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miR-140在软骨分化与骨关节炎的研究进展
骨关节炎(OA)是以关节软骨退行性变,关节内滑膜炎症以及周围关节和软骨下骨改变为特征的一种疾病.在OA组织中可观察到软骨细胞凋亡的分子特征,这表明软骨细胞的死亡在OA的发病机制中发挥关键作用.因此,对软骨分化的调控在延缓OA的发展中起到了至关重要的作用.miR-140在关节软骨中特异表达.越来越多的证据表明,miR-140通过抑制转录后水平的基因表达,在软骨细胞分化与OA中发挥重要分子作用.研究miR-140可为发现OA机制及治疗新靶点提供新的借鉴.
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miR-140表达与肿瘤发生发展关系的研究进展
MicroRNA是真核生物中一类小分子非编码RNA,长约22个核苷酸,通过影响mRNA的稳定性及其翻译过程而在转录后水平调节基因的表达.研究发现,microRNA在多种肿瘤中表达失调,与肿瘤的发生、发展密切相关,在肿瘤中发挥抑癌或促癌作用.miR-140在乳腺癌、肺癌、肝癌、结肠癌和骨肉瘤等多种肿瘤中呈低表达,通过调控多种靶基因参与调节肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭和转移等,被认为是一种具有抑癌作用的microRNA.本文就miR-140在常见肿瘤中的研究现状作一综述.
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测定宫颈癌不同分期及正常宫颈组织MiR-140水平的临床意义分析
目的：检测不同组织的MiR基因水平，探讨宫颈癌与该基因的关系。方法：收集2012年1月-2013年6月期间来本院及中南大学湘雅二医院治疗的宫颈疾病患者的临床资料，共62例，包括32例良性患者（良性组）和30例恶性患者（观察组），另选择同期来两院行健康体检者30例（对照组），测定其MiR-140水平。结果：观察组MiR-140 OD值为（0.82±0.30），高于对照组的（0.53±0.11）和良性组的（0.61±0.15），比较差异均有统计学意义（P<0.05）；Ⅳ期、Ⅲ期MiR-140 OD值分别为（0.92±0.21）和（0.85±0.23），均明显高于Ⅰ期和Ⅱ期，比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：宫颈癌患者体内MiR-140水平高表达，且病情越重越明显。
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miR-140与膝关节骨性关节炎严重程度的相关性
目的:探析miR-140与膝关节骨性关节炎严重程度的相关性.方法:选择本科收治的膝关节骨性关节炎患者60例为骨性关节炎组(OA组),按LawrenceX线诊断标准,Ⅰ～Ⅳ级患者各15例.同时选取同期非骨性关节炎患者30例为对照组(主要为外伤患者).应用实时荧光定量(PCR)检测上述两组患者膝关节液中miR-140的含量.比较两组及不同等级患者的miR-140表达水平.结果:OA组miR-140表达水平显著低于对照组,比较差异有统计学意义(P＜0.01);miR-140表达水平随OA严重程度增加而降低,比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:miR-140表达水平与膝关节骨性关节炎的严重程度呈负相关.
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膝骨关节炎患者关节液中miR-140-3p表达可反映骨关节炎进程
背景：骨关节炎是一种与年龄相关，以关节软骨退变为特点的关节疾病。
目的：检测膝关节液中miR-140-3p的表达，明确其表达量是否与骨关节炎严重程度相关。
方法：共收集到健康志愿者、痛风性关节炎患者、类风湿性关节炎患者各10例，膝骨关节炎患者45例，其中骨关节炎早期、中期、晚期各15例。应用实时荧光定量PCR检测各组膝关节液中miR-140-3p的表达。
结果与结论：①骨关节炎组miR-140-3p的表达明显下调，非骨关节炎组与骨关节炎组间表达量差异有显著性意义(P<0.05)，健康对照组、痛风性关节炎与类风湿性关节炎组间差异无显著性意义(P>0.05)；②健康对照组miR-140-3p的表达量是骨关节炎组的11.4倍，随骨关节炎严重程度的增加miR-140-3p表达量呈相对减少的趋势；③进一步行Spearman等级相关分析显示：骨关节炎的严重程度与miR-140-3p的表达量均呈负相关；④结果表明，关节液中miR-140-3p的表达量可以在一定程度上反映骨关节炎病程的进展。 -
MicroRNA-140在乳腺癌细胞中对Nrf2及其下游抗氧化基因的表达调控
目的 本研究旨在揭示microRNA在乳腺癌细胞中对Nrf2表达的影响.方法 利用生物信息学方法预测miR-140与Nrf2的结合位点,然后采用双荧光报告系统检测miR-140对Nrf2 3′UTR及启动子上的8×ARE区域活性的影响；同时以实时荧光定量PCR法和Western bloting法检测过表达miR-140和加药刺激前后细胞中Nrf2及其下游基因的mRNA和蛋白的表达变化；后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染miR-140后,对于不同浓度H2O2处理的细胞,观察其生长能力及对氧化应激敏感性的变化.结果 过表达miR-140能够显著抑制Nrf2 3′UTR区域的表达(P =0.007)和启动子上ARE区域的活性(P=0.01)；在过表达miR-140的对照组和加药组细胞中,Nrf2及其下游基因mRNA和蛋白水平均被明显抑制(均P＜0.05)；MTT实验结果显示转染miR-140细胞活力受到抑制,同时再使用不同浓度的H2 02刺激细胞后,细胞对氧化应激的敏感性增加(P＜0.01).结论 Nrf2可能作为miR-140的一个新型靶基因,miR-140能够通过抑制Nrf2,进而影响其下游一系列抗氧化基因的表达.
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miR-140靶向抑制PD-L1表达增强宫颈癌HeLa和Caski细胞对奥沙利铂的敏感性
目的:探究miR-140能否通过靶向抑制程序性细胞死亡蛋白-1 (programmed death-1,PD-L1)表达增强宫颈癌(cervical cancer,CC)细胞对奥沙利铂的敏感性.方法:采用qPCR检测miR-140在人正常宫颈细胞、CC细胞株及其奥沙利铂耐药细胞株中的表达情况;采用miR-140模拟物转染细胞,CCK-8法检测CC正常细胞株及其奥沙利铂耐药细胞株的增殖情况、克隆形成实验检测细胞的克隆形成率.通过Starbase及TargetScan在线分析软件预测miR-140与PD-L1的靶向结合位点,并通过双荧光素酶报告基因验证miR-140与PD-L1的靶向结合关系.采用AnnexinV FITC/PI双染色法和Wb法分别检测过表达miR-140或同时过表达PD-L1,且在使用奥沙利铂处理后CC细胞的凋亡、迁移及凋亡相关蛋白的表达情况.建立裸鼠CC移植瘤模型,检测miR-140加强肿瘤对奥沙利铂处理敏感性的效果.结果:miR-140在奥沙利铂耐药性CC细胞中表达显著下调(P＜0.01),过表达miR-140能够明显上调奥沙利铂耐药CC细胞对奥沙利铂的敏感性(P＜0.05),抑制CC细胞的增殖及克隆形成(均P＜0.01).miR-140与PD-L1 3'-UTR靶向结合并抑制其表达.过表达miR-140显著促进CC细胞的迁移及凋亡(P＜0.01),过表达miR-140的同时过表达PD-L1明显减弱了miR-140对CC细胞迁移的抑制及细胞凋亡的促进作用(均P＜0.05).小鼠异体移植瘤模型验证了miR-140促进肿瘤对奥沙利铂的敏感性.结论:miR-140通过靶向抑制PD-L1表达增加CC细胞对奥沙利铂的敏感性,上调miR-140或抑制PD-L1的表达再与奥沙利铂联合处理有可能作为奥沙利铂耐药CC治疗的新策略.
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MiR-140、RIP3与宫颈癌关系的研究
目的 观察宫颈癌患者MiR-140和RIP3蛋白的表达,探讨其在宫颈癌中的关系.方法 选取该院2012年1月～2014年1月宫颈癌患者30例为观察组,Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期患者分别为4、6、13和7例,良性肿瘤患者32例为良性组,正常人群30例对照组;采用免疫组化方法观察RIP3蛋白表达、RT-PCR方法测定MiR-140表达.结果 RIP3蛋白在细胞内为细胞核内表达,光镜下呈现黄色或棕黄色.观察组RIP3蛋白阳性率为13.33％(4/30),低于对照组73.33％(22/30)和良性组25.00％(8/32),差异有显著性(P＜0.05),观察组MiR-140 OD值为(0.62±0.31),高于对照组(0.33±0.34)和良性组(0.41±0.29),差异有显著性(P＜0.05),Ⅳ期、Ⅲ期RIP3蛋白阳性率分别为42.86％(3/7)和46.15％(6/13),均低于Ⅰ期和Ⅱ期,差异有显著性(P＜0.05),Ⅳ期、Ⅲ期MiR-140 OD值分别为(0.72±0.63)和(0.65±0.56),均高于Ⅰ期和Ⅱ期,差异有显著性(P＜0.05),观察组治疗后RIP3蛋白阳性率为76.67％(23/30),高于治疗前53.33％(16/30),差异有显著性(P＜0.05),治疗后MiR-140 OD值为(0.49±0.37),低于治疗前(0.62±0.31),差异有显著性(P＜0.05).结论 miR-140在宫颈癌中过度表达,通过抑制miR-140基因进而增强RIP3蛋白表达促进宫颈癌细胞的凋亡过程.
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miR-140在内耳毛细胞中的表达及其对突触蛋白Dynamin-1的调控作用
目的 研究miR-140在正常小鼠内耳毛细胞的表达分布及其对编码突触蛋白Dynamin-1的Dnm1基因的靶向调控作用.方法 取正常成年C57BL/6小鼠耳蜗基底膜,免疫荧光染色和原位杂交法观察Dynamin-1与miR-140的表达定位情况.构建荧光素酶报告基因载体转染293T细胞,通过荧光素酶活性变化明确Dnm1是否是miR-140的靶基因.携带miR-140前体及空载的腺相关病毒(adenoassociatedvirus,AAV) 通过圆窗膜注射传递到耳蜗中, 14 d后RT-PCR检测miR-140及Dnm1的mRNA表达水平,Western blot检测Dynamin-1蛋白的表达水平.结果 miR-140表达于内外毛细胞细胞质,Dynamin-1主要表达于内毛细胞细胞质;荧光素酶活性检测结果 显示,miR-140抑制Dnm1的3'UTR荧光素酶报告基因活性(P＜ 0.05) .RT-PCR及Western blot检测结果 显示: 转染AAV-miR-140后miR-140的相对表达量明显升高,Dnm1的mRNA及其蛋白表达水平显著降低(P＜ 0.05) .结论 Dnm1是miR-140的靶基因,且miR-140可以抑制内耳毛细胞中Dynamin-1的表达,表明miR-140可能通过抑制Dynamin-1蛋白负向调控内毛细胞突触囊泡内吞过程,进而影响听觉信号的传递.
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不同病变阶段OA软骨细胞中TGF-β信号通路相关分子的表达规律
目的 探讨OA软骨细胞中TGF-β信号通路相关分子(ALK1、ALK5、Smad3)及MMP13、Ⅱ型胶原的表达规律.方法 将全膝关节置换或创伤性截肢膝关节OA软骨细胞,按病变阶段分组为早、中、晚期,通过Western-blot测定不同病变阶段的OA软骨细胞中ALK1、ALK5、Smad3及MMP13、Ⅱ型胶原的表达规律.结果 ①OA软骨细胞随着病变程度的进展,ALK1、ALK5、Smad3及 MMP13、Ⅱ型胶原在蛋白水平的表达量的变化差异有统计学意义(P <0.05),其中ALK1、ALK5、Smad3及Ⅱ型胶原随着病变程度的进展而出现下降,MMP13随着病变程度的进展出现上升;②OA软骨细胞随着病变的进展,ALK5的下降幅度大于ALK1,ALK1/ALK5的比例会随着病变程度的进展而出现上升.结论 OA软骨细胞中,TGF-β信号通路相关分子及其下游分子的蛋白表达量随着病变的增加而变化:ALK1/ALK5的比例及MMP13会随着病变程度的进展而出现上升,而ALK1、ALK5、Smad3、Ⅱ型胶原随着病变程度的进展而出现下降,并且ALK5下降的幅度大于ALK1.
