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下调长链非编码RNA PVT1表达对胰腺癌BxPC-3细胞凋亡、侵袭及转移的影响
目的 研究下调长链非编码RNA PVT1的表达对胰腺癌细胞增殖、凋亡及侵袭转移能力的影响.方法 体外转染PVT1干扰序列siPVT1-1和siPVT1-2降低胰腺癌细胞系BxPC-3 PVT1表达,同时转染阴性对照siPVT1-NC作为对照组.CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭转移;qRT-PCR检测E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、vimentin和PVT1 mRNA表达;Western blot检测凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、caspase-3)和上皮间质转化相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、vimentin)表达.结果 下调胰腺癌细胞BxPC-3 PVT1表达能明显抑制细胞增殖、促进细胞凋亡和减少细胞侵袭转移数目(P＜0.05);E-cadherin蛋白和分子水平升高,N-cadherin、β-catenin、vimentin蛋白和分子水平降低(P＜0.05);Bax和caspase-3蛋白水平升高,而Bcl-2蛋白水平降低(P＜0.05).结论 下调长链非编码RNA PVT1表达能抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭转移能力,促进胰腺癌细胞凋亡,且能够逆转胰腺癌细胞上皮间质转化.
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Hsa_circ_PVT1在肝细胞癌中的表达及意义
目的 探讨人肝细胞癌(HCC)中circ-PVT1的表达及其对肝癌细胞增殖的影响,并探讨其临床意义.方法 利用RT-qPCR技术检测46例人肝癌组织/癌旁组织中circ-PVT1的表达水平,并且分析病理指标与其表达水平的关系;体外培养人正常肝细胞系(L02)、人肝癌细胞系(HepG2、SMMC-7721、MHCC-97H、MHCC-97L、HCC-LM3),利用RT-qPCR技术检测circ-PVT1的表达水平.利用脂质体转染技术体外转染si-circPVT1,敲低circ-PVT1在HepG2、SMMC-7721细胞系中的表达量,同时设置阴性对照组,通过CCK-8实验、EdU实验检测干扰circ-PVT1表达对肝癌细胞增殖的影响;采用流式细胞术观察干扰circ-PVT1表达对肝癌细胞周期的影响.结果 circ-PVT1在人肝癌组织中表达量明显高于癌旁组织(P＜0.001),且其表达水平与肿瘤大小、TNM分期及分化程度相关;同样,肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、MHCC-97H、MHCC-97L、HCC-LM3中circ-PVT1表达水平也明显高于正常肝细胞系L02(P＜0.05);与阴性对照组比较,circ-PVT1干扰组HepG2及SMMC7721的增殖能力明显降低.结论 在人HCC的诊断中,circ-PVT1可能作为一种潜在的生物标志物予以应用,并且可能成为一种新型的增殖因子.
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shRNA干扰长链非编码RNA PVT对甲状腺乳头状癌IHH-4细胞增殖、凋亡和周期的影响
目的:探究沉默长链非编码RNA PVT1对甲状腺乳头癌IHH-4细胞增殖、凋亡和周期的影响.方法:慢病毒转染PVT1 shRNA(sh-PVT1),RT-PCR检测PVT1的表达,CCK8检测细胞增殖倍数,流式检测细胞凋亡及细胞周期,Western blot检测细胞Ki67、Caspase-3和Cyclin A的表达;复制裸鼠甲状腺乳头状癌肿瘤移植模型,记录肿瘤生长情况,Western blot检测肿瘤组织Ki67、Caspase-3和Cyclin A的表达.结果:sh-PVT1转染细胞24 h后,IHH-4细胞PVT1的表达水平明显降低(P<0.01);转染细胞4 d后,细胞增殖倍数显著降低,增殖标志蛋白Ki67表达明显被抑制(P<0.05,P<0.01);同时,sh-PVT1能显著升高IHH-4细胞凋亡率,诱导凋亡标志蛋白Caspase-3表达(P<0.01);此外,sh-PVT1还可诱导细胞G2/M期阻滞,抑制周期蛋白Cyclin A的表达(P<0.05,P<0.01).干扰PVT1表达能显著抑制甲状腺乳头瘤生长(P<0.01),下调肿瘤组织Ki67和Cyclin A的表达水平(P<0.01),诱导Caspase-3表达(P<0.01).结论:沉默PVT1表达能显著抑制甲状腺乳头癌IHH-4细胞增殖且诱导细胞凋亡和周期阻滞.
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长链非编码RNA－PVT1在人胃癌组织中的表达及临床意义
目的：检测胃癌组织长链SK编码RNA（ lncRNAs）的表达，寻找新的胃癌标记物和治疗靶点。方法首先使用lncRNAs表达芯片筛选胃癌组织中高表达的lncRNAs，寻找靶lncRNA。使用qPCR在较大胃癌样本中对筛选的靶lncRNA进行验证，并寻找靶lncRNA与胃癌临床特征的相关性。结果胃癌lncRNAs芯片检测显示PVT1在胃癌组织高表达。使用qPCR进行临床较大样本检测发现：PVT1在胃癌组织表达明显高于癌旁组织，PVT1在胃癌组织中高表达与淋巴结转移相关（ P＜0．05）。结论 PVT1在胃癌组织中高表达，可以作为新的胃癌标记物，有希望成为胃癌治疗新的靶点。
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长链非编码RNA-PVT1在人胃癌组织中的表达及临床意义
目的 检测胃癌组织长链SK编码RNA(lncRNAs)的表达,寻找新的胃癌标记物和治疗靶点.方法 首先使用lncRNAs表达芯片筛选胃癌组织中高表达的lncRNAs,寻找靶lncRNA.使用qPCR在较大胃癌样本中对筛选的靶lncRNA进行验证,并寻找靶lncRNA与胃癌临床特征的相关性.结果 胃癌lncRNAs芯片检测显示PVT1在胃癌组织高表达.使用qPCR进行临床较大样本检测发现:PVT1在胃癌组织表达明显高于癌旁组织,PVT1在胃癌组织中高表达与淋巴结转移相关(P＜0.05).结论 PVT1在胃癌组织中高表达,可以作为新的胃癌标记物,有希望成为胃癌治疗新的靶点.
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肿瘤高扩增区域上的lncRNA-PVT1研究进展
随着科技的快速发展,全基因组测序技术已经证实了许多非编码RNA可以参与肿瘤的发生发展.然而,相较于短链非编码RNA的大量研究,长链非编码RNA的功能仍存在更大的未知性.PVT1,一个长链非编码RNA,由人类PVT1基因编码,位于染色体8q24这个与肿瘤相关的“基因沙漠区”.该lncRNA在肿瘤中已被证实存在3种作用机制,即参与DNA的重排,编码microRNA以及与MYC互作调控其稳定性.双微体是基因的主要扩增形式之一,可承载多种致癌基因以及耐药基因,PVT1位于多种细胞系的双微体上.针对PVT1与肿瘤的研究表明,PVT1在多种肿瘤中都是潜在的致癌基因.然而,其在肿瘤中的分子机制尚未明确.
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LncRNA-PVT1对人胰腺癌细胞株 HPAF-Ⅱ增殖和凋亡的影响
背景：近年来，长非编码 RNA（lncRNAs）在肿瘤发生、发展中的作用日益受到重视。研究发现 lncRNA-PVT1在多种人类恶性肿瘤中表达上调并发挥促癌作用。目的：探讨 PVT1在人胰腺癌细胞中的表达及其对 HPAF-Ⅱ细胞增殖和凋亡的影响。方法：以脂质体转染技术将 siRNA-PVT1转染入 HPAF-Ⅱ细胞；以 real-time PCR 检测 PVT1 mRNA 表达，MTS 实验和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力，流式细胞分析检测细胞周期和细胞凋亡，蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白和原癌基因蛋白 c-Myc 表达。结果：以人永生化正常胰腺导管上皮细胞株 H6c7作为对照，各人胰腺癌细胞株中以 HPAF-Ⅱ细胞 PVT1 mRNA 表达升高为明显。与转染阴性对照 siRNA 和未予转染 siRNA的细胞相比，转染 siRNA-PVT1的 HPAF-Ⅱ细胞 PVT1 mRNA 表达显著降低，细胞增殖能力减弱，发生细胞周期 G1期阻滞并出现凋亡峰，细胞中凋亡相关蛋白 cleaved-caspase-3、cleaved-PARP 表达上调，Bcl-2/ Bax 比值降低，c-Myc蛋白表达下调。结论：LncRNA-PVT1在人胰腺癌细胞株 HPAF-Ⅱ中呈高表达，其可能通过调控 c-Myc 表达影响HPAF-Ⅱ细胞的增殖和凋亡。
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外源性干扰 PVT1表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响
目的：外源性干扰PVT1表达对结直肠癌（CRC）细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法体外转染小干扰RNA（siRNA）干扰RKO和HCT116细胞PVT1表达（si‐PVT1组）；另设阴性对照siRNA（si‐NC）组。MTT实验和克隆形成实验检测 RKO和 HCT116细胞增殖力，Transwell实验检测RKO和HCT116细胞侵袭力，qRT‐PCR及Western blot检测相关抑癌基因SMAD4的表达。结果与si‐NC组相比，si‐PVT1组RKO和HCT116细胞增殖力抑制（P＜0．05或P＜0．01），细胞克隆数减少（P＜0．01），细胞侵袭数目减少（P＜0．05或P＜0．01），且SMAD4 mRNA和蛋白表达水平均升高（P＜0．05）。结论 PVT1能促进CRC细胞增殖和侵袭，抑制CRC细胞凋亡。
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LncRNA PVT1与恶性肿瘤治疗的研究进展
长链非编码RNA-PVT1(lncRNA PVT1)作为一种重要的致癌性非编码RNA在多种恶性肿瘤呈现高表达并提示不良预后,其通过影响肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡促进肿瘤的发生发展.目前大量的研究表明lncRNA PVT1在多种肿瘤中具有致癌活性或驱动作用,比如以竞争性内源RNA或作为“分子海绵”负性调控肿瘤相关miRNA的表达促进肿瘤发生等,因此,基于lncRNA PVT1在肿瘤发病中的关键作用,进一步的深入研究有望为恶性肿瘤提供新的治疗靶点.
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卵巢癌新辅助治疗对lncRNA差异表达的影响
目的 探究卵巢癌新辅助治疗对lncRNA差异表达的影响.方法 采用定量实时聚合酶链反应分析ln-cRNA PVT1在卵巢癌和相邻非肿瘤组织中的表达水平.Kaplan-Meier生存分析PVT1表达与患者生存率的相关性.单因素和多因素Cox回归分析PVT1表达的预后意义.结果 相比邻近非肿瘤组织,PVT1在卵巢癌组织中的表达显著增强.PVT1表达与临床分期和N分级(P<0.05)有关.高PVT1表达水平患者总生存时间较短.单因素和多因素Cox回归分析表明,PVT1可能是总体生存率较低患者的独立预后因素(P<0.05).结论 lncRNA PVT1在卵巢癌组织中的表达与肿瘤进展相关,PVT1可作为一个潜在的分子生物标记物,用于预测卵巢癌患者的预后.
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长链非编码 RNA PVT1在肾癌组织中的表达及意义
目的：探讨长链非编码RNA PTV1在肾癌组织的表达及意义。方法收集54例肾癌患者的癌组织，并选取距离肿瘤边缘2 cm以上（镜下未见癌细胞）的癌旁组织作为对照；提取总RNA、反转录获得cDNA后，采用Re-al-time PCR法检测肾癌及癌旁组织PTV1的相对表达量；分析肾癌组织PTV1的相对表达与患者临床病理特征及预后的关系。 MTT方法检测肾癌细胞增殖水平、流式细胞术检测细胞凋亡率的改变。结果肾癌组织与癌旁组织PVT1的相对表达量分别为6．22±0．71和2．26±0．36，肾癌组织明显高于癌旁组织（P＜0．05）。54份肾癌组织PVT1高表达39份，低表达15份，肾癌组织PTV1相对表达与患者淋巴结转移和TNM分期相关（P均＜0．05），与性别、年龄及病理类型未见相关性（P均＞0．05）。肾癌组织PVT1高表达与低表达者总体生存时间分别为（47．9±9．4）、（67．2±3．8）个月，PTV1高表达者的总体生存时间明显低于PTV1低表达者（P＜0．05）。体外786-0肾癌细胞转染PVT1 siRNA，肾癌细胞增殖活性明显降低、凋亡率明显增高（P均＜0．05）。结论 PVT1可能通过影响肾癌细胞增殖与凋亡促进肾癌的发生、发展，可作为潜在的肾癌治疗新靶点。
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长链非编码RNA PVT1在肿瘤中的作用研究进展
长链非编码RNA (lncRNA)是长度超过200个核苷酸的不具有编码蛋白质功能的RNA,在调控细胞增殖和分化中发挥重要作用.研究发现,lncRNA PVT1在多个恶性肿瘤中表达上调,而且其基因位点与癌基因myc相邻.虽然PVT1参与肿瘤发生发展的具体分子机制仍不清楚,但PVT1因其基因位点特殊性和表达的时空特异性而受到了广泛关注.
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叶氏糖肾方对糖尿病肾病小鼠长链非编码RNA PVT1表达的影响
目的 考察叶氏糖肾方对糖尿病肾病(DN)小鼠肾功能的保护作用,以及对其浆细胞瘤变体易位1(PVT1)基因表达的调控作用.方法 将48只ICR小鼠随机分为正常组(8只)、模型组及糖肾方高、中、低剂量组(10只/组).除正常组外,小鼠给予ip链脲佐菌素(STZ)造模,分别于造模前、造模后2周及处死前测定小鼠随机血糖及24 h尿蛋白量;造模后8周收集血清、摘取肾脏,用生化分析法测定血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)含量,用酶联免疫吸附(ELISA)法测定肾脏T转化生长因子-β1(TGF-β1)、1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的水平,用qPCR法检测肾脏PVT1的基因表达情况.结果 与正常组比较,模型组小鼠各项指标显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);经糖肾方干预后,小鼠血糖、24h尿蛋白量、BUN、Scr、TGF-β1水平显著降低,差异有统计学意义(JP＜0.05);糖肾方高、中剂量组小鼠PAI-1水平显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);经糖肾方干预后,PVT1基因表达明显下调,中剂量组作用尤为显著(P＜0.05).结论 叶氏糖肾方具有降低DN小鼠血糖、减少蛋白尿,保护肾功能的作用,其机制可能与通过减少PVT1的基因表达,下调细胞因子TGF-β1、PAI-1的水平,进而减少ECM堆积有关.
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LncRNA-PVT1在巨噬细胞炎症反应中的表达及与炎症基因相关性研究
目的:研究长链非编码RNA(LncRNA)PVT1在LPS诱导THP-1源巨噬细胞炎症反应中的表达及其与炎症基因表达相关性,推测lncRNA-PVT1在脓毒症急性肺损伤炎症反应中的可能作用.方法:通过LPS刺激THP-1源巨噬细胞产生炎症反应造模,利用RT-qPCR检测,比较不同刺激浓度(0、0.5、5.0μg/ml,8 h)下各组细胞中lncRNA-PVT1及TNF-α、IL-1βmRNA表达情况.结果:与对照组相比,IL-1β 及TNF-αmRNA在LPS不同刺激浓度下,均表达上调,且具有统计学差异(均P<0.05).随着刺激浓度增加,IL-1β及TNF-αmRNA表达量上升,呈浓度依赖,在LPS 5.0μg/ml作用8 h下,IL-1β 及TNF-αmRNA表达量达峰值.与对照组相比,在5.0μg/ml LPS组中lncRNA-PVT1表达明显上调,具有统计学差异(P<0.0001).相关性分析发现5μg/ml LPS刺激8 h后,THP-1源巨噬细胞中lncRNA-PVT1相对表达量分别与IL-1β 及TNF-αmRNA相对表达水平呈正相关(分别为R2<0.6134,P=0.0125;R2<0.7825,P=0.0015).结论:LncRNA-PVT1在LPS致THP-1源巨噬细胞炎症反应中高表达,且与TNF-α及IL-1βmRNA表达呈正相关,提示该lncRNA-PVT1在脓毒症急性肺损伤炎症反应中可能起重要作用.
关键词： 急性肺损伤 脓毒症 长链非编码RNA PVT1 THP-1源巨噬细胞 -
长链非编码RNAPVT1对膀胱癌细胞株UMUC-3增殖、凋亡细胞周期作用研究
目的:探讨长非编码RNAPVT1对人膀胱癌细胞UMUC-3增殖及转移相关的生物学行为的影响.方法:通过组织RNA研究,讨论PVT1在膀胱癌组织中的差异;将si-PVT1转入人膀胱癌细胞UMUC-3,并设立对照组;通过qRT-PCR检测si-PVT1的转染效率;MTS试验研究沉默PVT1对细胞增殖的影响;流式细胞技术检测沉默PVT1对细胞凋亡及周期的影响;Western-blot检测肿瘤增殖、凋亡及周期蛋白的影响.结果:组织中,qRT-PCR证实在膀胱癌组织中,PVT1的表达量较癌旁组织高;qRT-PCR检测si-PVT1,实验组表达量明显降低;细胞增殖实验表明沉默PVT1后细胞增殖变慢;流式细胞技术表明沉默PVT1后细胞凋亡增加,细胞周期阻滞在G0/G1期;沉默PVT1后,细胞的Bax蛋白表达升高,周期蛋白CyclinD1表达降低,同时EGFR表达降低.结论:PVT1可作为膀胱癌的候选分子标志.沉默长链非编码RNAPVT1可以抑制膀胱癌细胞的增殖、凋亡和细胞周期.
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长链非编码RNA-PVT1在顺铂诱导DNA损伤修复中的作用机制
目的 研究长链非编码RNA-PVT1对顺铂诱导DNA损伤修复的影响及其作用机制.方法 建立顺铂诱导非小细胞肺癌细胞株A549细胞DNA损伤模型,用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PVT1表达.通过siPVT1沉默A549细胞中PVT1表达,用qRT-PCR和Western blot检测核苷酸切除修复(NER)相关基因表达.用RNA免疫共沉淀(RIP)检测PVT1与ERCC1相互作用.结果 顺铂处理A549细胞明显下调PVT1表达.沉默PVT1后A549细胞中γH2AX表达显著增高,而NER途径中关键基因如ERCC1、DDB2表达明显降低.RIP实验表明PVT1可与ERCC1蛋白直接相互作用.结论 PVT1可能通过调节NER途径促进顺铂诱导DNA损伤修复.
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长链非编码RNA PVT1沉默对K562细胞增殖的影响
目的 筛选靶向抑制长链非编码RNA(lncRNA)浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)的小干扰RNA(siRNA),并探讨其对人白血病细胞株K562细胞增殖的影响.方法 针对PVT1设计合成PVT1-siRNA1、2、3、4序列及无关对照siRNA(SC-siRNA)序列.利用HiperFect转染试剂将各条siRNA转入K562细胞,实验依此分为siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组、siRNA4组和SC-siRNA组,并设空转组和细胞组.转染后用实时定量RT-PCR检测细胞中PVT1 RNA的相对表达情况,用CCK8法检测细胞增殖情况,用流式细胞仪检测细胞周期.结果 转染24、48 h后siRNA4组PVT1 RNA水平下降,与SC-siRNA组、空转组和细胞组相比差异有统计学意义(P<0.01), 而siRNA1组、siRNA2组和siRNA3组PVT1 RNA水平与细胞组相比差异无统计学意义(P>0.05);转染24、48、72 h后siRNA4组细胞增殖抑制率都增加,与SC-siRNA组和空转组相比差异均有统计学意义(P<0.01);转染48、72 h后siRNA4组出现了G1期阻滞,G1期细胞比例增加,与SC-siRNA组、空转组和细胞组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论 PVT1-siRNA可通过阻滞细胞周期的进展而抑制K562细胞的增殖.
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沉默lncRNA PVT1对鼻咽癌细胞C666-1增殖、侵袭转移的影响
目的 探讨下调长链非编码RNA PVT1(lncRNA PVT1)对鼻咽癌细胞增殖、侵袭转移的影响.方法 采用荧光定量PCR的方法检测PVT1在鼻咽癌细胞中的表达;通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分析转染siPVT1后对鼻咽癌C666-1细胞生长的影响;用Transwell法评估沉默PVT1对C666-1细胞迁移和侵袭能力的影响;荧光定量RT-PCR和Western blot检测上皮间质转化相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Vimentin)表达.结果 PVT1在鼻咽癌细胞中的表达显著升高;下调鼻咽癌细胞C666-1中PVT1表达可抑制细胞生长、迁移和侵袭;并且抑制N-cadherin和Vimentin的表达,升高E-cadherin的表达.结论 下调ln-cRNA PVT1可以抑制鼻咽癌细胞的生长、迁移和侵袭,逆转鼻咽癌细胞上皮间质转化,提示其可作为鼻咽癌治疗的一个潜在靶点.
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长链非编码RNA PVT1对MDA-MB-231细胞增殖和侵袭能力的影响
目的：探讨长链非编码RNA PVT1（lncRNA-PVT1）对于乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖和侵袭的影响。方法构建pcDNA3.1-PVT1表达载体，并将其转染入MDA-MB-231细胞，用实时定量PCR方法检测转染细胞中lncRNA-PVT1的表达，用Edu标记技术检测转染细胞的增殖能力，用Transwell实验检测转染细胞的侵袭能力。结果构建成功的pcDNA3.1-PVT1重组质粒转染入MDA-MB-231细胞后lncRNA-PVT1表达增加；转染细胞的增殖能力增强；转染细胞的侵袭能力增强。结论lncRNA-PVT1能增强MDA-MB-231细胞的增殖和侵袭能力。
