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APC、p16、CDH13和RASSF1A甲基化状态与肺癌的相关性研究
目的 探讨肺癌患者痰液脱落细胞中信号传导通路基因(rasassociation domain family 1A,RASSF1A)和腺瘤样息肉病基因(adenomatous polyposis coli,APC)、T-钙黏蛋白13(cadherin-13,CDH13)和p16基因甲基化的发生状态,及其联合检测在肺癌早期筛查及诊断中的作用和意义.方法 选取2015年1月至2017年12月本院收治的50例肺癌患者,50例肺部良性病变患者和50例正常人痰液标本,采用甲基化特异性PCR法(methylation specific PCR,MSP)检测患者痰液脱落细胞中APC、p16、CDH13和RASSF1A基因启动子区域甲基化发生情况.结果 肺癌患者痰标本中APC、p16、CDH13和RASSF1A基因启动子区甲基化发生率分别为38.00％ (19/50)、54.00％ (27/50)、34.00％ (17/50)和26.00％ (13/50).患者痰标本基因APC、p16、CDH13和RASSF1A基因启动子区甲基化率与患者年龄、性别、组织学分型和临床分期无关,差异不具有统计学意义(P＜0.05).患者痰标本基因APC、p16、CDH13和RASSF1A基因启动子区甲基化率与患者吸烟指数明显相关,差异具有统计学意义(P＞0.05).结论 肺癌患者痰液脱落细胞中APC、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化的联合检测可以提示有效临床肺癌的发生情况.
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慢性髓系白血病患者CD34+CD38-细胞水平JunB和CDH13基因启动子区域的甲基化状态研究
慢性髓系白血病(CML)是骨髓造血干细胞恶性增殖的克隆性疾病,在CML患者细胞水平由于JunB和CDH13基因启动子区甲基化而使这2个抑癌基因的表达受损.为了探讨正常人和CML患者CD34+CD38-细胞水平JunB和CDH13(cadherin-13)基因启动子区域甲基化状态及表达水平的差异,应用流式细胞仪分选出CD34+CD38-细胞,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测5例正常人和8例CML患者骨髓CD34+CD38-细胞JunB和CDH13基因启动子区域甲基化状态,用实时定量PCR(RT-PCR)检测JunB和CDH13基因的表达情况.结果表明:JUNB和CDH13基因在正常人骨髓CD34+CD38-细胞中呈完全性非甲基化状态,CML患者骨髓CD34+CD38-细胞中JunB和CDH13基因启动子区甲基化比例分别为87.5%(7/8)和50%(4/8),明显高于正常人(P＜0.05).CML患者骨髓CD34+CD38-细胞中JunB和CDH13基因mRNA相对表达水平与正常人的相比明显降低(2-△CT 分别为1/5.21和1/10.63).结论:在CML患者骨髓CD34+CD38-细胞中JunB和CDH13基因启动子区域都发生了高度的甲基化,它们的mRNA表达水平也明显降低,JunB和CDH13基因启动子区域甲基化在CML的发病机制中起到一定的作用,甲基化检测对CML的靶向治疗及新的治疗方法具有重要意义.
关键词： JunB CDH13 DNA甲基化 慢性髓系白血病 CD34+CD38-细胞 -
胸腺上皮肿瘤中CDH13基因启动子区甲基化检测的临床意义
目的 观察胸腺上皮肿瘤(TETs)组织中CDH13基因启动子区甲基化情况,探索CDH13基因启动子甲基化与TETs肿瘤发生进展之间的关系.方法 收集胸腺上皮肿瘤组织,采用巢式甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)技术检测CDH13基因启动子区甲基化状态,并分析其与临床病理之间的联系.结果 CDH13基因启动子区甲基化总检出率为37.8％;CDH13基因启动子区甲基化情况与患者性别、年龄以及是否合并重症肌无力无关(P＞0.05);按照世界卫生组织(WHO)组织学分型,分化越差的TETs组织中CDH13基因启动子区甲基化发生率越高,大多数甲基化阳性结果均来自于B2/B3/C组,A/AB/B1组仅有少量甲基化阳性结果(P=0.002);按照Masaoka病理分期,Ⅰ+Ⅱ期肿瘤中CDH13基因启动子甲基化率明显低于Ⅲ+Ⅳ期(P=0.001).结论 CDH13基因启动子区的异常甲基化与TETs肿瘤的病理分期和组织学分型密切相关.
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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对人结肠癌裸鼠种植瘤的抑制作用以及对种植瘤细胞CDH13表达和甲基化的影响
目的 探讨去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人结肠癌细胞及其裸鼠种植瘤生长的抑制作用,以及对种植瘤组织中CDH13基因表达和甲基化状态的影响.方法 在光镜下观察5 -Aza-CdR干预前后人结肠癌HCT116细胞的形态变化,采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞生长变化.建立HCT116细胞裸鼠种植瘤模型,比较给药组(腹腔注射5-Aza-CdR)和对照组(注射等量磷酸盐缓冲液)裸鼠种植瘤生长的变化.采用甲基化特异性聚合酶链反应、逆转录聚合酶链反应、Western blot和免疫组织化学方法,检测5-Aza-CdR对裸鼠种植瘤组织CDH13基因5'CpG岛甲基化状态、mRNA和蛋白表达的影响.结果 5-Aza-CdR对HCT116细胞的生长有抑制作用,随浓度的增加而增强.用药28 d后处死裸鼠时,给药组荷瘤裸鼠体重为(18.06±1.29)g,对照组为(17.07±0.84)g,两组差异无统计学意义(P＞0.10).给药组的肿瘤体积为(907.00±87.29)mm3,对照组为( 1370.93±130.20)mm3,两组差异有统计学意义(P＜0.01).给药组各肿瘤组织中出现非甲基化条带,对照组仅有甲基化条带扩增.给药组结肠癌种植瘤CDH13 mRNA和蛋白表达阳性,对照组未见CDH13mRNA和蛋白表达.结论 5-Aza-CdR能抑制人结肠癌细胞及其裸鼠种植瘤的生长,诱导种植瘤细胞CDH13表达,其机制可能为5-Aza-CdR使甲基化的CDH13启动子去甲基化,CDH13基因重新表达,从而抑制肿瘤细胞的生长和增殖.
关键词： 结肠肿瘤 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 CDH13 DNA甲基化 -
结肠癌患者CDH13基因启动子甲基化状态
目的 分析结肠癌患者CDH13基因启动子甲基化情况.方法 留取32例结肠癌患者的手术标本(观察组)及12例非结肠癌患者正常结肠组织(对照组),应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法分析CDH13基因启动子甲基化情况.结果 观察组CDH13基因启动子甲基化总发生率为59.4％(19/32),显著高于对照组的8.3％(1/12)(P=0.002).结论 结肠癌中存在着较高比例的CDH13基因启动子甲基化,提示CDH13在结肠癌的发生中起着重要作用.
关键词： 结肠肿瘤 CDH13 甲基化特异性聚合酶链反应 -
肺癌患者CDH13基因启动子甲基化状态研究
目的 应用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测非小细胞肺癌(NSCLC) CDH13基因启动子甲基化情况.方法 留取44例非小细胞肺癌患者手术标本及12例非肺癌患者正常肺组织,MSP分析CDH 13基因启动子甲基化情况.结果 44例非小细胞肺癌中CDH 13基因启动子甲基化阳性率为54.5%(24/44),12例正常肺组织中未检测到此基因的甲基化(0/12).CDH13基因甲基化与患者性别及吸烟与否无关;肿瘤分期越晚甲基化的发生率越高.结论 原发性非小细胞肺癌中存在着较高比例的CDH13启动子甲基化,提示CDH13在非小细胞肺癌的发生中起着重要作用.
关键词： 肺癌 CDH13 甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应 -
5-氮-2'脱氧胞苷对急性粒细胞性白血病细胞系HL-60中CDH13基因甲基化的影响
目的 分析探讨5-氮-2'脱氧胞苷对急性粒细胞性白血病细胞系HL-60中CDH13基因甲基化的影响.方法 5-Aza- dC处理培养的HL-60细胞,用甲基化特异性PCR(MSP) 法检测处理前后细胞中CDH13基因的甲基化状态,RT-PCR法检测用药前后细胞中CDH13 mRNA表达的变化.结果 HL-60中CDH13启动子区发现甲基化,应用5-Aza-dC能使CDH13基因启动子区CpG岛去甲基化,而且经药物处理后CDH13 mRNA的表达较前明显增强.结论 5-Aza-dC能逆转CDH13基因甲基化状态,从而调控CDH13基因表达.
关键词： 5-氮-2'脱氧胞苷 CDH13 HL-60 -
CDH13基因启动子甲基化对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药机制的研究
目的 探讨能否通过去甲基化作用恢复CDH13基因表达,并逆转A549/顺铂(DDP)细胞对DDP的耐药.方法 反转录-聚合酶链反应检测A549及A549/DDP细胞的CDH13表达情况,及甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-dc)干预A549/DDP细胞后CDH13表达情况;MSP检测A549、A549/DDP细胞及5-Aza-dc干预A549/DDP细胞CDH13甲基化状态.结果 CDH13mRNA在A549细胞中的表达高于A549/DDP细胞;DDP对A549和A549/DDP细胞的半数抑制浓度分别为(7.053±0.366) μmol/L和(36.351±2.648)μmol/L (t =8.153,P＜0.05),耐药指数为5.15.MSP结果显示,A549/DDP细胞中CDH13基因启动子区呈部分甲基化状态.经无毒和低毒剂量5-Aza-dc处理A549/DDP细胞48 h后,CDH13基因启动子区发生DNA去甲基化,伴随增加5-Aza-dc浓度至40 μmol/L处理后,DDP对A549/DDP细胞的半数抑制浓度为(9.840±1.337) μmol/L,逆转DDP耐药倍数约为3.41倍.结论 CDH13甲基化可能参与了A549/DDP细胞的DDP耐药过程.
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T-钙黏蛋白高甲基化与肺癌发生、发展关系探讨
目的:通过检测肺癌组织、良性病变组织和对照组织中CDH13基因及其甲基化水平,结合临床病理资料,找出其与肺癌发生、发展的关系.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和特异性甲基化PCR (MSP)法.结果:肺癌组CDH13基因甲基化阳性率为46.67％(21/45),对照组为2.22％(1/45),良性病变组为6.67％(3/45),前组与后两组之间的差异均有统计学意义(P＜0.05).CDH13基因在肺癌中为0.5273±0.0687,在对照组中为0.8345±0.0385、在良性病变组织为0.8632±0.0465,前组与后两组之间的差异均有统计学意义(P＜0.05).Ⅲ期肺癌组织的CDH13基因甲基化阳性率61.90％(13/21)明显高于Ⅰ+Ⅱ期33.33％(8/24) (P＜0.05).有淋巴结转移的肺癌组织中CDH13基因甲基化阳性率70.59％(12/17)与无转移组的32.14％(9/28)差异有统计学意义(P＜0.05).肺癌组织中CDH13基因甲基化阳性组的T-钙黏蛋白阳性率23.81％(5/21)显著低于甲基化阴性组54.17％(13/24) (P＜0.05).结论:肺癌组织中T-钙黏蛋白基因含量明显降低,存在着CDH13基因启动子5'CpG岛高甲基化,且CDH13基因的高甲基化水平随着肺癌临床分期和淋巴结转移而增高.
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唾液腺腺样囊性癌细胞系中5个抑癌基因甲基化及其表达
目的:探讨唾液腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)细胞系中CDH13、RASSF2A、TFPI-2、hMLH-1、MyoD1基因的甲基化及其与mRNA表达之间的关系.方法:甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法检测ACC细胞系ACC-2、ACC-3、ACC-M中CDH13、RASSF2A、TFPI-2、hMLH-1、MyoD1基因的甲基化;RT-PCR及荧光实时定量PCR对存在甲基化的基因进行mRNA水平的检测.结果:3个细胞系中均存在CDH13、RASSF2A、TFPI-2基因的甲基化和未甲基化,只存在MyoD1基因的甲基化和hMLH-1基因的未甲基化;ACC-2中CDH13基因mRNA水平的表达显著高于ACC-M,ACC-3中RASSF2A的表达显著高于ACC-2、ACC-M,3个细胞系中均未检测到MyoD1基因的表达.结论:ACC细胞系中,CDH13、RASSF2A、TFPI-2、MyoD1基因的甲基化为常见事件,甲基化可能为MyoD1基因失活的主要机制,CDH13基因的表达可能与ACC的转移相关.
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改良多重实时荧光定量PCR法测定抑癌基因MGMT、p16、CDH13和RASSF1A甲基化 在肺癌早期诊断中的作用
目的:建立改良多重实时荧光定量PCR法,检测抑癌基因MGMR、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,探讨其在肺癌早期诊断中的应用.方法:选取30例病理确诊为肺癌的患者作为肺癌组,30例病理确诊为良性病变的患者作为对照组.建立改良实时荧光定量PCR体系.检测受试者血清MGMT、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,对比两组基因甲基化阳性率,计算四项基因甲基化单独及联合用于肺癌早期诊断的敏感度和特异度.结果:肺癌组受试者血清MGMT、p16、CDH13和RASSF1A显著高于对照组(P<0.05);MGMT、p16、CDH13和RASSF1A四项基因甲基化联合检测用于肺癌早期诊断的敏感度和特异度显著高于单项指标检测(P<0.05).结论:建立了多重实时荧光定量PCR法用于MGMT、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化检测,联合检测用于肺癌早期诊断具有较高的敏感度和特异度.
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人头颈鳞癌细胞中CDH13的表达及其甲基化状态研究
目的 研究抑癌基因H-钙黏素(CDH13)在人头颈部鳞癌细胞系SCC10A和PCI-37B中的表达水平及其启动子区域的甲基化状态.方法 定量PCR和Western blotting检测CDH13在头颈鳞癌细胞系SCC10A和PCI-37B及两种正常组织中的mRNA和蛋白表达变化,并通过甲基化特异性PCR和硫化测序检测CDH13基因启动子区域的甲基化情况.结果 与正常组织比较,头颈鳞癌细胞SCC10A和PCI-37B中CDH13的mRNA和蛋白表达水平均降低.SCC10A和PCI-37B细胞中CDH13基因甲基化水平高于口腔黏膜正常组织,人头颈鳞癌细胞系中CDH13基因启动子区域呈高甲基化状态.结论 CDH13启动子区域高甲基化可能是导致人头颈鳞癌中CDH13表达沉默的重要因素,但其影响肿瘤发生发展的具体机制仍需进一步探究.
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阿尔茨海默病细胞模型中lncRNA RP11-543N12.1对CDH13表达的调控作用
目的 探讨阿尔茨海默病(AD)细胞模型中长链非编码RNA (lncRNA) RPl1-543N12.1对CDH13的表达调控作用.方法 采用基因芯片技术筛选AD相关差异表达lncRNA和mRNA,并通过Real-time PCR技术验证AD细胞模型中lncRNA RP11-543N12.1和CDH13 mRNA表达均增加,与芯片结果一致;然后将RP11-543N12.1-siRNA转入SH-SY5Y细胞,并加入β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)作用48 h,接着MTT检测细胞存活率,Real-time PCR技术检测RP11-543N12.1和CDH13在RNA水平的变化,Western blotting检测CDH13蛋白表达,Hoechst33258染色检测细胞核的形态学变化,流式细胞术检测凋亡率.结果在未转染RP11-543N12.1-siRNA的SH-SY5Y细胞中,Aβ25-35处理48 h后,与正常细胞相比,细胞存活率降低(P＜0.05),CDH13 RNA水平增加(P＜0.01),CDH13蛋白活性形式表达量增加(P＜0.01),细胞核出现凋亡的形态学变化,流式检测细胞凋亡率增加(P＜0.01);转入RP11-543N12.1-siRNA后再用Aβ25-35处理48h,细胞存活率、CDH13 RNA水平、蛋白活性形式表达量、细胞凋亡率均趋于正常水平,细胞核凋亡的形态学变化消失.结论LncRNA RP11-543N12.1能够调节CDH13的表达,降低RP11-543N12.1的表达量能使CDH13表达下调.
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CDH13表达下调对膀胱癌细胞迁移和侵袭及PI3K/Akt表达的影响
目的：研究膀胱癌5637细胞中CDH13表达下调后对细胞迁移、侵袭和PI3K/Akt表达的影响以及它们间的关系。方法应用 RNA 干扰技术抑制人膀胱癌5637细胞株中 CDH13的表达,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell 小室法检测细胞侵袭能力,Western blot 检测CDH13、PI3K及 Akt的表达水平。结果膀胱癌5637细胞中CDH13表达下调后细胞迁移和侵袭能力增强,PI3K及 Akt 的表达增加。结论膀胱癌细胞中 CDH13表达下调可能通过激活PI3K/Akt通路促进肿瘤细胞的迁移和侵袭。
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血清CDH13甲基化对非肌层浸润性膀胱癌行TURBT治疗后进展的预测作用
目的 探索血清钙黏蛋白13(CDH13)甲基化对非肌层浸润性膀胱癌行经尿道膀胱肿瘤切除术(TURBT)治疗后进展的预测作用.方法 选取2010年1月至2012年1月在该院行TURBT治疗的非肌层浸润性膀胱癌患者98例,应用甲基化特异性PCR检测患者血清CDH13甲基化状态,并分析其与患者临床病理资料及术后进展情况的相关性.结果 52例(53.1％)患者血清中检测到CDH13甲基化,并且血清CDH13甲基化与肿瘤大小、分级及数目密切相关(P＜0.05).在随访过程中有20例(20.4％)患者出现肿瘤进展,Kaplan-Meier分析和log-rank检验发现存在血清CDH13甲基化的患者无进展生存率低于血清CDH13未甲基化的患者,差异有统计学意义(P=0.007).Cox回归分析显示,血清CDH13甲基化是非肌层浸润性膀胱癌行TURBT治疗后进展的独立危险因素.结论 血清CDH13甲基化可作为非肌层浸润性膀胱癌行TURBT治疗后进展的预测指标.
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血清中CDH13基因启动子甲基化对非肌层浸润性膀胱癌患者术后复发的预测作用
目的 探索血清中CDH13基因启动子甲基化对非肌层浸润性膀胱癌术后复发的预测作用.方法 应用甲基化特异性PCR检测接受经尿道膀胱肿瘤切除术(TURBT)治疗的98例非肌层浸润性膀胱癌患者血清CDH13甲基化状态,并对患者临床病理资料以及术后复发情况进行统计学分析.结果 在52例(53.1％)患者血清中检测到CDH13甲基化,并且与肿瘤的大小、分级及数目密切相关.在随访过程中有41例(41.8％)患者出现肿瘤复发,Ka plan-Meier分析和log-rank检验发现存在血清CDH13甲基化的患者的无复发生存率比无血清CDH13甲基化的患者低,差异有统计学意义(P ＜0.001).Cox回归分析表明血清CDH13甲基化是非肌层浸润性膀胱癌行TURBT治疗后复发的独立危险因素.结论 血清CDH13甲基化是非肌层浸润性膀胱癌行TURBT治疗后复发的预测指标.
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钙黏蛋白-13表达下调对膀胱癌细胞上皮间质转化的影响
目的 研究CDH13表达下调对膀胱癌5637细胞上皮间质转化的影响.方法 应用RNA干扰技术抑制膀胱癌5637细胞中CDH13的表达后,倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化,Western blot检测CDH13及上皮间质转化标志物E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和α-平滑肌动蛋白的表达.结果 膀胱癌5637细胞中CDH13表达下调后细胞形态向间质细胞转变,呈现长梭形,细胞间紧密连接松散,大多数细胞出现细长的丝状伪足;上皮细胞标志物E-钙黏蛋白表达减少(P＜0.05),间质细胞标志物N-钙黏蛋白和α-平滑肌动蛋白表达增加(P＜0.05),与对照组相比差异有统计学意义.结论 膀胱癌细胞中CDH13表达下调促进肿瘤细胞向间质细胞转化.
