通过激活ERK5信号通路调控C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化.
关键词： 细胞外信号调节激酶5 骨形态发生蛋白9 心肌样细胞 肌细胞增强因子2C
