内源性CO抑制肾性高血压大鼠离体血管反应性

体内由血红素加氧酶(HO)催化血红索代谢的产物一氧化碳(CO)可通过刺激血管平滑肌的可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)和钙激活的钾通道及抑制ET-1和血小板源生长因子-β(PDGF-β)的表达,发挥舒血管的作用.我们曾报道[1],HO/CO系统可降低肾性高血压大鼠的血压.本研究通过体内外实验进一步探讨HO/CO舒张血管平滑肌的可能机制.

鸟苷酸环化酶C是一种区分原发性和转移性卵巢黏液瘤较特异的标志物

卵巢上皮肿瘤约占卵巢良性肿瘤的50%和恶性肿瘤的85%～90%.原发性卵巢黏液性肿瘤病变特征为单侧发病、大小>150 mm、包膜光滑和无卵巢外扩散、腺体融合或膨胀性生长、浸润间质.原发性卵巢黏液性癌的发生通常与交界性黏液肿瘤有关.

环二鸟苷酸信号系统研究进展

所有生命体都会通过信号转导感应环境改变，并反映在代谢、生理及行为适应等方面。这些调控网络非常复杂，并依赖于许多不同组分之间的相互作用来协调产生适合的生化反应，其中一个重要的成分即是第二信使分子，第二信使通过细胞表面受体感受第一信使信号并传递给细胞内大分子。在细菌中c-di-GMP是参与调控细菌主要生理功能的第二信使分子之一，是由两分子的GTP在鸟苷酸环化酶作用下形成。生物信息学分析发现编码 c-di-GMP的基因广泛分布于原核生物尤其是革兰氏染色阴性的细菌中。

一氧化氮吸入治疗在儿科危重病中的应用

一、吸入原理一氧化氮(Nitric oxide,NO)是血管平滑肌张力的主要调节因子,已证实它就是内皮衍生舒张因子(EDRF).NO通过与鸟苷酸环化酶的血红素组分结合,激活鸟苷酸环化酶,使cGMP产生增加,后者可能通过抑制细胞内钙激活的机制,使血管和支气管平滑肌舒张.

可溶型鸟苷酸环化酶(sGC)的激活能够逆转实验性肺动脉高压

多巴胺D3受体在胰岛素样生长因子-1介导的血管平滑肌细胞迁移的作用

目的：研究多巴胺D3受体激动剂（PD128907）对胰岛素样生长因子-1（IGF-1）诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）迁移的抑制效应及其机制。
　　方法：以大鼠胸主动脉平滑肌细胞株（A10细胞）为研究对象，观察PD 128907对IGF-1促VSMCs迁移作用的影响，采用微孔膜培养（Transwell）方法测定细胞迁移状况，并检测PD 128907对IGF-1促迁移中的一氧化氮/鸟苷酸环化酶（NO/cGMP）信号途径的影响。

急性缺氧时内源性一氧化碳的变化及外源性一氧化碳对肺动脉高压的影响

内源性一氧化碳(CO)作为一种新型的血管扩张剂可通过激活平滑肌细胞的鸟苷酸环化酶,增加环磷酸鸟苷(cGMP)水平, 维持正常血管张力[1].我们的实验观察了急性缺氧时CO的变化及外源性CO对肺动脉高压的影响.材料与方法雄性Wistar大鼠60只,体重220～250 g,实验分为两部分:第一部分30只,用于观察急性缺氧时内源性一氧化碳的变化;第二部分30只,用于观察外源性一氧化碳对肺动脉高压的影响.3%戊巴比妥钠50 mg/kg腹腔注射麻醉后,向右颈外静脉和左颈总动脉分别插入自制导管至肺动脉及颈总动脉以测定平均肺动脉压(mPAP)和体动脉压:收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均动脉压(MAP).气管切开行气管插管并接美国DH-140型小动物呼吸机控制呼吸,维持呼气末二氧化碳分压(PETCO2) 在35～45 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa).稳定20 min测量基础值后,进行以下两部分实验.第一部分:大鼠随机分为三组:对照组(10只):大鼠吸入 21% O2 30 min;缺氧组(10只):大鼠吸入90% N2+10% O2的混合气30 min; ZnPPIX组(10只):腹腔注入血红素氧化酶抑制剂ZnPPIX 10 μmol/kg后,大鼠吸入90% N2+10% O2的混合气30 min.然后分别从三组大鼠的颈动脉导管采集动脉血测血气,血浆CO含量及血浆cGMP含量.并取肝、肾、肺组织称重、匀浆.血及组织样品在3 000 r/min离心 15 min,取血浆及组织上清液进行CO分析.

一氧化氮合酶与心室重构

从1977年Murad提出一氧化氮(NO)可以启动鸟苷酸环化酶(GC),松弛平滑肌开始至今,对NO的研究仍然是全球生命科学和化学界热门的前沿领域之一,Rolert F.Furchgott、Louis J.Ignarro和 Ferid Murad 因此获得了1998年度的诺贝尔医学及生理学奖.一氧化氮合酶(NOS)对NO有重要调控作用,NOS在生物机体内的生物利用度及合成的改变与多种疾病的病理生理过程密切相关,对心血管系统病理生理调控作用尤为突出.

shRNA抑制GC-C基因表达对人胃癌SGC-7901细胞生物学功能的影响

目的 研究靶向鸟苷酸环化酶C(GC-C)的短发夹RNA(shRNA)对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡和细胞周期等生物学功能的影响.方法 构建针对人GC-C基因的shRNA真核表达载体,将其转染人人胃癌SGC-7901细胞,采用半定量RT-PCR和Westem blotting法检测细胞中GC-C在mRNA和蛋白水平的变化.以CCK-8法、流式细胞术和原位末端标记法检测转染GC-CshRNA真核表达载体的SGC-7901细胞增殖、凋亡及细胞周期等生物学指标的变化.结果 经DNA测序鉴定,所得到的表达载体插入片段序列与GenBank中的序列一致.shRNA-GC-C真核表达载体转染能有效抑制GC-C基因的表达,以shRNA-GC-CⅢ序列的抑制效果佳.转染GC-C shRNA真核表达载体后SGC-7901细胞的增殖能力受到抑制(P<0.05);细胞形态发生改变,细胞体积缩小,核固缩,染色质浓缩聚集于核膜;流式细胞术检测显示G7峰前出现亚二倍体峰,转染48、72h后凋亡率分别为5.47%和5.63%(P<0.05).结论 靶向GC-C基因的shRNA可有效抑制人胃癌SGC-7901细胞生长,并促进细胞凋亡,该作用与下调靶基因GC-C的表达有关;GC-C可能是胃癌治疗的一个潜在靶点.

硝酸酯类药物阿魏硝胺对猪冠脉血管舒张作用与机制

目的:观察硝酸酯类药物阿魏硝胺(FLNT)对猪冠脉血管舒张作用并探讨其可能机制.方法:测定FLNT对氯化钾(KCl)、组织胺(His)和乙酰胆碱(ACh)预收缩猪内皮完整和去内皮冠脉血管环张力的影响,比较FLNT、硝酸甘油(NG)和硝酸异山梨酯对冠脉血管的舒张作用;观察鸟苷酸环化酶阻滞剂亚甲蓝对FLNT血管舒张作用的影响以及FLNT对内向整流性、钙离子激活性、电压敏感性和ATP敏感性钾通道钾特异性阻滞剂(氯化钡、四乙胺、4-氨基吡啶和格列苯脲)所致血管张力的影响,研究FLNT对鸟苷酸环化酶和钾通道的作用.结果:对于由KCl,His或ACh预收缩内皮完整和去内皮冠脉血管,FLNT均有浓度依赖性(10-4～10-1 mmol·L-1)舒张作用,内皮完整组和去内皮组之间没有显著差异.FLNT使KCl收缩曲线右移,大张力减小,pD′2的值为3.68;FLNT对KCl预收缩冠脉的舒张程度类似于硝酸异山梨酯.亚甲蓝能明显减弱FLNT对冠脉血管舒张作用,另外,FLNT象尼可地尔一样可显著地降低氯化钡、四乙胺和格列苯脲预收缩血管的张力.结论:FLNT对猪冠脉产生浓度依赖性舒张,且为非内皮依赖性,舒张作用类似于硝酸异山梨酯.FLNT作用机制可能其与激活鸟苷酸环化酶,开放钾通道,抑制电压依赖性钙通道和受体操纵性钙通道有关.

阿魏硝胺的血管舒张作用与机制

目的 观察阿魏酸硝酸酯类药物阿魏硝胺(FLNT)的血管舒张作用并探讨其可能机制.方法 测定大鼠外周血管环(腔静脉、胸主动脉)张力,比较FLNT、硝酸甘油(NG)和硝酸异山梨酯(ISDN)对胸主动脉的舒张作用;观察鸟苷酸环化酶阻断剂亚甲蓝对FLNT血管舒张作用的影响以及FLNT对钾通道阻断荆(氯化钡、四乙胺、4-氨基吡啶和格列苯脲)血管张力的影响,研究FLNT对鸟苷酸环化酶和钾通道的作用.结果 在大鼠内皮完整腔静脉,FLNT有浓度依赖性(1x10-71x10-4mol·L-1)舒张作用.在内皮完整及去内皮胸主动脉血管上,FLNT均浓度依赖性地降低去甲肾上腺素(NE)或高钾预收缩血管的张力,对内皮没有依赖性;FLNT使NE或高钾收缩曲线非平行右移,且使大张力减小;FLNT时胸主动脉的舒张程度类似于ISDN.FLNT可以显著地时抗无钙环境下由NE引起的血管收缩.亚甲蓝能显著减弱FLNT的胸主动脉血管舒张作用,FLNT可显著地降低氯化钡和四乙胺的血管张力.结论 FLNT对大鼠胸主动脉和腔静脉产生浓度依赖性舒张,其中胸主动脉产生舒张作用类似于硝酸异山梨酯,且为非内皮依赖性的.FLNT作用机制可能其与激活鸟苷酸环化酶,开放钾通道,抑制钙通道有关.

利钠肽系统与高血压的研究进展

利钠肽系统主要包括ANP、BNP、CNP及其受体NPRA、NPRB、NPRC,利钠肽通过与其受体结合从而发挥一系列生理作用如利钠、利尿、扩张血管而起降压作用.近年来研究发现,改变某一利钠肽或利钠肽受体成分表达,血压将出现不同程度改变(升高或下降);注射利钠肽可使血压下降.利钠肽系统在高血压诊治方面有可能在临床上受到日益重视.

一氧化氮对下尿路作用的研究进展

在体内有多种组织存在一氧化氮(NO).以往认为NO的作用有:使血管平滑肌舒张,抑制血小板积聚,细胞毒性及介导勃起.近来研究认为NO还是一种神经递质,与以往的神经递质不同的是它不是从突触颗粒中释放出来,而是通过扩散达到靶细胞,激活鸟苷酸环化酶,使环磷酸鸟苷(cGMP)增多,从而激活多种蛋白激酶并发挥各种生理效应.在中枢神经系统中,NO参与神经传导;在周围神经系统中,NO作为非胆碱能、非肾上腺素能(NANC)的抑制性神经递质参与神经功能的调节.在泌尿系统,有许多关于NO对下尿路调节作用的研究报道,现将有关的研究进展综述如下.

鸟苷酸环化酶C和尾型同源盒转录因子2蛋白在胃癌及癌前病变组织中的表达

目的 检测鸟苷酸环化酶C(GC-C)和尾型同源盒转录因子2(CDX2)蛋白在胃癌及癌前病变中的表达,并探讨两者与胃癌生物学行为的关系.方法 免疫荧光检测GC-C和CDX2蛋白在23例肠上皮化生、9例异型增生、30例胃癌及相应远癌胃组织中的表达,Western印迹检测两者在30例胃癌及相应远癌胄组织中的表达.结果 GC-c和CDX2蛋白在肠上皮化生(均为9例阳性)、异型增生(均为5例阳性)和胃癌(分别为17例、18例阳性)组织中表达阳性率均显著高于远癌胃组织(均无表达);两者在肠型胃癌中的表达均高于弥漫型(均P＜0.05),与年龄、性别、病灶大小、临床病理分期、分化程度、淋巴结转移等因素无关;GC-C和CDX2蛋白在肠上皮化生和胃癌中两者的表达呈正相关(Spearman秩相关系数r=0.4524、0.3845).结论 GC-C和CDX2蛋白的异常表达与肠型胃癌发生发展有关,检测其变化可能有助于胃癌早期诊断.

肺动脉高压患者外周血细胞中PAI-2 mRNA水平及sGC激活剂对其表达的影响

目的 探讨肺动脉高压患者外周血细胞中纤溶酶原激活抑制剂-2(PAI-2) mRNA水平及可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)激活剂对其表达的影响.方法 sGC激活剂西那西呱(Cinaciguat)以100 μmol/L浓度处理人肺动脉平滑肌细胞,实时定量荧光PCR和蛋白质印迹法检测PAI-2的mRNA和蛋白表达水平.收集2014年1 1月至2015年3月中日友好医院的8份动脉性肺动脉高压(PAH)和16份慢性血栓栓塞性肺动脉高压(CTEPH)全血样本以及2015年3月北京医院体检中心的24份健康对照全血样本,Cinaciguat与PAH组和CTEPH组及其各对照组的外周血室温孵育8h,实时定量荧光PCR检测Cinaciguat处理前后PAI-2 mRNA表达水平,应用变量相关性分析明确PAI-2 mRNA水平是否与肺动脉高压患者的疾病严重程度相关.结果 Cinaciguat在人肺动脉平滑肌细胞中能明显上调PAI-2的mRNA和蛋白表达水平.Cinaciguat处理前,PAH组基线PAI-2 mRNA表达水平显著低于PAH对照组(0.201 ±0.152比0.660±0.440,P=0.021),CTEPH组基线PAI-2 mRNA表达水平与CTEPH对照组差异无统计学意义(0.428±0.364比0.769±0.682,P=0.152);Cinaciguat处理后,PAH组、CTEPH组外周血白细胞中PAI-2在mRNA水平上呈增加趋势(1.352±1.127、1.203±1.008),但诱导后PAI-2 mRNA水平在PAH组和PAH对照组、CTEPH组和CTEPH对照组之间差异均无统计学意义(P=0.130、0.534).PAH组基线PAI-2 mRNA水平与肺动脉收缩压显著负相关(r=-0.744,P=0.034).结论 肺动脉高压患者外周血细胞中基线PAI-2 mRNA水平显著降低,sGC激活剂能上调其mRNA表达水平,PAI-2可作为PAH血管重构潜在的生物标志物.

胃癌患者外周血中鸟苷酸环化酶C信使RNA的表达及其临床意义

目的 探讨胃癌患者外周血中鸟苷酸环化酶C信使RNA(GC-C mRNA)的表达及其与外周血微转移及病情判断的关系.方法 实时荧光定量PCR (RFQ-PCR)检测2009年11月至2010年8月在南通大学附属医院住院的60例胃癌患者和门诊21例异型增生、15例肠上皮化生患者及20名健康体检者外周血中GC-C mRNA的表达,同时检测在这60例胃癌患者手术切除胃癌组织中GC-C mRNA的表达.对数据进行Wilcoxon秩和检验、x2检验或Fisher确切概率法分析,外周血和胃癌组织中GC-C mRNA表达的相关性分析采用Spearman秩相关分析.结果 在健康体检者外周血中未检测到GC-C mRNA表达,肠上皮化生和异型增生患者外周血中分别检测到2例和3例阳性,胃癌患者外周血中检测到GC-C mRNA高表达,其表达阳性率为48.3％ (29/60),与健康体检者(0)、肠上皮化生(9.5％,2/21)和异型增生(20.0％,3/15)比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05),且其表达与Lauren分型、临床分期、分化程度、浸润深度和淋巴结转移等因素均有关(均P＜0.05).相关性分析显示外周血和胃癌组织中GC-C mRNA的表达呈正相关(r=0.4009,P=0.0015).结论 胃癌患者外周血中存在GC-C mRNA表达,且其表达与患者病情进展有关,有望成为胃癌预后判断新的标志物.

西地那非治疗肺动脉高压

西地那非作为一种磷酸二酯酶5抑制剂,可以调节鸟苷酸环化酶/环磷酸鸟苷途径,从而治疗各种类型的肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH).目前,美国FDA已批准该药治疗PAH.本文回顾了近年来大量动物和临床试验进行综述.

心血管一氧化氮异常及中西医结合治疗进展

1980年美国Furochgott等人发现兔血管内皮细胞能产生一种导致血管平滑肌松弛的物质，并确认这种物质为内皮细胞衍生舒张因子(endothelium derived relaxing factor, EDRF)。1987年Palmer等证明内皮释放的一氧化氮(NO)可以解释EDRF的生物学作用，并认为EDRF与NO是等同之物。随后各国学者对NO进行了广泛而深入的研究，发现NO的代谢异常与心血管疾病关系密切,其参与了动脉粥样硬化(AS)和冠心病的发生、发展〔13〕。本文主要就NO与冠心病关系的研究进展作一综述。1　NO的生理作用机制1.1　NO对冠状动脉(冠脉)血流的调节：生理状态下，调节冠脉收缩与舒张的物质处在动态平衡中，以维持正常的心肌供血。NO是维持冠脉舒张反应的重要物质，冠脉内一定量的NO的自发释放，既能拮抗α肾上腺素能神经的缩血管反应，又参与β2肾上腺素能神经的扩血管作用，以维持较低的冠脉张力，对动物基础冠脉血流量无明显影响〔4，5〕。Lefroy等〔6〕首次向人左冠脉内注射NO合成抑制剂NG单甲基左旋精氨酸（NGmonomethylLarginine，LNMMA），观察抑制NO合成对冠脉的影响。结果冠脉近段的血管无明显变化，远段血管口径缩小，冠脉血流量减少，表明人体冠脉远段血管和阻力血管可释放一定量的NO，参与基础冠脉血流量的调节。1.2　NO对血管的生理作用：血管组织中NO重要的生理作用在于它改变血管的基础张力，调节血压和组织血流量，以及抑制血小板的粘附、聚集，维持血流畅通。经研究发现，血液中的乙酰胆碱(ACh)、缓激肽，以及血小板释放的5羟色胺、凝血酶原、ADP等活性物质均是通过L精氨酸一氧化氮途径(LArgNO)而发挥扩血管作用的。它们与内皮细胞上相应的受体结合后，激活膜内的Gi蛋白，从而激活NO合酶（nitric oxide synthase，NOS），作用于LArg，生成NO；然后NO透过细胞膜渗入血管平滑肌细胞（smooth muscle cell,SMC)，激活其鸟苷酸环化酶，升高细胞内的环鸟苷酸(cGMP)浓度，终影响SMC膜上的Ca2+Na+通道的活性，使胞内Ca2+升高，引起血管舒张〔7〕。NO还调节内皮素（ET）的生理作用，ET除作用于SMC膜上的ETA受体而引起血管收缩外，同时还作用于内皮细胞上的ETB受体，刺激NOS，增加NO的产量，从而负反馈地抑制其作用〔7，8〕。

诱导型一氧化氮合酶抑制剂与软骨修复的研究进展

随着社会的老龄化，关节软骨的损伤和退变日益成为骨科普遍、重要的问题，而关节软骨的自我修复作用非常有限。因此，怎样促进关节软骨修复重建一直是骨科工作者不断追求，渴望解决的难题。然而，无论是自体或异体软骨移植、软骨膜或骨膜移植、软骨细胞移植，还是三维立体细胞培养及组织工程技术的应用，都仅能在早期生成透明和类透明软骨组织，且随后不可避免会发生退变[1]。而这些再生的软骨组织，无论是其结构、生物化学或者生物力学特性都与正常透明软骨不同[2]。因此怎样提高再生软骨质量和防止其发生退变就成为亟待解决的问题。自1993年Stefanovic阐述一氧化氮(nitricoxide，NO)在关节软骨损伤退变中的作用以来，一系列研究证实诱导型一氧化氮合酶抑制剂的应用有助于炎性软骨代谢的恢复。一、生物学特性目前，已经确定的一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase，NOS)有神经元型(neuronalNOS,nNOS)、内皮型(endothelialNOS,eNOS)和诱导型(inducibleNOS，iNOS)三种，它们作用于精氨酸生成NO而发挥生物学效应。iNOS在正常软骨组织中没有表达，但细胞因子如白介素1，γ－干扰素，肿瘤坏死因子和细菌脂多糖均能刺激iNOS的表达，一旦iNOS蛋白合成，它的活性是非Ca2＋依赖性的，可持续表达，使NO水平升高，并可协同各种细胞因子增加软骨损害[3]。而NO可通过抑制多种与线粒体电荷传递及柠檬酸循环有关的酶；与血红蛋白基因中的铁结合，激活鸟苷酸环化酶，导致细胞内环磷酸鸟苷增多，造成细胞损伤。激活还氧化酶、蛋白激酶C和铁结合蛋白,与核糖核苷酸还原酶中的铁结合，以抑制DNA的合成[4]。另外，NOS在L－精氨酸缺乏时，可生成超氧离子，造成组织损伤。

NO与动脉粥样硬化

一、内皮细胞与NONO是以L-精氨酸为底物在血管内皮细胞一氧化氮合酶(NOS)作用下合成的血管活性物质.生理状态下,血流剪应力能够刺激血管内皮细胞促进NO分泌增加.NO通过刺激平滑肌细胞产生鸟苷酸环化酶,后者催化生成cGMP,引起血管扩张.实验证明,投与乙酰胆碱能促进NO释放而使血管扩张.