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低氧微环境下胶质瘤干细胞表型的改变与RNA结合蛋白相关
目的 研究低氧微环境下胶质瘤干细胞表型变化与RNA结合蛋白表达之间的关系.方法1% O2的低氧条件培养胶质瘤干细胞U87MG-SLC和GSC5,20% O2为常氧对照.分别利用MTS实验和肿瘤球形成实验检测其增殖能力和自我更新能力;Western blot检测干性相关蛋白和RNA结合蛋白表达水平的变化;通过吸光度扫描进行统计分析.结果 低氧条件下肿瘤干细胞的增殖能力下降(P<0.05),自我更新能力上升(P<0.05),HIF-1α和干性标志物Nestin和SOX2上调(P<0.01;P<0.05).与常氧组相比,低氧组胶质瘤干细胞的多种RNA结合蛋白表达水平发生变化:hnRNPF、UNRIP以及HuD表达水平上调(P<0.05),PCBP2和UNR表达水平下调(P<0.01;P<0.05),而其他RNA结合蛋白(hnRNPK、ADAR1、PCBP1、CIRP、EBP1、eEF1A、PTBP1、PTBP2)表达水平没有显著性变化.结论 低氧微环境下,胶质瘤干细胞的表型变化与RNA结合蛋白hnRNPF、UNRIP、HuD、PCBP2和UNR表达水平相关.
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神经系统RNA结合蛋白Musashi1 RRM1的初步结晶
目的 对Musashi1发挥功能的RRM1结构域进行结晶,得到可用来衍射的蛋白晶体,为之后的结构解析打基础.方法 通过构建Musashi1 RRM1的原核表达载体,并在BL21中表达、纯化高纯度的蛋白质,通过筛选结晶体条件得到蛋白晶体.结果 通过系统筛选和优化晶体生长条件得到了蛋白晶体.结论 MusasM1 RRM1的蛋白晶体质量较好,满足蛋白晶体衍射和数据收集的要求.
关键词： RNA结合蛋白 Musaahi1 RRM1 蛋白表达和纯化 结晶 -
RNA结合蛋白KSRP在急性髓系白血病(AML)M5型细胞中的功能
目的 探讨RNA结合蛋白KSRP在不同类型急性髓系白血病(AML)中的表达,并研究KSRP对AML细胞增殖的调控功能.方法 利用基因表达汇编(GEO)数据集和癌基因组图谱(TCGA)的数据分析KSRP在AML中的表达水平;在人外周血的单核细胞系(THP-1)中利用慢病毒传导分别抑制KSRP的内源表达或者过表达miR-129,检测细胞的增殖和凋亡.结果 KSRP在t(15;17) 型急性早幼粒细胞白血病中低表达,而在混合谱系白血病(MLL)易位的急性单核细胞白血病或急性粒-单核细胞白血病中高表达.抑制内源KSRP的表达后显著抑制了THP-1细胞的增殖(P<0.01)而促进细胞凋亡(P<0.01).过表达 miR-129后促进 THP-1细胞的增殖(P<0.05).结论KSRP通过促进miR-129的加工调控AML-M5型细胞的增殖.
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细胞衰老过程中p16INK4mRNA稳定性调控
细胞衰老是诸多与之相关的基因或信号分子在环境因素作用下表达或修饰改变引起功能改变的“加合”结果.已发现至少上百个基因与衰老相关,但关键衰老相关基因的作用不可或缺.关键衰老相关基因p16INK4对衰老的发生与维持极其重要,探讨其调控机制一直是衰老及相关领域的重要课题.近年来多项研究表明,转录后水平调控,特别是多因素参与的mRNA稳定性调控是细胞衰老过程中p16表达的重要决定因素.
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Musashi-2在恶性血液病发病中作用的研究进展
以往研究发现,Musashi-2(Msi-2)主要通过抑制或激活作用发挥对翻译的必要调节从而调控干细胞群的基因表达,并以此调控干细胞的功能.目前的研究表明,Msi-2可通过不同作用机制参与多种恶性血液病的调控,在多种恶性血液病中异常表达,参与了多种恶性血液病的发生、发展过程.对其在恶性血液病中作用的深入研究,将进一步阐明恶性血液病的发病机制,为恶性血液病的诊治及预后提供新的依据.本文主要就Msi-2的结构与功能及与恶性血液病的关系及其新研究进展作一综述.
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以Rev依赖性凋亡增强HIV-1gp160的抗原性
目的检测Rev(HIV的调控基因)依赖性肿瘤坏死因子受体(TNFR-1)和gp160双重表达质粒pDM128-TNFR-1(pT128)的凋亡诱导功能. 方法采用基因枪转导及流式细胞仪检测新质粒的表达功能. 结果新结构具有特异的选择性表达作用.当Rev存在时,能间接表达TNFR-1,明显诱导HeLa细胞凋亡,使绿荧光细胞百分率非常显著地低于阴性对照(P＜0.01).等质量转染时,TNFR-1表达量少于Hu p60 TNFR-1的pDC302(pT60),故间接表达不及单纯pT60的直接表达,绿荧光细胞百分率显著高于pT60转染组(P＜0.01).培养40?h,才有明显杀伤功能并接近单纯pT60,差异无显著性(P＞0.01).单纯pT128不能直接表达TNFR-1,绿荧光细胞百分率非常显著地高于单纯pT60转染组(P＜0.01),接近阴性对照,培养40?h时差异无显著性(P＞0.01).当AD8或pMD+pRnv存在并表达Rev时,pT128均能表达TNFR-1,杀伤HeLa细胞,绿荧光细胞百分率非常显著地低于阴性对照(P＜0.01).pT128与pRev或AD8转染人正常的角质生成细胞时,能表达TNFR-1,诱导细胞凋亡.培养72?h后,阴性对照和单纯pT128组的绿荧光角质生成细胞数皆显著地超过pT128+pRev和pT128+pAD8组(P＜0.01). 结论 pT128可调控的凋亡诱导保证了HIV DNA疫苗足量的抗原表达、凋亡体形成、APC表型激发及特异性抗凋亡体免疫记忆建立.单纯pT128并不对机体产生明显伤害.此结构还适用于不同类型的HIV抗原表达系统并具有HIV感染细胞杀伤功能,能够方便地在人皮肤中表达抗原,诱导凋亡体形成.可作为HIV DNA疫苗的研究策略之一.
关键词： RNA结合蛋白 Rev反应区 肿瘤坏死因子受体-1 基因枪 流式细胞仪 -
串联MS2衣壳蛋白和MS2特异结合RNA表达载体构建及应用
目的 构建体内研究RNA-蛋白相互作用的表达载体.方法 利用MS衣壳蛋白可与MS2结合位点(MS2bs)RNA特异性结合的特点,通过设计特异引物,构建pcDNA3.0-Flag-2XMS2和pcDNA3.0-12XMS2bs表达载体,以及表达MEG3非编码RNA的表达载体pcDNA3.0-MEG3VI-12XMS2bs.共转染细胞,进行RNA免疫沉淀,所得RNA进行实时定量PCR分析验证.结果 成功构建了pcDNA3.0-Flag-2XMS2和pcDNA3.0-12XMS2bs表达载体,实时定量PCR结果表明,与对照相比能明显富集MEG3V1非编码RNA分子.结论 成功构建了体内研究RNA-蛋白质相互作用的表达载体,为RNA-蛋白相互作用研究提供了新的技术方法.
关键词： MS2衣壳蛋白 RNA-蛋白相互作用 RNA结合蛋白 -
可选择性多聚腺苷酸化的生物学功能
可选择性多聚腺苷酸化（ alternative polyadenylation ， APA）是一种普遍存在于真核生物中的基因调控机制。 APA事件的发生能使一个基因产生多种mRNA转录本，从而增加转录本的复杂度。选择不同的多聚腺苷酸化位点可以使不同的转录本具有不同的编码序列，或具有不同长度的3′端非翻译区（3′untranslated region，3′UTR）。不同长度的3′UTR可引起RNA结合蛋白或微小RNA（ miRNA）的结合位点发生变化，进而影响mRNA的稳定性、定位和翻译效率。近年来，APA的研究涉及APA的形成过程、调控APA的机制以及APA对生物学过程和疾病的影响。该文对APA的上述研究进展进行了综述。
关键词： 可选择性多聚腺苷酸化 基因调控 RNA结合蛋白 微小RNA 肿瘤 -
RNA结合蛋白LIN28的研究进展
RNA结合蛋白(RBP)是决定细胞分化、活动力和其他过程的调节子.LIN28是一种高度保守的RBP,在线虫和高等物种中有着复杂的调节机制和表达方式.它对微小RNA表达的调节、骨髂肌及心肌分化、肿瘤形成、多潜能诱导等多种发育的重要事件中起关键作用.本文就LIN28的研究进展予以综述.
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细菌RNA结合蛋白Hfq研究进展
Hfq蛋白是细菌中重要的转录后调控子,参与调节细菌的生长、代谢、压力环境适应能力等多种生命活动,影响细菌的多种生理代谢过程.在致病菌中,Hfq蛋白与细菌的毒力密切相关.Hfq主要通过结合RNA来影响其稳定性,或者是通过辅助非编码小RNA(sRNA)与mRNA结合来调节靶基因的表达.文章对Hfq在致病菌中的作用及寻找Hfq靶标RNA的研究方法进行了综述,以期为Hfq的功能研究奠定基础.
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紫外交联实验筛选HCV RNA结合蛋白的应用
目的选择一种用于筛选与丙型肝炎病毒(HCV)RNA核心区结合的细胞蛋白质分子较佳方法.方法用体外转录的方法制备地高辛标记(DIG)-HCV RNA;从HepG2细胞中提取细胞蛋白质分子.分别用紫外交联实验(UV)和凝胶迁移实验(EMSA)筛选HepG2细胞中可与HCV RNA结合的蛋白质分子.结果 2种实验方法均可检测到细胞蛋白质分子与HCV RNA结合,但凝胶迁移实验结果所见DIG-RNA信号比较弥散,而紫外交联实验的结果可见比较清晰的RNA-结合蛋白条带.结论紫外交联实验是用于筛选HCV-RNA结合蛋白的首选方案.
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RNA结合蛋白MOV10在阿尔茨海默病人脑组织及细胞中的表达及意义
目的 探讨RNA结合蛋白MOV10在阿尔茨海默病人脑组织及Aβ处理的人脑微血管内皮细胞和神经元中的表达变化.方法 应用real-time PCR和Western blot检测MOV10的表达变化.结果 RNA结合蛋白MOV10在阿尔茨海默病人脑组织中,在Aβ处理的人脑微血管内皮细胞和神经元中高表达.结论 RNA结合蛋白MOV10可能参与调控阿尔茨海默病的病理过程.
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潜在的肺癌肿瘤抑制基因RBM5的研究进展
RBM5首先作为LUCA-15于1996年被克隆出来,曾被命名为LUCA-15、RBM5、H37等.RBM5蛋白是RNA结合基序蛋白家族成员;该家族是由HU-GO基因命名委员会正式命名的RRB/RBM/RNP新近发现的蛋白亚群,此类蛋白是RNA结合蛋白,与RNA的剪接、翻译和稳定性有关,尤其是其在凋亡调控中的重要作用已经引起了人们广泛关注.
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非编码RNA在DNA损伤应答与修复中的作用
DNA 损伤应答（ DDR ）与修复是细胞维持基因组稳定性的主要机制。越来越多的证据表明许多非编码 RNA （ ncRNA ）在 DDR 与修复中起关键作用，参与 DDR 与修复的ncRNA 包括 miRNA、diRNAs、DDRNAs 及 lncRNA。本文侧重介绍这些 ncRNA 在 ATM／ATR 介导的 DNA 损伤应答信号传导通路及它们在各种 DNA 修复过程，特别是负责双链断裂（ DSB ）修复的同源重组修复（ HR ）及非同源末端连接（ NHEJ ）修复中的作用。接着，总结了参与 DDR与修复的 ncRNA 调控及功能的异常与多种肿瘤发生、发展及预后的相关性，后提出揭示与DDR 相关的 RNA 结合蛋白与其相互作用的 ncRNA 的关系是今后 ncRNA 研究领域的重要方向。
关键词： 非编码RNA DNA损伤应答与修复 RNA结合蛋白 -
PUF家族蛋白表达及功能研究进展
PUF家族蛋白是一类高度保守的RNA结合蛋白,在真核生物的基因转录后调控中起着重要的作用,同时对于低等动物和哺乳动物,PUF同源基因在生殖细胞和配子的发育过程中也起着重要的作用.PUF蛋白具有多种典型的特征和生物功能.目前关于果蝇和线虫PUF蛋白的研究有很多,但是对哺乳动物PUF蛋白在各个器官组织表达的研究还比较少,PUF蛋白在哺乳动物生长和发育过程中的功能还不明确.
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转录后调控在神经轴突损伤后修复中的作用
和发育阶段相比,受损的轴突再生面临更为艰难的挑战. 细胞内各种信号通路需要精巧的协同,在时空上调控蛋白的表达和运输,从而不断适应外部环境的变化. 相较于转录水平的调控,转录后调控对新蛋白的合成和组装,以及对运输进行时时地的控制具有不可替代的优势,是轴突成功再生必不可少的条件. 本文从转录后调控的两个基本元素( miRNAs和RBPs) 出发,阐述其作用机制,探讨它们如何在神经轴突再生的过程中发挥重要作用,以期为临床神经再生的基础研究和新药开发提供新的思路和方向.
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RNA结合蛋白HuR及TTP在结直肠癌中的表达和临床意义
目的:检测RNA结合蛋白HuR及TTP在结直肠癌中的表达,分析两者在结直肠癌发生、发展中的作用、关系.方法:免疫组化法检测83例患者肿瘤组织以及26例癌旁正常组织中HuR及TTP的表达.结果:蛋白HuR在肿瘤细胞质中的表达明显高于癌旁正常组织细胞质中的表达,而蛋白TTP在肿瘤组织中的表达则明显低于癌旁正常组织中的表达.经Spearman等级相关分析HuR和TTP表达呈负相关性(P＜0.05).结论:在结直肠癌的发生发展过程中,信使RNA的稳定因子HuR表达上调,而信使RNA的降解因子TTP下调或缺失.在结直肠癌的发生过程中可能起拮抗作用.胞质HuR蛋白的表达可促进肿瘤发生发展.
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RNA结合蛋白人抗原R在人脂肪细胞分化中的作用
目的 通过检测RNA结合蛋白人抗原R(HuR)与脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(FABP4)、脂肪酸合成酶(FASN)、脂蛋白脂肪酶(LPL)在人脂肪细胞分化过程中的表达变化,并探讨其作用.方法 对人脂肪源性间充质干细胞进行成脂诱导分化,油红O染色观察细胞成脂情况,分别以实时定量 PCR和Western印迹检测HuR、FABP4、FASN、LPL mRNA和蛋白表达水平的变化;siRNA干扰HuR后,进一步观察细胞成脂变化和成脂相关基因的表达水平.结果 人脂肪源性间充质干细胞在成脂诱导分化过程中HuR、FABP4、FASN和LPL的mRNA和蛋白质的表达水平均显著升高(均P<0.01).干扰HuR表达后,细胞成脂水平干扰组较对照组下降,FABP4、FASN、LPL mRNA表达水平无明显变化,而其蛋白表达水平均显著下调(均P<0.05).结论 HuR主要通过调节FABP4、FASN和LPL蛋白水平的变化影响成脂,促进人脂肪细胞的分化.
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利用基因芯片和RT-PCR检测MBD1在胰腺癌中的表达
目的:利用基因芯片和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析胰腺癌中甲基化CpG结合域蛋白MBD1mRNA的表达;探讨MBD1调控胰腺癌基因异常转录表达的分子机制.方法:利用含18000个cDNA克隆的芯片,对3份胰腺混合标本样品(来自2例正常胰腺组织和4例中分化胰腺癌标本)进行基因表达谱对比分析研究;通过RT-PCR验证阳性结果;并进一步检测MBD1在4对胰腺癌和癌旁组织中的表达.结果:两份混合癌组织样品分别有1484和1 353条差异表达基因,包括抑癌基因、细胞周期蛋白基因、生长因子及其受体基因、信号传导相关基因、转录调节因子基因等,其中同为上调表达的102条基因中MBD1差异为显著,而甲基化相关基因如上皮细胞钙黏蛋白CDH1、视网膜母细胞瘤Rb和E2F转录因子5 E2F5则呈下调表达,与RT-PCR验证结果一致.MBD1在胰腺癌中的表达明显高于癌旁组织(P＜0.01).结论:基因芯片技术为分析胰腺癌相关基因表达谱提供了有力的工具.MBD1在胰腺癌中的表达高于正常和癌旁组织.MBD1可能是多个甲基化相关抑癌基因转录表达下降的关键调控点.
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核质转运障碍在肌萎缩侧索硬化-额颞痴呆发病机制中的研究进展
肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)和额颞痴呆(frontotemporal dementia,FTD)是以选择性、进行性神经元死亡为主要特征的神经系统变性疾病,给社会和家庭带来沉重负担.越来越多的证据表明,ALS与FTD的临床表现、病理特征和遗传特征有所重叠.与单纯的ALS或FTD相比,ALS-FTD(ALS合并FTD)的疾病进展速度更快,患者的生存期也更短.目前,尚未阐明ALS和FTD的发病机制.许多研究揭示, ALS与FTD存在共同的病理基础:神经系统残存的神经元及胶质细胞内存在反式激活应答DNA结合蛋白43(transactivation response DNA-binding protein 43 kDa,TDP-43)阳性包涵体.研究发现,ALS和FTD患者中枢神经系统内的TDP-43蛋白失去正常的细胞核定位,而在细胞质内聚集形成包涵体.由此推测,TDP-43蛋白的核内转入机制缺陷导致其正常功能丢失及获得性神经毒性可能是ALS-FTD发病的始动因素之一.本文对核质转运障碍在ALS-FTD发病机制中的新研究进展进行综述.
