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经穴注射BMSCs联合中药对糖尿病大鼠缺血后肢毛细血管密度的影响
目的:观察经穴注射骨髓间充质干细胞(BMSCs)联合益气活血中药对糖尿病(DM)大鼠缺血后肢骨骼肌毛细血管密度及小动脉密度的影响.方法:80只SD大鼠按1: 7比例随机分为2组:正常假手术组10只,其余70只一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ, 50.0 mg/kg)制成DM大鼠模型,再等比例随机分为7组,即DM假手术组、DM缺血组、中药组(益气活血中药灌胃)、局部注射组(局部注射BMSCs)、局部注射+中药组(局部注射BMSCs配合益气活血中药灌胃)、穴位注射组(穴位注射BMSCs)、穴位注射+中药组(穴位注射BMSCs配合益气活血中药灌胃),每组10只.局部注射组、局部注射+中药组取缺血组织与正常组织交界处等距离选取5个点为注射部位注射BMSCs,注射量及浓度同穴位注射组.穴位注射:穴取"三阴交""照海""环跳""后三里""阳陵泉",每只大鼠共注射100 μL浓度为1×107/mL的BMSCs,每处注射20 μL.灌胃中药为煎煮浓缩成含生药1.5kg/L的益气活血中药(生黄芪120g、党参120g、炙甘草48g、当归120g、鸡血藤120g、川牛膝48g).非中药组蒸馏水灌胃.应用免疫组织化学SP二步法检测大鼠骨骼肌中α-平滑肌肌动蛋白(α-actin)、血小板内皮细胞黏附分子CD31、血管性血友病因子(vWF)的表达.结果:干预结束后21 d,各组内术侧较健侧后肢α-actin、CD31(除中药组外)表达均有所升高(P＜0.05,P＜0.01);中药组、局部注射组、局部注射+中药组、穴位注射+中药组术侧与健侧比较,vWF表达均降低(P＜0.05, P＜0.01).术侧组间比较,穴位注射+中药组与正常假手术组、DM假手术组、DM缺血组、局部注射组比较,骨骼肌中α-actin表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01);穴位注射组、穴位注射+中药组、局部注射+中药组大鼠后肢骨骼肌CD31表达与正常假手术组、DM假手术组、DM缺血组比较明显升高(P＜0.05,P＜0.01);穴位注射+中药组较中药组和局部注射组CD31表达升高(均P＜0.05);局部注射+中药注射组、穴位注射组、穴位注射+中药组与DM假手术组、DM缺血组比较,vWF表达降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:缺血可促进血管密度相关因子α-actin、CD31表达,但若给予穴位注射BMSCs或益气活血中药、特别是穴位注射BMSCs结合益气活血中药干预可明显促进血管密度相关因子α-actin、CD31的表达,抑制vWF的表达.说明穴位注射BMSCs结合益气活血中药可促进缺血组织血管新生,对改善组织缺血有促进作用.
