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Livin在白血病耐药细胞系THP-1R的表达
Livin是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族新成员,在正常组织极少表达,而在多数恶性肿瘤组织细胞中高表达,与肿瘤抗凋亡和耐药性有关[1].为探讨Livin与白血病细胞耐药的相关性,本实验主要从分子水平研究Livin在人急性白血病细胞系THP-1与耐药细胞系THP-1R中的差异表达情况,为Livin在白血病多药耐药( multi-drug resistance,MDR)方面的意义提供实验依据.1材料与方法1.1材料主要试剂:RPMI 1640培养液(Promega公司);兔抗Livin抗体(博奥森生物技术有限公司);引物(上海生工生物工程公司);RT-PCR试剂盒(MBIFermentas公司);双链siRNA和RNAi-Mate转染试剂(上海吉玛生物技术公司).1.2方法1.2.1细胞培养:THP-1细胞为本室冻存,用含10％小牛血清的RPMI 1640培养液在37℃、5％ CO2条件下培养,2～3d传代1次.采用逐渐增加药物浓度的方法[2]建立THP-1耐Ara-C的耐药系THP-1R,实验前2周撤去药物,以正常的RPM1640培养液培养,然后取对数生长期细胞用于后继实验.1.2.2 siRNA转染:参考文献[1],针对人Livin基因2个异构体的共同部分合成siRNA序列,正义链5’-GACAGUGCC AAGUGCCUGCdTdT-3’,反义链5'-GCAGGCACUUGGCACUG UCdTdT-3’.按照说明书所述比例配制siRNA/RNA-Mate复合物和完全培养基的混合液,用此混合液稀释细胞至所需浓度,再分配到培养板各孔.非转染对照组用生理盐水代替siRNA.同时转染有荧光标记的阴性对照siRNA,在荧光显微镜下观察和判断转染效果.
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凋亡抑制蛋白c-FLIP高表达与白血病细胞耐药的关系
目的:探讨抗凋亡蛋白c-FLIP的表达对于白血病细胞系Kasumi-1细胞耐药的作用及其机制.方法:应用Tet-on系统,通过强力霉素(doxycycline,Dox)调控c-FLIP的条件性表达;将c-FLIP基因与慢病毒目的载体pLVX-Tight-puro连接,感染Kasumi-1细胞并获得稳定表达c-FLIP蛋白的稳定克隆;应用实时荧光定量PCR和Western blot方法证实c-FLIP在mRNA和蛋白水平的过表达情况;通过流式细胞术分析Fas激动剂CH11和HDAC抑制剂苯丁酸钠处理的Kasumi-1细胞的凋亡变化,以及过表达c-FLIP蛋白后对凋亡发生的影响;应用吉姆萨染色观察细胞凋亡形态变化,Westem blot检测caspase-8凋亡信号通路的激活情况.结果:CH11和苯丁酸钠能够诱导Kasumi-1细胞凋亡,在Kasumi-1细胞过表达c-FLIP蛋白后,细胞能够抵抗CH11和苯丁酸钠诱导的凋亡;Westernblot显示c-FLIP过表达阻滞了caspase-8凋亡信号通路的激活.结论:c-FLIP基因高表达使白血病细胞系Kasumi-1细胞对CH11和苯丁酸钠产生耐药作用.
关键词： c-FLIP 白血病 Kasumi-1细胞 白血病细胞耐药 -
活化Chk1引起的G2/M期阻滞在调节K562/A02细胞耐药中的机制探讨
本研究探讨活化的Chk1对白血病细胞周期及凋亡的影响,探究Chk1调控肿瘤细胞耐药的机制.以慢性粒细胞白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562/A02(耐阿霉素)为研究对象,与阿霉素共孵育后,用流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测Chk1mRNA表达水平,Western blot检测转染前后Chk1磷酸化水平;靶向Chk1shRNA抑制细胞内Chk1的表达后,用流式细胞术检测阿霉素作用后细胞的凋亡情况.结果表明:阿霉素致K562/A02细胞阻滞在G2/M期的细胞百分率为(54.12±0.57)%,显著高于K562细胞(36.99±1.28)%; Chk1mRNA表达水平在K562与K562/A02细胞间无显著差异; Chk1磷酸化水平在K562/A02细胞为0.79 ± 0.56,在K562细胞为0.27 ± 1.47,其差异有统计学意义.转染Chk1shRNA后,两株细胞的Chk1磷酸化水平显著下降.转染组K562、K562/A02细胞凋亡率分别是空载体转染组的1.30倍和3.84倍.结论: Chk1的活化水平调控着K562/A02细胞对阿霉素的敏感性.
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白血病细胞耐药与凋亡及bcl-2和bax-α表达水平关系的研究
白血病细胞对化疗耐药是当前白血病治疗的难题，其机制尚不很明了。目前认为细胞凋亡是化疗诱导肿瘤细胞死亡的重要机制，bcl-2家族在调节细胞凋亡过程起核心作用［1］。有关bcl-2与白血病细胞耐药关系的报道结果不一致［2,3］，bcl-2与bax-α比率可能是影响白血病细胞对化疗药物敏感性的关键因素［3］。我们拟通过比较化疗敏感和耐药白血病细胞内bcl-2和bax-α的表达水平，探讨白血病细胞耐药的分子机制。
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去甲氧柔红霉素治疗难治性急性髓细胞白血病
难治性急性白血病通常是由于白血病细胞耐药所致,治疗效果差,目前尚无十分满意的治疗方法.我们采用去甲氧柔红霉素(IDA)联合阿糖胞苷(Ara-C)组成的IA方案,治疗难治性急性髓细胞白血病21例,取得较好疗效,报告如下.
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全反式维甲酸、砷剂、化疗三联治疗急性早幼粒细胞性白血病疗效观察
由于全反式维甲酸(ATR-α)、砷剂(AS2O3)、化疗治疗急性早幼粒细胞性白血病(APL)的机制不同,且相互协同,可增强抗白血病的作用,同时可能降低白血病细胞耐药的发生,获得更高的完全缓解(CR)及分子生物学水平的缓解率,本院自2001年1月至2005年5月期间对初发的APL患者采用三联方案治疗,取得了满意的效果.
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Chk1基因沉默增强K562/A02细胞对阿霉素敏感性的实验研究
目的研究Chk1基因沉默对人红白血病耐药细胞株K562/A02(耐阿霉素)生长的影响,探讨Chk1在白血病细胞耐药中的作用.方法通过电穿孔转染法将特异性靶向Chk1的短发卡状RNA(shRNA)导入K562/A02细胞,应用RT-PCR、Weston-blot检测细胞内Chk1的表达,经阿霉素作用后,流式细胞术(FCM)检测其细胞周期分布及细胞凋亡率,MTT法检测细胞增殖.结果与对照组和空载体转染组相比,shRNA使细胞中Chk1 mRNA水平下降了66%,蛋白水平下降了60%.抑制Chk1的表达可解除阿霉素引起的G2/M期阻滞;使阿霉素诱导的细胞凋亡率由转染前的(5.67±0.78)%上升到(19.25±1.41)%;在阿霉素浓度为0.4 mg/L、4 mg/L时,细胞的增殖活性分别下降12%、20%.结论靶向Chk1 shRNA有效地抑制了Chk1的表达,阻断了细胞周期检测点信号传导通路,从而增强了K562/A02细胞对阿霉素的敏感性,有可能为临床上克服白血病的化疗耐药提供新的作用靶点及治疗途径.
关键词： Chk1基因 K562/A02细胞 RNA干扰 白血病细胞耐药 -
α-2b干扰素联合化疗逆转原发耐药急性白血病2例
由于联合化疗方案的应用,白血病的缓解率近年来有较大幅度提高,但临床上仍存在一部分病人由于白血病细胞耐药,导致白血病难以缓解,以至于缓解后很快复发,成为临床上的一大难题.逆转白血病细胞耐药也成为一个热门话题,基于国内外文献[1、2]报道干扰素在体外和动物试验中有确切逆转白血病多药耐药的作用,本科应用α-2b干扰素联合化疗成功逆转原发耐药急性白血病2例,现报道如下.
