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脑心通对氧化低密度脂蛋白作用下的THP-1巨噬细胞活力及炎症反应的影响
目的 观察脑心通对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)作用下的人THP-1细胞活力及炎症反应的影响.方法 将THP-1源性巨噬细胞分为7个组,即对照组(不加任何干预)、OX-LDL组(50mg/L ox-LDL干预细胞24h)、脑心通1组、脑心通2组、脑心通3组、脑心通4组(分别以0.125g/L、0.25g/L、0.5g/L、1.0g/L脑心通和50mg/L OX-LDL与细胞共孵育24h)、阿托伐他汀组(1μmol/L阿托伐他汀和50mg/L ox-LDL与细胞共孵育24h).噻唑蓝(MTT)比色法检测THP-1细胞活力,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.结果 脑心通有轻度保护ox-LDL作用下巨噬细胞活力的作用,并抑制其引起的细胞炎症反应,上述作用均呈浓度依赖性,1g/L 脑心通作用为明显.结论 脑心通呈浓度依赖性抑制ox-LDL引起的细胞损伤及炎症反应.
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替米沙坦对体外培养THP-1源性巨噬细胞MMP-9与CD40/CD40L表达的影响
目的:通过观察替米沙坦对体外培养的THP-1源性巨噬细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)及白细胞分化抗原CD40/CD40L表达的影响,揭示替米沙坦抗炎作用的可能机制,同时明确替米沙坦的心血管保护作用.方法:用一定浓度的血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)(10 000 nmol/L)诱导体外培养的巨噬细胞,与不同浓度的替米沙坦共同孵育,以MMP-9和CD40/CD40L为指标,应用RT-PCR方法分别检测MMP-9和CD40/CD40L mRNA表达.结果:替米沙坦可同时下调AngⅡ刺激后的MMP-9、CD40和CD40L mRNA的表达,有剂量依赖性.替米沙坦100 nmol/L、1 000 nmol/L、10 000 nmol/L时,MMP-9mRNA的表达与AngⅡ组相比分别下降24％、42％及62％；CD40、CD40LmRNA的表达与AngⅡ组相比分别下降24％、39％、55％、16％、32％及40％.结论:替米沙坦体可下调外培养巨噬细胞MMP-9的表达,从而具有抗炎及稳定斑块作用,其作用机制与抑制CD40/CD40L通路有关.
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三种不同方法转染THP-1巨噬细胞效果比较
目的 探讨通过腺病毒,慢病毒,脂质体2000三种方法转染THP-1巨噬细胞的佳方法.方法 采用腺病毒,慢病毒,脂质体2000三种方法分别转染THP-1巨噬细胞,并用荧光显微镜观察细胞转染荧光表达情况,流式细胞仪检测THP-1细胞转染效率,台盼蓝染色检测细胞病死率.结果 腺病毒对THP-1巨噬细胞转染效率可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平,但可能对细胞免疫状态影响大.MOI=200时,转染效率较低,仅为(29.81 ±2.50)％,细胞病死率为(5.17±0.44)％;MOI=800,转染效率高,EGFP阳性率可达(86.49 ±6.11)％,细胞病死率为(8.80±0.54)％;MOI升至1200后,EGFP阳性率为(77.88±5.77)％,细胞病死率上升明显(14.50±0.77)％(P＜0.05);慢病毒转染效率高及细胞毒性较腺病毒低,但因其病毒产量低,实验消耗病毒量大,因而影响其应用.当MOI=10时,EGFP阳性率仅为(28.09±1.67)％,细胞病死率为(4.74±0.31)％;MOI=60时,转染率高,EGFP阳性率为(91.96±1.66)％,细胞病死率升至(7.25±0.50)％,此时病死率才有统计学意义(P＜0.05).脂质体2000对THP-1巨噬细胞毒性较大,细胞死亡率高,转染效率极低,不适合转染.结论 腺病毒与慢病毒转染THP-1巨噬细胞各存在一定优劣,在实验中需酌情选择,脂质体2000不适宜转染THP-1巨噬细胞.
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GPR119对脂质代谢相关基因表达的影响
目的 分析THP-1巨噬细胞中过表达GPR119对脂质代谢相关基因表达的影响.方法 构建过表达GPR119载体,转染THP-1细胞,用佛波酯(160 nmol/L,48 h)分化成巨噬细胞.NC组:空载体转染THP-1+Dil-oxLDL(50 μg/ml)48 h;GPR119(H)组:过表达GPR119转染THP-1+Dil-oxLDL(50 μg/ml)48 h.检测过表达GPR119转染THP-1巨噬细胞后脂质代谢相关基因表达.结果 过表达GPR119组SR-B1、APOE、LCAT基因表达显著高于NC组表达(P=0.000).结论 过表达GPR119能引起脂质代谢相关基因表达变化.
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血管紧张素-(1-7)对THP-1源性巨噬细胞CD40/CD40L表达的影响
目的 探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ[AngⅡ]刺激下THP-1源性巨噬细胞CD40和CD40L表达的影响.方法 用一定浓度的AngⅡ诱导体外培养的巨噬细胞,与不同浓度的Ang-(1-7)共同孵育,应用流式细胞技术检测CD40和CD40L在细胞上的表达,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CD40和CD40L mRNA表达.结果 Ang-(1-7)既可下调细胞表面CD40和CD40L的表达,又能使CD40和CD40L mRNA表达下降,其阻断作用呈浓度依赖性;应用Ang-(1-7)特异性阻断剂A-779后CD40和CD40L表达再次升高,与AngⅡ组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 Ang-(1-7)可拮抗巨噬细胞CD40和CD40L表达,并呈浓度依赖性,这种作用可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一;Ang-(1-7)是通过特异性受体MAS起作用的.
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肾上腺素对THP-1巨噬细胞TGF-β1、SR-A1和CD36表达的影响
目的:探讨肾上腺素对THP-1巨噬细胞TGF-β1、SR-A1和CD36表达的影响.方法:不同浓度肾上腺素处理THP-1巨噬细胞24 h,运用逆转录多聚酶链反应检测其TGF-β1、SR-A1和CD36的mRNA表达,酶联免疫吸附试验检测TGF-β1蛋白的表达,Western-blotting检测SR-A1蛋白的表达.结果:100mol/L及1μmol/L的肾上腺素作用THP-1巨噬细胞,引起TGF-β1 mR-NA和蛋白表达下调(p＜0.05),SR-A1 mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05),1pmol/L～1μmol/L的肾上腺素处理后,各组CD36 mRNA水平无显著性变化(p＞0.05).结论:应激浓度的肾上腺素可能通过影响TGF-β1和SR-A1的表达而参与和/或促进As的发生发展.
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氧化低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞CD36表达的影响
目的:观察氧化低密度脂蛋白(oxLDL)对THP-1巨噬细胞CD36表达和细胞胆固醇流入的影响,探讨CD36在巨噬细胞胆固醇流入中的作用.方法:用50 mg/L oxLDL分别孵育THP-1巨噬细胞不同时间(0、12、24、36和48 h),采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western印迹分别检测CD36 mRNA和蛋白质的表达;用油红O染色观测细胞内脂质蓄积情况;用液体闪烁计数法检测[3H]胆固醇流入.结果:50mg/L oxLDL孵育THP-1巨噬细胞不同时间(0、12、24、36和48h),THP-1巨噬细胞CD36 mRNA及蛋白质表达上调,油红0染色可见细胞内脂滴逐渐增加,液体闪烁计数发现THP-1巨噬细胞胆固醇流入增加,分别为23.5%、27.8%、39.7%、44.1%和49.7%.结论:oxLDL可使THP-1巨噬细胞CD36表达上调,并使细胞胆固醇流入增加.
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脂多糖通过LDLr诱导巨噬细胞泡沫化:炎症应激下巨噬细胞泡沫化的另一条通路
目的 研究炎症介质-脂多糖(LPS)诱导的炎症应激是否通过扰乱固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白-固醇调节元件结合蛋白2(SCAP-SREBP2)复合物介导的低密度脂蛋白受体(LDLr)负反馈调控,增加THP-1巨噬细胞对非修饰低密度脂蛋白胆固醇(LDL)摄取,导致泡沫细胞形成.方法 诱导分化成功的THP-1巨噬细胞在无血清培养基中培养4 h后,分为对照组(继续无血清培养),高脂组(加入LDL负荷,终浓度为25 mg·L-1),高脂加炎症刺激组(加入LDL负荷,终浓度为25 mg·L-1,同时加入炎症介质LPS,终浓度200 μg·L-1),单纯炎症刺激组(加入炎症介质LPS,终浓度200 μg·L-1),以上各组细胞培养24 h后收获.ELISA法检测细胞培养基中TNF-α 浓度,酶化学法检测细胞内胆固醇浓度,琼脂糖电泳检测LDL氧化程度,Real time PCR 法检测LDLr、SREBP2和SCAP mRNA 表达水平,Western blot法检测LDLr、SREBP2和SCAP蛋白表达,激光共聚焦检测SCAP在内质网与高尔基体间的转位情况.结果 细胞内胆固醇测定发现,炎症介质LPS通过增加THP-1巨噬细胞对非修饰LDL摄取,导致巨噬细胞转变为泡沫细胞.在无炎症介质LPS时,25 mg·L-1 LDL减少LDLr mRNA和蛋白表达(P<0.05).然而,LPS增加LDLr mRNA和蛋白表达,逆转25 mg·L-1 LDL对LDLr的抑制效应,不恰当的增加了巨噬细胞对LDL摄取(P<0.05),LPS刺激也导致了SCAP和SREBP2的mRNA和蛋白过表达(P<0.05),同时促进了SCAP从内质网转移到高尔基体.这些结果提示LPS干扰了胆固醇介导的LDLr负反馈调控,使非修饰LDL在巨噬细胞内堆积,导致泡沫细胞形成.结论 本研究提示,在LPS诱导的炎症应激状态条件下,天然LDL可以通过LDLr被巨噬细胞大量摄取入细胞内,导致泡沫细胞形成,这可能是巨噬细胞泡沫化的另一条通路.
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金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞素对THP-1巨噬细胞活性及凋亡/坏死的作用
目的 探讨金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞素(PVL)对THP-1巨噬细胞活性及凋亡/坏死的作用.方法 采用CCK-8比色法检测重组PV-杀白细胞素(rPVL)对THP-1巨噬细胞活性的影响;应用流式细胞仪检测THP-1巨噬细胞凋亡/坏死率;用Western blot法检测rPVL刺激THP-1巨噬细胞NF-κB的蛋白表达.结果 随着rPVL对THP-1巨噬细胞作用的浓度和时间的增加,细胞活性进行性下降,在低浓度(5 nmol/L rPVL)以凋亡为主,在高浓度(40 nmol/L rPVL)以坏死为主,且具有时间依赖性.NF-κB的蛋白在高浓度(40 nmol/L rPVL)刺激下活化,2 h量表达大,具有时间依赖性.结论 rPVL对THP-1细胞有毒性作用,低浓度诱导其凋亡、高浓度促进坏死,并能活化NF-κB的蛋白.
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氧化低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞脂质蓄积、亲脂素与过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达及蛋白激酶Cα活性的影响
目的:以THP-1巨噬细胞为研究对象,观察氧化低密度脂蛋白(oxLDL)对细胞内脂质蓄积、亲脂素(adipophilin)与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达以及蛋白激酶Cα(PKCα)活性的影响.方法:用0、10、20、40、80 mg/L oxLDL与THP-1巨噬细胞共孵育24 h,油红O染色和高效液相色谱检测细胞内脂质蓄积情况;半定量RT-PCR和Western blot检测adipophilin、PPARγ和PKCα表达的变化情况;PepTag非放射性蛋白激酶检测法对荷脂细胞胞膜PKCα活性进行定量检测.结果:随着oxLDL浓度的增加,THP-1巨噬细胞内脂滴增加变大,胆固醇酯/总胆固醇比值升高,adipophilin、PPARγ和PKCα表达增强(与0 mg/L oxLDL处理组比较,P均<0.05),胞膜PKCα活性由(0.07±0.01)kU/L增至(0.14±0.02)kU/L(P<0.05).结论:oxLDL可增强巨噬细胞PKCα活性,上调PKCα、PPARγ和adipophilin的表达,促进THP-1巨噬细胞中脂质的蓄积;oxLDL、PKCα、PPARγ和adipophilin之间可能存在着某种调控机制.
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高糖依赖过氧化体增殖物激活型受体γ介导THP-1巨噬细胞CD36表达及脂质蓄积
目的 观察高糖诱导THP-1巨噬细胞CD36表达及脂质蓄积是否由过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)所介导.方法 分别用20 mmol/L D-葡萄糖(高糖)、高糖+10 mmol/L GW9662(PPARγ拮抗剂)、50mg/L氧化型低密度脂蛋白+高糖、50 mg/L氧化型低密度脂蛋白+高糖+10 mmol/L GW9662共同孵育THP-1巨噬细胞24h;采用逆转录聚合酶链反应检测CD36、PPARγmRNA的表达;用Western blot分别检测CD36、PPARγ蛋白质的表达;用油红O染色观测细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱分析法检测细胞内总胆固醇水平.结果 GW9662明显抑制高糖所诱导的THP-1巨噬细胞CD36的表达及脂质蓄积,CD36 mRNA和蛋白质表达明显下降(P＜0.05);细胞内脂滴明显减少,总胆固醇含量明显下降(P＜0.05).结论 高糖所诱导的CD36表达及脂质蓄积可能是由PPARγ所介导的.本研究将为糖尿病性动脉粥样硬化病变的防治积累有价值的实验资料.
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高糖对HDL调节THP-1巨噬细胞CD36和过氧化体增殖物激活型受体γ表达的影响
目的 观察高糖对HDL调节THP-1巨噬细胞清道夫受体CD36和过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)表达的影响.方法 用50 mg/L ox-LDL、50 mg/L ox-LDL+ 50 mg/L HDL、50 mg/L ox-LDL+ 50 mg/L HDL+20 mmol/L D-葡萄糖、50 mg/L HDL、50 mg/L HDL +20 mmol/L D-葡萄糖孵育THP-1巨噬细胞24 h,采用油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,RT-PCR和Western Blot分别检测CD36、PPARγ、p-PPARγ mRNA和蛋白的表达.结果 加用HDL组明显减少脂质蓄积,加用HDL组的CD36 mRNA和蛋白的表达下调,PPARγ的mRNA和蛋白及p-PPARγ的蛋白表达上调;而同时加用50 mg/L HDL和20 mmol/L葡萄糖组CD36和PPARγ的mRNA及蛋白表达上调,而p-PPARγ的表达下调(P＜0.05),并促进脂质蓄积.结论 高糖可使HDL抑制CD36表达及脂质蓄积的作用减弱.
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高糖对THP-1巨噬细胞CD36表达及脂质蓄积的影响
目的 观察高糖对THP-1巨噬细胞清道夫受体CD36表达和脂质蓄积的影响.方法 用不同浓度的D-葡萄糖(分别为5.6、11、20、30及35 mmol/L)、50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)、50 mg/L ox-LDL+20mmol/L D-葡萄糖孵育THP-1巨噬细胞24 h,油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱分析法检测细胞内总胆固醇水平,定量PCR与免疫印迹分析法分别检测THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达.结果 随着D-葡萄糖处理THP-1巨噬细胞浓度的增加,CD36 mRNA和蛋白的表达逐渐增加(P＜0.05);高糖可协同ox-LDL诱导THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达上调(P＜0.05),并增加细胞内总胆固醇水平(P＜0.05).结论 高糖可诱导THP-1巨噬细胞CD36的表达上调,并促进细胞内脂质蓄积.
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血管紧张素(1-7)和血管紧张素Ⅱ对THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运子A1表达及胆固醇外流的影响
目的 探讨血管紧张素(1-7)[ Ang(1-7)]及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达及胆固醇外流的影响.方法 将诱导分化的巨噬细胞随机分为对照组、AngⅡ组、Ang(1-7)组、AngⅡ+不同浓度Ang(1-7)组、AngⅡ+Ang(1-7)+ A-779组,分别运用RT-PCR及Western blot方法检测ABCA1 mRNA及蛋白的表达,液体闪烁计数仪检测胆固醇流出的变化.结果 与对照组相比,AngⅡ可抑制ABCA1mRNA(0.471±0.036比0.857 ±0.053,P＜0.05)及蛋白(0.473±0.029比0.652±0.031,P＜0.05)的表达,减少胆固醇外流(8.937±0.353比13.942±0.478,P ＜0.05);而Ang( 1-7)促进ABCA1 mRNA (0.949±0.087比0.857±0.053,P＜0.05)及蛋白(0.722±0.045比0.652±0.031,P ＜0.05)的表达,增加了胆固醇外流(15.477±0.882比13.942±0.478,P＜0.05),且呈剂量依赖性地减弱AngⅡ的抑制作用(P＜0.05);ABCA1 mRNA及蛋白的表达和胆固醇外流A-779组与AngⅡ组比较差异无统计学意义(0.472±0.063比0.471±0.036、0.515±0.048比0.473±0.029及9.309±0.333比8.937±0.353,P＞0.05).结论 AngⅡ可抑制巨噬细胞ABCA1的表达、减少胆固醇外流;Ang(1-7)通过英特异性受体MAS受体介导拮抗AngⅡ抑制巨噬细胞ABCA1的表达,促进胆固醇流出,进而对动脉粥样硬化的发生发展起保护作用.
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过氧化体增殖物激活型受体γ对巨噬细胞脂质蓄积及CD36表达的影响
目的 观察过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂和拮抗剂对THP-1巨噬细胞胆固醇蓄积及CD36表达的影响.方法 实验分对照组、氧化型低密度脂蛋白组、Ciglitazone处理组和GW9662处理组,后两组用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白分别与过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂Ciglitazone(10 μmol/L)及拮抗剂GW9662( 10μmol/L)共同孵育24 h,高效液相色谱分析法检测细胞总胆固醇蓄积情况,RT-PCR和Western blot分别检测THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达.结果 与对照组(76.28±10.36 mg/g)相比,氧化型低密度脂蛋白(121.63±13.32mg/g)能使细胞总胆固醇含量显著增加,而Ciglitazone能使氧化型低密度脂蛋白处理的细胞总胆固醇含量进一步增加(136.23±14.78 mg/g),GW9662能使氧化型低密度脂蛋白处理的细胞总胆固醇含量减少(98.52±11.45 mg/g).过氧化体增殖物激活型受体γ拮抗剂GW9662使巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达下调及胆固醇蓄积减少,过氧化体增殖物激活型受体γ激动剂Ciglitazone使巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达上调及胆固醇蓄积增多.结论 过氧化体增殖物激活型受体γ拮抗剂使THP-1巨噬细胞胆固醇蓄积减少及氧化型低密度脂蛋白诱导的CD36表达下调.
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血管紧张素Ⅱ通过核因子κB上调巨噬细胞基质金属蛋白酶诱导因子的表达
目的 观察血管紧张素Ⅱ对巨噬细胞表达基质金属蛋白酶诱导因子的影响及其相关通路.方法 血管紧张素Ⅱ体外刺激人巨噬细胞,应用逆转录聚合酶链反应和Western blot测定基质金属蛋白酶诱导因子基因和蛋白表达;RNA干扰技术沉默核转录因子核因子κB p65亚基,评价核因子κB通路在血管紧张素Ⅱ上调巨噬细胞细胞基质金属蛋白酶诱导因子的表达中的作用.结果 血管紧张素Ⅱ刺激巨噬细胞后,基质金属蛋白酶诱导因子mRNA和蛋白表达均显著增加,核因子κB p65亚基沉默后,血管紧张素Ⅱ对基质金属蛋白酶诱导因子mRNA和蛋白表达无上调作用.结论 血管紧张素Ⅱ上调基质金属蛋白酶诱导因子的表达,此调控过程有核因子κB通路的参与.
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阿托伐他汀对THP-1巨噬细胞脂质蓄积及CD36表达的影响
目的 观察阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积及CD36表达的影响.方法 用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白与不同浓度的阿托伐他汀(0、0.312、1.25和5 μmol/L)共同孵育THP-1巨噬细胞24 h,以空白组作对照,用液体闪烁计数法检测细胞[3H]胆固醇流入情况,油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱分析法检测细胞内总胆固醇水平,逆转录聚合酶链反应与免疫印迹分析法分别检测THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达.结果 阿托伐他汀使THP-1巨噬细胞胆固醇流入减少,对照组胆固醇流入为35.90%±2.36%,0、0.312、1.25和5 μmol/L阿托伐他汀组胆固醇流入分别为47.10%±3.18%、41.20%±2.88%、35.10%±2.35%和28.30%±1.98%;阿托伐他汀能抑制THP-1巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取,油红O染色可见氧化型低密度脂蛋白+阿托伐他汀组细胞内脂滴较氧化型低密度脂蛋白组明显减少,且脂滴颗粒体积变小;高效液相色谱分析发现,对照组细胞总胆固醇含量为78.24±11.35 mg/g,0、0.312、1.25和5 μmol/L阿托伐他汀组细胞总胆固醇含量分别为123.13±15.92 mg/g、115.36±13.18 mg/g、107.52±12.05 mg/g和98.03±10.24 mg/g.阿托伐他汀使氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达下调.结论 阿托伐他汀引起氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞CD36表达下调,并使脂质蓄积减少.
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游离脂肪酸对THP-1巨噬细胞NALP3炎性通路的影响
目的:探讨NALP3炎性小体在非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的炎症发生发展中的可能作用.方法:选择THP-1构建体外巨噬细胞模型,用不同浓度的棕榈酸干预24 h;用不同浓度的N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)预处理细胞后加入高浓度的棕榈酸孵育24 h.分别用活性氧(reactive oxygen species,ROS)指示剂结合流式细胞仪检测THP-1中ROS的变化;ELISA检测细胞上清液中IL-1β的浓度;免疫荧光技术检测NALP3,caspase-1蛋白的表达;荧光定量PCR检测NALP3蛋白复合体各组分(NALP3,ASC,caspase-1)mRNA的表达水平.结果:与空白组相比,各棕榈酸组细胞内ROS增加,NALP3和caspase-1蛋白表达及其分泌IL-1β水平均增加(P＜0.05),并随棕榈酸浓度增加而增强;NAC预处理后,与单纯棕榈酸组相比,各NAC组THP-1产生ROS水平均下降,同时NALP3和caspase-1蛋白表达水平,NALP3复合体各组分mRNA水平及其分泌IL-1β的能力均降低(P＜0.05),此抑制作用随NAC浓度增加而增强.结论:游离脂肪酸可通过产生ROS调节巨噬细胞NALP3炎性小体信号通路的活化引起炎症因子分泌,该通路可能是NASH的发病机制之一.
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Ox-LDL对PMA诱导的THP-1巨噬细胞自噬的影响
目的探讨氧化型低密度脂蛋白( Ox-LDL)对PMA诱导的THP-1巨噬细胞自噬的影响。方法PMA诱导THP-1细胞24 h,使其分化为巨噬细胞,再分别用0、10、20、40或80 mg/L的Ox-LDL处理24 h,逆转录聚合酶链反应( RT-PCR)和免疫印迹技术( Western blotting)分别检测Beclin-1以及LC3的mRNA及蛋白表达；细胞免疫荧光检测LC3在细胞内的含量；MDC染色检测自噬囊泡的形成。结果随着Ox-LDL浓度的增加,THP-1源性巨噬细胞Beclin-1 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05)；LC3 mRNA表达无明显改变(P>0.05),但蛋白水平LC3II/LC3I显著降低(P<0.001)；免疫荧光结果表明随着Ox-LDL浓度的增加,LC3II含量降低,MDC染色结果显示自噬囊泡随着Ox-LDL浓度的增加而减少。结论 Ox-LDL抑制PMA诱导的THP-1巨噬细胞自噬。
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PDTC对ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积和胆固醇流出的影响
目的 研究核因子-κB(NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对THP-1巨噬细胞脂质蓄积和胆固醇流出的影响.方法 60 nmol/L PMA孵育THP-1巨噬细胞24 h后,分为3组:对照组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组(100 μg/mL)和PDTC组(100 μg/mL ox-LDL+50 μmol/L PDTC).用油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱分析法检测细胞内胆固醇水平,用液体闪烁计数法观察细胞内胆固醇的流出.结果 PDTC抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积,明显降低细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量,增加载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)介导的胆固醇流出,但对HDL介导的胆固醇流出无明显影响.结论 PDTC抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积,促进apoA-Ⅰ介导的胆固醇流出.
关键词： 二硫代氨基甲酸吡咯烷 THP-1巨噬细胞 脂质蓄积 胆固醇流出
