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评价视网膜缺血再灌注损伤指标的研究进展
视网膜缺血再灌注损伤常引起视功能损害,多见于青光眼急性发作时的降眼压治疗、视网膜血管栓塞性疾病的溶栓治疗及影响视网膜血流的各种眼科手术过程中.采用视网膜电流图、丙二醛、转录因子和炎性因子等指标评价视网膜缺血再灌注损伤,以指导临床治疗.
关键词： 视网膜缺血再灌注损伤 检测指标 -
视网膜缺血再灌注损伤后视网膜神经节细胞pax6的表达变化与意义
目的 探索视网膜缺血再灌注损伤后视网膜神经节细胞pax6的表达变化及意义.设计实验研究.研究对象缺血再灌注损伤大鼠视网膜.方法 成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠30只,随机选取5只作为空白对照组,其余25只为视网膜缺血再灌注损伤组,采用升高右眼眼压的方法制作视网膜缺血再灌注损伤模型.视网膜缺血再灌注后1、2、4、6、8周分5组,每组5只,不同时间点取右眼行免疫荧光染色,观察视网膜神经节细胞中pax6表达情况.主要指标pax6的表达.结果 视网膜缺血再灌注损伤后随着时间推移视网膜各层逐渐出现pax6表达阳性的细胞,对照组视网膜神经节细胞pax6表达阳性率为(1.28±1.41)％,损伤后1、2、4、6、8周分别为(0.99±1.23)％、(14.45±2.72)％、(50.88±4.73)％、(71.00±4.72)％、(78.80±4.62)％(F=1.350,P＜0.0001).各组与对照组两两比较,缺血后1周视网膜神经节细胞pax6表达阳性率差异无统计学意义(P=0.835),缺血再灌注损伤2、4、6、8周视网膜神经节细胞pax6表达阳性率均明显升高(P均＜0.0001).结论 视网膜缺血再灌注损伤后视网膜各层均出现pax6表达阳性细胞,视网膜缺血再灌注损伤能诱导视网膜内源性干细胞激活.
关键词： 视网膜缺血再灌注损伤 PAX6 干细胞 -
银杏叶对兔实验性高眼压损伤的保护作用
银杏叶含有多种药理活性的有效成分，如黄酮类，内酯B，萜类等，其药理作用有改善缺血性心肌，脑组织血液供应，清除氧自由基，抗血小板活化因子的作用，目前已广泛应用于心脑血管病的治疗。而视网膜缺血再灌注损伤中，银杏叶提取物EGb(estract ginkgo biloba)的保护作用，国外也有过报道。作者探讨银杏叶对视网膜缺血再灌注损伤保护作用。1 材料与方法1．1 药品和仪器 银杏叶(深圳海王医药集团提供，批号19980106)，每片20 mg含银杏叶提取物9．6 mg(黄酮20％，萜类6％)。其他分析用试剂均为分析纯；721分光光度计(上海第三生化仪器厂)；视觉电生理仪(重庆泰克医电仪器有限公司)。1．2 实验动物及分组 新西兰大耳白兔，♂24只，体重(30±5) kg(第三军医大学野战外科研究所实验动物中心)，随机分为4组：假手术组；缺血再灌注组；缺血再灌注+EGb l组(60 mg*kg-l*d-1)，缺血再灌注+EGb 2组(120 mg*kg-l*d-1)。1．3 模型制作 2％戊巴比妥钠25 mg*kg-1静脉注射麻醉，将连接生理盐水瓶输液管的七号针头于角膜缘刺入前房，然后升高输液瓶至动物垂直距离180 cm处，此高度可在眼内形成16．64 kPa(1 kPa＝7．5 mmHg)的眼压，阻断眼底血流以致视网膜缺血，维持60 min，拔出针头，视网膜恢复血供。缺血再灌注+EGb组动物于缺血前2周及术后给予银杏叶片，将药物混合于饲料(200 g含60 mg EGb)中喂养，术后家兔苏醒继续饲混有药物的饲料。1．4 组织取材及指标测定 动物于缺血12 h后处死，立即摘除眼球，置于0℃生理盐水中，分离视网膜加生理盐水l mL制成视网膜组织匀浆。用邻苯三酚法测SOD活性；硫代巴比妥酸比色法测MDA的含量;紫外分光光度法测定组织蛋白质含量。
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蒙药珍宝丸对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的神经保护作用
目的:观察蒙药珍宝丸对高眼压引起视网膜缺血再灌注损伤大鼠视网膜形态学改变及神经节细胞凋亡的影响,为防治视网膜缺血再灌注损伤性疾病提供理论依据.方法:将12只SD大鼠随机分为正常组、模型组、蒙药珍宝丸组和中药原花青素组,共4组,每组3只.蒙药珍宝丸组和中药原花青素组1次/d,连续灌胃7d后,末次给药6h后开始双眼造模,缺血再灌注24h后处死大鼠,摘取眼球进行病理改变和细胞凋亡的观察.结果:正常组大鼠视网膜结构清晰,各层细胞排列紧密,未见凋亡细胞.模型组大鼠缺血再灌注24h后视网膜细胞形态不规则,视网膜全层水肿,细胞排列明显疏松、紊乱,视网膜神经节细胞凋亡明显,与正常组相比,模型组凋亡细胞阳性率升高,差异有统计学意义(P＜0.05).蒙药珍宝丸组和中药原花青素组缺血再灌注24h后,视网膜各层细胞形态较规则,视网膜全层水肿,程度较模型组减轻,与模型组比较凋亡细胞阳性率均降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:蒙药珍宝丸能够减轻视网膜组织病理改变,抑制细胞凋亡,为防治视网膜损伤性疾病提供实验依据.
关键词： 蒙药 珍宝丸 视网膜缺血再灌注损伤 病理 -
蒙药额尔顿·乌日勒对视网膜缺血再灌注损伤大鼠血清中NO 和NOS的影响
目的：：研究蒙药额尔顿·乌日勒对血清一氧化氮( NO)和一氧化氮合成酶( NOS)在大鼠视网膜缺血再灌注损伤( RIR)中的影响,探讨额尔顿·乌日勒对大鼠RIR的保护作用及其相关机制。方法：通过高眼压法造成RIR模型,采用ELISA方法对160只RIR大鼠血清中NO、NOS含量进行测定。结果：视网膜缺血再灌注后模型组NO和NOS含量非常显著地高于空白组(P<0.01),12h、24h、48h高剂量组NO含量非常显著地低于模型组(P<0.01),24h、48h低、中剂量组NO含量显著地低于模型组(P<0.05),24h、48h高剂量组NOS含量显著地低于模型组(P<0.05)。结论：蒙药额尔敦·乌日勒能降低RIR血清中NO、NOS含量,能够减轻视网膜组织损伤,对视网膜缺血再灌注损伤具有保护作用。
关键词： 蒙药额尔顿·乌日勒 视网膜缺血再灌注损伤 一氧化氮 一氧化氮合成酶 保护作用 -
丹参预处理对大鼠视网膜缺血再灌注的保护作用及Bcl-2、 Caspase-3表达的影晌
目的:探讨大鼠视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)过程中,丹参对RIRI的保护作用以及对Bd-2、caspse-3蛋白表达的影响.方法:随机选取66只Wistar大鼠,分为正常对照组、缺血再灌注组、丹参预处理组,通过对前房加压制作RIRI模型.后两组各分为6、12、24、48、72h5个亚组,HE染色观察视网膜组织学变化,SABC法检测Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的变化.结果:Bcl-2、Caspase-3蛋白在正常组表达较弱.缺血再灌注组和丹参预处理组6h开始表达,24 h显著增强,48 h下降,72 h表达减弱,变化趋势基本一致.但是,两组比较,丹参预处理组在不同时间点Bcl-2蛋白的表达均明显强于缺血再灌注组,Caspase-3蛋白表达明显减弱,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:丹参预处理对RIRI可以通过减少神经节细胞的凋亡起到保护作用,其作用机制可能是调节Bcl-2、Caspase-3蛋白表达来实现.
关键词： 丹参 视网膜缺血再灌注损伤 Bcl-2 Caspase-3 -
大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型中大黄素对神经节细胞的影响
目的 探讨大黄素对视网膜缺血再灌注损伤后视网膜神经节细胞(RGC)密度的影响.方法 通过前房灌注法使眼内压升高,建立大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型.将36只SD大鼠随机分为正常对照组、损伤后未注射药物组(IR组)、注射对照液干预组(IR+DMSO组)和注射大黄素干预组(IR+Emodin组),其中IR组根据损伤后时间不同分为损伤1、2、3周组(IR1w组、IR2w组、IR3w组),每组6只.IR+DMSO组与IR+Emodin组在缺血再灌注损伤后第3、9、15天玻璃体腔分别注射DMSO和蛋白激酶2(CK2)抑制剂大黄素.3周后采用逆行荧光金染色和免疫组织化学染色方法标记RGC,计数各组RGC密度,行统计学分析.结果 IR2w、IR3w组与正常对照组比较,RGC密度明显减少(分别为P＜0.01和P＜0.001).IR +DMSO组与IR3w组比较,RGC密度的差异无统计学意义(P＞0.05).IR+Emodin组与IR3w组比较,RGC存活密度明显增多(P＜ 0.001).结论 缺血再灌注损伤后RGC密度随缺血再灌注时间延长而逐渐减少,CK2抑制剂大黄素在视网膜缺血再灌注损伤过程中对RGC有保护作用,提示CK2参与了RGC损伤的过程.
关键词： 视网膜神经节细胞 视网膜缺血再灌注损伤 蛋白激酶2 大黄素 -
白藜芦醇对大鼠视网膜缺血再灌注损伤后视网膜组织中Caspase-3和Bcl-2表达的影响
目的:研究白藜芦醇对大鼠视网膜缺血再灌注损伤(RIRI)后视网膜组织中Caspase-3和Bcl-2表达的影响,探讨白藜芦醇对 RIRI的治疗作用及其机制.方法:选取 SD大鼠90只,随机分为假手术组、模型组和治疗组,每组30只,通过对前房加压建立大鼠 RIRI模型,模型组和治疗组大鼠缺血再灌注1、6、12、24和48 h,治疗组大鼠用微量注射器于大鼠玻璃体腔内注射0.5 nmol·L-1的白藜芦醇5 μL.采用倒置显微镜观察视网膜组织结构,采用免疫组织化学法和 Western blotting法检测各组大鼠视网膜组织中Caspase-3和Bcl-2的阳性细胞数和蛋白表达水平.结果:模型组大鼠造模后视网膜组织水肿,可见神经节细胞空泡样变性,细胞层排列呈现疏松状,视网膜神经节细胞数目大量减少,边界模糊,神经纤维层明显变薄;治疗组大鼠视网膜组织结构、损伤程度及神经节细胞变性程度均轻于模型组.免疫组织化学检测,与模型组比较,治疗组大鼠视网膜组织中Caspase-3和Bcl-2阳性细胞数明显升高(P<0.05).Western blotting法检测,与模型组比较,治疗组大鼠各时间点视网膜组织中Bcl-2蛋白表达水平升高,24和48 h时差异有统计学意义(P<0.05);治疗组各时间点大鼠视网膜组织中Caspase-3蛋白表达水平均明显降低(P<0.05).结论:白藜芦醇对 RIRI大鼠的视网膜神经节细胞结构有改善作用,其作用机制可能与降低视网膜组织中 Caspase-3表达水平及升高视网膜组织中 Bcl-2表达水平有关.
关键词： 白藜芦醇 视网膜缺血再灌注损伤 Caspase-3 Bcl-2 -
七叶甙对大鼠缺血再灌注损伤视网膜电图的影响
目的:观察七叶甙对视网膜缺血再灌注损伤模型视网膜电图(ERG)的影响.方法:结扎大鼠左颈总动脉1h,然后再灌注,同时向腹腔注射七叶皂甙钠及异搏定,比较再灌注后1h、6h、12h、24h、48h、72h视网膜ERG的变化.结果:再灌注6h后,七叶甙组、异搏定组视网膜的ERG与生理盐水组相比,有明显的提高,而七叶甙组和异搏定组相比,无明显的差异.结论:七叶甙可以促进缺血再灌注损伤视网膜ERG b波的恢复.
关键词： 视网膜缺血再灌注损伤 视网膜电图 七叶皂甙钠 异搏定 大鼠 -
富氢生理盐水对大鼠视网膜缺血再灌注损伤神经保护作用的研究
目的：本文应用大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型，探讨富氢生理盐水对其是否具有神经保护作用。方法成年雄性SD大鼠随机分为4组：正常组、视网膜缺血再灌注组（ RIR）、富氢生理盐水组（ HRS）、生理盐水组（ NS）。正常组大鼠不进行任何手术操作，其他3组大鼠均行前房穿刺，造成缺血60min后恢复灌注，RIR 组期间不给予任何干预措施，HRS 组和 NS 组于再灌注前10min 及再灌注开始时分别腹腔内注射3mLHRS或2mL NS。应用免疫组化法观察缺血再灌注损伤视网膜神经节细胞存活情况，另外用相应试剂盒检测再灌注24h及7d后大鼠血清中SOD活性及MDA水平。结果缺血再灌注7d后，RIR组大鼠神经节细胞数明显减少（P＜0．01），而 HRS 组视网膜神经节细胞数明显较多（P＜0．05）；另外，与正常组相比，RIR组 SOD活性明显降低（P＜0．01），MDA水平明显升高（24h P＜0．05，7d P＜0．01），与 RIR 组相比，HRS 组SOD活性显著增加（24h P＜0．05，7d P＜0．01），7d时MDA含量显著降低（P＜0．01）。结论腹腔内注射富氢生理盐水能够明显减少神经节细胞凋亡，并可显著提高血清中内源性抗氧化酶活性，降低氧化产物水平。
关键词： 富氢生理盐水 视网膜缺血再灌注损伤 ROS 细胞凋亡 -
姜黄素对视网膜缺血再灌注损伤Bcl-2，Bax 表达的影响
目的：研究姜黄素（Cur）预处理对视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）Bcl-2和Bax表达的影响，为姜黄素治疗视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）提供实验依据。方法将33只健康成熟无眼疾的SD大鼠随机分为正常组（3组）、模型组（15只）、Cur组（15只），缺血前1h，正常组不进行任何处理，模型组腹腔注射生理盐水，Cur组腹腔注射姜黄素，前房加压法建立视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）模型，模型组和Cur组分别在2h，6h，12h，24h，48h5个时间段，通过腹腔注射10g/L戊巴比妥钠处死大鼠，立即摘取实验眼球，通过免疫组化检测Bcl-2和Bax阳性表达。结果正常组未见Bal-2阳性表达，模型组和Cur组在缺血再灌注后2h可见Bal-2阳性表达，6h，12hBal-2阳性表达逐渐增加，24h阳性表达达高峰，48h阳性表达逐渐减少；Bax在正常组未见阳性表达，模型组和Cur组在缺血再灌注后2h可见Bax阳性表达，6hBax阳性表达逐渐增加，12h阳性表达达高峰，24h阳性表达逐渐减少，48h表达明显下降；在各时间段Cur组Bcl-2阳性表达数均高于模型组；Bax阳性表达数均低于模型组，各时间段差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论姜黄素预处理大鼠视网膜缺血再灌注损伤，可增加神经节细胞Bcl-2表达，减少Bax阳性表达，减少神经节细胞损伤，对视网膜缺血再灌注损伤具有保护作用。
关键词： 视网膜缺血再灌注损伤 姜黄素 Bcl-2 Bax -
N-乙酰-5-羟色胺对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜Fas、FasL蛋白表达的影响
目的 探讨N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylserotonin,NAS)对视网膜缺血-再灌注损伤(retina ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜Fas、FasL蛋白表达的影响.方法 取健康成年Sprague Dawley大鼠54只,将大鼠随机分为正常组(6只)、RIRI组(24只)与NAS组(24只);采用高眼压法建立大鼠RIRI模型,依据造模后不同时间点将RIRI组与NAS组大鼠又分为6h、12 h、24h及72 h四个亚组.NAS组于造模前30 min腹腔注射NAS(5 mg·kg-1),RIRI组腹腔注射等剂量的生理盐水.通过HE染色在光学显微镜下观察各组大鼠视网膜形态学变化,并记录各组大鼠视网膜厚度及视网膜神经节细胞数,采用免疫组织化学染色法检测NAS对RIRI大鼠视网膜Fas、FasL蛋白表达的影响.结果 HE染色显示,正常组大鼠视网膜各层细胞分界清晰,形态正常,神经细胞排列整齐;RIRI组大鼠再灌注后6h视网膜各层出现水肿,以神经节细胞层及内核层较显著,神经节细胞数较正常组减少;随后视网膜水肿进一步加重,神经节细胞继续减少;NAS组大鼠在再灌注后6h、12 h、24h视网膜水肿程度较RIRI组轻,NAS组在再灌注后72 h视网膜厚度较RIRI组厚,NAS组各时间点神经节细胞数均较RIRI组多,差异均有统计学意义(均为P＜O.05).免疫组织化学染色显示,正常组几乎未见Fas+细胞.再灌注后6h,RIRI组视网膜神经节细胞及内核层开始出现少量Fas+细胞;再灌注后12h,RIRI组视网膜Fas+细胞表达逐渐增多;再灌注后24h视网膜Fas+细胞数达到高峰,棕色阳性染色细胞分布在视网膜神经节细胞层、内丛状层、内核层及神经纤维层;再灌注后72 h视网膜Fas+细胞较再灌注后24h减少.NAS组在再灌注后6h、12 h、24h、72 h视网膜Fas+细胞数均较RIRI组各时间点减少,再灌注后24h,Fas+细胞数达较高水平,随后下降,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).正常组视网膜可见FasL全层低表达.RIRI组再灌注后6h,视网膜神经节细胞层和神经纤维层存在少量FasL+细胞;再灌注后12 h FasL蛋白表达逐渐增多;再灌注后24 hFasL+细胞数达高峰,可见深棕色的细胞膜及细胞质染色细胞分布在视网膜神经节细胞层、内丛状层、内核层及神经纤维层;再灌注后72 hFasL蛋白的阳性表达逐渐减少.NAS组再灌注后6h、12 h、24h、72 h视网膜FasL+细胞数均少于RIRI组各时间点阳性细胞数,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 NAS可通过抑制RIRI大鼠视网膜细胞Fas、FasL蛋白的表达,减轻缺血再灌注对大鼠视网膜细胞造成的损伤.
关键词： N-乙酰-5-羟色胺 视网膜缺血再灌注损伤 Fas FasL 大鼠 -
急性视网膜缺血再灌注损伤后大鼠视网膜副凋亡和自噬的发生
目的 探讨大鼠急性视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)后不同时间点视网膜中副凋亡及自噬的发生.方法 将30只健康成年SD雄性大鼠随机分为RIRI组及正常对照组.利用高眼压前房灌注法建立SD大鼠急性RIRI动物模型.正常对照组不做任何处理.急性RIRI后1d、3d、7d、28 d各时间点取各组大鼠的视网膜组织,利用透射电子显微镜(transmission electron microscopy,TEM)检测视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)副凋亡及自噬的发生;利用免疫荧光染色法检测视网膜微管相关蛋白1轻链3 (microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达.结果 急性RIRI后1d持续至28 d,TEM可见RGCs细胞质空泡数量较正常对照组增高.急性RIRI后1d持续至28d,TEM可见RGCs细胞质中自噬体数量增加.正常对照组RGCs的细胞质中自噬体每50 μm2平均为0.79个,急性RIRI后7d自噬体的平均数量达到高峰,每50 μm2平均为2.29个,与正常对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).免疫荧光法检测发现,与正常对照组相比,急性RIRI后1d开始,RGCs的细胞质中LC3表达增加,并在整个实验期间持续高表达,正常对照组RGCs层的LC3阳性细胞百分比为15.90％,急性RIRI后1d、28 d时LC3阳性细胞百分比分别为46.95％和52.30％,与正常对照组相比差异均具有统计学意义(均为P ＜0.05).结论 急性RIRI后RGCs涉及副凋亡和自噬的激活,各种类型的程序性细胞死亡可作为单一细胞死亡的形式或多种细胞死亡形式共存,参与急性RIRI视网膜损伤.
关键词： 副凋亡 自噬 视网膜缺血再灌注损伤 视网膜神经节细胞 -
N-乙酰-5-羟色胺(NAS)对视网膜缺血再灌注损伤(RIRI)大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响
目的 探讨N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylserotonin,NAS)对视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响.方法 取健康成年Sprague-Dawley大鼠66只,采用随机数字表法随机分为正常对照组(6只)、缺血再灌注组(30只)与药物组(30只),药物组于造模前30 min腹腔注射5 mg·kg-1NAS,缺血再灌注组腹腔注射同等剂量的生理盐水,缺血再灌注组与药物组按RIRI后时间,分为6h、12 h、24 h、48 h、72 h五个亚组.采用HE染色法观察各组视网膜形态学变化,免疫组织化学染色检测各组大鼠视网膜活性Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白表达.结果 HE染色显示正常对照组大鼠视网膜结构清晰,各层细胞排列紧密;缺血再灌注组大鼠RIRI后6h、12 h视网膜各层高度水肿,24h后水肿逐渐减轻,神经节细胞逐渐减少,分布较紊乱,随着时间延长,视网膜神经节细胞大片缺失;药物组6h、12h较缺血再灌注组细胞水肿明显减轻,24h、48 h、72h组较缺血再灌注组细胞排列规整,神经节细胞数量减少减轻.缺血再灌注组视网膜活性Caspase-3阳性细胞数在灌注后6h开始表达增加,阳性细胞数为(561.15±37.19)个·mm-2,24 h达到较高水平,阳性细胞数为(1522.61±84.36)个·mm-2,随后逐渐下降,药物组视网膜各时间点活性Caspase-3阳性细胞数均显著少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).正常对照组视网膜可见大量Bcl-2阳性细胞;缺血再灌注组RIRI后6 h Bcl-2阳性细胞开始下降,12h后继续减少,24h降至较低水平;药物组各时间点Bcl-2阳性细胞数均显著多于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).正常对照组大鼠视网膜几乎未见Bax阳性细胞;缺血再灌注组RIRI后6h神经节细胞层及内核层可见Bax阳性细胞,24h达到较高水平,48 h开始下降;药物组各时间点Bax阳性细胞均显著少于缺血再灌注组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 NAS可促进RIRI大鼠视网膜Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达,降低活性Caspase-3蛋白表达,减轻细胞凋亡,具有神经保护作用.
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视网膜缺血再灌注损伤大鼠视网膜中白细胞介素-23和白细胞介素-17的表达及意义
目的 通过建立视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)模型,观察白细胞介素-23(interleukin-23,IL-23)和白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)在Sprague-Dawley (SD)大鼠视网膜上的表达,探讨其在RIRI中的可能作用机制.方法 采用随机数字表法将75只健康无眼疾SD大鼠随机分为正常对照组和模型组.正常对照组不作任何处理,模型组采用前房灌注生理盐水升高眼压法建立RIRI模型.分别在建模后12h、24 h、72 h、144 h处死SD大鼠,免疫组织化学染色法检测IL-23和IL-17蛋白在视网膜上的表达及分布情况;Western blot和ELISA检测分析各时间点视网膜IL-23和IL-17的表达水平和变化规律.结果 免疫组织化学染色法显示IL-23和IL-17蛋白在正常对照组视网膜中表达极少,而在模型组表达明显增多.两者主要表达于视网膜神经节细胞层和内核层细胞的细胞浆.Western blot法检测发现IL-23和IL-17蛋白在RIRI视网膜中的表达明显增强,1L-23蛋白在建模后24 h表达强,而IL-17蛋白在建模后72 h表达达到高峰.ELISA法结果显示建模后12 h、24 h、72 h、144 h,模型组视网膜IL-23和IL-17蛋白的表达水平均较正常对照组明显升高,差异均有显著统计学意义(均为P＜0.01).结论 IL-23和IL-17在RIRI模型SD大鼠视网膜中表达明显增强,IL-23/IL-17通路作为致病因素,通过加重视网膜炎症反应参与RIRI的病理损伤.
关键词： 视网膜缺血再灌注损伤 白细胞介素-23 白细胞介素-17 -
复方五花血藤对鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨复方五花血藤对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用.方法 采用健康成年SD大鼠90只,随机分为正常对照组、模型组和治疗组,其中模型组和治疗组建立视网膜缺血再灌注模型,治疗组于造模前连续3d给予复方五花血藤灌胃,每天2次(总剂量为10g·kg-1·d-1),模型组和正常对照组灌服相同剂量的生理盐水.通过HE染色、透射电镜观察再灌注6h、12h、24h、48 h与72 h各组大鼠视网膜的形态学变化,原位杂交方法检测各组视网膜凋亡相关因子survivin的表达情况.结果 与正常对照组相比,模型组再灌注后6h视网膜神经节细胞层高度水肿,内丛状层明显增厚,部分视网膜神经节细胞发生空泡变性,但随时间延长病变逐渐减轻.治疗组各时间点视网膜损伤均较模型组轻.与正常对照组相比,模型组survivin在再灌注后6h即开始增加,24 h达到高峰,以后逐渐下降,但各时间点均高于正常对照组(均为P＜0.05).与模型组相比,治疗组survivin各时间点表达均较高(均为P＜0.05).结论 初步证实复方五花血藤对于大鼠视网膜缺血再灌注损伤有较为明显的保护作用,此研究对于临床药物的开发和利用具有积极意义.
关键词： 复方五花血藤 视网膜缺血再灌注损伤 survivin 大鼠 -
骨髓间充质干细胞对视网膜缺血再灌注损伤中Fas和FasL表达的影响
目的 探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)移植对大鼠视网膜缺血再灌注损伤(retinalischemia reperfusion injury,RIRI)凋亡相关因子Fas和FasL表达的影响.方法 体外贴壁筛选法培养大鼠BMSC.将39只健康成年SD大鼠随机分成正常组3只、模型组18只、BMSC移植组18只.各组大鼠均选择右眼作为实验眼建立大鼠RIRI模型,正常组不做任何处理.另2组大鼠于RIRI后1h分别给予玻璃体腔注射PBS缓冲液(模型组)、BMSC(BMSC移植组),并于RIRI后2h、6h、12h、24 h、48 h、72 h各随机处死3只SD大鼠,迅速摘取右眼.免疫组织化学法检测大鼠视网膜组织Fas和FasL的阳性细胞数情况.结果 正常视网膜组织中Fas极少表达,FasL视网膜全层低表达.RIRI后2h、6h、12 h、24 h、48 h、72 h,模型组Fas阳性细胞数分别为(20.5±0.9)个·mm-2、(263.6±15.6)个·mm-2、(583.5±15.8)个·mm-2、(1184.6±45.5)个·mm-2、(684.5±3.5)个·mm-2、(80.6±4.5)个·mm-2,BMSC移植组分别为(19.8±0.8)个·mm-2、(238.5±14.7)个·mm-2、(473.6 ±13.6)个·mm-2、(964.5±23.7)个·mm-2、(632.6±5.8)个·mm-2、(72.5±6.3)个·mm-2;模型组FasL阳性细胞数分别为(42.2±0.9)个·mm-2、(57.3±0.9)个·mm-2、(365.8±7.5)个·mm-2、(1004.3±17.9)个·mm-2、(793.5±8.6)个·mm-2、(210.6±4.9)个·mm-2,BMSC移植组分别为(40.5±0.8)个·mm-2、(55.6±0.7)个·mm-2、(351.2±6.8)个·mm-2、(992.8±6.0)个·mm-2、(683.4±12.9)个·mm-2、(206.3±4.7)个·mm-2.与模型组比较,BMSC移植组各时间点Fas、FasL的阳性细胞数明显减少.Fas在6～48 h各组差异有统计学意义(P＜0.05),FasL在12～48 h各组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 RIRI后Fas/FasL表达水平升高,而玻璃体腔内注射BMSC抑制Fas/FasL的表达,证明BMSC移植对RIRI有治疗作用.
关键词： 视网膜缺血再灌注损伤 骨髓间充质干细胞移植 Fas FasL -
复方丹参滴丸对视网膜缺血再灌注损伤模型大鼠的疗效观察
目的 探究复方丹参滴丸对大鼠视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia reperfusion injury,RIRI)的影响.方法 将42只健康成年SD大鼠随机分为正常对照组(6只)、模型组(18只)和治疗组(18只).模型组和治疗组采用前房灌注加压建立大鼠RIRI模型,治疗组RIRI后立即给予复方丹参滴丸(450 mg· kg-1·d-1)灌胃,连续7d,模型组和正常对照组灌胃等量生理盐水.观察RIRI后24 h、7d视网膜电流图的改变,并取视网膜行组织病理学观察.测量RIRI后24 h、7d视网膜各层厚度,同时计数视网膜神经节细胞数.结果 RIRI后24h及7d,模型组视网膜电流图的b波振幅分别为(92.33±24.36) μV及(101.28±21.97) μV,较正常对照组大鼠测量到的(215.40±35.91) μV显著降低,而治疗组的b波振幅分别为(137.07±22.71)μV及(166.24±16.72) μV,较模型组显著好转(均为P＜0.05);各组a波与b波的变化趋势相同.大鼠RIRI后24h,模型组全层视网膜高度水肿,可见大量空泡变性,RIRI后7d,视网膜厚度明显变薄,而治疗组大鼠视网膜的组织病理学损害较模型组均明显减轻.结论 复方丹参滴丸可从形态学及功能学上减轻大鼠RIRI损伤.
关键词： 复方丹参滴丸 视网膜缺血再灌注损伤 细胞凋亡 视网膜电流图 大鼠 -
MSC移植对视网膜缺血再灌注损伤中p53和caspase-2表达的影响
目的 探讨间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)移植对视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemic-reperfusion injury,RIRI)后凋亡相关基因p53、caspase-2表达的影响.方法 将52只健康SD大鼠随机分为正常组(4只)、模型组(24只)、MSC移植组(24只).前房加压法建立大鼠RIRI模型.贴壁筛选法体外培养SD大鼠MSC,模型组于RIRI后1h予以玻璃体内注射PBS缓冲液,MSC移植组注射MSC.各组SD大鼠分别于RIRI后2h、6h、12 h、24 h、48 h、72 h处死,免疫组织化学染色检测各组SD大鼠RIRI后p53及caspase-2的表达情况.结果 正常组各时间点未见p53及caspase阳性表达.RIRI后2h、6h、12 h、24 h、48h及72 h模型组p53阳性细胞数量分别为(20.50±1.71) mm-2、(26.98±4.23) mm-2、(31.74 ±0.58) mm-2、(50.63±0.67)mm-2、(48.02±0.69)mm-2、(38.90±0.95)mm-2,MSC移植组分别为(14.48±0.47)mm-2、(17.23±0.64) mm-2、(21.64±0.58)mm-2、(28.69 ±1.12) mm-2、(18.73±1.21)mm-2、(17.10 ±0.98)mm-2；模型组caspase-2阳性细胞数量分别为(9.20±0.54)mm-2 、(78.93 ±0.88) mm-2、(391.10±5.62) mm-2、(687.25±6.24) mm-2、(491.75±2.75) mm-2、(153.75±7.63)mm-2,MSC移植组分别为(4.23±0.36) mm-2、(58.03±5.48) mm-2、(282.25±56.82) mm-2、(588.75±9.07) mm-2、(389.75 ±8.18)mm-2、(121.75 ±3.59)mm-2；与各时间点模型组比较,MSC移植组p53及caspase-2的表达均明显减少,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 RIRI后行MSC玻璃体内注射,可抑制p53及caspase-2的表达,减少视网膜神经节细胞的凋亡,对RIRI有一定的保护作用.
关键词： 视网膜缺血再灌注损伤 间充质干细胞移植 P53 Caspase-2 -
低氧预适应对缺血再灌注损伤大鼠视网膜促红细胞生成素及活性Caspase-3蛋白表达的影响
目的 观察低氧预适应(hypoxic preconditioning,HPC)后视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)蛋白及活性Caspase-3蛋白表达的动态变化,探讨HPC预防RIRI的机制,为RIRI的防治提供有效的治疗方案.方法 取健康Sprague Dawley成年大鼠随机分为正常对照组(CON组),RIRI组与HPC+缺血再灌注损伤组(HPC组,HPC后采用高眼压法制成RIRI模型),每组根据RIRI时间分为6h、12 h、24h及72 h4个亚组.采用免疫组织化学法动态观察HPC对RIRI大鼠视网膜细胞EPO蛋白、活性Caspase-3蛋白表达的影响.结果 CON组大鼠视网膜仅见极少量的EPO+细胞；RIRI后6h,HPC组EPO+细胞数开始增加；RIRI后12h,HPC组EPO+细胞数(171±21)mm-2进一步增加,显著高于RIRI组[(149±20) mm-2,P＜0.05]；RIRI后24h,HPC组EPO+细胞数(287±24)mm-2达较高水平并显著高于RIRI组[(238±22)mm-2,P＜0.01]；RIRI后72 h,HPC组EPO+细胞数开始下降,但仍显著高于RIRI组(P＜0.05).RIRI后6h,RIRI组活性Caspase-3+细胞数(60±5)mm-2开始增加,显著多于HPC组[(53±5)mm-2,P＜0.05]；RIRI后12h,RIRI组与HPC组活性Caspase-3+细胞数进一步增加,HPC组活性Caspase-3+细胞显著少于RIRI组(P＜0.01)；RIRI后24 h,RIRI组与HPC组活性Caspase-3+细胞数达较高水平,HPC组活性Caspase-3+细胞数(578±26)mm-2显著少于RIRI组[(624±25)mm-2,P ＜0.01]；RIRI后72 h,HPC组与RIRI组活性Caspase-3+细胞数均开始下降,HPC组Caspase-3+细胞数仍少于RIRI组(P＜0.05).结论 HPC可促进RIRI大鼠视网膜细胞EPO蛋白的表达,减轻活性Caspase-3蛋白的表达,从而减轻细胞凋亡,具有神经保护作用.
