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葡萄糖氧化酶诱导的氧化应激抑制α4β2烟碱型乙酰胆碱受体电流
目的 探究葡萄糖氧化酶(GO)引起的氧化应激对α4β2烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)电流的影响.方法 在HEK293T细胞共转染α4和β2质粒48 h后进行实验.分为对照组(control组)、3.5 kU/L的GO处理组(GO组)、3.5 kU/L的GO与450 kU/L的过氧化氢酶(CAT)共处理组(CAT组).使用DCFH-DA荧光探针以及激光共聚焦显微镜来检测活性氧(ROS)的产生;采用全细胞膜片钳检测α432 nAChR的电流变化,给予1、10和30 μmol/L ACh检测受体功能,给予10 μmol/L ACh检测电流变化.结果 全细胞膜片钳记录到呈ACh剂量依赖性的电流;GO处理HEK293T细胞1h后可显著地增强细胞活性氧的水平(P ＜0.001);对照组电流在10次给药中均保持稳定,GO组的电流在连续10次的ACh给药下逐渐降低(P＜0.01);CAT组反转GO引起的α4β2 nAChR电流下降(P＜0.01).结论 GO引起的氧化应激状态导致α4β2 nAChR电流逐渐下降,α4β2 nAChR电流的下降与ROS的增多密切相关.
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多杀菌素及其抗药性机制研究进展
介绍了昆虫对多杀菌素的抗性发展情况，从生理生化机制、分子水平方面总结了多杀菌素的抗性机制研究进展，昆虫对多杀菌素的抗性机制至今尚未明确，研究其抗性机制，延缓抗性发展，具有重要意义。
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1例表现为重症肌无力的脑干脱髓鞘病变
重症肌无力是临床较常见的自身免疫性肌肉疾病,是由于神经肌肉接头处的烟碱型乙酰胆碱受体受到自身抗体的攻击而破坏所致,表现为横纹肌波动性无力,休息时或应用胆碱酯酶抑制剂后好转,运动时加重,常累及眼外肌、咀嚼肌、咽喉肌、四肢肌和呼吸肌.
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针刺对重症肌无力患者血浆雌二醇和睾酮的影响
重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是目前比较公认的神经系统自身免疫性疾病.致敏抗原为烟碱型乙酰胆碱受体(n-AChR),约80%左右的患者可检测到抗n-AChR抗体[1].MG患者多见于育龄期女性,约占1/2～2/3[2],女性发生MG危象者亦比男性多,提示女性激素在MG发病机制中有一定作用.我们应用放射免疫法检测针刺治疗MG前后血浆睾酮(Te)和雌二醇(E2)含量的变化,旨在探讨针刺治疗MG获效的机制.
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CHRNA5-A3-B4基因簇与吸烟行为及肿瘤发生关系的研究进展
烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)是细胞膜上超家族配体门控离子通道受体,依赖尼古丁及其代谢产物的活性,激活各种代谢通路.这些代谢通路与肿瘤细胞的增殖、生存、迁移、侵袭、凋亡和血管生成有密切的联系,而CHRNA5-A3-B4是编码nAChRα5、α3和β4亚基的一组基因簇.研究证实,CHRNA5-A3-B4基因的多种单核苷酸多态性(SNP)与肿瘤的发生发展相关,这种突变的多样性,促进了更为主效的基因位点的探索,为肿瘤的靶向治疗提供依据.本文结合相关研究,从肺癌、食管癌及其他相关肿瘤疾病的发生来阐述CHRNA5-A3-B4相关SNP基因位点,以便获取主效基因位点.
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加兰他敏治疗阿尔茨海默病的作用机制
加兰他敏是一种从石蒜科植物中提取的菲啶类生物碱,具有多重作用机制:作为一种可逆性的胆碱酯酶抑制剂,能增加神经肌肉突触间隙内乙酰胆碱的浓度;作为变构增强配体可使烟碱型乙酰胆碱受体(nico-tinic acetylcholine receptor,nAChR)活化,具有神经保护功能;可作用于淀粉样前体蛋白的代谢途径,减少β淀粉样蛋白(Aβ)的生成;同时,加兰他敏还具有疾病调节作用,能抑制Aβ的聚集和/或毒性.现就加兰他敏在治疗阿尔茨海默病中的作用机制进行综述.
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作用于烟碱型胆碱受体激动剂的研究进展
烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)是一些药物重要的作用靶点,烟碱作为此受体的激动剂,在药物研究中已有多年的历史.近年来,具有强效镇痛活性的生物碱地棘蛙素的发现激起了全球生物学家、化学家和药物学家的广泛兴趣,使烟碱型乙酰胆碱受体的研究成为近年的一个热点.烟碱受体已被发现与许多人类重大疾病和病理生理现象如帕金森氏症、早老性痴呆、疼痛等的发病机制有密切关系.各个领域的研究人员正致力于从分子水平上对烟碱受体及其对人体的生理病理的调控作用进行研究.文献中报道了大量的对烟碱受体有一定激动作用的化合物,其中一些化合物的生物活性显著,正在作为新药开发的先导物而被不断深入地研究.
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α3(S147T)*乙酰胆碱受体突变型功能模型的建立
目的 构建包含α3亚基的烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs)点突变型,优化受体突变的方法,并利用nAChRs的激动剂乙酰胆碱(acetycholine,ACh)对突变型的功能进行研究.方法 利用聚合酶链反应(PCR)介导的定点突变技术,设计引物并以大鼠nAChRsd3亚基的基因作为模版,获得α3亚基基因的点突变体,通过体外转录获得α3亚基突变体的cRNA.利用非洲爪蟾卵母细胞表达系统和双电极电压钳技术,对含有α3亚基点突变的2种受体亚型的表达情况进行检测.同时利用ACh对受体突变型的门控特性进行检测.结果 成功建立了α3亚基第147位丝氨酸(serine,Ser,S)的突变体模型,激动剂ACh对野生型α3β2 nAChR和α3β4 nAChR的半数有效浓度(EC50)分别为55.33和163.00 μmol·L-1,对突变型α3(S147T) β2 nAChR、α3 (S147T) β4 nAChR的EC50分别为33.10和121.10 μmol·L-1.结论 将α3亚基第147位Ser突变成苏氨酸(threonine,Thr,T)后,成功建立了2个具有功能型的突变体.α3亚基点突变受体模型的成功建立,可为研究药物与α3* nAChR相互作用的分子机制提供功能模型和研究基础,也可为更多受体突变型的建立提供方法借鉴.
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从电鳐电器官中提取N2-AchR纯品建立EAMG模型
目的 从厦门海域单鳍电鳐的电器官中提取烟碱型乙酰胆碱受体(N2-AchR)纯品,用纯化的N2-AchR 免疫Lewis大鼠,建立实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型.方法 参照文献报道[1-2]从电鳐电器官提取N2-AchR纯品,并采用SDS凝胶电泳蛋白定性鉴定及考马斯亮兰定蛋白含量;以纯提的蛋白主动免疫Lewis大鼠,共免疫3次,于末次免疫后第3日进行EAMG大鼠临床评分及攀网时间、肌电图、血清Nz-AchRab含量、突触后膜上N2-AehR数目的 检测.结果 纯化的蛋白含量为1.097m咖l(标准品为1mg,ml);EAMG模型组与佐剂组比较,攀网时间明显降低(p<0.01);临床评分及肌电图第五个反应幅度衰减百分率显著升高(P<0.01);血清N2-AchRab含量明显增加(P<0.01);突触后膜上Nr-AchR数目显著减少(P<0.01).结论 从单鳍电鳐电器官纯提的Nz-AchR蛋白成功诱导EAMG模型,为进一步研究重症肌无力创造了良好条件.
关键词： 实验性自身免疫性重症肌无力 烟碱型乙酰胆碱受体 电鳐 -
吡虫啉对原代培养的大鼠海马神经元的影响
吡虫啉是一种新型的高效硝基亚甲基类内吸杀虫剂,作用于昆虫神经系统的烟碱型乙酰胆碱受体(nAchR)[1].吡虫啉对实验动物的急、慢性毒性研究已有报道[2],但其对神经系统的影响国内尚未见报道.为探讨吡虫啉对中枢神经系统的作用,我们研究了吡虫啉对原代培养的大鼠海马神经元的影响.
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免疫吸附法治疗重症肌无力的研究进展
重症肌无力(myasthenia gravis,MG)为累及神经肌肉接头处突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAchR),由乙酰胆碱受体抗体介导的细胞免疫依赖性补体参与的自身免疫性疾病.
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Ryanodine受体抗体与重症肌无力
重症肌无力(myasthenia gravis MG)是一种与神经肌肉接头处突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体损害有关的自身免疫性疾病.85%的MG体内可检测到AchR-Ab.在临床上,另有15%的MG患者血清内未检测到AchR-ab, 这些患者被称为抗体阴性的重症肌无力(SNMG),而且MG病人中AchR-ab常与病情严重程度不成比例,说明,在重症肌无力的发病机制中,除AchR-ab外,还存在其它抗体或分子.
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雌激素对穹隆海马伞切断大鼠脑内nAchR的干预作用
目的以双侧穹隆-海马伞切断制作阿尔茨海默病(AD)大鼠模型,观察脑内海马CA1区和皮层区烟碱型乙酰胆碱受体(nAchR)表达的变化,探讨与AD相关的发病机制,并观察雌激素的干预作用.方法健康雌性Wistar大鼠,随机分为3组:(1)穹隆-海马伞切断组;(2)雌激素治疗组;(3)假手术对照组;每组大鼠5只.在脑立体定位仪上切断穹隆-海马伞,建立模拟AD动物模型.应用免疫组织化学技术观察AD大鼠海马CA1区和皮层区的nAchR阳性细胞表达的变化,以及应用外源性雌激素的干预作用.结果与对照组大鼠脑内nAchR表达比较,穹隆-海马伞切断组大鼠脑内海马CA1区、皮层区nAchR表达显著减少(P＜0.05);与穹隆-海马伞切断组比较,雌激素治疗组海马CA1区、皮层区nAchR表达显著增加(P＜0.01),但与对照组比较无显著差异(P＞0.05).结论穹隆-海马伞切断组大鼠脑内海马CA1区、皮层区nAchR的阳性细胞显著减少,补充外源性雌激素治疗后,上述各脑区内的nAchR表达显著增加.nAchR的变化与AD的病理变化过程密切相关,补充雌激素可以干预这种病理过程.
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非神经乙酰胆碱系统及烟碱型乙酰胆碱受体在免疫活性细胞的表达和作用
长期以来，认为是副交感的末端释放乙酰胆碱作用于免疫细胞的乙酰胆碱受体（ Acetylcholine receptor AChRs）。但乙酰胆碱迅速被血液中乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶水解为胆碱和乙酸盐，没有证据表明免疫细胞直接受到的神经支配，胆碱能神经末端不可能释放足够的乙酰胆碱作用到免疫细胞表达的AChRs。尽管很早就在公牛的血液中发现乙酰胆碱（ Acetylcholine ACh ），由于缺乏敏感和有效的检测手段，加之ACh的不稳定性，不能确切证明不同种属的动物血液中存在 ACh。 Kawashima ［1］等使用敏感和特异的放射免疫技术，明确证实ACh存在于一系列哺乳动物，包括人的血液细胞中，且定位于单核淋巴细胞。放射同位素标记研究，在淋巴细胞、胸腺细胞等免疫活性细胞上，存在着烟碱型乙酰胆碱受体（ nicotinic acetylcholine receptors nAChRs）［2］。越来越多的证据表明，血液中免疫细胞释放ACh ，并且表达不同亚型nAChRs。兴奋烟碱受体可以导致免疫活性细胞功能和生化改变。免疫细胞存在非神经乙酰胆碱能系统，并且调节免疫功能。本文综述免疫细胞表达 ACh，乙酰胆碱酯酶（ Acetylcholinesterase AChE ），不同亚型的烟碱型乙酰胆碱受体，以及如何它们在免疫调节方面发挥作用。
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烟碱型乙酰胆碱受体亚单位a5基因多态性与吸烟老年人肺癌的关系
目的 探讨烟碱型乙酰胆碱受体亚单位a5(CHRNA5)-rs 17486278位点基因多态性与吸烟老年人肺癌的关联性.方法 采用病例对照研究方法,以216例吸烟老年原发性肺癌患者为病例组,以639例吸烟老年健康体检者为对照组,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)检测CHRNA5-rs 17486278位点基因多态性,结合两组人群的健康资料,分析CHRNA5-rs 17486278位点基因多态性与肺癌的关联性.结果 Logistic回归分析结果显示吸烟年限、每天吸烟量、合并肺部疾病和营养认知行为是吸烟老年人肺癌发生的影响因素(P<0.05);AC和CC基因型、C等位基因频率与原发性肺癌存在一定关联性(OR=1.701,95％CI:1.047～2.764;OR=1.656,95％CI:1.150～1.949;OR=1.676,95％CI:1.194～2.353);条件Logistic回归分析显示吸烟年限、每天吸烟的量与CHRNA5-rs 17486278位点基因多态性之间联合作用对肺癌发生的影响无统计学意义(P>0.05).结论 CHRNA5-rs 17486278位点基因多态性与吸烟老年人原发性肺癌发生有关,吸烟行为可增加CHRNA5-rs 17486278位点基因突变的风险,增加吸烟老年人原发性肺癌发生的风险.
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α7 nAChR在上皮组织的表达及其功能的研究进展
α7 nAChR是配体门控离子通道蛋白超家族的典型代表,烟碱型乙酰胆碱受体的一个重要亚型,是复杂的五聚体跨膜蛋白,介导Na+、Ca2+流入,K+流出,尤以对Ca2+通透性高.α7 nAChR分布广泛且功能多样,不仅分布于中枢和外周神经系统,介导神经元的快速突触传递,其在许多非神经元细胞和组织中亦有表达,包括内皮细胞,支气管上皮细胞,皮肤角蛋白细胞,膀胱上皮细胞,血管平滑肌等,并参与其功能调节及功能障碍相关疾病的病理生理过程,如可调节细胞质运动和细胞间黏附,细胞增殖,血管生成以及肿瘤的侵袭和迁移.本文主要介绍烟碱型乙酰胆碱受体α7亚型在不同胚层来源的上皮组织细胞中的表达及其功能特征,以期通过激活或抑制α7 nAChR的表达来降低与其密切相关疾病的发生率.
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烟碱型乙酰胆碱受体及其神经保护作用
新近研究证实,神经元烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)激动后可起到一定的神经保护作用.目前,一些作用于烟碱受体的激动剂已被作为治疗神经退行性疾病如阿尔茨海默病(AD)和帕金森病(PD)的候选药物,但是关于烟碱受体激动后如何发挥神经保护作用及其潜在的分子机制还不清楚,其中有与Ca2+相关的信号转导假说以及神经营养因子等假说.本文就烟碱型乙酰胆碱受体及其神经保护作用的研究进展予以综述.
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第二讲受体的克隆
本文较详细地描述了如何从传统的蛋白质化学出发,结合操作核酸的分子生物学技术,来对烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)的亚基进行克隆和测序.这是第一次利用这种技术来克隆神经递质受体,在这经典克隆策略后,又发展了同源克隆策略和表达克隆策略.为了解这项工作是怎样完成的,先介绍一下分子生物学家所用的有关基本技术.
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烟碱型乙酰胆碱受体亚型的表达调控及其生理意义
位于哺乳动物神经肌肉接头突触后膜上的烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)直接参与神经肌肉之间兴奋传递,对肌肉完成正常收缩功能具有十分重要的意义.nAChR是一种杂合五聚体蛋白,按亚单位组成的不同分为成熟型受体ε-AChR(α2βεδ)和胚胎型受体γ-AChR (α2βγδ).本文主要对两者在表达时期、分布范围、调控机制和生理意义方面的差异进行综述.
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烟碱型乙酰胆碱受体对人肺腺癌细胞生长和凋亡的影响
目的:研究烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)激动剂和拮抗剂对人肺腺癌A549细胞生长和凋亡的影响.方法:将A549细胞随机分成对照组、激动剂组和拮抗剂组,分别加入PBS、激动剂(10-3,10-4,10-5mol/L)、拮抗剂(10-3,10-4,10-5 mol/L)作用细胞24,48,72 h;MTF筛选出nAChR激动剂和拮抗剂作用细胞的佳浓度和时间点;RT-PCR法检测α7nAChR基因的表达,Tunel检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测Caspase-9,Bax和Bcl-2表达.结果:A549细胞株稳定表达α7 nAChR,与对照组相比,拮抗剂组α7nAChR基因表达明显减少,激动剂组增强;与对照组相比,拮抗剂各浓度组48 h细胞的增殖明显抑制(P＜0.01),且10-3 mol/L细胞增殖抑制明显强于10-5 mol/L(P＜0.05);10-3 mol/L激动剂作用A549细胞48 h后细胞增殖明显增强(P＜0.01).Tunel检测结果显示,拮抗剂组细胞凋亡明显多于激动剂组和对照组(P＜0.01),而激动剂组与对照组比较差异无统计学意义;与对照组相比,拮抗剂组α7nAChR表达降低,促凋亡蛋白Caspase-9,Bax表达增加,Bcl-2表达降低;激动剂组反之.结论:α7nAChR激动剂和拮抗剂分别与肺腺癌A549细胞增殖及凋亡密切相关,其中细胞凋亡可能与拮抗剂激活机体的Bax/Bcl-2和Caspase家族有关.
