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应用ROC曲线评价结核抗体蛋白芯片法对老年结核性胸膜炎的诊断价值
目的 探讨抗结核LAM、16kD和38kD抗体蛋白芯片法对结核性胸膜炎感染的诊断价值.方法 回顾性分析2009年3月~2012年5月解放军309医院收治的49例结核性胸膜炎及77例恶性胸腔积液的老年患者临床资料,采用结核分枝杆菌IgG抗体检测试剂盒(蛋白芯片)检测其抗结核LAM、16kD和38kD抗体,构建单独或3种结核抗体联合应用诊断结核性胸膜炎的ROC曲线,并与胸水涂片抗酸染色试验进行相关比较.结果 LAM、16kD、38kD、联合检测和抗酸染色的敏感性分别为69.39%、24.49%、69.39%、69.39%和22.45%,特异性分别为92.21%、100.00%、100.00%、100.00%和97.40%,诊断准确性分别为83.33%、70.63%、88.10%、88.10%和68.25%.ROC曲线下面积(AUC)分别为0.81、0.62、0.85、0.85和0.60,联合检测结核抗体的诊断效能显著高于胸水涂片抗酸染色试验(P<0.05).结论 联合检测LAM、16kD及38kD结核抗体诊断结核性胸膜炎准确、便捷,有较高的实用价值.
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多肿瘤标志物联合检测在健康体检中的应用
目的 探讨多肿瘤标志物联合检测在健康体检人群中的应用.方法 选取2015年1月~12月上海市嘉定区中心医院体检部进行健康体检者11706人,采用生物芯片阅读仪及多肿瘤标志物检测试剂盒(蛋白芯片-化学发光法),根据试剂说明书检测程序对健康体检者血清12种常见肿瘤标志物(AFP、CEA、CA19-9、CA242、CA125、CA15-3、Ferritin、HGH、PSA、f-PSA、β-HCG、NSE)的水平作定量分析.结果 健康体检者11706人中,共检出444人603项次阳性,男性227人,女性217人,阳性检出率为3.79%;其中27人经影像学、内窥镜和病理学检查确诊为早期或中期肿瘤,肿瘤检出率0.23%.节省检测费用合计人民币4752636元.结论 多肿瘤标志物蛋白芯片检测技术适用于健康体检人群中的肿瘤筛查.
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重组子宫内膜抗原制备及其在蛋白芯片检测中的应用
目的 探索一种纯度高、简便、低成本制备抗子宫内膜抗原的系统和便捷的检测方法. 方法 通过 YK537 大肠杆菌表达系统制备人重组子宫内膜抗原蛋白.获得蛋白制备蛋白芯片,利用蛋白芯片方法和酶联免疫吸附法(ELISA)方法检测 71 例不孕患者抗子宫内膜抗体. 结果 重组子宫内膜蛋白基因序列克隆入表达载体 phoA下游并在大肠杆菌中成功表达.SDS-PAGE和 HPLC的结果显示重组子宫内膜抗原蛋白纯度大于 95%.通过蛋白芯片和 ELISA 检测显示蛋白芯片和传统 ELISA方法的受试者工作特征曲线(ROC曲线)显示结果一致,曲线下面积为0.89 . 结论 新设计的重组子宫内膜抗原蛋白能在大肠杆菌分泌表达系统简便、高效地表达,将获得的新抗原用于蛋白芯片,操作简便,结果可信,有望成为临床检测抗子宫内膜抗体的手段.
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蛋白芯片的研究及其在生物毒素检测方面的应用
随着生物芯片技术的迅猛发展,DNA芯片已被应用于各种已知和未知的核酸序列表达的检测和研究中.虽然DNA芯片的技术已很完善,但这种以核酸为基础的芯片检测只能提供间接的信息.而我们要了解蛋白与蛋白之间,蛋白与DNA之间的相互作用,必须对蛋白质的功能进行更深入的研究.传统方法,如免疫亲和法、液相色谱及电泳分离技术等已成功地用于蛋白质的分析,但在灵敏度、检测速度及通量等方面还很不理想.蛋白芯片的出现轻松地解决了以上问题,它是一种高通量的研究方法,具有较高的灵敏度和准确度[1].我们拟对蛋白芯片的特点、分类、制作、检测及在生物毒素检测方面的应用进行综述.
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蛋白芯片检测牛乳β-乳球蛋白条件的优化
目的 优化蛋白芯片检测β-乳球蛋白(β-Lg)的技术条件.方法 用芯片点样仪将β-乳球蛋白的一种抗体点样于三维基片上,用其另一种抗体作为检测抗体,以Cy3标记的羊抗作为二抗进行检测.以双抗夹心法对β-Lg抗原进行检测.结果 β-Lg单克隆鼠抗66#被确定为点样探针,选择接触式点样进行芯片点样,点样数在42～ 92点之间可出现较好的点样一致性;β-Lg固定探针的浓度选择0.5 mg/mL,其检测抗体的稀释度为1:2000;1％无蛋白封闭液被优选为封闭剂;β-Lg检测下限与生物检测限分别为17.54和55.31 ng/mL.根据β-Lg的S型曲线确定了其线性范围并建立了对β-Lg具有佳决定系数(R2=0.9993)的回归方程与标准曲线.结论 本研究优化了牛乳中β-Lg检测的蛋白芯片检测条件,建立了定量检测牛乳β-Lg的蛋白芯片平台.
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生物蛋白芯片检测仪对600例正常人群TM检测报告分析
生物蛋白芯片对多肿瘤标志物(TM)的检测是近在我国发展起来的高新技术项目,是我国在利用蛋白质组学技术筛选疾病的生物标志分子方面取得了重大进展.是基于生物蛋白芯片技术原理,利用抗原与相应抗体特异性结合,在固相基质上结合多肿瘤标志物抗体,捕捉被检者血清中相应的肿瘤标志物.通过特定的化学反映产生光信号来实现对TM的检测,本方法具有高灵敏高度、高特异性、多指标并列以及具有早期诊断之优点,不仅用于临床对肿瘤的快速准确检测,病情鉴别及疗效动态观察,肿瘤分类、分期、定位.尤其适用于无临床症状人群肿瘤普查更具有价值.而且弥补了形态学.影像学只能对中晚期肿瘤检测的缺陷,另外,由于肿瘤细胞生物学特征的复杂性和多态性,至今无法找到一种肿瘤标志物可断定肿瘤诊断.但是,利用生物蛋白芯片检测系统,采用多肿瘤标志物联合检测可以弥补以上不足.为此,我院年初率先在河北引进了一台生物蛋白芯片检测仪,通过临床实验、检测结果准确可靠.并且对600例正常人群进行了多肿瘤标志物的检测,现将检测结果报告如下.
关键词： 多肿瘤标志物(TM) 蛋白芯片 生物芯片检测仪 -
蛋白芯片技术的研究及临床应用
随着现代科学技术的飞速发展,蛋白质组学研究技术也是日新月异,层出不穷,蛋白芯片的检测技术因具有快速、高效、高通量等特点,已受广泛重视,并逐渐推广到临床.
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应用蛋白芯片技术快速诊断肺结核病的研究
目的 评价结核分枝杆菌蛋白芯片在检测临床标本中结核分枝杆菌抗体的应用价值.方法 应用结核分枝杆菌蛋白芯片检测117例结核病患者的血清标本、103例肺部其他疾病患者和健康人的血清标本,并与痰涂片镜检法相比较.结果 在菌阳肺结核、菌阴肺结核中,结核分枝杆菌抗体芯片检测的阳性率分别是100%(26/26)、49.6%(45/91),在肺部其他疾病患者和健康人中,结核分枝杆菌抗体芯片检测的阴性率是98.1%(101/103).结论 结核分枝杆菌抗体检测蛋白芯片是一种集基因工程技术、芯片技术和免疫学技术的检测一体化的新型结核病快速诊断方法,具有简便、快速、大量、敏感性高和特异性强、检测成本较低的特点,是结核病、尤其是菌阴结核病辅助诊断的有效方法.
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西尼罗热抗体多片段蛋白芯片试剂盒的研制
[目的] 研制西尼罗病毒(WNV)多片段蛋白芯片IgG抗体检测试剂盒.[方法] 构建基于WNV的E蛋白、M蛋白及prM蛋白检测的蛋白芯片,并对芯片的抗原点样浓度、芯片检测的特异性、芯片检测的灵敏度以及芯片检测的可靠性进行测定.并利用ELISA法对研制芯片的检测结果进行对比验证.[结果] 研制芯片的抗原点样适浓度为E蛋白0.05mg/ml、prM蛋白0.04mg/ml、M蛋白0.2mg/ml;其对M蛋白的检测灵敏度达1.5ng/ml.批内重复检测的CV值≤2%;检测结果的准确性和特异性与ELISA法相比基本一致.[结论] 本研究建立的西尼罗病毒多片段蛋白芯片的检测法具有较高的敏感性、特异性和可靠性,可用于西尼罗病毒IgG抗体的检测.
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蛋白芯片技术与口岸卫生检疫
[目的]探讨蛋白芯片技术应用于口岸卫生检疫的前景.[方法]对蛋白芯片原理、制备、技术特点及其新研究进展进行分析,同时结合口岸卫生检疫工作的内容及特点,对蛋白芯片应用于口岸卫生检疫的前景进行探讨.[结果]蛋白芯片具有操作简便、通量高、信息量大等技术特点,有利于"大通关"建设.蛋白芯片技术在出入境人员健康体检及传染病的监测方面应用前景广阔.[结论]蛋白芯片作为一项新技术具有较广的应用前景,在许多领域得到研究应用,口岸卫生检疫应积极引进并开发适用于自身特点的蛋白芯片技术.
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SELDI-TOF MS蛋白芯片技术在卫生检疫中的应用前景
表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术(surface-enhanced laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry SELDI-TOF MS)是随着蛋白质组学的兴起而出现的新技术,是一种基于蛋白质芯片和质谱技术的蛋白质指纹图谱分析平台.SELDI-TOF MS技术是一种操作简单,方便快捷,样本需要量少,敏感性高,特异性强的高通量的研究蛋白组学的方法.为此,就SELDI-TOF MS技术的原理、特点及其在出入境卫生检疫应用前景进行综述.
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蛋白芯片技术在卫生检疫中的应用前景
阐述了蛋白芯片技术基本原理、制备及分析过程、技术特点,应用领域存在的问题.结合卫生检疫工作的内容和特点,对蛋白芯片技术应用于出入境人员传染病监测方面进行探讨.由于出入境人群具有复杂多样、流动性高的特点,并有快速通关的要求,这就要求传染病的检测必须快速、高效、高通量和准确.蛋白芯片技术能进行传染病的检测和特异性分析,具有高通量、快速、高效、操作简单、结果准确、灵敏度高等特点,在卫生检疫传染病检测方面具有很好的应用前景.
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结核蛋白芯片检测在结核病诊断和治疗中的价值
目的：探讨结核蛋白芯片检测在结核病诊断和疗效观察中的价值。方法：使用蛋白芯片系统检测血清结核抗体的病例共3676例，其中结核病例407例，非结核病例3269例。采用蛋白芯片技术检测结核杆菌中5种成分，即ESAT-6、CFP10、LAM、38KD和16KD，分析其结果。结果：407例结核病患者中共275例结核抗体阳性，3269例非结核病例547例阳性，结核蛋白芯片检测的灵敏度67.56%，特异度83.27%。对222例患者的治疗后抗体动态观察，开始治疗后每隔3个月抗体阳性人数未逐渐下降。结论：结核蛋白芯片是诊断结核病的较有效方法，具有特异性好、快速方便等优点，对结核病快速辅助诊断有积极作用。尤其对肺结核快速辅助诊断有积极作用，但在淋巴结核、结核性胸膜炎中阳性率偏低，敏感性稍差。对结核病的疗效监测无实用价值。
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蛋白芯片检测肺炎支原体与胶体金法检测肺炎支原体方法的比较
目的:探讨蛋白芯片检测肺炎支原体与胶体金法检测肺炎支原体方法的特异性与敏感性.方法:收集疑似肺炎支原体感染的患儿96例进行生物芯片和胶体金法检测肺炎支原体进行比较.结果:两种方法检测96例患儿,临床诊断肺炎支原体感染患者72例,蛋白芯片法49例阳性,阳性率51.0%,诊断符合率68.01%,胶体金法23例阳性,阳性率24.0%,诊断符合率31.9%,蛋白芯片法检测肺炎支原体感染的特异性和敏感性均高于胶体金法,两种方法比较差异有显著性(P＜0.05).结论:蛋白芯片法检测肺炎支原体感染的特异性和敏感性均高于胶体金法.
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兽残留蛋白芯片检测系统的研制和应用
本研究根据抗原和抗体特异性结合的免疫学原理,采用荧光标记竞争免疫法,构建蛋白芯片测定样品中的兽药残留含量.同时设计了一种简便快速的样品制备方法,能够从多种组织样品同时提取多种残留兽药.结合博奥生物有限公司研发的样品分子提取仪、芯片扫描仪以及配套的自动化数据分析软件,开发了晶芯(R)兽药残留蛋白芯片检测系统.该系统可用于猪肉、猪肝、鸡肉、鸡肝、牛奶中磺胺二甲基嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺间甲氧嘧啶、链霉素、双氢链霉素、恩诺沙星以及氯霉素的定量检测.
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多肿瘤标志物蛋白芯片在老年人健康筛查中的应用
目的 评估多肿瘤标志物蛋白芯片(C12芯片)在老年人健康筛查中的应用。方法C12芯片包含甲胎蛋白(AFP)、神经特异性烯醇化酶(NSE)、前列腺特异抗原(PSA)、游离前列腺特异抗原(f-PSA)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原153(CA153)、糖类抗原199(CA199)、糖类抗原242(CA242)、β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、人类生长激素(HGH)、铁蛋白(ferritin)，利用C12芯片对399例体检老年人及对照组1791例成人体检者血清进行检测，以超出正常范围为阳性结果。结果老年人组与对照组均检测到AFP、PSA、f-PSA、CEA、CA125、CA153及CA199有阳性结果，其阳性率差异有统计学意义(P＜0.05)；老年人组与对照组中AFP、PSA、f-PSA、CEA、CA125、CA199、CA242及ferritin的正常检测值差异有统计学意义(P＜0.05)。结论C12芯片中AFP、PSA、f-PSA、CEA、CA125、CA153及CA199肿瘤标志物可用于老年人的健康筛查，有助于发现早期肿瘤。
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基于蛋白芯片的慢性肾衰舌苔上清液中蛋白研究
目的:通过比较慢性肾衰(CRF)患者与正常对照组人群舌苔上清液中蛋白表达谱的差异,筛选慢性肾衰舌苔蛋白标志物并建立预测模型,探讨其在慢性肾衰诊断中的意义.方法:对67例慢性肾衰患者和38例正常对照组人群舌苔上清液样本,运用SELDI-TOF-MS蛋白芯片技术筛选慢性肾衰舌苔蛋白标志物,经生物信息学分析建立预测模型并进行验证.结果:①慢性肾衰组67例和正常对照组38例舌苔样本经SELDI-TOF-MS技术测定,质荷比1000～20000范围内共检测到242个蛋白峰,经生物信息学统计分析,有13个差异质谱峰有统计学意义(P＜0.01),其中m/z 1092.68、m/z 1508.26等7个差异质谱峰在慢性肾衰组中呈高表达；m/z 13302.5、m/z 14330.7等6个差异质谱峰在慢性肾衰组中呈低表达.②利用层次聚类算法进行层次聚类分析和主成分分析(PCA),结果显示,慢性肾衰组与正常对照组样本之间区分较明显,但均存在部分重叠.③经生物信息学分析建立慢性肾衰预测模型,终得到m/z 1049.61、m/z 1076.94、m/z 15295.7等7个差异质谱峰组成的生物标记物可以将慢性肾衰组和正常对照组样品较好的分类(终预测模型的灵敏度为61.4％,特异度为57.3％,预测正确率为64.4％).结论:该研究运用SELDI-TOF-MS蛋白芯片技术,初步筛选出了慢性肾衰舌苔蛋白标志物并建立了预测模型,为慢性肾衰的诊断研究提供客观依据.
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基于蛋白芯片技术研究参苈加颗粒对慢性心衰大鼠心肌MCP-1表达的影响
目的:应用蛋白芯片技术筛选并分析参苈加颗粒对心力衰竭大鼠心肌单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1)表达的影响.方法:将70只清洁级Wistar大鼠随机抽取空白组15只,其余用阿霉素造模,将成模大鼠随机分为模型组和治疗组,分别给予参苈加颗粒和0.9％氯化钠溶液灌胃,每日1次.4周后取大鼠左心室组织.结果:空白组心肌正常；模型组心肌纤维增粗、紊乱,间质增生,少量炎症细胞浸润；治疗组心肌排列较整齐,间质无明显增生,未见炎症细胞浸润.蛋白芯片显示,与空白组相比,模型组的表达下调；与模型组比较,治疗组的表达上调；治疗组与空白组比较无表达差异.结论:参苈加颗粒能够通过上调MCP-1的表达,对心力衰竭大鼠的心肌起到保护作用.
关键词： 蛋白芯片 参苈加颗粒 心力衰竭 单核细胞趋化蛋白-1 -
多肿瘤标志物蛋白芯片检测在人群普查中的应用
目的:探讨应用多肿瘤标志物蛋白芯片技术在人群普查中的意义.方法:采用多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统对4021例进行11种肿瘤相关抗原物的普查.结果4021例中筛查出187例(4.7%)肿瘤标志物有升高,其中24例被病理学、内窥镜、影像学确认为早期或中期肿瘤.确诊肿瘤人数占总普查人数0.60%.结论:多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统适用于人群普查.
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SARS灭活病毒免疫兔后IgG特异抗体应答
将灭活的SARS冠状病毒抗原每隔两周多点注射免疫兔,共免疫3次 ,以观察SARS灭活病毒免疫兔后兔血清中IgG特异性抗体的应答变化.免疫前及第一次免疫后第8、14、21、28、35天耳静脉取血,分离血清.间接ELISA法测得血清中特异性IgG抗体持续升高,并表现出一定的剂量依赖性.第35天G1、G2、G3组血清IgG抗体滴度分别为1:51 200、1:49 600、1:25 600;中和试验测得G1组第28 天血清样品中和抗体效价为1:2 560;蛋白芯片测得M、N、3CL、S1、S2、S3、S4等病毒蛋白抗原都可特异性结合抗血清中的IgG抗体 ,但是不同蛋白抗原结合能力有差别.因此可认为SARS灭活病毒经皮下注射免疫兔后,可诱导全身性IgG抗体应答,产生SARS冠状病毒特异性抗体.
