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李氏5号方对人神经母细胞瘤株SY5Y生长的影响
目的:观察李氏5号方在细胞水平上对神经细胞生长的影响,寻找佳药物浓度.方法:不同浓度的李氏5号方作用于人神经母细胞瘤株SY5Y,利用MTT测定细胞的存活率,制定浓度-药效曲线得出佳药物浓度.以MTT代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度、胞体面积为观察指标.结果:李氏5号方在0.125~0.75 g*L-1浓度范围内均可增加SY5Y细胞的存活率.与正常对照组相比,加药组SY5Y细胞轴突长度和胞体面积均增加,MTT代谢率升高、LDH漏出率降低. 结论:李氏5号方具有营养神经细胞、促进神经细胞存活的作用.
关键词: 李氏5号方 神经营养作用 人神经母细胞瘤株SY5Y -
李氏5号方对D-半乳糖老化小鼠海马神经元NGF信号转导的影响
通过检测D-半乳糖老化小鼠海马神经元NGF(神经生长因子)、PI3K(磷脂酰肌醇酯3激酶)、Akt/PKB(蛋白激酶B)、CREB(cAMP应答元件结合蛋白)的表达,观察李氏5号方对海马神经元NGF信号转导的影响.将小鼠随机分为5组:正常对照组(C组)、D-半乳糖模型组(D组)、李氏5号方大剂量药物治疗组(L组)、中剂量药物治疗组(M组)、小剂量药物治疗组(S组).D、L、M、S 4组每日皮下注射半乳糖65 mg/kg.L、M、S 3个治疗组分别灌胃李氏5号方0.6、0.3、0.15 g/kg,连续3个月.免疫组织化学染色方法和Western blotting检测海马神经元NGF、PI3K、Akt/PKB、CREB的表达.结果:4种抗体C组深染的阳性细胞在海马广泛分布,细胞计数与D组有显著性差异;D组海马阳性反应细胞着色浅,少有突起,细胞数目少.3个剂量李氏5号方治疗组染色结果与C组相似,与半乳糖老化组比较均有显著性差异,李氏5号方水提取液能明显上调NGF的PI3K通路中的一些信号转导蛋白,提示:李氏5号方水提取液中可能含有能激活PI3K的活性物质,为深入研究李氏5号方的有效成分打下基础.
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李氏5号方对Aβ导致神经元毒性的保护作用
观察李氏5号方对人神经母细胞瘤株SY5Y的细胞生长情况和对β-淀粉样肽(β-amyloid,Aβ)导致神经毒性的影响,从而在细胞水平上证实该中药对神经细胞的保护作用.用固相法合成Aβ25-35,高效液相纯化,李氏5号方水提液0.5 g/mL.将人神经母细胞瘤株SY5Y细胞接种后分为正常对照组、Aβ25-35 25 μmol/L损伤组和Aβ25-35 25 μmol/L加李氏5号方水提液保护组.以噻唑蓝(MTT)代谢率、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、细胞轴突长度、胞体面积为观察指标.结果:与正常对照组相比,Aβ25-35组SY5Y细胞的轴突长度和胞体面积均较小,MTT代谢率降低,LDH漏出率升高,而加入李氏5号方保护后,可使上述指标恢复或接近正常.提示:李氏5号方具有神经保护作用,可减轻Aβ导致的神经毒性.
关键词: 李氏5号方 Aβ25-35 神经营养作用 人神经母细胞瘤株SY5Y -
李氏5号方对半乳糖老化小鼠海马神经元褪黑素受体和Nogo受体表达的影响
为了观察李氏5号方对半乳糖老化小鼠海马神经元褪黑素受体(MTR)和Nogo受体(NogoR)表达的影响.我们将昆明小鼠随机分为五组:正常对照组(C组)、D-半乳糖模型组(D组)、李氏5号方大剂量药物治疗组(L组)、中剂量药物治疗组(M组)和小剂量药物治疗组(S组);D、L、M、S四组每日皮下注射半乳糖65 mg/kg体重,持续三个月.应用免疫组织化学染色方法检测小鼠海马神经元MTR和NogoR的表达水平.NogoR免疫组化染色结果:D组海马阳性反应细胞着色浅,少有突起,细胞数目少,仅为正常小鼠的20%,三个剂量李氏5号方治疗组染色结果与C组相似.结果提示:半乳糖老化小鼠海马神经元MTR免疫反应阳性神经元数的上调可能是老化小鼠的一种代偿性反应;NogoR表达下调提示老化小鼠可能存在脑白质的损害,出于机体自我保护的需要,NogoR表达下调以避免神经元修复机制对大脑的进一步损害;不同剂量的李氏5号方水提取液对两种受体的调节作用极为明显,说明这两种受体的表达可受到外源性药物的干预.