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包膜糖蛋白gp140文献资料
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人类免疫缺陷病毒1型gp140包膜蛋白三聚体在哺乳动物细胞中的高效表达及其性质鉴定
本研究目的是通过优化1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1) gp140编码基因的密码子和克隆设计,从而实现在293T哺乳动物细胞中高效表达,并对纯化获得的gp140蛋白进行抗原性质鉴定.在本研究中选择HIV-1 B亚型NL4-3全基因序列为模板进行gp140克隆构建,通过密码子优化、信号肽替换、增加柔性1inker、三聚体折叠序列等方法优化设计.通过HIV-1转录反式激活因子tat共转HEK293T细胞进行gp140蛋白表达,采用镍柱纯化.SDS-PAGE、Western blot、ELISA、负染电镜等结果显示目的蛋白纯度高于70％,每升培养基可获得0.5 mg gp140蛋白,并且具有良好的抗原活性,电镜下呈现三聚体结构.通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫Balb/c小鼠,检测小鼠免疫血清显示gp140蛋白能有效刺激机体产生免疫应答.本研究通过优化表达获得B亚型HIV-1 NL4-3 gp140蛋白,为HIV-1病毒包膜蛋白结构和重组疫苗研究奠定基础.
